WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 8 | 9 || 11 | 12 |   ...   | 18 |

Повод для инициации патологического процесса может быть случайным, тогда как механизм реализации конформационной патологии универсален для всех организмов: лавина повреждённых стрессом белков отвлекает адаптационную систему шаперонов от контроля функциональной конформации синтезирующихся de novo белков, что приводит к появлению мутантных протеинов в несвёрнутом состоянии. Такие мутантные белки организм синтезировал всю жизнь, но шапероны вовремя исправляли их конформацию, делая их приемлемо функциональными. Без шаперонов мутантные белки не способны самостоятельно обрести нативную пространственную структуру и становятся затравками в цепной реакции агрегации, что приводит к развитию различных амилоидозов. Как правило, в агрегаты рекрутируются регуляторные белки, отличные от затравки. Данный механизм характерен для целого ряда нейродегенеративных заболеваний, клиническое проявление которых совпадает с началом этапа старения организма. Речь идёт о болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, болезни Хантингтона, прионной патологии и др. Цель работы состояла в моделировании структурных предпосылок агрегации специфических маркерных пептидов при болезни Альцгеймера.

Структурные шаблоны -амилоидного пептида 1-40 и 1-42 были построены по детерминирующим их нуклеотидным последовательностям (база данных Protein Data Bank).

Визуализировали пространственную структуру протеинов в графическом редакторе Ggenedit. exe. На основе полученных моделей были сформулированы структурные предпосылки агрегации, специфичные для мутантного -амилоидного пептида1-42, играющего роль затравки в процессе амилоидообразования при болезни Альцгеймера.

Показали, что для -амилоидного пептида 1-40/42 характерно формирование олигомеров вследствие образования межмолекулярного антипараллельного -складчатого слоя в области С-концевых доменов этих пептидов. Роль затравки играет вариант этого пептида удлинённый на два аминокислотных остатка. Дальнейшее укрупнение агрегатов обязано сборке протофибрилл из бусин-олигомеров при участии двухвалентных катионов.

ВЗАИМОСВЯЗЬ ФЕНОТИПОВ ЛЕЙКОЦИТАРНЫХ АНТИГЕНОВ С ИЗМЕНЕНИЕМ ЭКСПРЕССИИ CD-МАРКЕРОВ, КОНЦЕНТРАЦИЕЙ ЦИТОКИНОВ И ОРГАНОСПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ У БОЛЬНЫХ МИАСТЕНИЕЙ Климова Е.М.

ГУ «Институт общей и неотложной хирургии АМН Украины», Харьков, Украина Миастения относится к ряду аутоиммунных заболеваний, при котором иммунологические факторы, а именно антитела и агрессивные клоны иммунокомпетентных клеток наряду с обезвреживанием патологических экзогенных и эндогенных антигенов, проявляют аутолизис и аутофагию, направленную против собственных тканей организма.

При миастении специфическими мишенями для аутоагрессии являются некоторые лиганды синапсов, участвующих в передаче нервных импульсов, мышечные клетки и различные зоны ткани тимуса. Патологические аутоиммунные процессы развиваются вследствие нарушения иммуногенетического контроля и затрагивают многие функции всех регуляторных систем (эндокринной, нервной и иммунной). У больных миастенией в различных возрастных группах вследствие нарушения регуляторных процессов могут развиваться характерные необратимые изменения, проявляющиеся в прогрессирующей мышечной слабости и опухолевом поражении вилочковой железы. У некоторых больных опухолевые поражения тимуса приобретают злокачественный характер течения и могут развиваться местнораспространенные тимомы, вовлекающие в опухолевый процесс либо эпителиальные слой тимуса, либо его лимфоидные элементы.

Известно, что имеются достоверные возрастные отличия в частоте встречаемости доброкачественной гиперплазии тимуса и развития злокачественных тимом.

Злокачественные тимомы в 80 % случаев встречаются у больных миастенией после 60 лет.

По характеру поражения тимуса тимомы подразделяют на лимфоидные (ЛТ), лимфоэпителиальные (ЛЭТ), эпителиальные (ЭТ), гранулематозные (ГТ).

Содержание органоспецифических антител к тканям легких, печени и к нативной ДНК, экспрессию маркеров дифференцировки CD, изменения концентрации цитокинов и лейкоцитарные фенотипы исследовали у 364 больных миастенией методами иммуноферментного, иммунофлюоресцентного анализа, световой микроскопии, фотоколориметрии и спектрофотометрии. Больные были распределены на две возрастные группы: младшая – до 50 лет, и старшая возрастная группа – после 50 лет.

Результаты наших исследований показали, что у больных миастенией, протекающей на фоне гиперплазии тимуса, в младшей и старшей возрастных группах, образуется целый спектр органоспецифических аутоантител. В первой возрастной группе отмечали повышение концентрации антител к денатурированной ДНК, что составило (0,058±0,01) Е.е., при норме (0,02±0,001) Е.е. У этой категории больных также значительно повышена концентрация антител к гепатоцитам, что составило 0,08±0,01 Е.е. при 0,03±0,01 Е.е. в контроле. У больных миастенией с гиперплазией тимуса старшей возрастной группы выявили достоверное увеличение антител к ткани легких – 0,09±0,04 Е.е. при контроле 0,02±0,001 Е.е.

У больных младшего возраста, страдающих миастенией на фоне тимом, выявлено достоверное повышение антител только к ткани печени. У больных старшей группы органоспецифические антитела достоверно не повышались.

У больных генерализованной миастенией, протекающей на фоне злокачественного поражения тимуса, выявили различные фенотипы лейкоцитарных антигенов и отличия в экспрессии маркеров дифференцировки CD на лимфоцитах периферической крови. При лимфоидных тимомах (ЛТ) фенотипирование HLA выявило высокую частоту встречаемости лейкоцитарных антигенов II класса DR-1 и DR-5. При лимфоэпителиальных тимомах (ЛЭТ) у 95% больных выявляли фенотипы DR-3 и DR-7; у больных с эпителиальными тимомами выявили гетерозиготные фенотипы лейкоцитарных антигенов HLA DR1 и HLA DR3 у 65 %, а у больных с гранулематозными тимомами (ГТ) выявили фенотипы антигенов II класса HLA DR 5 и HLA DR 52 у 72 % больных.

Поскольку аутолизирующие антитела могут существенно изменить функциональное состояние рецепторов иммунокомпетентных клеток, нами были исследованы, наряду с фенотипами лейкоцитарных антигенов изменения экспрессии CD маркеров дифференцировки, и изменения концентрации цитокинов в сыворотке крови.

У больных старшей возрастной группы с лимфоэпителиальными тимомами (ЛЭТ) на фоне достоверного повышения экспрессии кластеров дифференцировки CD19+, CD16+ выявили достоверное увеличение концентрации интерлейкина 4 и простогландина Е, а также значительное увеличение органоспецифических антител к тканям печени. Все выше перечисленные изменения исследуемых параметров сопровождались многократным снижением концентрации гамма-интерферона у больных с ЛЭТ. У больных миастенией, протекающей на фоне гранулематозной тимомы (ГТ), выявили достоверное снижение интерлейкина 2 и интерлейкина 4, а концентрация интерлейкина 8 превышала референтные значения во много раз.

Таким образом, различные клинические фенотипы миастении сопровождаются определенным сочетанием патологических изменений функции иммунокомпетентных клеток и медиаторных систем. Для больных миастенией, протекающей на фоне гиперплазии тимуса, диагностически значимыми являются увеличение органоспецифических антител, причем у больных старшего возраста выявляли только органоспецифические антитела к тканям печени. У больных с различными типами злокачественных тимом диагностически значимыми показателями были изменения экспрессии СD маркеров, концентрация интерлейкинов. Также было выявлено наличие ассоциации злокачественных тимом с определенными фенотипами лейкоцитарных антигенов. Органоспецифические антитела у больных с тимомами старшей возрастной группы не были выявлены.

ЗАДЕРЖКА ПРОЯВЛЕНИЯ КЛЕТОЧНОЙ ГИБЕЛИ В ИЗОЛИРОВАННЫХ КОЛЕОПТИЛЯХ ПШЕНИЦЫ Карпец Ю.В., Колупаев Ю.Е., Швиденко Н.В., Акинина Г.Е., Попов В.Н.

Харьковский национальный аграрный университет им. В.В. Докучаева, Харьков, Украина plant_biology@mail.ru Колеоптили проростков злаков считаются удобной моделью для изучения запрограммированной гибели растительных клеток. В колеоптилях проростков пшеницы на 5-6 сут с момента проращивания установлено начало проявления межнуклеосомной фрагментации ДНК (Кирнос и др., 1999) и ультраструктурных признаков апоптоза (Александрушкина и др., 2004). В то же время изолированные колеоптили злаков (чаще пшеницы) широко используются в физиологии растений как модельный объект для изучения действия фитогормонов и клеточных механизмов устойчивости к действию стрессоров (Мелехов и др., 1983). В связи с этим представляется важной оценка параметров жизнеспособности изолированных колеоптилей. Однако специальных исследований по сопоставлению эффектов, связанных с проявлением клеточной гибели в интактных и изолированных колеоптилях, до сих пор не проводилось. Нами изучены состояние ДНК и клеточных мембран в отрезках базальных частей колеоптилей этиолированных проростков пшеницы.

На 8-е сутки с момента проращивания семян пшеницы сорта Элегия при температуре 20С в колеоптилях, отделенных от 7-суточных интактных проростков наблюдалась фрагментация ДНК. При этом в колеоптилях, отделенных от проростков на 4 сут и инкубировавшихся еще 4 суток на 2 % растворе сахарозы, ДНК оставалась целостной.

Изолированные колеоптили 4-суточных проростков практически не окрашивались Эвансом голубым в течение семи суток с момента отделения (11 суток от начала проращивания семян), что свидетельствует об отсутствии в них массовой клеточной гибели. В то же время окрашивание колеоптилей, отделяемых от интактных проростков на 7-е и 10-е сутки составляло соответственно 20-28 %. Таким образом, имеются основания полагать, что в колеоптилях пшеницы, которые отделяли от проростков на 4 сут проращивания и затем инкубировали на растворе сахарозы, происходила существенная задержка процессов старения и клеточной гибели. Такое заключение также согласуется с данными, полученными Кирносом и соавт. (1999), о том, что в срезанных колеоптилях по сравнению с интактными значительно в меньшем количестве образуется так называемая «тяжелая» митохондриальная ДНК, появление которой сопровождает ранние стадии апоптоза.

ВОЗРАСТНАЯ ИНВЕРСИЯ СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ СВОЙСТВ НАДМОЛЕКУЛЯРНЫХ КОМПЛЕКСОВ МАТРИКСА СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ В РАННЕМ ПОСТНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ Буланкина Н.И., Костина Т.В., Кот Ю.Г., Перский Е.Э., Пономаренко А.Н., Фальченко Е.В., Эль Таалу А.

Харьковский национальный университет имени В.Н. Каразина, Харьков, Украина Изучены метаболические основы снижения структурной стабильности надмолекулярных комплексов в матриксе соединительной ткани в период интенсивного роста массы и мышечной силы организма и рассмотрена биологическая роль этого явления.

Объект исследования: кожа, коллагеновые волокна, коллаген типа І, эластин и гликозаминогликаны in vivo и in vitro крыс-самцов линии Вистар 1, 3, 12, 24 месяцев.

Исследованные показатели: 1. Структурная стабильность – вязко-упругие свойства и термостабильность кожи и коллагеновых волокон; 2. Метаболизм – синтез, внутри- и внеклеточный процессинг биополимеров; 3. Фибриллообразование in vitro.

Показано, что в период от 1 до 24 месяцев прочность кожи на разрыв непрерывно повышается. В то же время её модуль Юнга в области упругой деформации снижается в период от 1 до 3 месяцев, после чего вновь повышается, а максимальное относительное удлинение в момент разрыва, повышаясь от 1 до 3 месяцев, в дальнейшем непрерывно снижается. Аналогичным образом выглядит динамика вязко-упругих свойств изолированных коллагеновых волокон.

В период от 1 до 3 месяцев скорость и степень теплового разрушения надмолекулярных межклеточных комплексов кожи при постоянной температуре увеличиваются, регулярно снижаясь затем до 24-месячного возраста. Динамика изменения энергии активации этого процесса имеет противоположный характер.

В основе этой инверсии стабильности надмолекулярных комплексов в период от 1 до месяцев лежат изменения на двух уровнях.

1. Надмолекулярный – изменение компонентного состава конструкционных биополимеров в комплексах, происходящее из-за различной динамики их метаболизма в онтогенезе. Так, возрастная динамика отношения содержания коллагена, определяющего гуковскую упругость и жёсткость кожи, как к содержанию эластина, определяющего её резиноподобные упругость и растяжимость, так и к содержанию гликозаминогликанов, от которых, в значительной степени, зависят вязкие свойства ткани, представляет собой кривую с минимумом в 3 – месячном возрасте.

2. Молекулярный – изменение активности ферментов внутриклеточного и внеклеточного процессинга, вызывающее изменение структуры молекул конструкционных биополимеров, наиболее ярко выражено у коллагена, обладающего наибольшим числом модификаций. Так, гидроксилирование пролина в нём регулярно снижается от 1 до месяцев. В то же время возрастная динамика окислительного дезаминирования -NH2-групп лизила и гидроксилизила имеет более сложный характер. Повышаясь к 3-месячному возрасту, содержание свободных -NH2-групп в коллагене остаётся в дальнейшем постоянным, в то время как содержание свободных СОН-групп, начиная с 1 месяца, неуклонно снижается с возрастом. В соответствии с обеими модификациями, в период от до 3 месяцев в коллагене образуются, в основном, внутримолекулярные связи альдольного типа, а после 3 месяцев – межмолекулярные – типа шиффовых оснований. Это и приводит к снижению термостабильности комплексов в период от 1 до 3 месяцев с дальнейшим её ростом до 24 месяцев.

Фибриллы, образующиеся в результате самосборки in vitro из коллагена 1- и 3месячных животных, имеют меньшие длину и диаметр, чем образующиеся из коллагена 12- и 24-месячных, что определяется обнаруженными возрастными особенностями внутри- и межмолекулярного связывания. Аналогичные отличия размеров имеют и коллагеновые волокна из дермы кожи животных 1, 3, 12 и 24 месяцев.

Биологический смысл инверсии структурной стабильности, очевидно, заключается в том, что после некоторого замедления роста плода перед рождением, в начале постнатального онтогенеза, в период до 3 месяцев происходит интенсивный рост организма, и межклеточные комплексы с высокой структурной стабильностью и жёсткостью неблагоприятны для клеточной дифференцировки, перемещения клеток и успешного морфогенеза.

ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ПЕРЕСТРОЙКИ АКТИВНОСТИ ДЕГИДРОГЕНАЗ ЦТЦ ПРИ АЛЛОТРАНСПЛАТАЦИИ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ ТКАНЕЙ Петров С.А.

Одесский национальный университет имени И.И. Мечникова, Одесса, Украина Механизмы взаимодействия эмбриональных и сформировавшихся тканей и клеток практически не изучены. Значение таких взаимодействий трудно переоценить, поскольку они имеют место не только при развитии и формировании всех без исключения органов организма, но и при трансплантации различных тканей.

Pages:     | 1 |   ...   | 8 | 9 || 11 | 12 |   ...   | 18 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.