WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 23 | 24 || 26 | 27 |   ...   | 83 |

В коллекции A.thaliana кафедры генетики МГУ есть мутант erecta2 (er2), характеризующийся утолщенным прямостоячим (эректоидным) стеблем. Мутация характеризуется рецессивным моногенным характером наследования, однако детальные исследования ее фенотипического проявления ранее не проводились. Наши исследования показали, что помимо изменения структуры стебля, мутант характеризуется уменьшением площади листовой пластинки, что связано главным образом с уменьшением ее длины. Кроме того, у мутанта er2 снижено количество розеточных листьев, а также длина вегетативных и генеративных междоузлий по сравнению с диким типом. Электронно-микроскопический анализ морфологии эпидермальных клеток показал, что уменьшение размера листьев и междоузлий у мутанта er2 обусловлено изменением полярности клеток – клетки мутанта шире, но значительно короче, чем у дикого типа. Изменения полярности клеток характерно и для органов цветка мутанта er2. Это приводит к укорочению всех органов цветка. В результате этого бутоны мутанта всегда открыты.

В цветках мутанта иногда наблюдали образование пестиков из 3-4-х плодолистиков (у дикого типа пестик всегда имеет два плодолистика). Поскольку увеличение числа плодолистиков и утолщение стебля – характерные признаки мутантов clv1, clv2 и clv3, проведено изучение взаимодействия гена ER2 с генами CLV1, CLV2 и CLV3, контролирующими размер апикальной меристемы побега. Показано, что двойные мутанты er2 clv1, er2 clv2 и er2 clv3 сочетают признаки обоих родителей, т.е. взаимодействия генов не наблюдалось. В то же время, нами выявлено комплементарное взаимодействие гена ER2 с геном LE, контролирующим синтез брассиностероидов. Растения двойного мутанта er2 le-имели полукарликовый фенотип, причем высота их стебля была существенно ниже, чем у обеих родительских форм. Эти результаты свидетельствуют о совместном участии генов в контроле полярности клеток.

Репрограммирование нейральных стволовых клеток крысы к плюрипотентному состоянию Стекленева Анастасия Евгеньевна (Новосибирский государственный университет, факультет Естественных наук, Россия, Новосибирск, miammeka@gmail.com) Лабораторная крыса (Rattus norvegicus) является одним из модельных объектов, на котором проводится широкий спектр фундаментальных и клинических исследований.

Технология получения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) крысы, основанная на введении в дифференцированные клетки определенных факторов для репрограммирования до состояния плюрипотентности, в комплексе с использованием крыс в качестве моделей патогенеза различных заболеваний человека, может создать перспективную базу по исследованию возможностей и безопасности применения заместительной клеточной терапии в лечении заболеваний.

В качестве исходной линии использовали нейральные клетки, полученные из мозга эмбриона самки крысы линии Wistar. Иммуноцитохимическим анализом было показано, что часть клеток в культуре экспрессирует маркеры нейральных стволовых клеток: NESTIN и PSA-NCAM. Методом ОТ-ПЦР была показана экспрессия генов Pax6 (эктодермальный маркер) и Sox2 (один из четырех генов, необходимых для репрограммирования).

Для проведения репрограммирования использовали управляемую доксициклином лентивирусную систему транскрипции генов Oct4, Sox2, Klf4 и c-Myc. Суть системы заключается в том, что клетки трансдуцировали двумя лентивирусами. Один из вирусов несет кассету из кДНК четырех генов, необходимых для репрограммирования, другой несет ген негативного тетрациклинового трансактиватора. В присутствие в среде доксициклина трансактиватор способен активировать транскрипцию кассеты генов. После трансдукции клетки культивировали в среде для поддержания ИПСК с использованием ингибиторов сигнальных путей. На седьмой день после добавления доксициклина в среду наблюдали появление колоний, напоминающих по морфологии колонии эмбриональных стволовых клеток.

Анализ репрограммированных клеток показал наличие маркеров плюрипотентности:

активность щелочной фосфатазы и экспрессию эндогенных Nanog и Rex1. При этом реактивация Х-хромосомы не происходила: анализ полученных клеток крысы показал наличие маркеров неактивного хроматина на Х-хромосоме. При дифференцировке ИПСК в эмбриоидных тельцах наблюдали экспрессию маркеров энто- и мезодермы: Gata6, Sox17, T (Brachyury), что говорит о дифференцировке в разные зародышевые листки и, следовательно, о прохождении этих клеток через стадию плюрипотентности.

Активность рибосомных генов и уровень хромосомных аберраций у детей, подвергающихся воздействию радона Тимофеева Анна Александровна (Учреждение Российской академии наук Институт экологии человека СО РАН, Кемеровский государственный университет, Биологический факультет, Кемерово, Россия, coldunica@mail.ru) На сегодняшний день является актуальным изучение структурной целостности хромосом человека в условиях генотоксических воздействий. Процессы адаптации организма к влиянию неблагоприятных условий внешней среды во многом обусловлены индивидуальными генотипическими особенностями, в число которых входит и активность рибосомных генов.

Были изучены хромосомные аберрации (ХА) в 48-часовых культурах лимфоцитов периферической крови 149 детей шорской (50%), русской национальностей (23%) и метисов – потомков шорско-русских браков (27%), проживающих в школе-интернате г. Таштагол Кемеровской области, где были зарегистрированы сверхнормативно высокие значения уровня радона внутри помещений (479,71 Бк/м3). Активность рибосомных генов оценивали на препаратах хромосом, окрашенных нитратом серебра. Использовали полуколичественный способ оценки в баллах по методу, предложенному Н.А.Ляпуновой.

Уровень ХА в обследованной группе составил 4,38±0,16%, что выше регионального фонового уровня (2,86%). Межэтнические различия не зарегистрированы. Самые низкие значения дозы активных рибосомных генов были зафиксированы у детей русской национальности (18,52±0,07 баллов), самые высокие – у метисов (19,15±0,07 баллов), у шорцев – 18,88±0,05 балла. В группе метисов было зафиксировано уменьшение уровня ХА у детей с низкой дозой активных рибосомных генов (<18 баллов) по сравнению с детьми со средней дозой (18-20 баллов). У шорцев обнаружено статистически значимое уменьшение частоты встречаемости аберраций хромосомного типа и клеток с множественными ХА (0,81±0,17% и 0,00%) у обследованных с высокой дозой активных рибосомных генов (>баллов) по сравнению с обследуемыми со средней дозой (1,41±0,18% и 0,15±0,05% соответственно). В группе детей русской национальности модифицирующего влияния дозы активных рибосомных генов на уровень ХА выявлено не было.

Работа поддержана государственным контрактом ФЦП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2012 годы» № 16.512.11.2062; грантом РФФИ, 10-04-00497-а.

Генотипирование пород крупного рогатого скота и овец с помощью ISSR-PCR Феофилов Антон Владимирович (Российский Государственный Аграрный Университет имени К.А. Тимирязева, центр нанобиотехнологий, Россия, Москва, foton3@yandex.ru) Генотипирование животных имеет большое значение в связи с поиском новых генетических резервов, которые могут быть использованы в выведении новых пород сельскохозяйственных животных. Особое внимание при выборе метода генотипирования следует уделять надежности, стоимости и сложности выбранной системы маркеров.

Использование ISSR-PCR является одним из наиболее удобных с этой точки зрения. Нами были проанализированы представители некоторых пород крупного рогатого скота и овец с использованием двух ди- и двух тринуклеотидных фрагментов микросателлитов в качестве праймеров в ПЦР. Последовательность (GAG)6C давала 8 ампликонов, фрагменты длинами около 820, 540 и 320 п.н. наблюдались у всех исследованных особей, полиморфными оказались фрагменты длиной 750 п.н. (выявлен у всех якутских животных) и у 9 из 23 коров из Псковской обл.; фрагмент 650 п.н. (присутствовал у половины представителей чернопестрой породы, и у 22 из 23 коров красной эстонской породы). Фрагмент длиной 280 п.н.

был обнаружен только у якутских коров. По праймеру (GA)9C нами были выявлены ампликона длинами около 590, 510 и 260 п.н., причем полиморфизм в спектрах отсутствовал. У овец эдильбаевской породы этот же праймер давал продукт длиной в п.н., который может различать внутрипородные типы, праймер (AG)9C позволил выявить полиморфизм у внутрипородных типов (фрагмент длиной 780 п.н. встречался только у бирликского типа). По праймеру (GAG)6C полиморфизм выявлен только по трем локусам из восьми, однако ни по одному из них не наблюдается достоверных отличий по частоте встречаемости аллелей между внутрипородными типами. По праймеру (CTC)6C все выявленных нами локусов полиморфны, но ни по одному из них не наблюдается зависимость частоты встречаемости аллеля от внутрипородного типа, хотя проявление двух локусов зависит от пола животных. Таким образом, применение метода ISSR-PCR позволяет в ряде случаев различать по совокупности спектров маркеров виды, породы и внутрипородные типы животных. Спектры ампликонов также иногда указывают на фрагменты, специфичные конкретной группе животных (например, фрагмент длиной п.н. по праймеру (GAG)6C у якутских коров). Предварительный поиск в GenBank позволяет предположить, что ампликоны могут быть ассоциированы с генами 2 класса MHC и с белками, отвечающими за фолдинг хроматина.

Картирование сайтов инициации репликации в центре инактивации Х-хромосомы полевки Microtus rossiameridionalis Шерстюк Владимир Владимирович (Новосибирский государственный университет, факультет Естественных наук, Россия, Новосибирск, sv-411@inbox.ru) В данной работе проведено исследование процесса инициации репликации в центре инактивации X-хромосомы полевки Microtus rossiameridionalis. Данный локус имеет размер около 60 т. п. н. и содержит четыре гена: Enox, Xist, Tsix, Slc7a3, отличающихся по траснскрипционному статусу в разных типах клеток, представляющих различные стадии развития. Таким образом, данный локус преставляет интерес в изучении инициации репликации в онтогенезе и установлении связи между расположением ориджинов репликации, их эффективностью и экспрессией генов в данном локусе.

Для установления локализации ориджинов репликации был выбран метод анализа насыщенности новосинтезированными нитями ДНК. С использованием количественного ПЦР анализа была установлена локализация и проведено сравнение расположения и эффективности ориджинов репликации в клетках экстраэмбриональной энтодермы, фибробластах и трофобластных стволовых клетках полевки Microtus rossiameridionalis.

Показано наличие нескольких ориджинов репликации в исследуемом локусе и изменение их эффективности в зависимости от типов клеток.

ПОДСЕКЦИЯ «ГИДРОБИОЛОГИЯ И ОБЩАЯ ЭКОЛОГИЯ » УСТНЫЕ ДОКЛАДЫ Сообщества макрозообентоса небольших рек cеверных окраин Алтайской горной системы Батурина Наталья Сергеевна (Новосибирский государственный университет, Россия, Новосибирск, ns_baturina5@mail.ru) Фауна водных беспозвоночных животных горных водотоков Алтайского края и Республики Алтай исследована недостаточно. Гидробиологическое изучение водотоков Горного Алтая, испытывающих в настоящее время всё возрастающую антропогенную нагрузку, позволяет получить материалы по зоогеографии, структуре и динамике биоценозов горных рек с целью мониторинга их экологического состояния. Цель данной работы — выявить региональные особенности структурных и функциональных характеристик сообществ макрозообентоса малых рек северных окраин Алтайской горной системы.

Материал исследования — 74 пробы зообентоса (48 качественных и 26 количественных), собранных в рр. Ануй и Сема в течение первой половины июля 2010 г. Места отбора проб определялись их высотой над уровнем моря. При этом участки располагались сверху вниз в пределах 200-метровых высотных интервалов.

Вклад отдельных групп в количественное развитие макрозообентоса оценивали по биомассе и по интенсивности метаболизма.

В ходе исследования выявлено 72 вида макрозообентоса, из них в р. Сема обнаружено 66. Наиболее широко представлены отряды Ephemeroptera и Trichoptera, 27,2 % и 31,8 % от общего числа видов, соответственно. В верховьях реки наибольшие показатели биомассы и доли интенсивности метаболизма в сообществе характерны для представителей рода Cinygmula (отряд Ephemeroptera) 4,11±0,01 г/м2 и 14,70 %. По этим показателям в среднем течении реки и при переходе реки в её равнинную часть доминируют представители отряда Trichoptera: Dicosmoecus palatus, Ceratopsyche nevae и Brachycentrus subnubilis. Среди видов зообентоса р. Ануй отряды Ephemeroptera и Trichoptera представлены наибольшим количеством видов. В верховьях по биомассе и вкладу в интенсивность метаболизма доминируют представители рода Planaria: 5,21±0,01 г/м2 и 20,35 %, в среднем течении — род Cinygmula: 4,28±0,01 г/м2 и 20,64 %, а в равнинных участках— доминируют Trichoptera.

Изменения значения коэффициента Съёренсена–Чекановского, рассчитанного для соседствующих участков, сходны для обеих рек. Так, в верховьях рек значения (приведены данные для р. Сема) понижались от 0,44 до 0,41, в среднем течении они повышались от 0,до 0,47, а при переходе реки в её равнинную часть значения вновь понижались от 0,47 до 0,40, что, на наш взгляд, связано с изменением комплекса абиотических факторов: расхода воды, её электропроводимости и характера грунта.

Влияние низкоинтенсивного электромагнитного излучения на гидробионтов Воробьева Ольга Владимировна (Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова, Россия, Москва, olvorobieva@rambler.ru) В настоящее время низкочастотное электромагнитное излучение не только применяется в медицинской практике для лечения и профилактики широкого круга заболеваний, но и зачастую оказывается фоном существования организмов, в том числе и человека.

Повсеместное использование лазерных и диодных систем создает фон, влияние которого на биоту нуждается в оценке. С другой стороны, не до конца ясны те выгоды от применения таких источников в сельском хозяйстве и аквакультуре.

Исследования проводили на культуре рачков Daphnia magna. Рачков облучали светодиодом с красной матрицей (максимальная длина волны 650 нм, интенсивность излучения 0.91 мВт/см) один раз, в возрасте 24 часов, со временем экспозиции 1с и 60 с.

Наблюдения за исходной и дочерней генерациями продолжались до 21 суток. Исследовались такие характеристики, как смертность, плодовитость и размеры тела.

Pages:     | 1 |   ...   | 23 | 24 || 26 | 27 |   ...   | 83 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.