WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 71 | 72 || 74 | 75 |   ...   | 83 |

При светомикроскопическом исследовании в РПЭ старых животных по сравнению с молодыми наблюдалась дезорганизация и разрозненность в расположении базальных отростков, незначительное увеличение числа ядер на единицу длины РПЭ (на 4,5%). По данным электронной микроскопии, в клетках РПЭ старых птиц накапливается липофусцин в виде гранул разной формы и размера с неоднородным содержимым, довольно часто встречаются митохондрии в виде замкнутых и незамкнутых колец. Также наблюдается нарушение базальной складчатости (она становится более разряженной) клеток РПЭ, утолщение мембраны Бруха.

Таким образом, полученные результаты в целом согласуются с данными литературы по возрастным изменениям в РПЭ сетчатки человека. Однако в нашем исследовании наиболее характерных для сетчатки человека старческих изменений в виде отложений друз вблизи РПЭ у перепела не обнаружено.

Роль аппарата Гольджи в организации системы клеточных микротрубочек.

Фокин Артём Игоревич (НИИ ФХБ имени А.Н. Белозерского Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова, Россия, Москва, fktimofei@yandex.ru) Традиционно считается, что единственным центром организации микротрубочек в клетках животных является центросома. Однако появились данные о возможности организации микротрубочек в митозе без участия центросомы. Кроме того, недавно была показана способность мембран аппарата Гольджи нуклеировать микротрубочки. В связи с этим мы решили проверить гипотезу о возможном участии аппарата Гольджи в организации системы микротрубочек в интерфазных клетках.

Исследования проводили на культивируемых клетках двух родственных линий Vero и BS-C-1, выделенных из эпителия почки зелёной мартышки. Использовали трёхканальную иммунофлуоресцентную микроскопию фиксированных клеток и прижизненную видеомикроскопию клеток, трансфицированных различными генетическими конструктами.

Нами было показано, что в клетках с радиальной системой микротрубочек в большинстве случаев можно говорить о зоне их схождения, в которой как правило находятся как центросома, так и аппарат Гольджи. Нередко именно он играет основную роль в организации микротрубочек, или существует два независимых центра организации. При этом вклад Гольджи в организацию микротрубочек различен у клеток Vero и BS-C-1. Путём восстановления разобранных микротрубочек в клетках с диспергированным Гольджи, мы продемонстрировали также разницу в способности его нуклеировать короткие микротрубочки в клетках двух этих линий. Наконец, цейтраферная видеомикроскопия клеток, экспрессирующих GFP-слитый белок EB-1 показала, что в интерфазе новые микротрубочки в клетках Vero нуклеируются лишь на центросоме, а в клетках BS-C-1 кроме того ещё в некой компактной области в районе ядра, морфологически сходной с зоной аппарата Гольджи.

Полученные данные позволяют нам сделать вывод о том, что в интерфазных клетках млекопитающих аппарат Гольджи участвует в организации радиальной системы микротрубочек, причём в клетках разных линий степень его участия в этом различна.

Работа поддержана грантом МК-3444.2010.Выражаю глубокую благодарность своему научному руководителю – Буракову Антону Владимировичу.

Иммуноферментный анализ распределения про- и антивоспалительных факторов в атеросклеротических бляшках сонных артерий человека Шишкина Валентина Сергеевна (Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова, Биологический факультет, Россия, Москва, shishkinavalya@mail.ru) Острые клинические проявления сердечно-сосудистых заболеваний связаны с развитием нестабильных (склонных к разрывам) атеросклеротических поражений стенок магистральных артерий. Разрывы бляшек происходят в основном по периферии поражения в областях преимущественного расположения лейкоцитарного инфильтрата. Цель исследования заключалась в анализе распределения про- и антивоспалительных факторов, вырабатываемых преимущественно макрофагами, инфильтрирующими центральную (атеронекротическое ядро) и периферические («плечи») области бляшек. В работе исследовали 40 биопсий сонных артерий человека, полученных в ходе эндартерэктомии. С помощью иммуноферментного метода провели анализ распределения провоспалительного цитокина IL-1, фактора хемотаксиса MCP1, ростового фактора TGF и белков протеазноантипротеазного баланса (металлопротеазы MMP2/9 и тканевые ингибиторы металлопротеаз TIMP1/2) в тканевых экстрактах, полученных из разных областей бляшек. Результаты исследования показали, что в центральных областях бляшек уровень провоспалительных факторов (MCP1, IL-1) был выше, чем в периферических, а антивоспалительных (TGF) – ниже, p<0,05. Это предполагает доминирование провоспалительной субпопуляции макрофагов в центральных областях, а антивоспалительной – в периферической. В то же время уровень MMP2 и MMP9 был ниже в центральных участках по сравнению с «плечами», а уровень их ингибиторов TIMP1 и TIMP2 – выше, p<0,05. Результат согласуется с данными о том, что разрывы бляшек происходят в основном по периферии поражения, так как металлопротеазы участвуют в деградации коллагенового каркаса бляшек. В плечах бляшек наблюдалась положительная корреляция уровня MCP1 с IL-1, но отрицательная – с TGF.

Также выявлена положительная корреляция между уровнем MMP2 и TIMP2, а также MMPи TIMP1 для каждого из участков бляшек. Обнаружено, что уровни MMP9 и TGF в плечах достоверно и положительно коррелируют с уровнями MMP9 и TGF, соответственно, в центре бляшки. Кроме того, уровень TIMP1 в плечах достоверно и положительно коррелирует с количеством MCP1 и TIMP1 в центральных участках, что, по-видимому, связано со схожей провоспалительной активностью макрофагов в этих областях. Таким образом, иммуноферментный анализ тканевых экстрактов каротидных бляшек выявил в них высокий уровень провоспалительных факторов, что свидетельствует о преимущественном присутствии в них провоспалительной субпопуляции макрофагов.

СТЕНДОВЫЕ ДОКЛАДЫ Исследование влияния антибактериальных препаратов на структуру синаптонемных комплексов хромосом в профазе I мейоза самцов мыши Ацаева Марет Махмудовна (Институт общей генетики РАН, Россия, Москва, acaeva-mm@mail.ru) Широкое применение антибиотиков, обладающих высокой метаболической активностью, делает актуальной проблему побочного действия этих препаратов на высокочувствительные к мутагенам дифференцирующиеся половые клетки человека.

Актуальность исследования определяется тем, что антибактериальные препараты могут нести не только риск побочных эффектов для пациента, но и генетический риск для его будущего потомства. С быстрым распространением мультирезистентных бактериальных болезнетворных микроорганизмов растет интерес к альтернативным антибактериальным препаратам, в первую очередь - к бактериофагам.

Нами впервые проведено иммуноцитохимическое исследование тотальных препаратов распластанных синаптонемных комплексов (СК) у половозрелых самцов мыши F1(CBA/lac х C57BL6) массой 20 г, забитых на 36 сутки после окончания 10 дневного введения терапевтической дозы антибиотика цифрана, относящегося к группе фторхинолонов, и поливалентного пиобактериофага «Секстафага». Использованы антитела к белкам SCP3 и кинетохора. Этот метод позволяет анализировать разрывы хромосом и нарушение процессов синапсиса и десинапсиса хромосом, идентифицировать стадии мейоза, на которых он блокируется.

Нами установлено, что введение цифрана вызвало: фрагментацию СК в 59,8%, ассоциацию аутосом с половым (XY) бивалентом в 19,61%, асинапсис X и Y хромосом в 8,82%, асинапсис аутосом – 5,9%, интерлокинг хромосом – 6,86%, нарушение формирования полового тельца – 9,86%, транслокации хромосом 11,76 % и атипичную структуру СК в 2,9% клеток. После введения секстафага количество клеток с нарушениями в структуре СК в среднем в два раза меньше, чем после введения цифрана, а в контроле количество поврежденных клеток приблизительно в 2 раза меньше, чем после введения секстафага. Бактериофаг и цифран отличаются также и по спектру вызываемых нарушений.

Например, такие нарушения, как асинапсис аутосом и транслокации хромосом, не были обнаружены после введения бактериофага. Выявленные нарушения ( преждевременный асинапсис аутосом и половых хромосом ) могут с служить причиной анеуплоидии сперматозоидов и потомства. Клетки в которых не образуется половое тельце, как известно подвергаются селекции.

Эпигенетический статус Х-хромосом в линиях индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека Грачева Екатерина Александровна (Институт цитологии и генетики СО РАН, Россия, Новосибирск, katerina.gracheva@gmail.com) Репрограммирование дифференцированных клеток к плюрипотентному состоянию приводит к морфологическим, транскрипционным, а также эпигенетическим изменениям.

Одним из важных эпигенетических феноменов у млекопитающих, в том числе у человека, является процесс инактивации Х-хромосомы. Известно, что при получении индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) мыши происходит облигатная реактивация Ххромосомы. Вопрос о том, происходит ли это при репрограммировании дифференцированных клеток человека, в настоящее время изучен недостаточно хорошо. На данный момент показано, что при получении ИПСК с помощью ретровирусной трансдукции фибробластов с набором половых хромосом ХХ одна из Х-хромосом остается неактивной.

Однако из-за многообразия методов получения ИПСК можно ожидать, что как и в случае эмбриональных стволовых клеток возможны линии как с одной активной, так и с двумя активными Х-хромосомами.

В нашей работе мы исследовали линии ИПСК, полученные из нейральных стволовых клеток плода человека с набором половых хромосом ХХ с помощью трансфекции плазмидной ДНК, содержащей гены Klf4, Sox2, c-Myc и Oct4. При получении некоторых линий в среду добавляли вальпроевую кислоту и ингибитор гистоновой метилтрансферазы G9a, которые увеличивают эффективность получения ИПСК. Во всех исследованных линиях на одной из Х-хромосом показано присутствие ковалентных гистоновых модификаций, характерных для неактивного хроматина, кроме того, в данных клетках экспрессируется ген XIST. Таким образом, неактивная Х-хромосома не реактивируется. При длительном культивировании ИПСК в стандартных условиях происходит потеря маркеров неактивного хроматина, однако, это не приводит к реактивации неактивной Х-хромосомы. Кроме того, культивирование ИПСК в среде, содержащей вещества, ингибирующие сигнальные пути дифференцировки (PD0325901, CHIR99021, A83-01) также не способствует реактивации неактивной Х-хромосомы, но способствует ускоренной потере и перераспределению маркеров неактивного хроматина.

Типы межклеточных контактов в культуре стволовых клеток амниотической жидкости: нанотрубочки и адгезивные соединения Давыдова Дарья Александровна (Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН, Россия, Москва, davydovad@gmail.com) Многие исследователи относят стволовые клетки амниотической жидкости человека к мезенхимным стволовым клеткам. Однако одновременная экспрессия в них маркеров мезенхимного и эпителиального типов дифференцировки отличает их от постнатальных стволовых клеток. Мы предположили, что изучение ультраструктурных особенностей этих клеток поможет уточнить их тканевую принадлежность.

Стволовые клетки амниотической жидкости были культивированы на пластике и в коллагеновом геле, после чего проводили электронно-микроскопическое исследование.

При культивировании на пластике клетки сохраняли высокий пролиферативный потенциал, по меньшей мере, в течение 15 пассажей. В коллагеновом геле пролиферация клеток сохранялась, что подтверждалось включением BrdU. Проведенное электронномикроскопическое исследование показало, что стволовые клетки амниотической жидкости формируют в культуре однослойные пласты. Такой характер роста типичен для эпителиальных клеток. Кроме того, актиновые микрофиламенты образовывали кольцевой пучок в цитоплазме под плазматической мембраной. При культивировании в трехмерном матриксе между стволовыми клетками амниотической жидкости были выявлены типичные для эпителиев адгезивные соединения. Сканирующая электронная микроскопия показала, что клетки в культуре соединялись между собой многочисленными нанотрубочками толщиной 0,02 – 0,1 мкм. Нанотрубочки могли ветвиться, в них были заметны везикулярные утолщения – гондолы. Считается, что они являются участками межклеточной транспортировки. Через нанотрубочки между клетками могут мигрировать не только низкомолекулярные соединения, но и органеллы. В этом состоит их отличие от щелевых контактов. Ранее нанотрубочки были выявлены в культурах некоторых типов клеток, таких как иммунные, нервные, кардиомиоциты, т.е. в тех случаях, когда сигнал между клетками должен предаваться очень быстро. Мы впервые выявили такой тип соединений в культурах стволовых клеток амниотической жидкости.

Таким образом, адгезивные соединения играют важную роль в поддержании целостности клеточных пластов, а нанотрубочки обеспечивают тесную связь между клетками в культуре. По всей видимости, стволовые клетки амниотической жидкости не являются истинно мезенхимными, т.к. могут проявлять и свойства эпителиальных клеток.

Возможно, они находятся в состоянии эпителиально-мезенхимного перехода, который активно протекает в эмбриогенезе.

ПОДСЕКЦИЯ «ЭКОЛОГИЯ И ОХРАНА ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ» УСТНЫЕ ДОКЛАДЫ Характеристика размещения гнезд черноголовой и серой славок в Центральном Предкавказье Друп Виктория Демировна (Ставропольский государственный аграрный университет, факультет Защиты растений, Россия, Ставрополь, sylvia_vica@mail.ru) Специфичность размещения гнезд черноголовой славки Sylvia atricapilla состоит в предпочтении опушек, окраин лиственных и смешанных лесов с богатым подлеском и подростом. Особую роль играет расположение кустарника, подлет к которому должен быть менее заметным. На территории антропогенно-измененных районов птицы гнездятся в кустарниках и поросли культурных пород, в городских парках предпочитают кустарники спиреи (Spiraea crenata L.).

При попарном сравнении видов растений, на которых черноголовая славка строит гнезда, достоверных различий, в предпочтении какого-либо из них, выявлено не было (слива колючаяграб (t=1,88, P>0,05); слива колючаяалыча (t=1,80, P>0,05); слива колючаякизил обыкновенный (t=1,88, P>0,05); слива колючаябоярышник пятипестичный (t=1,71, P>0,05); слива колючаяайва (t=1,96, P>0,05); слива колючаябузина черная (t=0,34, P>0,05).

Pages:     | 1 |   ...   | 71 | 72 || 74 | 75 |   ...   | 83 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.