WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 70 | 71 || 73 | 74 |   ...   | 83 |

Вахитов Эдуард Маратович (Оренбургская государственная медицинская академия, Россия, Оренбург, tripura@mail.ru) В норме стресс направлен на поддержание гомеостаза. При его чрезмерном воздействии развивается нарушение структурно-функциональной целостности организма. В настоящей работы исследовано структурно-функциональное состояние эпителиальных барьеров воздухоносной системы лёгких крыс при стрессировании различной интенсивности. В опытах использовали белых беспородных крыс-самцов массой 210 – 240 г., которых подвергали воздействию однократного ЭБС по O.Disederato (однократное 5-тичасовое стрессирование) и длительного ЭБС (ежедневное 5-тичасовое стрессирование в течение дней). Анализ гистологических препаратов показал, что при воздействии однократного ЭБС наблюдаются небольшие участки десквамации эпителия и его лимфоидная инфильтрация.

Отмечается активизация бокаловидных клеток и клеток Клара. В просвете бронхов выявлялся детрит, состоящий из слущенных эпителиоцитов, слизи и лимфоцитов. При длительном стрессировании участки десквамации эпителия становятся более значительными. Была выявлена вакуолизация цитоплазмы мерцательных эпителиоцитов и дегенеративные изменения их ресничек. В ряде участков многорядный мерцательный эпителий замещался однослойным однорядным, либо многослойным. Бокаловидные клетки выглядели опустошёнными, клетки Клара подвергались дегенерации. Отмечалась выраженная бронхоконстрикция с гипертрофией мышечной пластинки слизистой оболочки бронхов. Таким образом, можно заключить, что длительный стресс вызывает стойкие нарушения эпителиального барьера бронхов и предрасполагает к развитию хронической патологии дыхательной системы. Полученные данные доказывают, что стрессовое воздействие приводит к значительным морфофункциональным изменениям в периферических тканях. Степень выраженности этих изменений напрямую зависит от длительности воздействия стрессовых факторов. В перспективе результаты микроскопической картины бронхиального эпителия можно использовать для подбора адекватных методов коррекции постстрессорных нарушений.

Клеточный каннибализм в культуре клеток эпидермоидной карциномы человека АГаранина Анастасия Сергеевна (Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова, Биологический факультет, Россия, Москва, pupsovenok@yandex.ru) Еще в начале XX века внимание ученых привлек уникальный феномен “клетка-вклетке”, при котором одни клетки оказываются внутри цитоплазмы других клеток. Он получил название клеточного каннибализма (КК). По ряду признаков процесс КК отличается от фагоцитоза. КК особенно характерен для клеток злокачественных опухолей. Феномен “клетка-в-клетке” в некоторых случаях используется для диагностики заболеваний и прогноза развития опухолей, однако точные механизмы, лежащие в основе этого явления, до сих пор не изучены. В связи с этим целью работы было исследование механизмов КК и поведения клеточных органелл в ходе данного процесса в культуре клеток эпидермоидной карциномы человека А431.

В работе были использованы методы световой, флуоресцентной, видеомикроскопии, трансмиссионной и сканирующей электронной микроскопии.

Было выявлено, что в культуре клеток А431 частота встречаемости КК в ходе длительного культивирования не изменялась, и число подобных клеток составляло около 2%. При КК происходило изменение морфологии как поглощенной, так и поглощающей клетки. Поглощенные клетки, как правило, имели округлую форму, при этом среди них встречались клетки на разных стадиях деградации. Размеры таких клеток были примерно вдвое меньше размеров соседних клеток. Поглощенные клетки находились внутри крупных вакуолярных структур. Для поглощающих клеток было характерно изменение формы и расположения ядра. Оно приобретало бобовидную форму и смещалось к периферии.

Осуществление контакта между клетками происходило с участием десмосом. На начальных этапах КК наблюдалось перераспределение лизосом, митохондрий и аппарата Гольджи в поглощенной и поглощающей клетках и соответствующая перестройка системы микротрубочек, обеспечивающей перемещение данных органелл. Было выявлено снижение уровня эндоцитоза. В ходе КК происходила деградация поглощенной клетки, проявляющаяся в изменении состояния ядра и цитоплазмы последней: первоначально округлое ядро, богатое эухроматином и имеющее несколько ядрышек, приобретало все более неровные очертания и уменьшалось, хроматин постепенно конденсировался, ядрышки не выявлялись. На заключительных этапах КК ядро подвергалось фрагментации. Кроме того шло постепенное усиление вакуолизации цитоплазмы и деградация внутриклеточных органелл поглощенной клетки, а также закисление каннибалистической вакуоли. При КК не выявлены процессы, характерные для апоптотического пути клеточной гибели, такие как усиление продукции активных форм кислорода, выход цитохрома с и активация каспазы-3.

Однако при этом обнаружено, что на заключительных этапах усиливаются процессы аутофагии.

Таким образом, можно предположить, что при КК в субстратзависимых культурах происходит лизосомо-опосредованная деградация поглощенной клетки. Этот процесс на начальных этапах включает усиление продуцирования лизосом, источником которых могут быть как поглощающая, так и поглощенная клетки, и активацию аутофагического механизма деградации поглощенной клетки на заключительных этапах ее гибели.

Работа поддержана РФФИ № 08-04-00750-а, НШ 1861.2003.4.

Изучение воздействия митохондриально-направленного антиоксиданта SkQ1 на процесс заживления ран у старых и диабетических мышей Демьяненко Илья Александрович (Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова, Биологический факультет, Россия, Москва, ilya871@rambler.ru) Известно, что с возрастом происходит снижение репаративных возможностей тканей.

Кроме того, развитие возраст-ассоциированных заболеваний, например, сахарного диабета, приводит к значительным нарушениям заживления ран. В связи с этим актуальными являются исследования, направленные на поиск и разработку препаратов, активирующих процессы репаративной регенерации тканей. Недавно было показано, что митохондриально адресованные антиоксиданты замедляют развитие многих признаков старения и предотвращают развитие целого ряда возрастных патологий. В работе исследовано воздействие антиоксиданта SkQ1 [10-(6'-пластохинонил) децилтрифенилфосфония] на процесс заживления ран у мышей. Животным под наркозом наносили резаную полнослойную кожную рану на спине в межлопаточной области. Проведены 2 независимых эксперимента. Первый эксперимент проведён на старых (25 месяцев) самках гибридах CBAxC57BL/6. Животные с 18-и месячного возраста до окончания эксперимента получали SkQ1 с питьевой водой (100 нмол/кг веса в сутки). Второй эксперимент проведён на 5-ти месячных гомозиготных мутантных мышах C57 BLKS/J, db/db, у которых спонтанно к первому месяцу жизни развивается ожирение и симптомы сахарного диабета 2-го типа.

Животные с 2-х месячного возраста и до конца эксперимента получали SkQ1 перорально с помощью механического дозатора (250 нмол/кг веса в сут). Для анализа заживления ран проводили макроскопическое (измерение площади ран на фотоизображениях), гистологическое и иммуногистохимическое исследования. Статистический анализ полученных численных данных проводили, используя непараметрический U - критерий Манна - Уитни. Показано, что длительный (7 мес) приём SkQ1 с питьевой водой вызывал ускоренное сокращение площади ран, уменьшение продолжительности острой фазы воспаления, а также ускорение эпителизации и новообразования соединительной ткани дермы. При этом темпы заживления ран у старых мышей, получавших SkQ1, и молодых контрольных животных были сходными. В опыте на диабетических мышах C57 BLKS/J, db/db показано, что продолжительное (3 мес) пероральное введение SkQ1 вызывает небольшое достоверное ускорение сокращения площади ран, ускорение эпителизации и уменьшение числа клеток воспалительного инфильтрата в области раны.

Работа выполнена при поддержке НИИ Митоинженерии МГУ.

Влияние экспрессии изоформ р150Glued 1A и 1B на длину и количество отростков (форму) фибробластов Корнаков Николай Владимирович, Жаппарова О.Н.

((Московский Государственный Университет имени М. В. Ломоносова, Биологический факультет, НИИ Физико-химической биологии имени А.Н. Белозерского МГУ, Россия, Москва,nikolay.kornakov@gmail.com) Основной функцией динактина в клетке считается обеспечение связи микротрубочкового мотора динеина с перевозимым грузом, и увеличение его процессивности за счет взаимодействия с микротрубочкой одной из субъединиц динактина – белка p150Glued. Этот белок экспрессируется в виде нескольких изоформ, отличающихся длиной микротрубочко-связывающей области. Полноразмерная изоформа (1А) экспрессируется во взрослом организме только в нервной ткани, и также обнаруживается во всех эмбриональных тканях и в культивируемых фибробластах. Изоформа 1А в культивируемых поляризованных клетках декорирует микротрубочки, обращенные к ведущему краю. Мы предположили, что изоформа динактина 1А может быть вовлечена в процессы поляризации клетки и определять ее форму.

Цель работы - проверка влияния экспрессии изоформ 1A и 1B р150Glued на форму фибробластов. Исследования проводили на культуре эмбриональных фибробластов мыши 3Т3, трансфицированных конструкциями, кодирующими слитые с GFP изоформы динактина 1A и 1B. Для характеристики формы клеток измеряли максимальную длину, степень удлиненности (aspect ratio) и циркулярность, то есть близость формы клетки к окружности (4**S/P^2, для идеальной окружности этот параметр равен 1).

Выявлены существенные различия между циркулярностью фибробластов, экспрессирующих изоформы 1A и 1B (0,26±0.03 и 0,35±0.04, соответственно), максимальная длина различалась менее заметно (клетки, экспрессирующие 1A, в среднем на 15% длиннее клеток с изоформой 1B). Также изучена форма клеток с нокдауном по динактину (фибробласты трансфицировали конструкцией для РНК-интерференции p150).

Эффективность интерференции проверена с помощью иммунофлуоресценции. Оказалось, что при нокдауне p150Glued клетки становятся более округлыми (0,41). В качестве контроля использовали фибробласты дикого типа и фибробласты, экспрессирующие GFP.

Полученные результаты указывают на то, что изоформы динактина по-разному влияют на форму фибробластов. Экспрессия 1A вызывает увеличение длины клеток и количества отростков, по сравнению с 1В. Кроме того, клетки с нокдауном обеих изоформ динактина имеют меньше отростков, по сравнению с контролем.

Работа поддержана грантом Президента РФ № МК-8703.2010.4.

Характер пролиферативной активности клеток глиомы С6 при изменении действия гравитационного фактора Роева Маргарита Олеговна (Институт физиологии НАН Беларуси, Национальная академия наук Беларуси, Минск, Pochta_margo@mail.ru) Проблема влияния гравитационного фактора на формирование клеток и тканей на разных этапах онтогенеза весьма актуальна. Недостаточно изученным остается злободневный вопрос влияния данного фактора на разные типы клеток, особенно патологически измененные. В связи с этим, весьма важна задача, направленная на анализ закономерностей развития малигнизированных клеток при гипер- или микрогравитации. В экспериментах на культуре клеток глиомы С6 изменяли на 60 положение флаконов относительно горизонтальной плоскости через 40-48 часов после достижения конфлюэнтности в 70%. Клетки культивировали (концентрация 1,3 105 клеток/мл) во флаконах в среде DMEM с добавлением 10%-ной эмбриональной бычьей сыворотки и 10-г/мл раствора сульфата гентамицина. Флаконы размещали в СО2-инкубаторе при 5% CO2 и температуре 37 С.

Сопоставляли результаты наблюдений пролиферативной активности клеток глиомы Сво флаконах, один из которых на протяжении всего эксперимента находился в горизонтальном положении (серия 1), другой располагался под углом 60о (серия 2). Опыты дублировали с целью дополнительной верификации наблюдаемых эффектов. Мониторинг аналоговых событий на протяжении 20 часов осуществляли с помощью видеокамеры и накапливали в цифровой форме на компьютере с интервалом в 10 минут. При статистической обработке данных проводили их усреднение (30-и минутные интервалы), сопоставляя особенности пролиферативной активности культуры клеток С6 во флаконах серий 1 и 2.

Установлено, что после поворота флаконов на 60о в сравнении с горизонтально расположенными клетками глиомы С6 пролиферативная активность клеток снижается на 52%. Итак, изменение действия гравитационного фактора оказывает ингибирующий эффект на глиальные клетки глиомы С6. Следовательно, сдвиг направленности действия гравитационного фактора отражается на пролиферативной активности патологически измененных клеток, нарушая их развитие. Этот факт перспективен для анализа в будущем способов ингибирования роста злокачественных опухолей в условиях микро- или гипергравитации.

Возрастные изменения пигментного эпителия сетчатки перепела Сережникова Наталья Борисовна (Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова, Биологический факультет, Россия, Москва, natalia.serj@yandex.ru) Старение – неизбежный процесс, характеризующийся нарушением физиологических функций и снижением адаптационных возможностей. Возрастные изменения глаз затрагивают, прежде всего, пигментный эпителий сетчатки (РПЭ), а также фоторецепторы, мембрану Бруха и хориокапилляры. Такие изменения часто предшествуют развитию серьёзных заболеваний глаз, угрожающих значительным снижением зрения и даже слепотой во второй половине жизни.

Хорошей моделью для исследования процессов старения сетчатки и развития заболеваний глаз служит японский перепел (Coturnix japonica). Это обусловлено тем, что, помимо морфологического сходства, сетчатка перепела имеет сходный с человеком оксикаротиноидный обмен и короткий период старения (за год в ней происходят изменения, характерные для сетчатки человека в возрасте порядка 70 лет).

Цель работы - выявить возрастные изменения в РПЭ сетчатки перепела. Материал для исследования предоставлен сотрудниками Института биохимической физики им.

Н.М.Эммануэля РАН. Образцы сетчатки старых (47 недель) и молодых (12 недель) самцов перепела изучали на светооптическом уровне (фиксация смесью Буэна, заливка в гистамикс, окраска срезов гематоксилин-эозином) и с помощью электронной микроскопии (фиксация 2,5% глютаральдегидом, заливка в эпон).

Pages:     | 1 |   ...   | 70 | 71 || 73 | 74 |   ...   | 83 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.