WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 22 | 23 || 25 | 26 |   ...   | 83 |

Дополнительная 21 хромосома приводит к блокированию гаметогенеза и, в конечном счете, ведет к бесплодию. Реже встречаются, но также ведут к бесплодию такие заболевания как синдром Шерешевского-Тернера 45, ХО у женщин (18%) и синдром Клайнтфельтера 47, ХХУ у мужчин (9%). Анеуплоидный набор хромосом блокирует мейоз половых клеток, что в свою очередь выражается как первичная аменорея у женщин и азооспермия у мужчин.

Выявлены кариотипы, содержащие хросмосомные транслокации (14%). Они влекут за собой анеуплоидии различной этиологии. Внутриутробная элиминации несбалансированных по хромосомному материалу гамет, зигот или эмбрионов приводит к спонтанному аборту или мертворождению.

Относительно редко встречается синдром трипло-Х (5%). Кариотип 47, ХХХ позволяет иметь нормальную плодовитость, однако анеуплоидия повышает риск спонтанных абортов.

В 4 % случаев выявлено носительство «маркерных» хромосом. Они не только являются причиной нарушений гаметогенеза и раннего эмбриогенеза, но и несут аномальную неидентифицируемую генетическую информацию.

С такой же частотой встречается синдром де ля Шапелля (4%). Наличие на одной из Ххромосом гена SRY определяет мужской фенотип. Отсутствие гена AZF (фактор мужской фертильности) определяет бесплодие.

Фенотипическое проявление генотипических проблем легко принять за нативную причину бесплодия. Поэтому для того, чтобы поставить правильный диагноз, подобрать адекватные методы лечения и возможные пути реабилитации, важно провести оценку кариотипа.

Неоцентромеры в структуре неробертсоновской субметацентрической пары хромосом Ellobius tancrei Матвеевский Сергей Николаевич (Учреждение Российской академии наук Институт общей генетики РАН, Россия, Москва, sergey8585@mail.ru) В последние годы растет интерес к исследованию загадочной проблемы формирования неоцентромер. Важно, что формирование неоцентромер не связано со специфическими последовательностями ДНК; формирование эволюционно новых центромер, как и неоцентромер человека происходит в горячих точках генома. В настоящей работе использован иммуноморфологический анализ синаптонемных комплексов (СК) с помощью антител против основного белка СК - SCP3 и антител против центромерных белков (АСА).

СК – скелетная белковая трехполосная структура формирующаяся в профазе I мейоза между гомологичными хромосомами.

Ранее нами проведено сравнительное исследование СК-кариотипов двух видовдвойников слепушонок E. talpinus (2n=54, NF=54) и E. tancrei (2n=54, NF=56). Установлено, что в процессе дивергенции этих видов появление неробертсоновского субметацентрика, присутствующего в кариотипах всех форм E. tancrei (с 2n от 54 до 32), обусловлено формированием эволюционно новой центромеры.

Нами впервые в структуре СК неробертсоновских субметацентриков у самок 34хромосомной природной кариоморфы, самцов и самок 49- и 50-хромосомных внутривидовых гибридов E. tancrei выявлено по 2-3 дополнительных центромерных сигнала.

Измерения позволили установить, что один из сигналов соответствует стандартному положению центромеры у данной пары хромосом (в диапазоне центромерных индексов от 0,34±0,01 до 0,36±0,02). Дополнительные центромерные сигналы были смещены либо в сторону либо короткого, либо длинного плеча.

Вероятно, появление дополнительных центромер связано с особенностями эволюции неробертсоновского субметацентрика. Известно, в структуре хромосом существуют особые районы – кластеры неоцентромер. К примеру, эти участки у приматов часто соответствуют анцестральным инактивированным центромерам, и в некоторых областях могут сохраняться особенности, которые были свойственны их предкам десятки миллионов лет назад, что может вызывать появление неоцентомер (Mehta et al., 2010).

Скорее всего, происхождение единственного неробертсоновского субметацентрика у разнохромосомных форм E. tancrei путем формирования эволюционно новой центромеры и образование неоцентромер в структуре СК у некоторых кариоморф и внутривидовых гибридов E. tancrei взаимосвязаны между собой и являются уникальными особенностями эволюции данной пары хромосом.

Полиморфизм сортов пшеницы по ретротранспозону Cassandra Нежигай Лилия Николаевна, Киселев Д.А.

(Национальний университет биоресурсов и природопользования Украины, Украина, Киев, loli-nezh@ukr.net) Целью работы было выяснение наличия и особенностей внутривидового полиморфизма Triticum aestivum L. по IRAP-маркеру ретротранспозона Cassandra.

Исходным материалом служили сорта озимой мягкой пшеницы украинской селекции:

Колумбия, Белоцерковская полукарликовая, Ятрань 60, Полесская 90, Мироновская 61, Подолянка и китайский сорт яровой мягкой пшеницы Sumai 3, высокоустойчивый к поражению фузариозом колоса. ДНК выделяли из проростков с применением ЦТАБ. Для IRAP-PCR использовали праймеры к консервативным участкам LTR ретротранспозона Cassandra.

Всего было получено 17 амплифицированных фрагментов, 4 из которых присутствовали во всех исследуемых вариантах. Общий уровень межсортового полиморфизма составил 76,47%. По полученным данным рассчитывали меру генетического родства и генетические дистанции по Nei. Для исследуемых сортов показатель генетическоого расстояния находился в пределах 0,0606 - 1,0415, что свидетельствует о значительной генетической гетерогенности в пределах вида Triticum.

На основе величин генетических дистанций выявлено два основных кластера. В первый вошли сорта Мироновская 61, Ятрань 60, Подолянка и Sumai 3. Во второй - Полесская 90, Белоцерковская полукарликовая, Колумбия. В данном случае не отмечено выразительной кластеризации сортов по признаку устойчивости к фузариозу колоса. К каждому из кластеров вошли устойчивые (Sumai 3 – в первый, Колумбия – во второй), а также средне- и неустойчивые сорта (Белоцерковская полукарликовая и остальные). Это может быть обьяснено тем, что при IRAP-PCR анализируется аллельное состояние локусов в пределах всего генома, а не аллельное состояние отдельного гена или кластера генов. Сорт яровой мягкой пшеницы китайского происхождения Sumai 3, по исследуемому маркеру оказался генетически близким к озимым сортам украинской селекции.

Авторы выражают благодарность за научное руководство и обсуждение результатов зав. кафедры молекулярной генетики и биобезопасности проф. д.б.н. Чеченевой Т.Н. и проф.

д. с-х. н. Крючковой Л.А.

CENTB5 как возможный ген, ассоциированный с криптогенной и симптоматической эпилепсией Пицик Екатерина Васильевна (НИИ Экспериментальной Медицины СЗО РАМН, Россия, Санкт-Петербург) В настоящее время ген центаурина 5 (CENTB5) мало изучен. В одном из интронов CENTB5 находится минисателлитный тандемный повтор UPS29. Ранее нами была обнаружена ассоциация коротких аллелей UPS29 с криптогенной и симптоматической эпилепсией у женщин и высказано предположение о возможном участии гена CENTB5 в патогенезе эпилепсий. Известно, что многие мультифакториальные заболевания связаны с изменением количества копий гена. Поэтому был проведен анализ количества копий гена CENTB5 у здоровых людей (N=25) и пациентов с эпилепсией (N=25). Количество копий CENTB5 определяли методом ПЦР в режиме реального времени на ДНК, выделенной из лейкоцитов периферической крови. Для установления числа копий использовали стандартные калибровочные кривые, в качестве интеркалирующего красителя был выбран SYBR Green I («QIAGEN»). В исследованных группах контроля и пациентов с эпилепсией различий по количеству копий CENTB5 не выявлено (обнаружено 2 копии гена на диплоидный геном).

Было проверено предположение об участии UPS29 в патогенезе исследуемых форм эпилепсий. Известно, что минисателлитные ДНК могут модулировать экспрессию генов.

Анализ in silico показал, что UPS29 содержит большое количество потенциальных сайтов связывания как для активаторов, так и репрессоров транскрипции и, вероятно, UPS29 может модулировать активность CENTB5. Оценка уровня экспрессии гена CENTB5 была проведена с помощью метода ПЦР в режиме реального времени. Уровень экспрессии определяли относительно референсных генов ACTB, B2M и GAPDH. В исследованных группах не было выявлено зависимости между уровнем экспрессии CENTB5 и длиной аллелей UPS29.

Уровень экспрессии CENTB5 составлял в среднем 65% от уровня экспрессии референсных генов.

Таким образом, исследованные случаи криптогенной и симптоматической эпилепсии не были вызваны делециями и/или дупликациями гена CENTB5, а скорее всего обусловлены негативным влиянием коротких аллелей минисателлита UPS29. Следует отметить, что отсутствие различий в уровне экспрессии CENTB5 между здоровыми людьми и пациентами с эпилепсией было обнаружено в лейкоцитах. Не исключено, что предполагаемые различия в уровне экспрессии CENTB5 могут иметь место в тканях нервной системы. В пользу этого предположения свидетельствуют полученные нами в модельных экспериментах данные об энхансерных свойствах UPS29 в клетках нейронального происхождения. Поэтому роль UPS29 в патогенезе различных форм эпилепсий требует дальнейшего исследования.

MALDI ToF масс-спектрометрия для сполиготипирования M. tuberculosis.

Рукин Илья Владимирович (Российский государственный аграрный университет имени К.А. Тимирязева, Зооинженерный факультет, Россия, Москва, Ruki.N.ilyA@gmail.com) Конец XX века и начало XXI характеризовались ростом заболеваемости туберкулезом во многих странах мира, независимо от их экономического статуса и социального уровня жизни. Одной из основных задач современной эпидемиологии туберкулеза является изучение вопросов и закономерностей развития эпидемии, поиск причин и факторов, способствующих распространению штаммов M. tuberculosis, обладающих определенными свойствами, в человеческой популяции. Метод сполиготипирования (от англ. Spoligotyping), являющийся одним из наиболее распространённых методов типирования патогена, основан на определении полиморфизма участка хромосомной ДНК Mycobacterium tuberculosis, называемого DR регионом («DR» - англ. direct repeat). DR регион содержит ряд прямых повторов, разделённых уникальными спейсерными участками.

Целью исследования являлась модернизация существующей классической методики сполиготипирования путем применения реакции удлинения праймера с последующей детекцией продуктов реакции с помощью MALDI-ToF MS(Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time Of Flight Mass-Spectrometry, времяпролётная масс-спектрометрия с матричной лазерной десорбционной ионизацией) для идентификации сполиготипа.

316 образцов ДНК M. tuberculosis было выбрано из коллекции ЦНИИ Туберкулёза РАМН. Амплификация интересующего региона проводилась по стандартному протоколу.

Для определения структуры DR региона использовался метод удлинения праймера с последующим MALDI ToF масс-спектрометрическим анализом.

На основании последовательности информативного участка DR региона было подобрано 43 спейсер-специфических праймеров, объединённых в 8 мультипраймерных систем для определения сполиготипа. Согласно международной базе данных SpolDB4 (The Fourth International Spoligotyping Database) 70% изучаемых штаммов относились к Beijing семейству. На долю LAM9, T1 и Haarlem3 пришлось 3%, 2,3% и 2% образцов, соответственно. Всего было выявлено 15 семейств, но встречаемость каждого из них была менее 1%. Результаты проведённого исследования, полученные с помощью модифицированного метода, полностью совпали с результатами, полученными с помощью классического сполиготипирования этих образцов.

Подходы для выявления референтных генов кукурузы Zea mays Сафина Анита Фаридовна 1, В. Ю. Горшков2, Я. Ю. Топоркова2, Ю. В. Гоголев(1Казанский (Приволжский) федеральный университет, 2Казанский институт биохимии и биофизики КазНЦ РАН, Россия, Казань, anita-safina@mail.ru) Исследование особенностей экспрессии генов в последние годы занимает одно из ведущих мест в фундаментальных и прикладных областях биологии. На сегодняшний день наиболее точный способ определения экспрессии генов заключается в сравнительном количественном анализе транскриптов целевого гена и стабильно экспрессирующегося гена «домашнего хозяйства» (housekeeping gene). При этом уровень экспрессии последнего принимается за константную величину. Универсального референтного гена, который всегда бы проявлял один и тот же уровень экспрессии в различных условиях, при различных воздействиях и на разных стадиях онтогенеза не существует. Поэтому отправной точкой в любых исследованиях, касающихся изучения особенностей экспрессии генов, является грамотный подбор референтых генов, позволяющих адекватно интерпретировать экспериментальные данные.

Цель настоящей работы заключалась в разработке тестовой системы для выявления стабильно экспрессирующихся генов кукурузы (Zea mays L.). Для этого нами был проанализирован алгоритм расчета стабильности экспрессии генов GeNorm. Для работы с этим алгоритмом на основе литературных данных были выбраны «гены-кандидаты», которые у ряда видов растений охарактеризованы как наиболее стабильно экспрессирующиеся. В число этих кандидатов входили следующие гены: актина, тубулина, глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназы, фактора элонгации, белка контроля клеточного деления и убиквитина. С использованием всемирной базы данных нуклеотидных последовательностей (NCBI) были найдены гомологичные гены у кукурузы и выбраны наиболее оптимальные области для амплификации участков ДНК при помощи ПЦР. С помощью пакета программ vector NTI Advance9, были сконструированы праймеры, которые затем были нами экспериментально протестированы. На амплифицируемую область были скоcнтруированы флуоресцентные зонды TaqMan, необходимые для проведения количественного ПЦР-анализа в реальном времени. Данная система в дальнейшем позволит среди «генов-кандидатов» выявить наиболее стабильно экспрессирующиеся гены, что обеспечит высокую достоверность результатов по оценке особенностей экспрессии генов у исследуемого нами объекта.

Изучение мутанта er2 Arabidopsis thaliana (L.) Heynh. с изменением функционирования апикальной меристемы побега Солтабаева Айгерим Даулетбеккызы (Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова, Россия, Москва, arabidopsis2004@mail.ru) Изучение генетического контроля процессов морфогенеза растений – важнейший раздел генетики и биологии развития. В контроле развития растений участвует большое число взаимодействующих генов. Анализ мутантов модельных объектов генетики растений с изменениями морфологии побега и корня является наиболее эффективным путем выявления всех генов, контролирующих развитие растения. Наибольшее число генов, контролирующих морфогенез, выявлено у Arabidopsis thaliana (L.) Heynh. – модельного растения из рода крестоцветных.

Pages:     | 1 |   ...   | 22 | 23 || 25 | 26 |   ...   | 83 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.