WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 59 | 60 || 62 | 63 |   ...   | 83 |

(Казанский (Приволжский) федеральный университет, Биолого-почвенный факультет, Россия, Казань, fliza8080@mail.ru) NO относится к классу газообразных посредников, синтезируемых в физиологических условиях и участвующих в расслаблении гладких мышц. Было показано, что NO модулирует освобождение медиаторов в центральной и периферической нервной системе в условиях как in vitro, так и in vivo. В двигательном нервном окончании лягушки NO угнетает спонтанную и вызванную секрецию медиатора и модифицирует работу потенциал-зависимых и кальцийактивируемых калиевых каналов. Данные о влиянии NO в нервно-мышечном синапсе теплокровных животных противоречивы. Целью работы было исследование эффектов NO на освобождение медиатора в нервно-мышечном синапсе мыши и роли гуанилатциклазы в механизмах его действия.

Эксперименты проводили на изолированном нервно-мышечном препарате диафрагмы лабораторных белых мышей в условиях постоянной перфузии стандартным раствором Кребса. Для предотвращения сокращения мышц использовали d-тубокурарин в концентрации 2-2,5 мкM. Токи концевой пластинки (ТКП) регистрировали с помощью внеклеточных электродов, заполненных раствором NaCl (2M). Полученные результаты обрабатывали с помощью стандартных методов.

Аппликация экзогенного донора NO S-nitroso-N-acetylpenicillamine (SNAP) в концентрации 100 мкМ снижала амплитуду ТКП до 27,8±7,5% (n=5, p<0,05) относительно контроля. Максимальный эффект достигался к 20-30 мин эксперимента. Известно, что действие NO в небольших концентрациях связано с влиянием на гемовую группу растворимой (цитозольной) формы гуанилатциклазы. Активация гуанилатциклазы приводит к быстрому повышению уровню цГМФ (в течение 5 с), что в свою очередь изменяет активность ионных каналов, фосфодиэстераз или цГМФ-зависимой протеинкиназы.

Селективный блокатор растворимой гуанилатциклазы 1H-[1,2,4]-oxadiazolo[4,3-a] quinoxalin-l-one (ODQ) в концентрации 2,5 мкМ достоверно не изменял амплитуду ТКП. К 30 минуте аппликации амплитуда ТКП составляла 111,4±26,5% (n=5, p>0,05). На фоне действия ODQ, SNAP уменьшал амплитуду ТКП до 62,1±10,3% (n=5, p<0,05), что меньше его эффекта в контроле. Таким образом, NO снижает вызванную секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе мыши и его эффекты частично опосредуются активацией гуанилатциклазы.

Работа поддержана грантом РФФИ 09-04-00748.

Механизмы регуляции сократительной активности и автоматии стенки тела асцидии Styela rustica.

Волкова Евгения Павловна, Тарасова Е.О., Зыбина А.М.

(Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова, Биологический факультет, Москва, Россия, sciuriny@gmail.com) Асцидии являются широко распространенными организмами, морфология и экология которых хорошо известна, однако остается много неизученного касательно их физиологии.

Цель данной работы заключалась в исследовании природы автоматической активности, характерной для мышц стенки тела, а также в изучении нервной регуляции мышечных сокращений у асцидий.

Опыты были выполнены на Беломорской Биологической Станции им. Перцова (МГУ).

Продольную полоску мышечной стенки асцидий Styela rustica помещали в проточную камеру с охлажденной морской водой, механическую активность регистрировали с помощью механо-электрического преобразователя.

При добавлении в морскую воду ацетилхолина (АЦХ) и карбахолина (негидролизуемого аналога АЦХ) в диапазоне концентраций 10-7М-10-5М развивался выраженный сократительный ответ мышечной полоски. При действии карбахолина сократительный ответ был значительно больше по амплитуде и длительнее, чем при действии АЦХ. Атропин – блокатор М-холинорецепторов, в диапазоне концентраций 10-7М-10-5М не снижал сократительного ответа препарата, вызванного АЦХ (10-5М). d-тубокурарин – блокатор Nхолинорецепторов, в диапазоне концентраций 10-7М-10-5М прогрессивно снижал сократительный ответ препарата на АЦХ (10-5М).

Ивабрадин – блокатор пейсмекерного тока млекопитающих, в диапазоне концентраций 10-6М-10-4М не вызывал изменения частоты ритмической активности. Прокаин и хинидин – блокаторы натриевой проводимости, также не оказывали влияния на автоматию.

Таким образом, ацетилхолин (АЦХ) является медиатором нервно-мышечной передачи у асцидий. В мышцах стенки тела показано наличие ацетилхолинэстеразной активности. На основании экспериментов с холиноблокаторами можно предположить, что действие АЦХ опосредуют N-холиноподобные рецепторы. Также показано, что автоматия мышц стенки тела асцидии, вероятно, не связана с периодической активацией катионного тока, активируемого гиперполяризацией либо потенциалчувствительных натриевых каналов. Для изучения природы автоматической активности мышечной стенки асцидии необходимы дальнейшие исследования.

Величина мембранного потенциала митохондрий как отражение функционального состояния сердца старых крыс Добровольская Раиса Андреевна1, Гошовская Ю. В.(1Национальный университет “Киево-Могилянская Академия”, 2Институт физиологии им. А. А. Богомольца, Украина, Киев, 1raysik@yandex.ru, 2pokutt@gmail.com) Процесс уменьшения протонного градиента – протонный поток, сопровождается снижением синтеза АТФ и опосредован митохондриальными порами (МП) и разобщающими белками (uncoupling proteins, UCP). Ранее было показано, что при старении организма увеличивается экспрессия генов белковых компонентов митохондриальных пор, а также чувствительность пор к действию индукторов, что указывает на интенсификацию протонного потока через митохондриальные поры. Цель работы состояла в изучении соотношения потребления кислорода миокардом уровню мембранного потенциала митохондрий сердца взрослых и старых крыс, а также выяснении возможного участия сердечных изоформ разобщающих белков в диссипации протонного градиента.

Сердца взрослых (6 мес) и старых (24 мес) крыс изолировали по методу Лангендорфа и изучали их сократительную активность и кислородный обмен. В тех же экспериментах регистрировали дыхание митохондрий сердца при наличии субстрата дыхания сукцината Na и блокатора АТФ-синтазы – олигомицина; одновременно с помощью потенциометрии с использованием липолитического катиона триметилфенилфосфониума (ТРМР+) измеряли и рассчитывали по уравнению Нернста мембранный потенциал митохондрий ().

Экспрессию генов UCP2 и UCP3 в тканях сердца изучали с помощью ПЦР-анализа.

Показано нарушение диастолической функции сердца старых крыс, сопровождающееся не только достоверным увеличением потребления кислорода и кислородной стоимости его работы (Р<0,05), но и снижением уровня мембранного потенциала митохондрий сердца старых крыс до -146,5±3,2 мВ по сравнению с взрослыми – -156±3,5 мВ (Р<0,04). Подобные изменения свидетельствовали об утечке протонов, что подтверждалось и достоверным увеличением уровня экспрессии разобщающего белка UCP2 (Р<0,03) в сердцах старых животных. Таким образом, диастолическая дисфункция и низкая эффективность использования кислорода миокардом старых животных связана со снижением величины мембранного потенциала митохондрий. Последнее является результатом повышения протонного потока как следствия не только образования митохондриальных пор, но и активизации разобщающих белков.

Репродуктивная эффективность антигенстимулированных самцов мышей Масленникова Светлана Олеговна (Новосибирского государственного университета, факультет Естественных наук, Россия, Новосибирск, maslennikova_sveta@ngs.ru) Доминирующий взгляд на роль паразитарного окружения в реализации репродуктивного потенциала хозяев базируется на многочисленных примерах нарушения различных показателей воспроизводства у инфицированных животных. Современная парадигма эколого-эволюционного анализа репродуктивной значимости паразитизма (в широком смысле) ориентирована не столько на сами болезни, которые являются достаточно редким явлением, сколько на изучение популяционных эффектов, обусловленных активацией защитных механизмов, что в условиях разнообразной паразитарной среды наблюдается гораздо чаще.

В данной работе специфический иммунный ответ вызывали у самцов аутбредной линии мышей ICR (n=19) путем внутрибрюшинного введения гемоцианина (KLH). Контрольным особям (n=19) вводили физиологический раствор. На начальном этапе антителообразования (3-и сут после введения KLH или физиологического раствора) к антигенстимулированным и контрольным самцам подсаживали по 2 интактных самки и содержали совместно до покрытия (наличие вагинальной пробки), но не более 6 суток. У самок, содержавшихся с антигенстимулированными самцами, отмечено, достоверно большее число овулировавших яйцеклеток (177), общее число эмбрионов (128) и число живых эмбрионов (112) по сравнению с контролем (97, 83, 74, соответственно, p<0,05, критерий 2 для нуль-гипотезы о равном репродуктивном выходе). Самки, покрытые антигенстимулированными самцами, вынашивали более крупных потомков по сравнению с контролем (620,3±6,2 мг и 583,0±7,мг, t=3,81, p < 0,001). Показатели плодовитости самок зависели от преобладания у антигенстимулированных самцов клеточного (Th1) или гуморального (Th2) иммунных ответов. У самок, покрытых самцами с преобладанием клеточного иммунного ответа, были более высокие доимплантационные эмбриональные потери (42,7±4,9), общие эмбриональные потери (46,6±6,5), но они вынашивали более крупных потомков (641,5±9,мг) по сравнению с таковыми у самок, чьими партнерами были особи, характеризующиеся преобладанием гуморального иммунного ответа (17,6±4,4, І=12,48; p=0,004, 23,0±4,9, І=10,35; p=0,009, 607,2±8,3 мг, t=2,66, p = 0,009, соответственно).

В данной работе, установлено, что общий эффект активации иммунной системы у самцов направлен на увеличение фертильности. Основное позитивное влияние на темпы роста потомков антигенстимулированных самцов оказывало превалирование Th1 иммунного ответа.

Таким образом, экспериментально обоснованная возможность увеличения воспроизводства при активации иммунной системы позволяет, объяснить вклад защитных реакций организма в повышение фертильности млекопитающих, населяющих территории с высоким видовым обилием паразитов.

Тезисы доклада основаны на материалах исследований, проведенных при поддержке РФФИ.

Автор выражает признательность д.б.н. Герлинской Л.А. и профессору, д.б.н. Мошкину М.П. за помощь в подготовке тезисов.

NO зависимый аритмогенный эффект TNF- у предсердий крыс Митрохин Вадим Михайлович, Тянь Б.

(Российский государственный медицинский Университет, Россия, Москва, vmitrohin@gmail.com) Нами показано, что TNF- вызывает электрические абнормальности кардиомиоцитов, а растяжение ткани их устраняет. Предположительно этот эффект реализуется через механоуправляемые каналы (Mechanically Gated Channels: MGCs) кардиомиоцитов, работа которых модулируется NO, поскольку донор NO SNAP открывает MGCs у нерастянутой клетки, а у растянутой клетки их закрывает. Если TNF- реализует свой эффект через повышение концентрации NO посредством активации NO-синтазы, то применение донора NO, например, SNAP должно приводить к изменению в APD90 с последующим возникновением аритмии. Для доказательства этого в отсутствии каких либо изменений в преднагрузке, осуществляли перфузияю ткани стандартным солевым раствором, содержащим SNAP в концентрации 3х10-4 М. Уже через 10 мин наблюдали появление горбообразной деполяризации, которая позднее преобразовывалась в устойчивые параксизмы, чередующиеся с абнормальными или нормальными потенциалами действия. То есть SNAP вызывал абнормальности по типу горбообразной деполяризации, аналогичные тем, которые вызывал TNF-. Для ответа на вопрос, являются ли абнормальности и аритмии, вызванные SNAP, аналогами деполяризации опосредованной растяжением (SID), проводили 2 серии экспериментов с Gd3+ в концентрации 40 мкмоль/л. В одной серии Gd3+ добавляли в перфузионный раствор после появления вызванных SNAP горбообразных деполяризаций или развившихся на этом фоне аритмий. Было показано, что горбообразные деполяризации в абнормальных паттернах полностью блокировались 40 мкмоль/л Gd3+ в течение 10 мин после его введения в раствор. Возникающие под действием SNAP аритмии также блокировались 40 мкмоль/л Gd3+. В другой серии Gd3+ добавляли в перфузионный раствор вместе со SNAP.

В этом случае мы не регистрировали никаких абнормальных потенциалов. Поскольку дискретное растяжение ткани на фоне перфузии TNF- приводило к полному устранению сначала аритмии, а затем электрических абнормальностей, и с учетом того, что эффект TNF может реализовываться через повышение концентрации NO, мы поставили серию экспериментов, в которых вызывали SNAP индуцированное появление SID и аритмий, а затем растягивали клетки для дополнительной активации NO-синтазы. После появления вызванных SNAP абнормальностей или аритмий ткань растягивали, и это растяжение полностью устраняло не только аритмии, но и SI-подобную деполяризацию, вызванную SNAP.

В заключении было показано, что введение SNAP на фоне вызванных TNF- абнормальностей полнотью устраняет эти абнормальности. Для выяснения функциональной роли NO-синтаз в реализации эффекта TNF- применяли их неселективный ингибитор LNAME, которым предварительно инкубировали ткань в течение 30 мин, после чего добавляли TNF- и инкубировали еще 30 мин на фоне L-NAME. Предварительная перфузия ткани раствором L-NAME не приводит к появлению каких либо абнормальностей в развитии потенциалов действия даже через 30 мин регистрации. Однако, несомненно, более важный факт заключается в том, что после подобной инкубации TNF-, введенный на фоне L-NAME не вызывает появление или развитие горбообразной деполяризации. Принципиально важно, что растяжение не вызывало появление или развитие горбообразной деполяризации.

Таким образом, аритмогенный эффект TNF- связан с работой MGCs и является NO зависимым. TNF- активирует NO синтазы, в результате чего повышается коцентрация NO, что приводит к открытию MGCs, потоку Na+ в клетку и деполяризации мембраны, что приводит к аритмиям.

Дистанционная оценка физиологического состояния бодрствующих крыс в условиях формирования эмоционального стресса Мкртчян Масис Арташесович (Ереванский государственный университет, факультет Химии, Ереван, Армении, Masis1989@yandex.ru) Исследования по поиску альтернативных методов оценки физиологического состояния биологических систем, проведенные в Институте физиологии им. Л.А. Орбели НАНРА, привели к разработке нового прибора - «Биоскопа» (Drrayer J.P. et. al, 2007) способного бесконтактно реагировать на присутствие биологических систем (растения, лабораторные животные, люди). Прибор прост в конструкции, а принцип его работы основан на оценке интенсивности света, рассеянного от датчика – стеклянной пластины, покрытой тонким непрозрачным материалом.

Pages:     | 1 |   ...   | 59 | 60 || 62 | 63 |   ...   | 83 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.