WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     || 2 |
608 Урология удК 616.62-006.6-018-008.9-074-078.63 Оригинальная статья роль иммУногиСтохимичеСких маркеров в диагноСтике рака мочевого ПУЗыря Г.Н. Маслякова – ГОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И.Разумовского Росздрава, начальник морфологического отдела НИИ фундаментальной и клинической уронефрологии, профессор, доктор медицинских наук; А.Н. Понукалин – ГОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И.Разумовского Росздрава, старший научный сотрудник отдела реконструктивной уронефрологии НИИ фундаментальной и клинической уронефрологии, доцент, кандидат медицинских наук; Е.Н. Цмокалюк – ГОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И.Разумовского Росздрава, научный сотрудник морфологического отдела НИИ фундаментальной и клинической уронефрологии; А.Б. Бучарская – ГОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И.Разумовского Росздрава, научный сотрудник морфологического отдела НИИ фундаментальной и клинической уронефрологии, кандидат биологических наук; А.В. Медведева – ГОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И.Разумовского Росздрава, научный сотрудник морфологического отдела НИИ фундаментальной и клинической уронефрологии.

SIGNIfICANCe Of IMMuNOHIStOCHeMICAL MARkeRS IN DIAGNOStICS Of uRINARY BLADDeR CANCeR G.N. Maslyakova – Saratov State Medical University n.a. V.I.Razumovskiy, Scientific Research Institute of Fundamental and Clinical Uronephrology, Head of Morphological Department, Professor, Doctor of Medical Science; A.N. Ponukalin – Saratov State Medical University n.a. V.I.Razumovskiy, Scientific Research Institute of Fundamental and Clinical Uronephrology, Department of Reconstructive Uronephrology, Assistant Professor, Candidate of Medical Science; E.N. Tsmokalyuk – Saratov State Medical University n.a. V.I.Razumovskiy, Scientific Research Institute of Fundamental and Clinical Uronephrology, Morphological Department, Associate Research Assistant; A.B. Bucharskaya – Saratov State Medical University n.a. V.I.Razumovskiy, Scientific Research Institute of Fundamental and Clinical Uronephrology, Morphological Department, Research Assistant, Candidate of Biological Science;

A.V. Medvedeva – Saratov State Medical University n.a. V.I.Razumovskiy, Scientific Research Institute of Fundamental and Clinical Uronephrology, Morphological Department, Research Assistant, Candidate of Medical Science.

дата поступления – 12.09.09 г. дата принятия в печать – 27.10.09 г.

Г.Н. Маслякова, А.Н. Понукалин, Е.Н. Цмокалюк и соавт. Роль иммуногистохимических маркеров в диагностике рака мочевого пузыря. Саратовский научно-медицинский журнал, 2009, том 5, № 4, с. 608-611.

На основании исследования операционного и биопсийного материала 106 пациентов с заболеваниями мочевого пузыря, проходивших лечение в НИИ «Фундаментальной и клинической уронефрологии» СГМу была проведена оценка 13 иммуногистохимических маркеров: пролиферативной активности – ki67, pcna, p63; супрессора опухолевого роста – р53, маркеров апоптоза bcl2, Вах; рецептора эпидермального фактора роста – egfR; цитокератинового профиля ( цК7, цК8, цК10/13, цК17, цК18, цК19) и дана их диагностическая оценка для постановки диагноза рака мочевого пузыря.

Ключевые слова: рак мочевого пузыря, иммуногистохимия, диагностические и прогностические факторы.

G.N. Maslyakova, A.N. Ponukalin, E.N. Tsmokalyuk et al.. Significance Of Immunohistochemical Markers In Diagnostics Of Urinary Bladder Cancer. Saratov Journal of Medical Scientific Research, 2009, vol. 5, № 4, p. 608-611.

on the basis of surgical and biopsy material 106 patients with diseases of urinary bladder have been under study.

they received treatment at Scientific Research Institute of fundamental and clinical uronephrology of Saratov State Medical university. 13 immunohistochemical markers have been evaluated: markers of proliferative activity – ki-67, pcna, p63, suppressor of tumor growth – p53, markers of apoptosis – bcl-2, bax, receptor of epidermal growth factors – egfR, cytokeratin profile – (ck7, ck8, ck10/13, ck 17, ck18, ck19), as well as their diagnostic significance for identifying the urinary bladder cancer.

Key words: urinary bladder cancer, immunohistochemical markers, diagnostic and prognosis factors.

ежегодно в мире раком мочевого пузыря заболе- дения отличаются противоречивостью выводов и не вает 335,8 тысяч человек, в России – 12,5. На долю позволяют однозначно рекомендовать какой-либо мочевого пузыря по данным разных авторов прихо- маркер в качестве универсального диагностического дится от 2,7% до 4% всех опухолей. По темпам абсо- и прогностического критерия.

лютного прироста среди онкоурологических заболе- Целью исследования явилось определение ваний РМП выходит на 4-е место, уступая лишь раку диагностической значимости иммуногистохимичепредстательной железы, почки и яичка [1].Сегодня в ских маркеров для ранней диагностики рака мочеРоссии под динамическим наблюдением находятся вого пузыря.

около 60 тысяч больных РМП, и только у 45% бо- Материалы и методы. Материалом для исслелезнь диагностируется на ранних стадиях развития дования послужил операционный и биопсийный ма[2]. Все эти обстоятельства создают предпосылки териал 106 пациентов с заболеваниями мочевого для поиска новых методов диагностики ранних форм пузыря, проходивших лечение в НИИ «фундаменрака и маркеров прогноза заболевания. В настоящее тальной и клинической уронефрологии» ГОу ВПО время хорошо известны и широко применяются та- Саратовский ГМу им В.И.Разумовского Росздрава.

кие морфологические критерии, как глубина инвазии, Операционный и биопсийный материал фиксиростепень дифференцировки клеток, митотическая вался в 10% растворе нейтрального формалина активность и т.д. [3]. Последнее время большое и заливался в парафин. Срезы толщиной 5-7 мкм, количество работ посвящено исследованию новых окрашенные гематоксилин-эозином, подвергались иммуногистохимических маркеров, позволяющих ди- обзорному морфологическому анализу, при котором агностировать ранние признаки инвазии и рецидива стадию рака определяли в соответствии с классифирака мочевого пузыря. Однако опубликованные све- кацией tnM, а степень дифференцировки опухолевых клеток оценивали в соответствии с рекомендаОтветственный автор: Маслякова Галина Никифоровна циями ВОЗ (2002).

410012, г. Саратов, ул. большая Казачья, 112, Иммуногистохимические реакции ставили на ГОу ВПО Саратовский ГМу им. В.И. Разумовского Росздрава, кафедра патологической анатомии, серийных парафиновых срезах (5мкм), используя тел. (8452) 669751.

стрептавидин-биотиновый метод. В качестве детекe-mail gmaslyakova@yandex.ru Саратовский научно-медицинский журнал. 2009. том 5. № 4.

uROLOGY ционной системы применяли систему lSab2 System, 2) 21% - 50% – умеренная пролиферативная акhRp, k0675, dako, в качестве хромогена – диамино- тивность;

бензидин (dako). 3) 51% - 100% – высокая пролиферативная активдля иммуногистохимического исследования были ность.

использованы 13 коммерческих моноклональных ан- Статистический анализ проводили с использоватител, разделенных на группы по функциональной нием пакета программ статистической обработки резначимости: зультатов SSpS 13.0 for Windows.

- маркеры пролиферативной активности –ki67, С помощью обзорных методов окрашивания диаpcna, p63; гноз уротелиального рака был поставлен 94 паци- супрессор опухолевого роста – р53; ентам. Остальные 12 пациентов составили группу - маркер апоптоза bcl2, Вах; контроля. Иммуногистохимическое исследование - рецептор эпидермального фактора роста – маркеров было проведено на биопсийном материале egfR; 66 пациентов, в связи с ограниченным количеством - цитокератиновый профиль – цК7, цК8, цК10/13, материала. Распределение больных по группам в цК17, цК18, цК19. данном случае проводилось с учетом гистологичеИнтенсивность реакций, локализованных в ци- ской картины заболевания (табл. 1).

топлазме (цитокератины 7,8,13, 17,18,19), Вах и на Результаты исследования. При анализе показамембранах клеток (egfR) оценивали полуколиче- телей экспрессии иммуногистохимических маркеров, ственным способом по балльной шкале от 0 до 3, имеющих ядерную локализацию, в различных групучитывая выраженность реакции и ее локализацию: пах больных с раком мочевого пузыря были получе0 – отсутствие реакции, 1 – слабая реакция, 2 – уме- ны следующие результаты (табл. 2).

ренная реакция, 3 – сильная реакция. Антиген пролиферирующего клеточного ядра Результаты реакций с антигенами, имеющими (pcna) является мультифунциональным белком, ядерную локализацию (pcna, ki67, p53, p63, bcl2) который экспрессируется в делящихся клетках в оценивали, подсчитывая количество окрашенных конце g1-фазы и в первой трети S-фазы. В тканях ядер на 100 ядер в 3 полях зрения и выражая по- с низкой пролиферативной активностью по данным лученные результаты в процентах. Маркеры проли- литературы экспрессия антитела минимальна, однаферативной активности расценивались следующим ко результаты нашего исследования показали, что образом: маркер пролиферирующего клеточного ядра (pcna) 1) 0% - 20% – низкая пролиферативная актив- дает положительную реакцию во всех исследуемых ность; группах, в том числе и в группе сравнения, что деТаблица Распределение больных по степени инвазии рака, полу и возрасту Кол-во Группы Мужчины женщины Средний возраст больных та- неинвазивный 15 12 3 т1с прорастанием в собственную пластинку слизистой 9 7 2 т2 – с прорастанием в мышечный слой 23 22 1 т3 – с прорастанием в паравезикальную клетчатку 8 7 1 т4 – с прорастанием в другие органы 11 10 1 т0 группа сравнения 14 11 3 Таблица Показатели ИГх-реакций с антигенами, имеющими ядерную локализацию Показатель т0 та т1 т2 т3 тpcna(%) 20±7,6 30,33±10,2 55,83±13,5 73,86±6,1 35,25±14,7 46,25±16,pcna int 1,75±0,25 1,5±0,27 2,6±0,25 2,43±0,2 1,75±0,25 1,67±0,ki67(%) 0 2,33±1,7 28±9,9 24,44±8,2 40,75±12,7 49±8,ki67 int 0 1 1,8±0,2 2,2±0,2 2,25±0,25 2,2±0,p53(%) 0 5,45±5,45 23,6±14 11,5±9,4 35±20,6 27±18,p53 int 0 1 2±0,6 1,67±0,7 2,5±0,5 2,5±0,p63(%) 0 37±8,67 13,3±7,7 31,43±13,7 0 7,5±7,p63 int 0 1,9±0,2 1,7±0,3 1,5±0,3 0 (%) - % экспрессирующих клеток, int – интенсивность экспрессии Saratov Journal of Medical Scientific Research. 2009. Vol.5. № 4.

610 Урология лает его применение для ранней диагностики рака сравнения, однако достоверных различий частоты и мочевого пузыря невозможной. интенсивности экспрессии в группах больных с разбыло отмечено, что процент экспрессирующих личной стадией заболевания не выявлено.

клеток возрастал по мере увеличения глубины ин- При иммуногистохимическом исследовании с анвазии опухоли непосредственно в стенку мочевого тигенами, имеющими локализацию в цитоплазме, пузыря ( т 1, т2 ). Как только опухоль начинала про- были получены следующие результаты (табл. 3).

растать в паравезикальную клетчатку, процент экс- экспрессия цитокератинов во всех исследованпрессирующих клеток уменьшался, что, возможно, ных группах больных была положительной. достосвязано с уменьшением дифференцировки клеток. верно значимых различий между группами больных ki67–антиген экспрессируется во всех фазах по показателям иммуногистохимических реакций с митотического цикла (g1, S, g2 b M-фазах), но от- антигенами, имеющими локализацию в цитоплазме, сутствует в фазе покоя (g0), что позволяет исполь- не выявлено. Ни один из этих маркеров не продемонзовать ki67 в качестве оптимального маркера проли- стрировал значимой корреляционной зависимости с ферации. клинической стадией заболевания.

Как показали наши исследования, маркер ki67 не Рецептор эпидермального фактора роста (egfR) дает экспрессии в группе сравнения, а также отмеча- представляет собой трансмембранный гликопротеин, ется корреляционная зависимость высокой степени при активации которого под действием внутриклеточзначимости между стадией рака мочевого пузыря, ных тирозиновых киназ происходит деление клетки.

процентом экспрессирующих клеток и интенсивно- эти рецепторы в норме располагаются вдоль базальстью иммуногистохимической реакции. Практически ной мембраны уротелия, но при переходноклеточном в два раза повышается количество экспрессирующих раке определяются во всех его слоях. Проведенное клеток при стадиях заболевания т3 и т4, т.е. когда исследование показало, что как в группе сравнения, опухоль начинает прорастать за пределы стенки мо- так и группе со стадией та во всех случаях был почевого пузыря. лучен отрицательный результат (рис. 1).

p53 является ядерным белком, который регулирует клеточный цикл и апоптоз, а также контролирует целостность генома. экспрессия гена р53 выявляется во многих злокачественных новообразованиях, в том числе в переходноклеточных карциномах.

установлено, что интенсивность экспрессии рвозрастает в группах с увеличением глубины инвазии. что касается количества экспрессирующих клеток, то более чем в четыре раза увеличивается процент экспрессирующих клеток в группе инвазивного рака, что является весьма обнадеживающим критерием при определении прогноза заболевания.

Несколько другая картина наблюдалась при использовании маркера р63. Преимущественным местом экспрессии белка р63 являются ядра пролиферирующего базального слоя клеток многослойного плоского и переходного эпителия. Исследования поэкспрессия маркера egfR в группах казали, что белок р63 не дает экспрессии в группе с различной стадией рака Таблица Показатели ИГх-реакций с антигенами, имеющими цитоплазменную локализацию Маркер т0 та т1 т2 т3 т ck7(%) 79±4,6 83,5±4,6 88,6±2,8 90,9±3,1 91±3,3 86,3±2,ck7 int 2,2±0,4 2,3±0,2 2,9±0,14 2,83±0,17 3±0,2 3±0,ck8(%) 34±9,6 49±7,8 64,3±12,9 50±10,2 48,3±10,5 40±10,ck8 int 1±0,1 1,44±0,18 1,83±0,17± 1,5±0,19 1,33±0,2 1±0,ck13(%) 39,1±11,4 57,5±5,9 40,7±13,2 34,2±11,1 27,5±13 50±13,ck13 int 1,5±0,2 1,25±0,16 1,8±0,37 2,33±0,33 1,25±0,25 1,5±0,ck17(%) 25±11,7 44±11,3 30,6±12,1 34,6±11,7 43,5±18,7 20±16,ck17 int 1,25±0,25 2±0,22 1,8±0,49 1,38±0,18 2,2±0,37 1,2±0,ck18(%) 20±18,7 67,5±8,5 48,8±10,6 59,6±7,3 46±18 60±14,ck18 int 1,5±0,5 1,9±0,2 1,88±0,3 2,2±0,23 2,25±0,48 2,25±0,ck19(%) 52±11,6 62±6,5 66,9±6,9 64,6±6,8 34±17,2 35±14,ck19 int 1,2±0,2 1,7±0,2 1,88±0,35 2±0,27 1,67±0,33 1,33±0,(%) - % экспрессирующих клеток, int – интенсивность экспрессии Саратовский научно-медицинский журнал. 2009. том 5. № 4.

uROLOGY данный маркер нецелесообразно использовать левания, набор иммуногистохимических маркеров в качестве дифференциально диагностического должен быть избирательным. для ранней дифпризнака между доброкачественными и ференциальной диагностики доброкачественных и злокачественными новообразованиями, однако для злокачественных новообразований целесообразно определения глубины инвазии и, следовательно, в использование Кi 67, p63, р53, которые показали качестве прогностического фактора использование высокую степень корреляции с клинической стадиданного маркера вполне допустимо. На возможность ей заболевания.

Pages:     || 2 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.