WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 47 | 48 || 50 | 51 |   ...   | 83 |

Титр КОЕ в таких культурах снижался, однако титр геномных копий в большинстве случаев был значительно выше, что свидетельствует в пользу активного образования покоящихся клеток. Соотношение между показателями титра КОЕ и геномных копий было выше в культурах, инокулированных стационарными клетками. В противоположность этому индекс ингибирования амплификации, определенный с помощью ПЦР анализа, был выше в культурах клеток логарифмической фазы роста. С помощью метода электронной микроскопии были обнаружены ультраструктурные особенности клеток голодающих культур логарифмической и стационарной фаз роста.

Полученные нами данные, позволяют заключить, что выбор адаптивной программы в популяции микроорганизмов зависит от исходного физиологического состояния клеток, подвергаемых стрессовому воздействию, что дает возможность бактериям гибко реагировать на изменение внешних условий.

Изучение влияния ионов железа(II) на ростовые характеристики Staphylococcus aureus и Escherichia coli Якубенок Светлана Александровна (Югорский государственный университет, Россия, Ханты-Мансийск, svetlana.jakubenk@rambler.ru) Патогенные бактерии в отличие от бактерий, живущих в окружающей среде, при попадании в организм человека находятся в условиях дефицита и конкуренции за железо с железосвязывающими белками. Существует точка зрения, что наибольшей активностью сидерофоров и железозависимостью свойств обладают штаммы бактерий, выделенные из крови.

Целью данной работы явилось изучение влияния ионов железа (Fe2+) на ростовые характеристики S. aureus и E. coli, выделенных из разных источников.

Для эксперимента использовали по 8 штаммов S. aureus и E. coli, выделенных из разных биотопов больных ОКБ г. Ханты-Мансийска. В качестве эталонов использовали стандартные штаммы международных коллекций: S. aureus АТСС 25923, VT 209 и E. coli АТСС 25922, 35218. Изучение влияния ионов Fe2+ на рост бактерий проводили на железодефицитной питательной среде, приготовленной на основе мясо-пептонного бульона.

Железо вносили в среду в виде раствора FeSO4 до конечной концентрации 0,1-50,0 мкМ.

Рост микроорганизмов контролировали турбидиметрически при =540 нм. Для описания влияния железа на рост использовали уравнение для ингибирования роста избытком субстрата.

В результате определения константы сродства исследованных штаммов к ионам железа(II) они были разделены на три группы: с Кs <10 мкМ – сильно железозависимые, с Кs = 10-100 мкМ – слабо железозависимые и с Кs >100 мкМ – нежелезозависимые. Доля штаммов, у которых отмечался признак железозависимости, для S. aureus составила 60%, для E. сoli 90%. Результаты проведенного исследования подтвердили предположение о том, что штаммы, выделенные из крови, обладают наибольшей железозависимостью.

Сравнительный анализ значений Кs E. coli и S. aureus показал, что в условиях нашего эксперимента наибольшую железозависимость имеет E. coli.

ПОДСЕКЦИЯ «МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОЛОГИЯ» УСТНЫЕ ДОКЛАДЫ Молекулярно-генетическое исследование немертин рода Oerstedia (Monostilifera, Tetrastemmatidae) Ахматова Алина Федоровна (Институт биологии моря им. А.В. Жирмунского (ИБМ) ДВО РАН, Россия, Владивосток, Ahmatova.alina@mail.ru) Настоящая работа представляет собой молекулярно-генетическое исследование широко распространенных в заливе Петра Великого Японского моря видов гоплонемертин рода Oerstedia Quatrefages, 1846 - O. oculata Kulikova, 1987, O. zebra Chernyshev, 1993, O.

phoresiae Kulikova, 1987 и O. valentinae Chernyshev, 1993. Все они изначально были описаны как представители рода Oerstediella Friedrich, 1935, но затем перенесены в род Oerstedia. Эти виды являются весьма схожими по признакам внешней морфологии, однако имеются некоторые различия, во-первых, в окраске и размерах тела, во-вторых, в строении слепой кишки (O. phoresiae несколько отличается от O. oculata и O. zebra), и, кроме того, периоды размножения у данных видов не совпадают (апрель-май у O. valentinae, май-июнь у O.

oculata и O. zebra, июль-август у O. phoresiae).

Молекулярно-генетическое исследование проводилось на основе данных о первичной последовательности фрагмента ядерной ДНК, кодирующего 28S рибосомальную РНК. В общей сложности получены и проанализированы последовательности 15 экземпляров исследуемых видов. В анализ также были включены данные из генного банка по исследуемому гену для O. zebra и O. venusta с побережья Японии, а также O. dorsalis с побережья Европы.

Ранее методами аллозимного анализа было показано, что хорошо различимые по окраске тела O. oculata и O. zebra генетически идентичны, а внешне похожие O. oculata и O.

phoresiae по аллозимным маркерам, как оказалось, очень сильно различаются. Проведенный молекулярно-генетический анализ на основе анализа первичных последовательностей ядерного 28S рибосомального гена подтверждает эти выводы. А именно, полученные данные позволяют установить, что, во-первых, экземпляры O. zebra и O. valentinae не имеют отличий от O. oculata и, во-вторых, O. oculata и O. phoresiae действительно являются самостоятельными видами. Таким образом, O. zebra и O. valentinae следует признать младшими синонимами O. oculata. Кроме того, молекулярно-генетический анализ позволил установить, что O. phoresiae, ранее известная только из Японского моря, обитает и на литорали острова Чеджу (Южная Корея). Наконец, показано, что O. venusta sensu Thollesson and Norenburg из прибрежных вод Хоккайдо следует относить к O. oculata.

Молекулярная характеристика лекарственной устойчивости к изониазиду и рифампицину клинических изолятов Mycobacterium tuberculosis, выделенных из Восточного и Западного Казахстана Ахметова Айнур Жармухамбетовна, Кожамкулов У.А.

(Национальный Центр Биотехнологии, Казахстан, Астана, a.akhmetova.zh@gmail.com, kzulan@gmail.com) С каждым годом в Казахстане регистрируется все больше случаев мультирезистентного (Multidrug resistance - MDR) туберкулеза, обуславливающего устойчивость к основным противотуберкулезным препаратам первого ряда – изониазиду и рифампицину. По данным различных авторов, 60-96% всех изониазид-устойчивых штаммов имеют мутации в katG, 1015% в ahpC и 21% в inhA генах, а 96-98% всех рифампицин-устойчивых штаммов имеют мутации между 507 и 533 кодонами rpoB гена.

В данной работе были исследованы 89 MDR клинических изолятов M.tuberculosis из Восточного и Западного Казахстана. Лекарственная чувствительность M. tuberculosis к изониазиду и рифампицину определялась методом абсолютных концентраций, согласно рекомендациям ВОЗ. Амплификацию фрагментов katG, fabG-inhA и ahpC-oxyR промоторной области, а также rpoB M.tuberculosis проводили в амплификаторе (Tetrad 2 BioRad, США).

Определение нуклеотидных последовательностей данных генов осуществляли с помощью генетического анализатора ABI 3730 (Applied Biosystems, США). Полученные последовательности генов сравнивали с референсной последовательностью штамма M.tuberculosis H37Rv с помощью программы SeqScape (Applied Biosystems).

Среди 89 MDR изолятов было обнаружено 6 различных вариантов мутаций в 2 кодонах rpoB гена Ser531, His526. Преобладала замена TCG531TTG (Ser531Leu) rpoB гена - у (85.4%) изолятов. В двух случаях (2.2%) обнаружена замена Ser531Tyr. Наиболее вариабельным оказался 526 кодон rpoB гена, где было выявлено 4 различных вариантов однонуклеотидных замен. У 3 изолятов (3.4%) мутаций в гене rpoB не было обнаружено. В гене katG у всех 89 изолятов (100%) выявлена мутация Ser315Тhr. 8 (9%) изолятов показали двойные мутации. Так у 5 (5.6%) изолятов отмечена мутация Ser315Тhr в сочетании с мутацией в -15С-Т позиции промоторной области fabG-inhA и у 3 (3.4%) изолятов отмечена мутация Ser315Тhr с мутацией в -8Т-А позиции в fabG-inhA. Не было обнаружено никаких мутаций в промоторной области оперона гена oxyR-ahpC.

Таким образом, было выявлено, что для популяции M. tuberculosis, циркулирующей на территории Восточного и Западного Казахстана, характерна высокая частота встречаемости мутаций в горячих точках rpoB гена и мутации в katG-гене определяющих устойчивость к рифампицину и изониазиду.

Некодирующая транскрипция влияет на коммуникативную активность энхансеров генов white и yellow D. melanogaster.

Давыдова Анна Игоревна (Институт Биологии гена РАН, Россия, Москва, anya_davydova@mail.ru) Тканеспецифичная и различающаяся на разных стадиях развития организма активация транскрипции генов высших эукариот зависит от активного статуса цис-регуляторных ДНКэлементов: промотора гена, на котором собираются белки основного транскрипционного комплекса, и энхансеров, которые, посредством регуляторных белков, усиливают транскрипцию. В активности энхансеров можно выделить две составляющие:

активационную (способность значительно увеличивать транскрипцию гена-мишени) и коммуникативную (способность взаимодействовать с промотором на большом расстоянии).

В данной работе проведено исследование влияния некодирующей транскрипции на активность энхансеров генов white и yellow Drosophila.

Основным подходом в реализации данного проекта было создание трансгенных конструкций с последующей интеграцией их в геном Drosophila путем микроинъекции плазмидной ДНК в эмбрионы. Было протестировано влияние транскрипции на активность энхансеров с индуцируемого UAS-промотора (минимальный промотор гена hsp70 под контролем сайтов связывания для белка-активатора дрожжей GAL4). Для индукции высокого уровня транскрипции через исследуемые энхансеры, трансгенные линии скрещивались с линией, несущей ген GAL4-активатора под контролем сильного тубулинового промотора.

В результате было установлено, что транскрипция, проходящая через энхансеры генов white и yellow, инактивирует способность энхансеров усиливать транскрипцию генов на расстоянии (коммуникативную активность). Показано, что наблюдаемый эффект не связан с конкуренцией энхансеров за сигнал промотора. Дополнительно было продемонстрировано, что наличие в системе терминатора транскрипции стабилизирует экспрессию трансгена, предотвращая репрессирующий эффект транскрипции на энхансеры.

Полученные данные свидетельствуют о возможности наличия дополнительного механизма, контролирующего способность энхансеров активировать транскрипцию.

Данное исследование было проведено при поддержке РФФИ (грант № 09-04-00903-а), гранта Президента РФ МК-3421.2011.4. Автор выражает благодарность академику Георгиеву П.Г. за руководство и помощь в проведении экспериментов.

Анализ сайленсер-блокирующей активности Wari-инсулятора D. melanogaster Ерохин Максим Максимович (Учреждение Российской Академии Наук Институт Биологии гена РАН, Россия, Москва, yermaxbio@yandex.ru) Инсуляторы классически определяются двумя их экспериментально установленными свойствами: энхансер-блокирующей и барьерной активностями. Инсуляторы характеризуются асимметричностью действия: они блокируют действие энхансера (энхансер-блокирующая активность) только если расположены между ним и промотором гена. Барьерная активность инсуляторов ограничивает распространение гетерохроматина и, как следствие, репрессию гена. Обе активности инсуляторов необходимы для сайленсерблокирующей активности инсуляторов, т.е. способности блокировать репрессию, опосредованную белками группы Polycomb (PRE-элементами). Недавно нами был обнаружен инсулятор, названный Wari. Этот инсулятор находится в геноме между геном white, отвечающим за пигментацию глаз, и геном CG32795.

Анализ сайленсер-блокирующей активности Wari-инсулятора был проведен на трансгенных линиях дрозофилы; для характеристики белков инсулятора использовался метод иммунопреципитации хроматина.

Было показано, что ранее обнаруженная 368 п.н. функциональная область Wariинсулятора достаточна для блокирования репрессии, опосредованной сайленсером. Хотя Wari-инсулятор не содержит сайты связывания для известных ДНК-связывающих инсуляторных белков, белки E(y)2 и CP190 взаимодействуют с Wari-инсулятором in vivo.

Известно, что данные белки взаимодействуют с Su(Hw)-зависимыми инсуляторами. Вполне вероятно, что рекрутирование данных инсуляторных компонентов на ДНКпоследовательность Wari-инсулятора происходит за счет пока не известных ДНКсвязывающих инсуляторных белков. Кроме того, мы показали, что частичная инактивация белка E(y)2 за счет введения мутации e(у)2u1, нарушает только сайленсер-блокирующую, но не энхансер-блокирующую активность Wari-инсулятора.

Таким образом, белок E(y)2 необходим для сайленсер-блокирующей активности Wariинсулятора.

Данное исследование было проведено при поддержке РФФИ (грант № 09-04-00903-а), гранта Президента РФ МК-3421.2011.4. Автор выражает благодарность академику Георгиеву П.Г. за руководство и помощь в проведении экспериментов.

Глюкантрансфераза Bgl2p клеточной стенки дрожжей: структура и функции.

Плотникова Татьяна Александровна, Безсонов Е.Е.

(Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова, Биологический факультет, Россия, Москва, plotta@inbox.ru) Клеточная стенка полностью покрывает дрожжевую клетку. Основными структурными компонентами данной органеллы являются глюкан (50-60%), маннопротеины (40-50%) и хитин (менее 5%). Bgl2p – мажорный нековалентносвязанный с глюканом белок клеточной стенки дрожжей, обладающий глюкантрансферазной активностью. Этот белок давно и интенсивно изучается, однако вплоть до начала нашей работы его структура и функции были неясны. Для выявления роли этого фермента в клеточной стенке методом сайтнаправленного мутагенеза, основанного на гомологичной интеграции линейного фрагмента ДНК в геном дрожжевой клетки, нами был нарушен ген BGL2 в дрожжах Hancenula polymorpha, характеризующихся отсутствием системы хитиновой репарации клеточной стенки, а также создана коллекция изогенных мутантов дрожжей S. cerevisiae c делециями генов глюкантрансфераз Bgl2p и Gas1p по отдельности и с двойной делецией генов сразу обоих ферментов для исключения взаимной компенсации функций. Электронная микроскопия и споттинг анализ полученных мутантов позволил обнаружить, что Bgl2p ответственен за образование материнского рубца на клеточной стенке после деления клеток, необходим дрожжам для выживания в экстремальных условиях, таких как высокая температура и длительное высушивание, а также играет важную роль в ограничении репродуктивной жизни клеток в процессе старения культуры. Сравнительный анализ белкового состава клеточных стенок полученных штаммов с использованием метода избирательно биотинилирования гликопротеинов клеточной поверхности дрожжей позволил выявить, что Bgl2p участвует во встраивании GPI-белков клеточной стенки дрожжей.

Pages:     | 1 |   ...   | 47 | 48 || 50 | 51 |   ...   | 83 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.