WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 17 | 18 || 20 | 21 |   ...   | 83 |

Мы обнаружили, что взаимодействия репортерных генов на гомологичных хромосомах в эухроматине возможны на расстоянии порядка 30-50 т.п.о. Проанализировав экспрессию репортера в составе молекулярных конструкций различного типа, мы выяснили, что подобные взаимодействия возникают вследствие воздействия на mini-white эндогенных регуляторных элементов, энхансеров. Мы предполагаем, что транскоммуникация mini-white является следствием эффекта положения репортера в геноме и возникает при случайном воздействии DPE- (downstream core promoter element)-зависимых энхансеров на DPEсодержащий промотор mini-white. Близость к такому энхансеру и разреженная структура хроматина определяют степень активации mini-white. Полученные данные расширяют представления о значении межхромосомной коммуникации в регуляции экспрессии генов у дрозофилы, а также пополняют сведения о свойствах гена mini-white дрозофилы.

Серия модульных векторов для клонирования целевых генов и регуляторных элементов с целью обеспечения стабильной и эффективной экспрессии гетерологичных генов в растениях Вячеславова Алиса Олеговна1, Бердичевец И.Н1., Шимшилашвили Х.Р. 1, Савчин Д.В.2, Голденкова-Павлова И.В. (1Институт Общей Генетики им. Н.И. Вавилова РАН, Россия, Москва, 2ГНУ Институт генетики и цитологии НАН Беларуси, Беларусь, Минск, alisavo@gmail.com) Трансгенные растения широко используются как модели для фундаментальных исследований физиологической роли растительных генов и для решения прикладных задач по созданию устойчивых форм сельскохозяйственных культур и продукции рекомбинантных белков в растениях. Успех в этих направлениях, прежде всего, связан с эффективностью экспрессии перенесенного гена (трансгена) в растениях, которая обусловлена рядом факторов: кодоновым составом трансгена; регуляторными элементами, контролирующими его экспрессию; интеграцией трансгена в определенные участки генома растений, и др.

Важную роль в создании трансгенных растений играют экспрессионные вектора, используемые для трансформации растений. В связи с вышеизложенным, создание новых векторных систем для клонирования целевых генов и регуляторных элементов с целью обеспечения стабильной и эффективной экспрессии гетерологичных генов в растениях является актуальной задачей.

На основе анализа литературы и баз данных геномов растений сконструирована серия модульных векторов, в которых учтено большинство факторов, обеспечивающих стабильную и эффективную экспрессию гетерологичных генов в растениях, а именно:

окружение инициирующего ATG кодона целевого гена; последовательности, кодирующие стабилизирующие аминокислоты во втором положении после инициирующего кодона;

локализация и состав кодонов, терминирующих транскрипцию; оптимальный состав области полиаденилирования. Помимо этого, модульная структура сконструированных векторов позволяет легко проводить замену регуляторных элементов, контролирующих экспрессию гетерологичного гена в растениях, таких как промоторы, последовательности лидерных пептидов, последовательности 3’- и 5’-некодирующих областей, важных для эффективной экспрессии трансгена.

Сконструированные вектора были успешно апробированы с использованием транзиентной и стабильной экспрессии ряда гетерологичных генов и регуляторных элементов и предлагаются как для анализа новых регуляторных элементов, так и для обеспечения эффективной экспрессии трансгенов в растениях.

Работа выполнена при финансовой поддержке грантов РФФИ №09-04-01518_а и №1004-90909-моб_снг_ст.

Использование сайт-направленного мутагенеза стартовых кодонов гена speA для изучения альтернативной инициации трансляции Глазова Ольга Владимировна (Самарский государственный университет, Россия, Самара, plach_detka@inbox.ru) Ген speA супрессирует патогенность бактерий Erwinia carotovora. В пределах открытой рамки считывания гена находятся 6 кодонов АUG, потенциально претендующих на роль инициирующих. Перед тремя из них (start 2, start 4 и start 6) располагаются пурин-богатые участки, в различной степени обладающие гомологией с последовательностью ШайнаДальгарно (SD1, SD2 и SD3, соответственно). С целью проверки функциональной активности in vivo всех имеющихся SD создан ряд генетических конструкций, где использован ген зелёного флуоресцирующего белка, egfp, в качестве репортерного.

Продемонстрированы различия в функциональной активности трех исследуемых структур. Вестерн-блот анализ, проведенный с применением поликлональных антител к GFP, показал наличие ряда сигналов разной интенсивности, соответствующих белкам с различными молекулярными массами. Это свидетельствует об одновременном, но неравнозначном участии в инициации трансляции всех трех структур SD. Установлен также факт инициации трансляции со стартовой точки 1, не имеющей перед собой последовательности SD. По-видимому, для этого необходимо присутствие нуклеотидной последовательности, расположенной между стартовыми точками 1 и 2, т.к. постановка гена egfp непосредственно под стартовую точку 1 не приводила к его экспрессии.

Для подтверждения факта альтернативной инициации трансляции, на базе векторной плазмиды pET28b была создана конструкция, в которой ген speA был соединён с репортёрным геном зелёного флуоресцирующего белка. Продукт этого рекомбинантного гена представляет собой химерный белок, состоящий из двух доменов: N-концевого SpeA и C-концевого GFP. Проведен сайт-направленный мутагенез инициирующих кодонов start 2 и start 6 рекомбинантного гена speA-egfp. Получены три мутантные конструкции, в которых последовательно элиминированы инициирующие кодоны start 2, start 6 и оба кодона вместе.

Клетки E. coli, трансформированные этими конструкциями, сохранили способность к флуоресценции подобно контрольным клеткам, содержащим исходную плазмиду, что свидетельствовало об инициации трансляции с нескольких стартовых точек. Вестерн-блот анализ белков мутантных клонов, продемонстрировал изменение спектра сигналов по сравнению с контролем. У клона с мутацией инициирующего кодона start 6 наблюдалось исчезновение белка с молекулярной массой 50,4 kDa. Неожиданным оказалось то, что удаление стартового кодона start 2 не привело к ожидаемому исчезновению белка соответствующего молекулярного веса. То же самое касается и двойного мутанта, у которого зафиксировано исчезновение только одного сигнала. Этот факт требует дальнейшего детального изучения и проверки.

Генетические особенности «мещеры» Земетчинского района Пензенской области по данным о полиморфизме мтДНК Грошева Александра Николаевна (Институт общей генетики им Н. И. Вавилова РАН, лаборатория генетики человека Россия, Москва, k294_chew@mail.ru) Проведен популяционно-генетический анализ населения сел Кириллово, Вяземка и Большая Ижмора Земетчинского района Пензенской области. Интерес к этому населению вызван его самоназванием и определением со стороны окружающих как «мещера», что подкрепляется рядом культурных и лингвистических особенностей. Был поставлен вопрос:

связана ли Земетчинская «мещера» с этнонимом – одноименным древним поволжскофинским племенем, или же это самоназвание связано с топонимом – Мещёрской низменностью, а само население является русским.

Были сформулированы две гипотезы: если население сел русское, то его генетические характеристики будут типичны для русских Пензенской области. С другой стороны, если население связано с племенем мещера, то следует ожидать его сближения с поволжскими финнами и отдаление от славян. Для проверки гипотез был исследован полиморфизм мтДНК из образцов крови жителей трех указанных сел, а также русского сельского населения Нижнеломовского района Пензенской области. В работе использовались стандартные молекулярно-генетические (ПЦР-ПДРФ, секвенирование ГВСI мтДНК) и статистические (расчет генетических расстояний, построение филогенетических сетей, многомерное шкалирование) методы.

В результате исследования в популяциях Кириллово и Вяземки, в отличие от выборки Большой Ижморы и Нижнеломовского района, был выявлен «монголоидный» компонент, представленный восточноевразийскими гаплогруппами мтДНК, с частотами, близкими к таковым у поволжских и пермских финнов. Анализ генетических расстояний показал, что популяции Кириллово и Вяземки сближаются между собой и отдаляются от популяций Большой Ижморы и Нижнеломовского района. При этом выборки Кириллово и Вяземки сближаются с поволжским финнами и удаляются от славян, в то время как выборка Большой Ижморы, как и Нижнеломовского района, сближается со славянами и удаляется от поволжских финнов.

Таким образом, в результате анализа полученных результатов и соотнесения их с выдвинутыми гипотезами, можно предположить, что в формировании населения Кириллово и Вяземки участвовало финно-угорское племя мещера, в то время как население Большой Ижморы является типично русским.

Анализ экспрессии генов, контролирующих развитие соцветия и цветка у мутантов гречихи посевной (Fagopyrum esculentum Moench) с использованием ПЦР-РВ Демиденко Наталья Владленовна (Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова, Россия, Москва, demidenkonatalia@gmail.com) К настоящему времени достигнуты большие успехи в понимании генетического контроля развития цветка и соцветия у ряда объектов, таких как Arabidopsis thaliana (L.) Heynh. Однако процессы их формирования у других растений остаются малоизученными, что препятствует пониманию общих закономерностей развития и эволюции этих структур.

F. esculentum – однолетнее травянистое растение из семейства Polygonaceae, порядок Caryophyllales. В отличие от большинства двудольных цветок гречихи формирует простой околоцветник.

В работе была изучена экспрессия генов, ортологичных генам флорального морфогенеза A. thaliana у растений дикого типа F. esculentum (сорт Даша) и трех мутантов; в том числе двух с изменением типа органов околоцветника (листовидные у green corolla (gc) и карпелоидные у fagopyrum apetala (fap)), и мутанта tepal-like bract (tlb), который характеризуются развитием органов околоцветника на месте кроющих листьев цветков.

Анализ экспрессии проводили с использованием ПЦР-РВ. Праймеры для исследуемых и референсных генов подбирали на основе последовательности транскриптома по гомологии с генами A. thaliana. Тесты устойчивости экспрессии показали, что лучшими для использования в качестве референсных являются гены SAND, CACS и ортолог гена AT4G33380.

В результате проведенных исследований было показано, что у мутанта tlb повышена экспрессия генов, контролирующих переход к цветению. Вероятно, именно ускорение зацветания приводит к развитию у этого мутанта органов околоцветника на месте кроющих листьев – последних перед цветками вегетативных органов. У всех мутантов, несмотря на изменение типа органов околоцветника или изменение числа этих органов, не наблюдается существенных изменений в уровне экспрессии генов, отвечающих за развитие лепестков и тычинок (В-класс, согласно АВС модели генетического контроля определения типа органов цветка). Это свидетельствует в пользу предположения о неучастии этих генов в развитии околоцветника. При этом наблюдаемые изменения в уровне экспрессии генов, ортологичных генам SEPALLATA A. thaliana, позволяют предположить их участие в регуляции этого процесса.

Работа поддержана грантами РФФИ (09-04-01363), Миннауки РФ (ГК-П913, НШ3293.2010.4, ГК-16.512.11.2153), программой УМНИК (№13151).

Использование молекулярно-генетических методов в мониторинге процесса реинтродукции двух популяций овцебыков Ельсукова Ирина Александровна (Российский государственный аграрный университет – МСХА имени К.А. Тимирязева, Россия, Москва, irinaelsukova@gmail.com) В связи с завозом и успешной адаптацией овцебыков на территории Северной Азии возникла необходимость исследования генетической структуры образованных популяций с целью постоянного контроля их состояния. Проведение мониторинга позволит оценить успешность и целесообразность реинтродукции. Для исследования двух российских популяций Ovibos moschatus (о. Таймыр и о. Врангель), а также популяции о. Гренландия, был использован метод ISSR (inter sequence simple repeats) PCR. В качестве праймеров использовали ди- и тринуклеотидные инвертированные микросателлитные повторы (AG)9C, (GA)9C, (CTC)6C, (GAG)6C. Нами выявлены праймеры, отличающиеся коровым мотивом, применение которых наиболее информативно для решения поставленных задач. Каждый ампликон полученного спектра рассматривался нами как отдельный локус. Определены мономорфные (консервативные) и полиморфные локусы, выявлены локусы, специфические для каждой изученной популяции вида, определена частота встречаемости каждого полиморфного локуса. Мономорфными для всех изученных популяций локусами являются по праймеру (AG)9C участки ДНК, фланкированные инвертированными микросателлитными повторами, длиной 450 и 340 п.о., по праймеру (GAG)6C – 600 и 510 п.о., по праймеру (GA)9C – 570 и 500 п.о. Для животных таймырской популяции по спектру ампликонов, получаемому при использовании праймера (AG)9C, специфическим является встречаемость локусов длиной 1000 и 550 п.о., для гренландской – 220 п.о. По праймеру (GAG)6C только у овцебыков гренландской популяции полиморфно встречается участок длиной 850 п.о., что может являться маркером данной популяции. Для дифференциации овцебыков гренландской популяции в качестве маркера может применяться участок ДНК – 850 п.о., полученный при использовании праймера (GAG)6C. Полиморфизм по большему числу локусов характерен для гренландской популяции Ovibos moschatus. Наиболее гомогенной является популяция, обитающая на острове Врангеля, что подтверждается данными о завозе животных. Несмотря на то, что на данный момент численность популяции о. Врангель растет, ей следует уделять большее внимание, возможно, следует завести новых особей во избежание инбридинга.

Полиморфизм митохондриальной ДНК в популяциях яка Центрально-азиатского региона Жабагин Максат Кизатович (Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова, Россия, Москва, patriotkz88@mail.ru) На фоне экономического и продовольственного кризиса все большее значение придается изучению генетического разнообразия в области сельского хозяйства, в первую очередь тех пород, поголовье которых непрерывно сокращается. За последние 10 лет в Российской Федерации поголовья яка в Республике Алтай и Туве сократилось на 77% и 81% соответственно. В связи с этим необходимо изучить генетическое разнообразие в этих популяциях, поддержание которого является условием сохранения жизнеспособности популяций.

Pages:     | 1 |   ...   | 17 | 18 || 20 | 21 |   ...   | 83 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.