WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 5 | 6 || 8 | 9 |   ...   | 18 |

При более длительном (24часа) воздействии тироксина в клетках печени 3-месячных крыс повышается содержание ХС и ТГ относительно контроля на 10,8 % и 25,2 %, соотвественно. В то же время, в клетках печени старых крыс тироксин в течение 24 часов не вызвал повышения содержания нейтральных липидов. Толерантность к эффектам тироксина на липогенез у старых крыс может объясняться возрастными нарушениями в работе цитоплазматических путей передачи тиреоидного сигнала, что в свою очередь приводит к десенсибилизации рецепторов на более поздних этапах развития ответа. Рядом современных научных работ показано, что ведущую роль в опосредовании воздействия тиреоидных гормонов на клетку на ранних этапах может играть фосфоинозит-3-киназный (ФИ-3-К) сигнальный каскад. Известно, что нормальное функционирование ФИ-3-К пути повышает жизнеспособность клеток, оказывает мощное антиапоптогенное влияние на клетки печени, нервной системы и ряда других органов и тканей.

Также показано, что снижение активности ФИ-3-К каскада при старении организма в самых различных тканях, ассоциировано с рядом тяжелых возрастных патологий, таких как синдром Альцгеймера, сахарный диабет и др. Толерантность гепатоцитов старых крыс к воздействию тироксина может быть связана с подавлением именно этого сигнального пути. Известно, что антагонистами ФИ-3-К пути в клетках являются естественные метаболиты мембранного липида сфингомиелина – церамиды. С возрастом концентрация церамидов в клетках повышается, и убедительно показана важная роль церамида в сигналинге апоптоза и подавлении антиапоптической активности ФИ-3-К. С целью изучения воздействия церамида на быструю индукцию тироксином липогенеза мы вводили С2 церамид в среду инкубации изолированных гепатоцитов на фоне действия гормона. Введение церамида нивелировало вызванное тироксином повышение синтеза [14C]СЖК, что позволяет предположить ингибирование церамидом процессов липогенеза в гепатоцитах на ранних этапах воздействия тироксина. Таким образом, установлено, что тироксин краткосрочно стимулирует липогенез в гепатоцитах 3месячных крыс, в то время, как в гепатоцитах 24-месячнх крыс эффект тироксина на липогенез нивелируется. Церамид подавляет стимулирующий эффект тироксина на липогенез в гепатоцитах молодых крыс, что может быть связано с ингибированием ФИ-3-К пути. Учитывая то, что содержание церамида увеличивается в клетках печени старых животных, можно предположить, что экзогенный церамид вызывает резистентность гепатоцитов к стимулирующему действию тироксина на липогенез.

ПЕРВЫЕ ПОДТВЕРЖДЕНИЯ АСТРОЦИТАРНОЙ ГИПОТЕЗЫ СТАРЕНИЯ МЛЕКОПИТАЮЩИХ Бойко А.Г.

Одесский национальный университет им. И. И. Мечникова, 65026 Украина, Одесса, ул. Дворянская, 2;

boyko-l@rambler.ru Астроцитарная гипотеза старения млекопитающих [Бойко А. Г. 2007. Журн. общ. биол.

Т. 68. С. 35–51. URL: www.elementy.ru/downloads/elt/ o.g.boyko_ageing_mechanism _in_mammals.pdf ] получила первые подтверждения.

Астроцитарная гипотеза исходит из факта, что у Vertebrata место генерации нейробластов во взрослом и эмбриональном фенотипе и место их конечной локализации разъединены. Во взрослом фенотипе нейробласты мигрируют из вентральной/субвентральной зон по клеткам радиальной глии (РГ), но если у всех Vertebrata такая картина сохраняется пожизненно, то у Mammalia клетки РГ после рождения трансформируются в астроциты, что запрещает обновление нервной ткани и как результат возможно является первопричиной процесса Дильмана. Поэтому «постмитотичный мозг» характерен только для Mammalia в отличие от остальных фил Vertebrata, у которых в течение жизни постоянно обновляется пул нейронов.

Предполагаемый астроцитарной гипотезой фактор долгожительства птиц – постоянное обновление пула нейронов нервной ткани, в свою очередь должен препятствовать накоплению сенильных гормонсекретирующих нейронов и тем самым не допускать развитие процесса Дильмана, т.е. параметры гомеостаза взрослого фенотипа птиц должны сохраняться пожизненно на одном уровне. В работе (Lecomte et al., 2010. Patterns of aging in the long-lived wandering albatross // Proc Natl Acad Sci U S A. V. 107 P. 6370-6375. URL:

www.pnas.org/content/107/14/6370.full) показано, что все значимые физиологические параметры гомеостаза (маркеры старения) у странствующего альбатроса (Diomedea exulans) в течение жизни не меняются как то и предполагает астроцитарная гипотеза. Тем не менее, эта птица всё же стареет: – наблюдается возрастное сокращение способности к добыванию пищи и репродуктивной функции. Поэтому старение у птиц (по крайней мере у странствующего альбатроса) имеет совершенно иную природу, чем у Mammalia.

АКТИВАЦИЯ ИНСУЛИНОМ ФОСФОЛИПАЗЫ Д В ГЕПАТОЦИТАХ КРЫС.

ВОЗРАСТНЫЕ И ИНДУЦИРОВАННЫЕ ЦЕРАМИДОМ И ПАЛЬМИТИНОВОЙ КИСЛОТОЙ ИЗМЕНЕНИЯ Харченко В.С.

Отдел физиологии онтогенеза НИИ биологии Харьковского национального университета имени В.Н. Каразина С возрастом, а также в результате перегрузки нежировых тканей липидами происходит накопление церамида (Цер), что вызывает снижение автофосфорилирования рецепторных субъединиц, активности фосфатидилинозитол-3-киназы, фосфолипазы Д (ФЛД) и протеинкиназы В. Эти процессы лежат в основе нарушения сигналинга инсулина.

Целью настоящей работы явилось изучение влияния экзогенного Цер и пальмитиновой кислоты (16:0) на инсулин-индуцированную активацию ФЛД в гепатоцитах крыс.

Исследования проводили на гепатоцитах 3- и 24-месячных крыс самцов. Клетки ресуспендировали в среде Игла, содержавшей 10 % эмбриональную сыворотку, 20 мМ HEPES, пенициллин (61 мг/л), стрептомицин (100 мг/л), до 4*107 клеток/мл, и инкубировали 3 часа при 37 °С в присутствии С2-Цер (5 мкг/мл среды инкубации) или 16:0 (0,75 мМ) или без них. Клетки отмывали буфером Кребс-Хенселейт с 0,1 % альбумином и разводили перед началом эксперимента до концентрации 2*107 клеток/мл. Для определения содержания фосфатидилэтанола (ФЭТ) гепатоциты прединкубировали 10 минут с 300 мМ этанолом, затем в среду инкубации вносили инсулин (100 нМ) или 0,9 % NaCl (в качестве контроля к инсулину) и через 5 минут останавливали реакцию. Липиды разделяли с помощью тонкослойной хроматографии.

Установлено, что инкубация гепатоцитов 3-месячных крыс с инсулином в течение минут приводила к снижению содержания [14С]фосфатидилхолина (ФХ) с (103,3±8,6) до (72,4±11,1) нмоль/107 клеток, что сопровождалось повышением содержания [14С]ФЭТ (26,2±2,5) до (102,4±4,5) нмоль/107 клеток. Указанные изменения содержания липидов свидетельствуют об активации инсулином ФХ-ФЛД у молодых животных в этот промежуток времени.

В то же время, обнаружено повышение базального уровня Цер после инкубации с С2Цер или 16:0 в гепатоцитах молодых крыс, а также в интактных гепатоцитах 24-месячных крыс. Кроме того, инсулин не вызывал повышения содержание [14С]ФЭТ в этих клетках.

Таким образом, установлено, что в гепатоцитах 3-месячных крыс инсулин стимулирует ФЛД. В то же время, в клетках 24-месячных крыс, а также при добавлении в среду инкубации клеток печени экзогенного С2-Цер или его предшественника – 16:0 происходит накопление Цер и отмена инсулинстимулированного образования ФЭТ гепатоцитами молодых животных. Обнаруженные в настоящей работе возрастные и экспериментально индуцированные нарушения регуляции инсулином ФЛД могут быть связаны с накоплением в клетках печени Цер.

ВЛИЯНИЕ ХЛОРИДА РТУТИ НА АКТИВНОСТЬ НЕКОТОРЫХ NADPHГЕНЕРИРУЮЩИХ ФЕРМЕНТОВ В ПЕЧЕНИ КРЫС РАЗНОГО ВОЗРАСТА Ганусова Г.В., Калиман П.А.

Харьковский национальный университет им. В. Н. Каразина, Харьков, Украина Pavel.A.Kaliman@univer.kharkov.ua Ртуть – высокотоксичный тяжелый металл, широко распространенный в окружающей среде. Попадая в организм, ртуть может накапливаться и вызывать гемолиз эритроцитов, подавление иммунного ответа, канцерогенез, повреждение почек, нервной и эндокринной системы. Одним из главных механизмов токсического действия ртути и других тяжелых металлов является развитие оксидативного стресса, который сопровождается образованием активных форм кислорода (АФК), изменением системы антиоксидантной защиты организма.

В процессе детоксикации ртути важную роль играют восстановленный глутатион и металлотионенины, которые синтезируются в основном в печени и почках. При старении организма также происходит усиление образования АФК и накопление оксидативных повреждений в тканях. Для эффективной работы антиоксидантной защиты организма необходимо поддержание высокого уровня NADPH и активности NADPH -генерирующих ферментов.

В данной работе исследовались возрастные изменения активности некоторых NADPHгенерирующих ферментов в печени крыс при действии хлорида ртути.

В работе использовали крыс-самок линии Wistar 1-, 3- и 24- мес. возраста. Хлорид ртути (HgCl2) вводили подкожно из расчета 0.7 мг/100 г массы за 24 часа до эксперимента.

Активности NADPH-генерирующих ферментов: глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г6ФДГ), 6-фосфоглюконатдегидрогеназы (6ФГДГ), NADP+-малатдегидрогеназы, декарбоксилирующей (NADP+-МДГ), и NADP+-изоцитратдегидрогеназы (NADP+-ИЦДГ) определяли в цитозольной фракции печени спектрофотометрически по изменению поглощения NADPH при 340 нм. Оценку значимости различий между группами проводили с помощью критерия Стьюдента.

У контрольных крыс активность Г6ФДГ снижалась от 1- к 3-мес. возрасту (52 %) и оставалась на том же уровне у 24-мес. животных (63 %). Для NADP+-МДГ отмечено более выраженное снижение активности фермента с возрастом – от 1- к 3-мес. ( 48 %), далее снижение к 24 мес. (17 % по отношению к 1 мес.). 6ФГДГ повышалась от 1- к 24- мес.

возрасту (154 %). Активность NADP+-ИЦДГ возрастала от 1- к 3-мес. возрасту (165 %) и оставалась на том же уровне у старых животных (160 %).

После введения HgСl обнаружено повышение активности Г6ФДГ у 3 мес. крыс (160 %), а также NADP+-ИЦДГ у 1 мес. и 24 мес. животных (123%). Высокий уровень NADPH у этих животных, по-видимому, необходим для функционирования ферментов антиоксидантной защиты. Возрастная направленность активности изучаемых NADPHгенерирующих ферментов не изменилась при действии HgСl.

В контрольной группе суммарный пул NADPH повышался от 1- к 3-мес. возрасту (17 %) и не изменялся при старении. При введении HgСl обнаружена тенденция к повышению этого показателя у животных всех возрастных групп (17-20 %) и уменьшению возрастных различий (в основном за счет активности NADP+-ИЦДГ).

Таким образом, возрастные изменения образования NADPH связаны со снижением активноcти NADP+-МДГ и Г6ФДГ, а также повышение активности 6ФГДГ и NADP+-ИЦДГ в печени крыс. При введении HgСl основным поставщиком NADPH в цитозоле печени крыс разного возраста является изоцитратдегидрогеназная реакция.

Возраст, мес. Контроль HgСl однократно Г6ФДГ 1 мес. 41,7 ± 4.6 55.2 ± 5,3 мес. 21,7 ± 2.7** 34,4 ± 3.4* (**) 24 мес. 26,2 ± 2.5** 29,1 ± 3.2** 6ФГДГ 1 мес. 29,7 ± 2,0 32.8 ± 2.3 мес. 30,7 ± 2,1 30.6 ± 4.24 мес. 45,7 ± 4.2**(В) 44,9 ± 3.2**(В) МДГ 1 мес. 45,3 ± 4,3 46.8 ± 3,3 мес. 21.9 ± 2,0** 20.5 ± 2.1** 24 мес. 7,8 ± 0,9**(В) 7,9 ± 0,8**(В) ИЦДГ 1 мес. 128,9 ± 8,7 159,3 ± 9,8* 3 мес. 212,5 ± 11,8** 237,6± 8,9** 24 мес. 206,2 ± 10,0** 253,2 ± 9,5*(**) ВАРИАБЕЛЬНОСТЬ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ МИТОХОНДРИЙ ПЕЧЕНИ ПРИ ГОЛОДАНИИ У КРЫС РАЗНОГО ВОЗРАСТА Малеев В.А., Божков А.И.

НИИ биологии Харьковского национального университета имени В.Н. Каразина, Харьков, Украина Известно, что ограничение калорийности диеты приводит к увеличению продолжительности жизни. Однако особенности метаболизма при голодании и ограничении диеты и их связь с процессом старения изучены недостаточно.

Митохондрии являются ключевой структурой в метаболизме клетки, а их роль в процессе старения широко обсуждается в литературе как основной источник активных форм кислорода (АФК).

Интенсивность образования АФК в митохондриях зависит от их функционального состояния. Высокоэнергетическое состояние митохондрий характеризуется высокими скоростями дыхания и показателями сопряженности окислительного фосфорилирования. А высокие значения трансмембранного потенциала и восстановленности дыхательной цепи, сопряженные с процессом окислительного фосфорилирования, являются условиями генерации АФК. Поэтому настоящая работа посвящена изучению функционального состояния митохондрий печени крыс разного возраста при полном трехсуточном голодании и частичном, но длительном голодании, когда животные получали корм через день в течение 30-ти суток.

Обнаружены значительные различия функционального состояния митохондрий молодых и старых животных при полном и частичном голодании. Так при полном голодании наблюдали снижение дыхания митохондрий в фосфорилирующем состоянии. У молодых оно составляло 20 %, а старых 40 %. Дыхательный контроль имел аналогичную направленность изменений. Возрастной эффект зависел от сезона и был хорошо выражен в осенне-зимний период, но практически отсутствовал в весенне-летний. Эти сезонные изменения, в целом, коррелируют с состоянием липолитических процессов в тканях.

Возрастные различия энергетического состояния митохондрий при голодании можно объяснить состоянием липидного обмена и запасами жира у животных разного возраста, которые, как известно, зависят от сезона.

При длительном голодании митохондрии старых крыс имели более высокие показатели биоэнергетики по сравнению с молодыми. Низкое энергетическое состояние митохондрий молодых животных по-видимому, свидетельствовало о более чётком контроле энергетического баланса, что может снижать образование АФК и тем самым увеличивать продолжительность жизни при низкокалорийной диете.

СУБКУЛЬТИВИРОВАНИЕ КАК МОДЕЛЬ ИЗУЧЕНИЯ ЗАКОНОМЕРНОСТЕЙ СТАРЕНИЯ КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЫ DUNALIELLA VIRIDIS TEOD.

Ковалева М.К., Мензянова Н.Г.

НИИ биологии ХНУ имени В.Н. Каразина, Харьков, Украина Metyolkina@rambler.ru Временная нестабильность структурно-функциональных параметров клеточных культур создает значительные трудности в технологиях массового культивирования клеток.

Известно, что временная нестабильность клеточных культур может быть обусловлена как флуктуациями эпигенетических факторов, так и процессами старения. Реализация процессов старения в двух временных масштабах (хронологическое старение и репликативное старение), зависимость процессов старения от множества эпигенетических факторов создают значительные трудности в изучении закономерностей старения клеточных культур. В связи с этим возникает необходимость в новых методических подходах и простых экспериментальных моделях.

В представленной работе изучали возможность использования в качестве такой экспериментальной модели 4 субкультуры одноклеточной микроводоросли D. viridis.

Pages:     | 1 |   ...   | 5 | 6 || 8 | 9 |   ...   | 18 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.