WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 7 | 8 || 10 | 11 |   ...   | 83 |

Влияние электромагнитного поля на активность АТФ-гидролазы зародышей вьюна на этапах раннего эмбриогенеза Бура Марта Владимировна1, Мандзинец С. М. 1, Яремкевич Е. С.(1Львовский национальный университет имени Ивана Франко, 2Национальный университет «Львовская Политехника», Украина, Львов, mcelevych@yahoo.com) Процессы взаимодействия электромагнитного поля (ЭМП) с живой клеткой или организмом, особенно с зародышем, очень сложные и на данное время недостаточно изучены. Целью исследования было определение влияния ЭМП на активность Na+, K+АТФазы (маркер плазматической мембраны и тест-система) зародышей вьюна на этапах раннего эмбриогенеза в условиях in vivo. Объектом исследования были зародыши вьюна (Misgurnus fossilis L.) в период раннего эмбриогенеза. Пробы отбирали на стадиях 2, 16 и бластомеров, 8 и 10 делениях. Электромагнитная обработка зародышей проводилась с помощью генератора ЭМП. Инкубированные в растворе Гольтфретера зародыши после оплодотворения размещали в центре соленоида и 15 мин воздействовали на них ЭМП (частота 27,14 МГц). Оптимальные условия подобраны экспериментально. Активность Na+, K+-АТФазы зародышей определяли модифицированным методом Фиске-Суббароу, количество белка в пробе – методом Лоури. Под влиянием ЭМП выявлено достоверное изменение активности Na+, K+-АТФазы в сравнение с контролем. Самую малую реакцию зародышей на влияние ЭМП выявили на первом часу развития (2 бластомеры) – активность АТФазы снизилась на 19,3±0,9% (р<0,05). Возможно, такие изменения связаны с очень низкой чувствительностью зародышей к воздействию экзогенных факторов на ранних этапах бластуляции. На следующих этапах деления тоже установлено статистически достоверное более выраженное снижении активности АТФазы за действия ЭМП в сравнении с контролем в среднем на 53,6% (р<0,001).

Известно, что ключевую роль в биологических эффектах ЭМП играет изменение магнитоэлектрических свойств молекул воды, входящих в состав клеточных мембран. ЭМП будет вызывать отклонение траектории движения Na+, K+, Mg2+ через ионные каналы, соответственно инактивацию мембранозависимых энзимов вследствие отсутствия транспорта. Кроме того, ЭМП влияет на окисление SH-групп, с которыми связаны многие биологические процессы: проницаемость клеточных мембран, функции рецепторов, активность ферментов, структура биомакромолекул, а также клеточное деление, нарушение которого отмечено в предыдущих экспериментах.

Работа выполнена при финансовой поддержке Державного фонда фундаментальных исследований, проект № Ф25.5/075. Авторы выражают благодарность д.б.н. Санагурскому Д.И. и к.т.н. Яремкевичу С.К. за помощь в проделанной работе и подготовке тезисов.

Образование активных форм кислорода под действием ионов уранила in vitro Гармаш Светлана Анатольевна, Гудков С.В.

(Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, Пущинский государственный университет, Пущино, Россия, daradysha@rambler.ru) В настоящее время обедненный уран используется в качестве балласта в судах, самолетах и для изготовления бронебойных снарядов, а также для придания цвета стеклу и керамике. Показано, что обедненный уран может быть причиной заболеваний неясной этиологии. Кроме того, опубликовано несколько работ, в которых показано, что обедненный уран может являться причиной повреждения ДНК, мутагенеза и канцерогенеза.

Нами исследовано влияние обедненного урана на образование активных форм кислорода (АФК), в частности перекиси водорода, как наиболее долгоживущей из АФК и гидроксильных радикалов, как наиболее реакционноспособных. Использовали уранилнитрат, ионы уранила является наиболее стабильными оксидами урана, образующимся при его автоокислении в присутствии кислорода. В качестве отрицательного контроля для уранилнитрата использовали нитрат натрия.

Концентрацию перекиси водорода измеряли с помощью метода усиленной хемилюминисценции в системе люминол-парайодфенол-пероксидаза с использованием жидкостного сцинциляционного счетчика «Бета1» (Украина), измерение концентрации гидроксильных радикалов производили с помощью флуоресцентного зонда кумарин-3карбоновой кислоты.

Впервые показано образование перекиси водорода и гидроксильных радикалов под действием ионов уранила (в виде уранилнитрата) in vitro. Установлено, что генерация активных форм кислорода (АФК) в водных растворах содержащих ионы уранила происходит более интенсивно при повышении температуры и воздействии на растворы электромагнитных волн видимого спектра. Показано, что присутствие в водных растворах нитрат анионов приводит к не значительному влиянию на процесс образования АФК при воздействии тепла и света. Образование перекиси водорода и гидроксильных радикалов сильно зависит от концентрации ионов уранила (5, 10, 50, 100, 200, 500 мкМ) в растворе. С ростом концентрации уранилнитрата показано увеличение образования перекиси водорода и гидроксильных радикалов при действии тепла и света.

Работа поддержана грантом Российского фонда фундаментальных исследований 1004-01265-а.

Исследование антикоагулянтной активности ДНК-аптамеров in vitro и in vivo Завьялова Елена Геннадиевна1,2, Решетников Р.В.2,3, Головин А. В.2,3, Пантелеев Д.Ю.2,4, Мудрик Н. Н.2, Павлова Г.В.2,4, Копылов А. М.(1 Московский Государственный университета им. М.В. Ломоносова, Химический факультет, 2ООО «АПТО-ФАРМ», 3Московский Государственный университета им. М.В.

Ломоносова, Факультет Биоинженерии и Биоинформатики, 4Институт биологии гена РАН, Россия, Москва, zlenka2006@rambler.ru) ДНК-аптамеры – перспективная альтернатива антителам в терапии и диагностике.

Работа посвящена исследованию ингибирующей активности ДНК-аптамеров к тромбину в плазме крови млекопитающих, а также in vivo при болюсном введении препаратов крысам.

Эффективность ДНК-аптамеров тестировалась на стандартной плазме крови человека с помощью автоматического коагулометра ВСТ (Dade Behring). Для исследований in vivo крысам линии Wistar болюсно через яремную вену вводились препараты, отбор образцов крови производился из симметричной вены. Новый аптамер RA-36 (10 кДа), разработанный на основе изучения стабильности G-квадруплексной структуры методами молекулярной динамики, исследован наряду с известными аналогами: 15-ТВА (5 кДа), 31-ТВА (10 кДа), NU172 (10 кДа), NU2. Показано, что тромбиновое, протромбиновое и активированное частичное тромбопластиновое время увеличиваются дозозависимо при добавлении аптамеров в концентрации 0,5-2 мкМ. Наиболее эффективным ингибитором оказался новый аптамер RA-36, удваивающий протромбиновое время стандартной плазмы человека при концентрации 1,5 мкМ. Протромбиновое время плазмы крыс не изменяется при добавлении RA-36, что указывает на видоспецифичность нового аптамера, в то же время 31-ТВА проявляет антикоагуляционную активность в этих условиях. In vivo исследование скорости выведения аптамеров из крыс показало одинаковые результаты для RA-36 и 31-ТВА: время полувыведения составило 7 минут. Аптамер NU2, обладающий наибольшей молекулярной массой, выводится из крови крыс более 40 минут, сохраняя плато эффективности в течение 20 минут. Таким образом, новый аптамер RA-36 обладает дозозависимой антикоагулянтной активностью и видоспецифичностью. Аптамер нетоксичен и выводится из крыс за 15 минут.

In vivo эксперименты показали корреляцию между массой аптамеров и временем их выведения. Эти данные, а также распределение аптамера по органам, указывают на выведение аптамеров почками.

Работа поддержана Министерством образования и науки Российской Федерации, госконтракт № 16.512.11.Получение микрокапсул из поли-3-гидроксибутирата и изучение высвобождения инкапсулированного в них белка in vitro Зернов Антон Лаврентиевич, Иванов Е.А.

(Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова, Биологический факультет, Институт биохимии имени А. Н. Баха РАН, Москва, Россия, alto6a@gmail.com) Разработка и исследование полимерных систем для контролируемого высвобождения (ПСКВ) биологически активных веществ (БАВ) белковой природы – перспективное направление в современной биотехнологии. В настоящее время поли-3-гидроксибутират (ПГБ), привлекает большое внимание как биодеградируемый и биосовместимый полимер.

Он перспективен для создания широкого спектра ПСКВ (микро- и наносфер, микро- и нанокапсул, матриксов, резервуаров). В данной работе рассматриваются микрокапсулы из ПГБ разных молекулярных масс (ММ) (33-1000 кДа), загруженные модельным белком, человеческим сывороточным альбумином (ЧСА) и созданные по методике двухэтапного эмульгирования двух различных вариаций: водная фаза / масляная фаза / водная фаза (W/O/W) и водная фаза/масляная фаза/масляная фаза(W/O/O). Опыты in vitro по высвобождению белка из микроструктур проводились в условиях, моделирующих внутреннюю среду организма, в 25 мМ калий-фосфатном буфере, рН 7.4, при 37С.

Микрокапсулы, созданные по разным методикам, отличались по характеру высвобождения ЧСА. В методике W/O/W почти все загружаемое вещество аккумулировалось внутри капсул в довольно малом количестве. Это объясняется тем, что водорастворимые белки легко мигрируют в водную фазу в ходе итогового эмульгирования. В другом случае, при применении методики W/O/O не происходило вымывания, а белок, не вошедший внутрь капсул, легко адсорбировался на их поверхности. Доля загруженного белка была большей, чем в методике W/O/W. Вклад ММ полимера, из которого изготовлены капсулы, в кинетику выхода вещества из микроструктур оказался определяющим по сравнению с другими параметрами, например, концентрацией полимера. Чем меньше была ММ полимера, тем быстрее капсулы разрушались. В то же время адсорбция БАВ при применении методики W/O/O была тем сильнее, чем больше была ММ полимера.

Работа выполнена в рамках реализации ФЦП Минобрнауки РФ (ГК №№ П2266, П548, П2429).

Авторы благодарят с.н.с. биологического факультета МГУ имени М.В. Ломоносова, к.б.н. Бонарцева Антона Павловича, а также сотрудников Института биохимии РАН им.

А.Н. Баха: с.н.с., к.б.н. Бонарцеву Гарину Александровну и н.с. Махину Татьяну Константиновну.

Влияние природных антиоксидантов на морфологическое состояние перитонеальных макрофагов крыс.

Камалетдинова Татьяна Рашидовна.

(Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова, Россия, Москва, kamaletdinovat@gmail.com) Исследуемый нами объект – перитонеальные макрофаги крыс – клетки, играющие значительную роль как в начальном ответе на инфекцию, так и в формировании специфического иммунного ответа. В связи с этим изучение воздействия на них биологически активных веществ, обладающих антиоксидантными свойствами, чрезвычайно актуально.

Данная работа проводилась с целью определения морфологического состояния перитонеальных макрофагов крыс, инкубированных с известными природными антиоксидантами, обладающими разными механизмами действия, – карнозином, таурином и восстановленным глутатионом. Для проведения исследований инкубировали суспензию клеток с антиоксидантами (конечная концентрация составляет 10-3М), затем фиксировали клетки через разные промежутки времени после начала инкубации (0, 15, 30 и 60 минут).

Полученные образцы оценивали при помощи метода Лазерной Интерференционной Микроскопии (ЛИМ).

Известно, что in vitro макрофаги способны выполнять фагоцитарную функцию только после активации - осаждения на подложку и распластывания; происходит выброс некоторых белков, что сопровождается незначительным уменьшением вещества. Было обнаружено, что у клеток в контрольных образцах со временем достоверно увеличивается площадь, снижается высота, уменьшается количество вещества, что свидетельствует об активации.

При этом не было выявлено значительных изменений количества вещества в макрофагах со временем (максимальное изменение составило не боле 30%), что говорит о том, что клетки остаются живыми. Макрофаги, инкубированные с карнозином или восстановленным глутатионом, не переходят в активную форму. Для клеток в этих пробах не наблюдаем достоверного увеличения площади, достоверного уменьшения высоты и количества вещества, что связано с действием этих антиоксидантов на систему активации клетки.

Таурин оказывает подобное действие, но в меньшей степени, т.к. наблюдается достоверные изменения количества вещества.

Данные, получаемые таким образом, могут использоваться как хороший диагностический признак воздействия новых антиоксидантов на клетки.

Исследование влияния излучения He-Ne-лазера на важнейшие биологические молекулы Капралова Ангелина Владимировна (Институт Лазерной Физики СО РАН, НГТУ, Новосибирск, Россия, kapralova@ngs.ru) Одной из актуальных задач молекулярной биофизики является изучение влияния электромагнитного излучения на важнейшие биополимеры: нуклеиновые кислоты и белки. В настоящей работе проводилось исследование влияния He-Ne-лазера на белки, представляющие различные классы белковых молекул. Это ферментативный белок трипсин, транспортный белок бычий сывороточный альбумин (БСА) и гемоглобин.

В нашем исследовании источником излучения служил He-Ne-лазер с длиной волны - нм (474 ТГц) и интенсивностью излучения ~ 3,6 мВт/см2. Для экспериментов использовались лиофилизированные порошковые белковые препараты фирмы Sigma. Действие лазерного излучения на белковые молекулы оценивалось с помощью УФ спектроскопии. УФ спектры водных растворов облучённых и необлучённых (контрольных) белковых образцов регистрировались на спектрофотометре SHIMADZU UV-3101PC.

В результате серии проведенных экспериментов было установлено следующее. Судя по результатам УФ спектрофотометрии, излучение He-Ne-лазера ( = 633 нм) влияет на конформацию всех изученных белков. Наиболее выраженные изменения наблюдаются при облучении БСА. Происходит значительное увеличение оптической плотности в УФ спектре на характеристических для белка областях поглощения: амидной полосе (200…250 нм) и триптофановой полосе (в области 280 нм). Изменения УФ спектра трипсина после облучения выражены гораздо слабее и проявляются только на полосе 200…230 нм. Поглощение УФ излучения гемоглобином после облучения He-Ne-лазером незначительно снижается, то есть оптическая плотность уменьшается.

Повышение оптической плотности в УФ спектре БСА и трипсина обусловлено изменением их молекулярной конформации, что «улучшает» доступ излучения к белковым хромофорам. Такой вывод хорошо подтверждается имеющимися литературными данными.

Что касается гемоглобина, уменьшение его оптической плотности в УФ спектре после облучения может быть связано с переходом его из дезоксигенированной формы в оксигенированную. Сравнение паспортных УФ спектров этих форм гемоглобина свидетельствует о более низкой оптической плотности оксигенированной формы практически во всём УФ диапазоне. Однако в этом направлении требуются дополнительные исследования.

Pages:     | 1 |   ...   | 7 | 8 || 10 | 11 |   ...   | 83 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.