WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 16 | 17 || 19 | 20 |   ...   | 83 |

Таким образом, в данной работе был разработан новый «деконструированный» вирусный вектор, обеспечивающий высокий уровень накопления БО ВМальт в листьях Nicotiana benthamiana, достаточный для эффективного образования ВПЧ. В дальнейшем, полученный вирусный вектор может быть использован для получения ВПЧ, декорированных различными вакциногенными эпитопами, а также для накопления в растении целевых белков.

Роль микротрубочек в транспорте ТБГб1 вируса скручивания верхушек картофеля Шемякина Елена Андреевна (Московский Государственный Университет им. М.В. Ломоносова, Биологический факультет, Россия, Москва, myrmica@rambler.ru) Внутриклеточный и межклеточный транспорт вируса скручивания верхушек картофеля (ВСВК) осуществляется при участии транспортных белков ТБГ1, ТБГ2 и ТБГ3, кодируемых тремя частично перекрывающимися генами, составляющими так называемый тройной блок генов. Предполагается, что транспортной формой вирусного генома является рибонуклеопротеидный комплекс, состоящий из вирусной геномной РНК, связанной с белком ТБГ1. Белки ТБГ2 и ТБГ3 участвуют в доставке этого комплекса к межклеточным каналам - плазмодесмам.

В данной работе анализировались локализация и внутриклеточный транспорт белка ТБГ1 ВСВК в присутствии белков ТБГ2 и ТБГ3 в живых клетках Nicotiana benthamiana. Для этого был сконструирован плазмидный вектор, содержащий две экспрессионные кассеты.

Первая из них несла ген белка ТБГ1, слитый с зеленым флуоресцирующим белком (green fluorescent protein, GFP) под контролем сильного конститутивного 35S-промотора, тогда как вторая – перекрывающиеся гены, кодирующие белки ТБГ2 и ТБГ3, под контролем промотера нопалин-синтазы, существенно более слабого в сравнении с 35S-промотером.

Такая конструкция позволяет (1) гарантировать экспрессию белков GFP-ТБГ1 и ТБГ2/ТБГв одной клетке и (2) экспрессировать транспортные белки в соотношении, близком к природному. Векторная конструкция доставлялась в растения с помощью инфильтрации листьев суспензией клеток Agrobacterium tumefaciens. Локализацию белков детектировали с помощью конфокального лазерного сканирующего микроскопа.

Было показано, что на второй день после инфильтрации GFP-ТБГ1 локализовался в ядре и был ассоциирован с микротрубочками. На третий день GFP-ТБГ1 также обнаруживался в ассоциации с микротрубочками и образовывал гранулярные тельца, располагающиеся на микротрубочках, а также локализовался в отдельных точечных структурах в клеточной стенке. На четвертый день GFP-ТБГ1 наблюдался в основном в точечных структурах, расположенных в клеточной стенке, и в околоядерных включениях, напоминающих агресомы – предполагаемые места непротеосомной деградации белков. Было выявлено, что на четвертый день после инфильтрации GFP-ТБГ1 колокализовался с каллозой, характерной для участков клеточной стенки, обогащенных плазмодесмами, и, кроме того, оставался в клеточной стенке после плазмолиза, что указывает на направленный транспорт GFP-ТБГ1 в плазмодесмы в присутствии белков ТБГ2/ТБГ3.

Проведен анализ ряда мутантов белка ТБГ1, показывающий, что взаимодействие с микротрубочками играет важную роль в доставке белка к клеточной стенке. Разрушение микротрубочек с помощью колхицина также подтверждает, что они являются необходимыми для внутриклеточного транспорта белка ТБГ1 и для образования околоядерных включений (агресом).

Предполагается, что взаимодействие белка ТБГ1 ВСВК с микротрубочками необходимо для формирования транспортного рибонуклеопротеидного комплекса, а также может быть важно для направления избыточного белка к местам его деградации.

Частичное секвенирование и филогенетический анализ вируса мозаики сои, выделенного в Подольском регионе Украины Шерепитко Дмитрий Валентинович.

(Киевский национальный университет имени Тараса Шевченко, Украина, Киев, supervirusok@gmail.com) Вирус мозаики сои (ВМС) является возбудителем одной из основных и наиболее вредоносных вирусных болезней сои (Glycine max L. Merr.), встречающейся в большинстве мировых регионов возделывания этой культуры. Данный вирус вызывает значительные потери урожая (10-90%) и ухудшение качества зерна. Исследователи ряда стран сообщают о появлении новых изолятов ВМС, способных преодолевать действие известных генов вирусоустойчивости сои. Несмотря на интенсивное изучение штаммового разнообразия ВМС во всем мире, на Украине, где площади выращивания сои в последние годы стремительно возрастают, такие исследования не проводились.

В 2008-2009 гг. было проведено обследование селекционно-опытных участков в Винницкой области, в результате чего у 30 из 45 сортов сои отечественной и зарубежной селекции выявлены симптомы ВМС, который был идентифицирован методом DAS-ELISA. Дальнейшие исследования биологических и молекулярно-генетических свойств выделенного нами ВМС с использованием методов биотипирования, ПЦР-анализа и секвенирования проводились с целью сравнения украинского изолята с уже известными зарубежными изолятами данного вируса и получения информации о его происхождении.

Используя информацию из Генбанка (GenBank®, NCBI) о нуклеотидных последовательностях известных штаммов ВМС были подобраны праймеры к участкам консервативного гена капсидного белка (СР) и более вариабельного гена сериновой протеазы (Р1). Полученные в результате ОТ-ПЦР ампликоны размером 469 п.н. и 934 п.н.

для СР и Р1 соответственно, были в последующем просеквенированы. Филогенетический анализ первичных последовательностей генов Р1 и СР украинского и 18 зарубежных изолятов ВМС выявил высокую степень гомологии (Р1-99,3%; СР-100%) с американским изолятом VA2 (Вирджиния), который входит в одну группу с штаммами G2 и G4, при этом мы не обнаружили четкой генетической дифференциации между азиатскими и североамериканскими популяциями данного вируса.

Таким образом, учитывая реакцию маркерных сортов сои на инфицирование изучаемым изолятом ВМС и результаты филогенетического анализа, можно сделать предположение о занесении в Украину G2 штамма ВМС, который является самым распространенным на территории США. Впервые в Украине выявили и идентифицировали ВМС с использованием молекулярных методов.

ПОДСЕКЦИЯ «ГЕНЕТИКА» УСТНЫЕ ДОКЛАДЫ Оценка уровня гетерозиготности пород лошадей по анонимной последовательности ДНК Бардуков Николай Владимирович, Эркенов Т. А.

(РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева, Россия, Москва, bardukv-nikolajj@mail.ru) Применение молекулярно-генетических методов (МГМ) в животноводстве обусловлено необходимостью получения достоверных данных в селекционной работе, сбора полной информации о каждом животном, подтверждения родословной животного с целью исключения ошибок селекционера. Также МГМ с успехом применяются в популяционногенетических исследованиях. Обширное применение этих методов в животноводстве позволит повысить эффективность селекции и, следовательно, должно привести к ускорению развития отрасли.

В своих исследованиях мы использовали один из наиболее простых, дешёвых и информативных молекулярно-генетических методов – использование полимеразной цепной реакции (Polymerase Cycle Reaction – PCR) с применением ISSR-PCR (Inter-Simple Sequence Repeat) маркёров, представляющими собой участки микросаттелитных локусов с якорным нуклеотидом. Исследованы 164 лошади, из которых: 96 алтайской породы из разных хозяйств, 20 карачаевской породы и 48 лошадей рысистых пород.

По четырём ISSR-PCR маркёрам произведена оценка полиморфизма по локусам спектра амплификации. По всем группам животных найдены значения индекса PIC (Polymorphic Information Content), показывающего частоту встречаемости гетерозигот. Найдены усреднённые по четырём маркёрам значения индекса. По методу Нея (1972) найдены значения генетических дистанций между исследованными породами и внутри самих пород.

Построена дендрограмма генетических взаимоотношений между группами исследованных животных. Породы образовали кластеры в полном соответствии с историей происхождения.

На основании полученных данных сделаны предположения о породоспецифичных особенностях распределения ампликонов в спектре амплификации. Выявлена дифференциация местных, заводских и переходных пород лошадей по частоте гетерозигот в анонимных участках ДНК. Так, наиболее гетерозиготными оказались лошади алтайской породы, которые не испытывают жёсткого инбридинга и целенаправленной селекции.

Следовательно, данные об уровне гетерозиготности внутри породы по локусам анонимной последовательности ДНК могут учитываться в спорных вопросах классификации пород на местные, переходные и заводские.

Сравнительный анализ последовательностей ДНК промоторных областей, экзонов и интронов гена Dras1 у видов Drosophila группы virilis Барсуков Максим Ильич, Прошаков П. А.

(Московский педагогический государственный университет, Россия, Москва, barsS7@yandex.ru) Семейство генов ras1 кодирует группу GTP-связывающих белков, играющих важную роль в передаче сигналов в составе Ras-зависимых сигнальных каскадов. Белки Rasфункционируют в течение всего развития практически всех эукариот. Высокий консерватизм последовательности Dras1 предполагает накопление исключительно нейтральной изменчивости в последовательности гена. Проведенный в ряде работ анализ последовательности генов Adh1, Gpdh и других, участвующих в формировании пищевых адаптаций и подверженных направленному отбору, показал противоречивые картины филогенеза, отличающиеся от полученных по данным инверсионного полиморфизма, в группе видов D. virilis. По-видимому, направленный и сопутствующий отбор по используемой последовательности могут смещать оценки родства между видами.

Мы провели сравнительный анализ последовательностей ДНК гена ras1 группы близкородственных видов Drosophila: D.virilis, D.lummei, D.littoralis, D.kanekoi, D.ezoana).

Нуклеотидную последовательность продуктов полимеразной цепной реакции (ПЦР) определяли методом циклического секвенирования. Среднее количество секвенированных нуклеотидных пар различных участков гена Dras1 у данных видов: промоторный район – 120; 5’UTR(a) – 269; интрон 1 (расположенный в 5’- UTR) – 377; 5’UTR(b) – 157; экзон 1 – 138; интрон 2 – 80; экзон 2 – 258; интрон 3 – 67; экзон 3 – 171; всего – 1637. На основании выявленных нуклеотидных замен были построены дендрограммы генетических расстояний между исследованными видами.

Показано, что высокая консервативность гена позволяет предположить наибольшую близость D.virilis к предковому виду и выделить его в качестве самостоятельной субфилады.

Приведены статистические данные в пользу нейтральности рассматриваемых замен в гене Dras1. Такой характер эволюции гена Dras1 позволяет надежно реконструировать филогенетические отношения близкородственных видов. Итоговое древо для основных филад выглядит следующим образом: [D.virilis (D.lummei), montana (D.kanekoi, D.littoralis, D.ezoana)]. Полученная картина взаимоотношения видов соответствует предполагаемой ранее на основании анализа морфологических и цитогенетических признаков, а также последовательностей высококонсервативного 3’ района гена 16S рРНК.

Работа поддержана РФФИ (проект № 08-04-00959).

Роль полиморфных маркеров генов факторов воспаления в формировании наследственной предрасположенности к эссенциальной гипертензии Белоногова Валерия Александровна, Насибуллин Т.Р.

(Институт биохимии и генетики УНЦ РАН, лаборатория физиологической генетики, Россия, Уфа, valery259@mail.ru) Эссенциальная гипертензия (ЭГ) - один из основных факторов риска сердечнососудистых заболеваний, которые являются причиной более половины всех случаев смерти в России, что определяет актуальность научных изысканий, направленных на активный поиск и разработку эффективных первичных и вторичных мер профилактики ЭГ.

Цель настоящего исследования состояла в оценке роли полиморфных маркеров rs3091305 (-3328A>C, ген CXC3R, Xq13.1), rs2076059 (3832T>C, ген SELE 1q24.2) и rs(N331S, ген SELP 1q24.2) в формировании наследственной предрасположенности к ЭГ.

В исследование были включены 234 человек с ЭГ и 187 человек без признаков сердечнососудистых заболеваний. Все участники исследования были мужского пола в возрасте от до 55 лет из этнической группы татар. Генотипирование проводилось с помощью полимеразной цепной реакции с последующим рестрикционным анализом. Для статистического анализа полученных результатов использовался пакет программ SPSS v. 18, оценка ген-генных взаимодействий проводилась с помощью программы MDR 2.0.

Анализ ассоциаций исследованных полиморфных маркеров выявил существенные различия в распределении частот генотипов гена SELP: в группе больных в отличие от контрольной группы существенно повышена частота генотипа N/S (37.18% и 28.9% соответственно Р=0.025). Изучение ген-генных взаимодействий установил выраженный синергизм генов SELE и CXC3R. Проведён многофакторный логистический регрессионный анализ, где в качестве предикторов выступал полиморфный маркер гена SELP и сочетание полиморфных маркеров генов CXC3R и SELE. Согласно полученным результатам факторами повышенного риска ЭГ являются генотип N/S гена SELP (OR=1.89, P=0.035) и сочетание генотипов С/T (SELE) и C/C (CXC3R) (OR=1.68, P=0.05).

Таким образом, изученные нами полиморфные маркеры вносят существенный вклад в формирование наследственной предрасположенности к ЭГ.

Взаимодействия между гомологичными хромосомами индуцируют неаддитивную экспрессию репортерного гена mini-white у D. melanogaster Былино Олег Валерьевич (ФГУ «НИИ Вирусологии им. Д.И. Ивановского» минздравсоцразвития России, Москва, bylino@gmail.com) Пространственная организация хромосом внутри интерфазного ядра и их взаимодействия рассматриваются в настоящее время как один из важных механизмов регуляции экспрессии генов. Межхромосомная коммуникация впервые была обнаружена у дрозофилы и позднее у многих других организмов, в том числе и у человека. Вместе с тем роль межхромосомной коммуникации в регуляции активности генов изучена недостаточно. В качестве модели использовался репортерный трансген mini-white, экспрессию которого исследовали в различном хроматиновом окружении и геномном положении. Мы показали, что соматическая конъюгация интерфазных хромосом у дрозофилы способна оказывать положительный эффект на экспрессию в эухроматине и индуцировать ее в гетерохроматине.

Pages:     | 1 |   ...   | 16 | 17 || 19 | 20 |   ...   | 83 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.