WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 43 | 44 || 46 | 47 |   ...   | 83 |

aureus гомосеринлактоном (ГСЛ) на динамику роста и способность к колониеобразованию после действия теплового шока. 3. Продемонстрировать эффекты гомосеринлактона на активность ферментов стафилококка в условиях стресса. В ходе эксперимента было показано, что тепловой шок при 60°С (15 минут) приводит к частичному разрушению клеток стафилококка. ТШ при 45°С с предварительной обработкой ГСЛ вызывает более раннее наступление стационарной фазы роста культуры, что, вероятно, связано с накоплением токсичных метаболитов. Двухчасовая предобработка стафилококка гомосеринлактоном перед ТШ не влияет на лецитиназную активность, но приводит к повышению устойчивости протеаз к тепловому шоку при 60°С и к повышению чувствительности гемолизинов к действию ТШ, за счет чего ингибируется гемолитическая активность.

Таким образом, ацилированный ГСЛ демонстрирует комплексное и неоднозначное воздействие на физиолого-биохимические характеристики Staphylococcus aureus. Понимание биологической активности АГЛ и экологических последствий такой деятельности может дать нам возможность манипулировать составом и функциями сложных биологических комплексов. В конечном итоге, это расширяет биотехнологическую значимость исследований АГЛ для ослабления вирулентности патогенов человека, животных и растений.

Оптимизация применения «ассоциативных» бактериальных удобрений в выращивании огурцов Блинков Евгений Александрович (Российский государственный аграрный университет – МСХА имени К.А. Тимирязева, Россия, Москва, ecobio@list.ru) Открытие явления ассоциативной азотфиксации обосновало целесообразность искусственного обогащения ризосферы небобовых растений отобранными штаммами бактерий, способных к комплексному положительному воздействию на растения, в том числе к активному связыванию молекулярного азота. Последнее особенно важно для овощных культур, нуждающихся в больших дозах азота в доступной форме. По результатам опытов в защищенном грунте некоторые ассоциативные азотфиксаторы способны более чем на 50% заменить минеральный азот, вносимый под овощные культуры, а также снизить потребность в фосфорных и калийных удобрениях, в фунгицидах.

Нерегулярная воспроизводимость результатов инокуляции, не позволяющая достаточно надежно прогнозировать реакцию растений, является в настоящее время главной причиной ограниченного применения «ассоциативных» бактериальных удобрений в сельскохозяйственной практике.

Нами изучалось влияние дефицита влаги в почве (45-50% ПВ) и низких положительных температур (+16С день, +12С ночь) на азотфиксирующие микроорганизмы ризопланы и филлосферы растений, а также влияние интродуцируемых микроорганизмов на растения огурца в условиях водного и температурного стресса. Огурцы сорта «Конкурент» и гибрида «Рассвет» инокулировались биопрепаратами «Биоплант-К» (создан лабораторией микробиологии РГАУ-МСХА им. К.А. Тимирязева на основе эндофитной ризобактерии Klebsiella planticola штамм ТСХА-91) и «Мизорин» (разработан ВНИИ сельскохозяйственной микробиологии на основе ризобактерии Arthrobacter mysorens).

Интродуцируемые в эндосферу корней огурца бактерии вступают в ассоциативный симбиоз с растениями, снижая негативное воздействие стрессовых факторов на них.

Особенно это отмечается на ранних стадиях роста. Инокуляция растений штаммами Klebsiella planticola и Arthrobacter mysorens в целом способствует увеличению численности ассоциативных диазотрофов как в ризоплане и эндосфере корней огурца, так и в его филлосфере.

Исходя из полученных данных, рекомендуется применять штаммы Klebsiella planticola ТСХА-91 и Arthrobacter mysorens при выращивании, прежде всего, рассады огурца, как при оптимальной, так и при дефицитной влажности почвы и (или) пониженных температурах.

Инокуляция растений изучаемыми диазотрофными бактериями привела к увеличению урожайности огурца по сравнению с контролем. В условиях недостатка влаги перспективной является инокуляция растений штаммом Arthrobacter mysorens (биопрепарат «Мизорин»), а в условиях низких положительных температур – штаммом Klebsiella planticola ТСХА-(биопрепарат «Биоплант-К»).

Активный ил и осадки промышленных сточных вод как источник бактерий, стимулирующих рост растений Гаязова Диана Сергеевна (Казанский (Приволжский) Федеральный Университет, Биолого-почвенный факультет, Россия, Казань, dianagajazova@rambler.ru) Обнаруженные ранее жизнеспособные микроорганизмы в толще концентрированных отходов нефтехимии (нефтешламов), а также микроорганизмы, участвующие в очистке промышленных сточных вод, широко известные как «активный ил», представляют собой наиболее выраженный пример адаптации к неблагоприятным условиям. Уникальные метаболические возможности микрофлоры, выживающей в агрессивной среде, могут являться факторами, способствующими повышению устойчивости и других организмов, в частности растений. Учитывая высокий потенциал растительно-микробных ассоциаций при фиторемедиации загрязненных объектов, антропогенные экониши представляли для нас особый интерес как источники адаптированной микрофлоры, обладающей потенциалом в отношении стимуляции роста растений.

Изоляты исследовали с точки зрения способности к синтезу индолил-3-уксусной кислоты (ИУК) и растворению фосфатов кальция, а также наличию противопатогенных свойств.

Все изоляты, выделенные из шлама, и 90% изолятов активного ила, оказались способными к синтезу ИУК. Среднюю и высокую активность (на уровне 14-50 мкг/мл) проявили 50% изолятов, выделенных из шлама, и около 20% изолятов, выделенных из активного ила. Способность растворять труднодоступные соединения фосфора выявили только среди шламовых изолятов (до 60% представителей). Что касается противопатогенных свойств, то была выявлена антагонистическая активность в отношении фитопатогенных грибов из родов Alternaria sp. и Fusarium sp. у 90 и 16% представителей сообщества шлама и активного ила, соответственно. Изоляты активного ила проявляли, в основном, узкоспецифичный антагонизм по отношению к Fusarium sp., тогда как шламовые изоляты продемонстрировали широкий спектр противопатогенной активности.

Исходя из результатов всех опытов можно заключить, что микрофлора, циркулирующая в системе очистки промышленных сточных вод и длительное время сохраняющаяся в осадках (шламе) обладает набором ценных свойств, определяющих механизмы стимуляции роста растений. При этом процент биотехнологически перспективных штаммов в шламе выше, чем в активном иле.

Эффективность методов выделения ДНК из культур ацидофильных хемолитотрофных микроорганизмов, выделенных из сульфидной руды медноникелевого месторождения Шануч (Западная Камчатка) Дронин Александр Владимирович, Рогатых С.В.

(Камчатский государственный университет имени Витуса Беринга, Научноисследовательский геотехнологический центр Дальневосточного отделения РАН, Россия, Петропавловск-Камчатский, nigtc@kscnet.ru) Цель работы состоит в сравнении методик выделения ДНК из клеток микроорганизмов (Acidithiobacillus thiooxidans, A. ferrooxidans, Sulfobacillus thermosulfidooxidans и Ferroplasma acidiphilum), которые участвуют в экспериментальных процессах бактериально-химического выщелачивания ценных компонентов из сульфидной руды месторождения Шануч.

Полученные препараты ДНК не должны содержать примесей веществ, влияющих на эффективность и надежность анализа, и получаемая смесь нуклеиновых кислот должна сохранять количественное соотношение копий геномов каждого вида, входящего в состав пробы.

Были протестированы методы очистки ДНК, использующие различные комбинации механических (нагревание до 60-98С, перетирание с частицами SiO2), ферментативных (обработка лизоцимом и протеиназой K) и химических (обработка GuSCN, CTAB и KOH) воздействий на клетки. В сравнении принимали участие пробы, содержащие прикрепленные к частицам грунта микроорганизмы, и содержащие преимущественно свободные клетки.

Оценку эффективности проводили с помощью real-time ПЦР; использовали пары универсальных праймеров, позволяющих амплифицировать суммарную ДНК в пробе.

Наилучший результат получен для методики, основанной на лизирующей активности GuSCN. Сходный результат был получен для ферментативной методики, но на результат количественной ПЦР оказали влияние остатки бактериальных нуклеиновых кислот, содержащиеся в реагентах. Показана низкая эффективность методик, основанных на лизирующей активности CTAB и на физическом воздействии на клетки с помощью частиц SiO2. Для методики, основанной на лизирующей активности KOH, получен средний результат, однако ее недостатком является низкая степень очистки препарата ДНК от ионов железа, содержащихся в культурах (этот метод показал лучший результат для проб, содержащих незначительное количество прикрепленных клеток). В остальных случаях значимых отличий между пробами, содержащими свободные и прикрепленные клетки, обнаружено не было.

Полученные результаты позволяют рекомендовать методику, основанную на активности GuSCN (лизиc при 98С, с последующей очисткой фенолом и хлороформом), к проведению молекулярного анализа структуры сообществ ацидофильных хемолитотрофных микроорганизмов.

Влияние нитропроизводных адамантана на характер роста и протеолитическую активность As. niger Карасева Дарья Николаевна (СамГУ, Россия, Самара, pomailer@mail.ru) Проблематика работы заключена в поиске новых веществ, обладающих антифунгальными свойствами. По моделированию с помощью компьютерной программы PASC исследуемые нитропроизводные адамантана: 3-нитро-1-адамантанкарбоновая кислота (I), N-адамантоил-О,О-дихлор-n-нитроанилин (II), N-адамантоил-м-нитро-П-толуидин (III), синтезированные к.х.н. Ермохиным В.А., с долей вероятности p 0,65-0,92 могут проявлять данную активность. Было исследовано влияние плазмохимической полимеризации в тлеющем разряде (PCVD) на биологическую активность нитропроизводных адамантана.

Чистая культура A. niger высевалась на агар Чапека и инкубировалась 72 ч при 28ОС.

Изучаемые соединения растворяли в DMSO и наносили на стерильные диски в действующих концентрациях 100, 150 и 200 мкг/мл. Часть дисков обрабатывали PCVD, время обработки составляло 100, 300 и 600 с. Протеолитическая активность (ПА) определялась по методу Ансона. Характер роста грибных пропагул оценивали с привлечением средств фрактального анализа.

Наблюдалось уменьшение фрактальной размерности (ФР) грибных пропагул, выросших на среде с дисками, обработанными PCVD, в случае (I) вещества и увеличение ФР – (II) и (III) вещества, по сравнению с необработанными в плазме дисками по отношению к адамантану и к контролю (диски с DMSO). У грибной культуры в случае роста совместно с дисками, обработанными PCVD, не регистрировалась ПА клеток. По сравнению с этим, в опыте с необработанными PCVD дисками, вещества (I) и (II) в концентрациях 100 и мкг/мл не изменяли ПА, подавление протеолитической активности наблюдалось в случае вещества (III) во всех концентрациях, и веществ (I) и (II) в концентрации 200 мкг/мл. Больше всего антифунгальным эффектом обладает вещество (III), меньше всего – вещество (I); чем выше показатель ФР, тем более выражен этот эффект: грибные пропагулы растут хаотичнее, края у них неровные. Было доказано, что обработка PCVD увеличивает эти эффекты при времени обработки 100 и 300 с.

Работа выполнена при поддержке ФЦП "Научные и научно-педагогические кадры инновационной России" на 2009-2013 гг. Государственный контракт от 6 сентября 2010 г.

14.740.11.0057.

Создание иммобилизованного пробиотического препарата нового поколения Кистаубаева Аида Сериковна (Казахский национальный университет им. аль-Фараби, Биологический факультет, Казахстан, Алматы, aida_kaz@mail.ru) Микрофлора кишечника человека выполняет ключевую роль в обеспечении защиты от патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Биологическое равновесие нормофлоры кишечника часто нарушается, вследствие чего развивается дисбактериоз, приводящий к целому ряду проблем желудочно-кишечного тракта (ЖКТ).

Терапевтической основой для коррекции микробиоценоза кишечника являются пробиотики – бактерии, оказывающие позитивное влияние на организм. По пути в толстый кишечник при их прохождении через верхние отделы пищеварительного тракта обычно происходит значительное снижение расчетной активности препарата, поскольку большая часть интродуцируемых бактерий погибает в желудке и двенадцатиперстной кишке.

Решение этой проблемы может быть связано с использованием иммобилизованных форм препаратов.

Нами проводилась иммобилизация клеток лактобацилл на карбонизованной рисовой шелухе (ЗРШ-1). Для иммобилизации были выбраны штаммы молочнокислых бактерий Lactobacillus acidophilus AA-1, Lactobacillus plantarum AP-1, Lactobacillus fermentum AK-2R, которые обладают набором свойств, позволяющих им конкурировать с условнопатогенными микроорганизмами и колонизировать определенный биотоп организма человека. К таким признакам относятся: активность кислотообразования, антагонистическая активность, естественная резистентность к ряду антибиотиков, а также хорошая выживаемость в желудочно-кишечном тракте.

Проведенное электронно-микроскопическое исследование показало, что между микробными клетками и карбонизованным материалом регистрируется сорбционное взаимодействие. Клеточная загрузка используемого сорбента достаточно высокая, при оптимальном соотношении клетки/носитель она составляет 72%, а титр прикрепившихся клеток достигает 109 КОЕ/г.

Экспериментально установлено, что антимикробная активность лактобацилл, иммобилизованных на ЗРШ-1, возрастает на 25-60%. Сам сорбент тоже способен связывать до 28-33% клеток этих микроорганизмов, но наибольшее ингибирование роста тест-культур наблюдается при использовании иммобилизованного на ЗРШ-1 пробиотика. Уже после часов его совместного культивирования с энтеробактериями рост и жизнеспособность тесторганизмов практически полностью подавляется.

Таким образом, установлено, что использование энтеросорбентов в качестве носителя для прикрепления пробиотических микроорганизмов обеспечивает решение комплексной задачи – адресной доставки пробиотического препарата, его прикрепления к слизистой кишечника с последующей детоксикацией желудочно-кишечного тракта и нормализацией его микроэкологии.

Оценка филотипического разнообразия прокариот черноземов типичных Колодяжный Александр Юрьевич, Москалевская Ю.П.

Pages:     | 1 |   ...   | 43 | 44 || 46 | 47 |   ...   | 83 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.