WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 37 | 38 || 40 | 41 |   ...   | 83 |

Видовой состав возбудителей альтернариоза картофеля и томата Кокаева Людмила Юрьевна (Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова, Биологический факультет, Москва, Россия, lud.milka@bk.ru) Альтернариоз – опасное заболевание картофеля и томата, вызываемое несовершенными грибами рода Alternaria. Оно распространено практически во всех картофелеводческих регионах мира и при благоприятных погодных условиях вызывает существенное снижение урожая.

В работе исследованы изоляты возбудителей альтернариоза, выделенные в 2007–годах с пораженных образцов картофеля и томата в Ленинградской, Московской, Астраханской, Костромской и Смоленской областях.

Морфологическое исследование выделенных с картофеля российских изолятов мелкоспоровых Alternaria показало присутствие нескольких видов – A. alternata, A.

tenuissima и комплекса видов A. infectoria. Предварительные исследования, проведенные нашим коллективом в разных регионах России, также выявили морфологическое разнообразие в группе мелкоспоровых Alternaria.

Ранее в исследованиях видового и внутривидового полиморфизма фитопатогенных грибов, было показано, что скорость эволюции межгенных спейсеров области транскрибируемых рибосомных генов ITS позволяет использовать эти участки генома в качестве молекулярных маркеров для оценки изменчивости внутривидовых структур. Для филогенетических исследований нами был взят участок генома, ограниченный праймерами ITS4 и ITS5, включающий 5,8S рДНК, как один из наиболее полиморфных. В результате секвенирования этого участка у всех исследованных изолятов были выявлены практически полностью идентичные последовательности нуклеотидов, различающиеся единственной делецией основания Т в 508 положении у двух штаммов, морфологически соответствующими виду A. alternata. У остальных 10 штаммов, морфологически соответствующих видам Alternaria alternata, A. tenuissima, A. arborescens, различий по нуклеотидному составу выявлено не было. Таким образом данные, полученные в результате определения последовательности нуклеотидов, свидетельствуют о принадлежности мелкоспоровых штаммов к одному виду.

По предварительным результатам аналогичных исследований крупноспоровых штаммов предполагается, что они относятся к одному виду Alternaria solani.

Автор выражает благодарность своему научному руководителю С.Н. Еланскому, а также сотрудникам кафедры микологии и альгологии М.А. Побединской и А.В.

Александровой.

Характеристика долгоживущих и бессмертных изолятов Podospora anserina, полученных методом продолжительного глубинного культивирования Кудрявцева Ольга Александровна (Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова, Биологический факультет, Москва, Россия, for-ol-ga@yandex.ru) Аскомицетный гриб Podospora anserina (Rabenh.) Niessl – один из немногих видов грибов, дикие штаммы которого подвержены выраженному старению и смерти. Используя метод длительного культивирования мицелия в жидкой аэрируемой среде, осуществляемый за счет серийных пассажей, мы получили 22 долгоживущих изолята P. anserina. Их непрерывный рост на агаризованной среде поддерживали от 147 до 252 суток от момента отсева из глубинной культуры до остановки эксперимента, в то время как исходные штаммы, культивируемые исключительно поверхностно, прожили (от прорастания аскоспоры до остановки роста и отмирания мицелия) около 20 суток.

У 8 долгоживущих изолятов P. anserina полностью отсутствовали признаки старения на всем протяжении их роста. У остальных изолятов наблюдали от 1 до 6 кризисов старения – периодов, сопровождающихся временным снижением скорости роста и уменьшением формирования воздушных гиф. Амплификация основного фактора старения P. anserina – последовательности -senДНК – у долгоживущих изолятов была выражена слабо, как у молодых диких штаммов, либо полностью отсутствовала. Изоляты P. anserina характеризовались рядом признаков, передающихся потомкам от скрещивания с дикими штаммами, а именно: женской стерильностью, измененной макроморфологией мицелия, отсутсвием меланина и синтезом каротиноидов на свету.

Один из исследуемых изолятов P. anserina – V2-s1-IV(2) – является бессмертным. Было показано, что подавление программы старения и смерти мицелия обусловлено у данного изолята наличием в его митохондриальном геноме делеции, захватывающая ген cox1, в результате чего основная дыхательная цепь не функционирует, а дыхание обеспечивается исключительно за счет альтернативной оксидазы (AOX). Бессмертный изолят V2-s1-IV(2) продемонстрировал высокий уровнь экспрессии AOX, в 75 раз превышающий контроль, а также устойчивость к добавлению в среду ингибитора комплекса III антимицина А. Среди потомков от скрещивания V2-s1-IV(2) с диким штаммом P. anserina также были получены бессмертные мутантные штаммы, у которых инактивирована цитохром с-зивисимая дыхательная цепь.

Таким образом, продолжительное глубинное культивирование P. anserina позволяет получить изоляты с новыми свойствами, несущие разнообразные мутации.

Изучение видового состава и распространение мицелиальных грибов рода Trichoderma в Казахстан Макимова Гульшат Манатовна.

(Республиканская коллекция микроорганизмов Казахстан, Астана, gulshat_vir@mail.ru) Грибы рода Trichoderma имеют большое хозяйственное значение в связи с широким использованием многих видов для получения ферментов, биологически активных веществ и препаратов для защиты растений.

Видовой состав и распространение рода Trichoderma в Казахстане изучены не полно, используется устаревшая систематика рода, что не позволяет делать какие-то выводы и соотносить с данными зарубежных исследователей. Нечеткая морфология этого рода и вариабильность признаков затрудняет определение видов Trichoderma только по морфологическим критериям. В последнее время исследователи пишут о приуроченности видов Trichoderma к определенным субстратам. Так, например, T.viride чаще всего встречается на древесине, T.hamatum обычно выделяется из почвы, T.harzianum обитает преимущественно на плодовых телах грибов.

Целью настоящей работы было, используя молекулярно-генетические методы исследования, провести инвентаризацию видового состава грибов рода Trichoderma, распространённых в разных регионах Казахстана и установить их таксономическое положение.

Выделение грибов Trichoderma производилось при помощи метода предельных разведений и методом почвенного мелкозема. Идентификация по морфологическим признакам проводилась по ключу Александровой. Дополнительно виды идентифицировали молекулярно-генетическими методами по ITS— региону ДНК. Для проведения полимеразноцепной реакции с микромицетами использовали универсальные праймеры ITS1 — ITS4.

Процесс секвенирования ITS зоны и анализ полученных данных с использованием программного обеспечения SeqScanner, Vector NTI Advands 10 и базы данных GenBank, TrichOKEY позволил определить с вероятностью 98-100% видовую принадлежность штаммов Trichoderma, выделенных на территории Казахстана.

Анализ образцов почвы, подстилки, мертвой древесины из различных областей Казахстана привел к идентификации 78 штаммов грибов рода Trichoderma, относящихся к видам. Наиболее разнообразный видовой состав характерен для черноземных почв Алматинской области. Для Северо-Казахстанской области характерно доминирование T.harzianum. В Акмолинской области было выделено больше всего грибов рода Trichoderma.

Типы почв были представлены черноземами, луговыми целинными, темно-каштановыми, болотными. Меньше было выделено грибов рода на территории Южно-Казахстанской и Жамбылской областях, представленной образцами сероземных почв. Не было высеяно ни одного вида из серо-бурых почв Атырауской области.

Обильнее и разнообразнее всего грибы рода Trichoderma представлены в почве, где обнаружены все 8 видов. На древесине и коре мертвых деревьев было обнаружено 2 вида — T.harzianum и T.asperellum (5,2%). Грибы Trichoderma обитают преимущественно в лесных почвах. Из лесной почвы было выделено 58,8 % всего материала, в то время как из степной - 16,5%; 18,5% образцов выделили из агроценозов.

На территории Казахстана встречаются 8 видов микромицетов рода Trichoderma с доминированием вида T.harzianum (54 штамма). На втором месте по распространенности стоит T.atroviride (19 штаммов). Виды T.brevicompactum, T.hamatum, T.citrinoviride, T.virens, T.atroviride, T.harzianum на территории Казахстана регистрируются впервые.

Генотипическое разнообразие вида Physarum notabile T. Macbr. (Myxomycetes) в аридных районах Евразии Окунь Михаил Вадимович (Ботанический институт им. В.Л. Комарова РАН, Россия, Санкт-Петербург, m.okun@hotmail.com) Согласно литературным данным, вид Physarum notabile представляет собой «таксономический центр», объединяющий различные морфотипы, значительно отличающиеся друг от друга по форме, окраске и структуре элементов плодовых тел (спорокарпов), а также окраске и орнаментации спор. Ранее, в различных аридных районах Прикаспийской низменности, Центральной Азии, Центральной Америки с помощью метода влажной камеры нами были найдены спорокарпы миксомицетов, морфологически отдаленно напоминающие плодовые тела Physarum notabile из лесных сообществ бореальной и умеренной зон. Классический морфологический анализ не дает ясной картины положения данного таксона в системе, так как в нем могут быть использованы только признаки спорокарпов, а признаки трофических стадий (плазмодия, миксамеб) не учитываются. Кроме того, этот анализ затрудняет значительная морфологическая изменчивость изолятов. В связи с этим, нами был использован молекулярно-генетический подход для выявления филогенетических связей между изолятами.

Для проведения филогенетического анализа на основе молекулярных признаков необходимо было оценить степень генетической однородности образцов в исследуемой группе. Последовательности рДНК сравнительно изменчивы; эта область ДНК наилучшим образом подходит для изучения внутривидовой изменчивости, идентификации видов и выявления филогенетических связей внутри вида.

Нами было проанализировано 76 образцов из вышеописанных регионов. Полученные при анализе секвенированных последовательностей дендрограммы свидетельствуют о наличии корреляции между географическими расстояниями и генетическими характеристиками исследуемых изолятов. Изоляты, относящиеся к одному и тому же региону, формируют отдельные кластеры. Полученные данные подтверждают эффективность молекулярно-генетического метода анализа в систематике и филогении миксомицетов на родовом и видовом уровне, а также возможность использования метода для сравнительного филогенетического анализа как географически близких, так и удаленных изолятов.

Мы предполагаем, что упомянутые формы из аридных районов являются либо одним морфологическим видом, включающим несколько асексуальных клонов, либо группой близкородственных видов, предварительно условно отнесенных к P. notabile. Дальнейшее изучение изолятов из других регионов, а также сравнительный анализ их экологического и морфологического разнообразия помогут выявить корреляции между географическим положением изолятов и морфо-генетическими характеристиками., а также оценить влияние географического расстояния и экологических факторов на дивергенцию популяций этого вида на обширных пространствах Центральной Азии.

Ингибиторы протеолитических ферментов, секретируемые энтомопатогенным грибом Tolypocladium cylindrosporum W. Gams Попова Варвара Вячеславовна (Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, Россия, Москва, varya.chizhik@gmail.com) Протеолитические ферменты, секретируемые грибами, широко используются в фундаментальных исследованиях, медицине и народном хозяйстве. Однако механизмы регуляции работы грибных пептидаз остаются не достаточно изученными. Одним из способов контроля работы протеолитических ферментов является использование их природных и синтетических ингибиторов.

Целью представленной работы стали поиск и изучение ингибиторов пептидаз у энтомопатогенного гриба T.cylindrosporum W. Gams.

В ходе работы показано наличие в культуральной жидкости гриба T.cylindrosporum ингибиторов цистеиновых (бромелаин, папаин) и сериновых (трипсин, субтилизин) пептидаз. Гриб выращивали на среде Чапека, модифицированной добавлением различных источников азота (KNO3, NH4NO3, желатина, триптон) и углерода (сахароза, фруктоза), в течение 10 суток. Показано, что на среде Чапека, модифицированной добавлением триптона и сахарозы, секреция фермента и ингибиторов грибом T.cylindrosporum оптимальна. При этом пик ферментативной активности приходится на сутки культивирования. Бромелаин, папаин и трипсин максимально ингибировались препаратами 3-дневной культуральной жидкости, а субтилизин – 5-дневной.

Проведенные исследования показали, что T.cylindrosporum секретирует белок (кДа), ингибирующий субтилизин. В частности, ингибитор действует на бактериальный субтилизин и на субтилизиноподобный фермент, секретируемый грибом Sesquicillium microsporum (Jaap) Veenb.-Rijks & W. Gams. Однако ингибитор не подавляет активности субтилизиноподобных ферментов близкородственных видов T.inflatum W. Gams и T.geodes W. Gams. В ходе работы изучены некоторые физико-химические свойства ингибитора субтилизина. Вместе с тем, биохимическими методами установлено, что обнаруженные в культуральной жидкости ингибиторы бромелаина, папаина и трипсина имеют, по-видимому, небелковую природу.

Наличие исследуемых ингибиторов пептидаз у T.cylindrosporum предположительно связано с охраной необходимых ему пищевых ресурсов, или инактивацией защитных барьеров насекомого-хозяина.

Работа поддержана грантом РФФИ (10-04-00739) Сообщества галотолерантных микромицетов из мест природного засоления Смолянюк Евгения Владимировна (Московский Государственный Университет имени М.В. Ломоносова, Биологический факультет, Россия, Москва, esmol@yandex.ru) Местообитания с высокими и чрезвычайно высокими концентрациями хлорида натрия, представлены в природе гиперсолеными водоемами, засоленными аридными почвами (солончаками, солонцами и др.), местами природной добычи соли. Высокие концентрации солей в окружающей среде обусловливают стресс, связанный с низкой доступностью воды.

В задачи данного исследования входило выделение сообщества галотолерантных видов грибов, из мест природного засоления. Образцы были отобраны в г. Поморие (Черноморское побережье Болгарии), в г. Эйн Бокек (побережье Мертвого моря, Израиль) и на побережье озера Баскунчак (Астраханская область, Россия). Выделение микромицетов проводилось на селективных питательных средах с концентрациями 10 - 20% NaCl.

Из всех исследованных нами образцов засоленных почв на селективных средах наиболее часто выделяются виды родов Penicillium (P. rugulosum Thom, P. miczynskii K.M. Zalessky, P.

Pages:     | 1 |   ...   | 37 | 38 || 40 | 41 |   ...   | 83 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.