WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 49 | 50 || 52 | 53 |   ...   | 83 |

Моделирование физической адсорбции РНКаз на плазматическую мембрану Ширшиков Фёдор Владимирович (Казанский (Приволжский) федеральный университет, Биолого-почвенный факультет, Россия, Казань, shirshikov-fedor@ya.ru) Проявление биологической активности экзогенных ферментов на клеточном уровне во многом зависит от их способности взаимодействовать с поверхностью клетки, которая определяется совокупностью физико-химических свойств молекул фермента и свойствами плазматической мембраны.

Объектами настоящего исследования являются РНКазы, обладающие цитотоксическим действием и другими биологическими эффектами.

Целью работы являлось сравнение физической адсорбции РНКазы А и РНКазы Bacillus intermedius (РНКаза Bi) на отрицательно заряженную поверхность слюды с помощью метода атомно-силовой микроскопии. Процесс моделировал взаимодействие РНКаз с плазматической мембраной в физиологических условиях. Гидрофобные свойства РНКаз оценивали методом построения профиля гидрофобности, который позволяет определить на белке участки, потенциально способные участвовать в гидрофобных взаимодействиях с липидным бислоем.

Анализ АСМ-изображений слюды с адсорбированными на ней РНКазами и кинетики адсорбции препаратов показал, что РНКаза Bi адсорбировалась в 3-4 раза эффективнее, чем РНКаза A. Адсорбция РНКазы Bi на слюде сопровождалась димеризацией и агрегацией молекул фермента. Обсуждается зависимость эффективности взаимодействия РНКаз с отрицательно заряженной поверхностью от распределения суммарного заряда на белковой молекуле.

Сравнение профилей гидрофобности РНКаз свидетельствует о том, что РНКаза Bi обладает более выраженными гидрофобными свойствами по сравнению с РНКазой А.

Полученные в настоящей работе результаты позволяют оценить различия в биологических эффектах РНКаз с позиции их взаимодействия с поверхностью клетки.

Работа выполнена при поддержке федеральной целевой программы «Научные и научнопедагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы, Гос. Контракт № 02.740.11.0391. Выражаю огромную благодарность моему научному руководителю с.н.с.

Калачевой Наталье Васильевне, а также доц. Коноваловой Ольге Анатольевне за помощь в проведенной работе.

Cancer-derived p53 mutants suppress p53-target gene expression – potential mechanism for gain of function of mutant pKanarsky Eugene (National university of life and environmental sciences of Ukraine, Ukraine, Kiev, Johny.Kanarsky@gmail.com) Tumour-derived p53 mutants are thought to have acquired “gain-of-function” properties that contribute to oncogenicity. The p53 suppressor gene is mutated in ~ 50% of all human cancers.

All p53 mutant and wild-type p53 plasmids were generated. The following p53-target gene promoter-reporter constructs were used in study: p21-luciferase (luc), gadd45-luc, p53AIP-1-luc, Bax-luc, Igfbp3-luc, p53R2-luc, cyclinG1-luc and hTert-luc. p21-promoter deletion constructs 0luc, 2-luc and 4-luc. HUH-7 and T47D cells were co-transfected with 1g pCDNA and 10g of pSuper-based plasmid containing oligonucleotide sequences for silencing p53. Total RNA was prepared from cells using TRIZOL Reagent (Invitrogen) as per manufacturer's instructions.

Since silencing of mutant p53 expression led to the induction of p53-target genes involved in growth arrest and apoptosis, was evaluated if knock-down of endogenous mutant p53 expression would also affect cellular growth. Was silenced p53 expression in HUH-7 cells which harbours the A220G mutation in p53 and in T47D cells that carry the C194T mutation, and where silencing led to increased expression of p53-target genes. Absence of any transfection and subsequent selection resulted in no surviving colonies, confirming the efficacy of the selection procedure. Enumeration of cellular colonies indicated that there was a significant decrease in the number of colonies upon silencing of p53 expression (HUH-7–control versus p53 siRNA: 407 versus 133; P = 0.0073 and T47D—control versus p53 siRNA: 406 versus 103; P = 0.0133).

The results presented here propose another mechanism through which mutant p53 may contribute to unregulated cellular growth and oncogenesis. Together with the recent reports the presence of the overexpressed mutant p53 in tumour cells may be a good therapeutic target for clinical intervention.

Interactions between HIV-1 Nef and ABCA1 cholesterol transporter Sheveleva Daria1, Jeannelle L.(1Department of Molecular Biology, Faculty of Biology, Lomonosov Moscow State University, Moscow, Russia, The George Washington University, Department of Microbiology, Immunology and Tropical Medicine, USA, DC, Washington, dariasheveleva@gmail.com, mtmltj@gwumc.edu) Nef is an accessory protein of HIV-1 which is crucial for viral infectivity and pathogenesis. It undergoes N-terminal myristoylation for attaching to the membrane. Nef is shown to downregulate the function of ABCA1 cholesterol transporter. In our studies, we use NEF gene derived from the pNL4-3 cell-line adapted clone. We have compared the wild type Nef and its mutant form G2A, deficient in myristoylation, in their ability to decrease the presence of ABCA1. Co-expression of wild type Nef and ABCA1 led to a significant decrease in ABCA1 abundance revealed by Westernblotting analysis. Interestingly, co-expression of G2A mutant also had a decreasing effect on ABCA1 presence, contrary to previous results with other Nef alleles. Both wild-type and G2A Nef proteins were then tested for co-immunoprecipitation with FLAG-tagged ABCA1, using antiFLAG affinity gel. In previous studies, it was shown that G2A mutation destroys the ability of some Nef alleles to co-immunoprecipitate with ABCA1. In our studies, G2A mutant of the pNL4-allele was detected in co-immunoprecipitation with ABCA1, though at lower levels than wild-type Nef. Another remarkable feature of Nef pNL4-3 allele is its ability to co-immunoprecipitate efficiently with the C-terminally truncated ABCA140 mutant, in contrast to Nef from the SFHIV-1 isolate. These data indicate that myristoylation of pNL4-3 Nef is not required for decreasing ABCA1 abundance. Myristoylation promotes, but is not crucial for, co-immunoprecipitation of Nef with ABCA1. Apparently, the way Nef interacts with ABCA1, and especially the role of myristoylation in this process, is strongly dependent on the allele of Nef.

We thank Dr. T.S.Kalebina and Dr. M.I.Bukrinsky for supervising our work and Dr.

T.A.Plotnikova for participation in discussion.

The work was funded by the grant 10-04-01821-a from Russian Foundation of Basic Research and the grant for the USA-Russia educational program “Training Leaders in 21st Century Biotechnology” P116S090023.

ПОДСЕКЦИЯ «НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ И ФИЗИОЛОГИЯ ВНД» УСТНЫЕ ДОКЛАДЫ Динамика внутриклеточного кальциевого сигнала в условиях воздействия агонистов рецепторов глутамата в первичной культуре нейронов коры мозга Абушик Полина Александровна (Санкт-Петербургский политехнический университет, факультет Медицинской физики и Биоинженерии, Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М.

Сеченова РАН, Россия Санкт-Петербург, polinaabushik@gmail.com) Известно, что нейротоксическое действие глутамата реализуется через рецепторы NMDA-типа, каналы которых обладают высокой проводимостью для ионов кальция, и рецепторы АМРА-типа. В моем исследовании сопоставляются динамики Са2+ сигналов в условиях действия NMDA (N-метил-D-аспартата), KA (каинта, агониста АМРА рецепторов), и механизмы лежащие в основе их различий.

Эксперименты проводили на первичной культуре нейронов коры головного мозга крыс.

Мониторинг кальциевого сигнала осуществляли с использованием флуоресцентного зонда Fluo-3 на конфокальном микроскопе Leica SP5 MF.

При длительной активации рецепторов глутамата 30 мкМ NMDA и 30 мкМ КА наблюдался значительный рост интенсивности флуоресценции. Обнаружено, что при активации NMDA рецепторов Са2+ сигнал нарастал быстро и достигал стационарного уровня. В случае АМРА рецепторов флуоресценция возрастала медленно, и тот же уровень достигался за 30 минут. Аппликация агонистов в бескальциевом растворе не вызывала усиления флуоресценции, однако добавление наружного Са2+ запускало внутриклеточный Са2+ ответ за счет входа внеклеточного Са2+ через каналы плазматической мембраны. Для идентификации механизмов в опытах использовали ИЭМ-1460, который блокирует каналы AMPA-рецепторов, не содержащих GluR2 субъединицу, определяющую проницаемость для Са2+, и нифедипин - блокатор потенциал-чувствительных Са2+ каналов L-типа. Поскольку нифедипин ингибировал Са2+ сигнал в большинстве нейронов, L-тип Са2+ каналов участвует в генерации сигнала. Показано также, что динамика Са2+ ответа в различных нейронах при действии КА зависит от субъединичного состава AMPA-рецепторов и бывает трех типов, характерных для вставочных нейронов (имеют Са2+-проницаемые AMPA рецепторы), пирамидных нейронов (экспрессируют AMPA рецепторы, содержащие GluR2) и нейронов промежуточного типа (имеют оба вида рецепторов). Таким образом, была обнаружена гетерогенность популяции нейронов в первичной культуре, характерная для коры взрослых животных.

Работа поддержана грантом РФФИ № 08-04-00423, руководитель д.б.н. Антонов С.М.

Движения глаз при чтении предложений с синтаксической неоднозначностью в русском языке Анисимов Виктор Николаевич (Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова, Биологический факультет Россия, Москва, victor_anisimov@neurobiology.ru) Параметры движений глаз при чтении (длительности фиксаций, величины саккад, количество регрессий) могут быть использованы для оценки когнитивных процессов при чтении. В рамках проведенного исследования разработали новый подход для анализа определенного типа синтаксической конструкции русского языка - конструкции с локальной и глобальной синтаксической неоднозначностью (например, «Преступник застрелил служанку актрисы, которая стояла на балконе» vs. «Преступник застрелил слугу актрисы, которая стояла на балконе»).

В экспериментах испытуемые (14 студентов МГУ) читали 40 тестовых предложений (Т), содержащих синтаксическую неоднозначность, и 40 контрольных предложений (К) без неоднозначности. Предложения предъявлялись на экране монитора, располагаемом в 45 см от глаз испытуемого. Строка, содержащая синтаксическую неоднозначность, состояла из 2527 символов, ее длина составляла 35 см. Положение взора определялось методом видеоокулографии (250 Гц). Анализировали различия параметров движений глаз при чтении 2-й строки, содержащей неоднозначность (в Т) и не содержащей неоднозначность (в К).

У всех испытуемых время чтения 2-й строки в Т превышало аналогичный параметр при чтении 2-й строки в К. Увеличение времени чтения происходило из-за увеличения числа фиксаций, их длительности, а также числа регрессивных саккад при чтении Т по сравнению с К. Регрессивные саккады (смещение взора влево) испытуемые совершали для повторного чтения фрагмента, вызвавшего какие-либо затруднения. При повторном чтении (после регрессивной саккады) 2-й строки как в Т, так и в К длительности фиксаций оказались меньше, чем при первом чтении.

Мы выполнили первое в отечественной научной практике исследование влияния трудностей в русском языке на параметры движений глаз. Ценность работы состоит в том, что анализируемые психофизиологические показатели, сопровождающие когнитивную деятельность, специфическим образом отражают успешность ее выполнения.

Оценка влияния хронической алкоголизации на поведенческие характеристики в открытом поле с учетом индивидуально-типологических особенностей Бобровская Анна Викторовна, Мальцева Е.С.

(Донецкий национальный университет, Украина, Донецк, annetlustig@rambler.ru) Большое количество работ, посвященных изучению действия этанола на организм, связано со значительным ростом психоэмоциональных нарушений, вызванных употреблением избыточных доз алкоголя. Одним из вопросов, который нуждается в уточнении является вопрос индивидуальной чувствительности к действию этанола. Целью представленного фрагмента комплексной работы является установление особенностей индивидуальной чувствительности к хроническому действию этанола в условиях открытого поля. Эксперимент был выполнен на 40 крысах-самцах весом 180±15 г., содержавшихся в стандартных условиях вивария. Хроническую алкоголизацию (ХА) моделировали 14дневным в/бр введением 10%-го раствора этилового спирта в расчете 2 мл/кг. Влияние этанола изучали в стандартных условиях открытого поля (ОП). Первичные экспериментальные данные обрабатывались с помощью общепринятых методов математической статистики с помощью пакета программ STATISTIKA 6.0 и Excel.

Выявлено, что уровень двигательной активности (ДА) в подгруппах с низким и средним уровнями исследовательской активности (ИА) достоверно не отличались между собой; у высокоактивных животных этот показатель был максимальным. Кроме того, высокоактивные животные оказались более эмоциональными, чем другие крысы (большее количество фекальных болюсов. Установлено, что на первой минуте тестирования животного демонстрируют максимальные проявления разных форм поведения, не в зависимости от исходного уровня ИА. Выявлено, что ХА не повлияла на суммарный уровень ИА низкоактивных животных. Двигательная активность, напротив, снизила почти вдвое (pu<0,05). У средне- и высокоактивных животных проявления ИА снизились в среднем на 32-41% (pu<0,05) относительно показателей контроля. Однако, ДА крыс со средним уровнем активности не изменилась относительно контрольных значений, в то время, как ДА высокоактивных крыс совпала с результатами, полученными в подгруппе с низком уровнем активности. В подгруппах животных с крайними уровнями ИА (низким и высоким) обнаружены противоположные по направленности изменения эмоциональности: у низкоактивных – повышение (pu<0,05), в высокоактивных – снижение (pu<0,05). Таким образом, можно сделать вывод, относительно хронического действия этанола чувствительными являются только особи со средним и высоким уровнями исследовательской активности.

Pages:     | 1 |   ...   | 49 | 50 || 52 | 53 |   ...   | 83 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.