WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 15 | 16 || 18 | 19 |   ...   | 83 |

При созревании плода часто развиваются одна или две карпелли. План строения перикарпия сходен с описанным выше, общее число слоев клеток составляет от 19 до 21, два самых наружных слоя мезокарпия представлены гиподермой, а внутренняя зона мезокарпия представлена 4-5 слоями склереид. Плоды Allophylus развиваются из тримерного гинецея, фертильной оказывается только одна карпелль, она имеет округлую форму, стерильные карпелли остаются в основании плода. Перикарпий подразделен на сочную мякоть и косточку. Количество слоев перикарпия варьирует от 27 до 42. Сочную часть мезокарпия образуют экзокарпий и наружные слои мезокарпия из паренхимных клеток. Косточка образована склереидами внутренней зоны мезокарпия (3-5 слоев) и многослойным эндокарпием (5-6 слоев у A. cobbe и 10-13 у A. camtostachys). Наши исследования показали, что плоды представителей Thouinieae обладают большим морфологическим разнообразием, однако, анатомия перикарпия имеет сходный план строения. Плоды, встречающиеся в данной трибе, следует относить к верхним синкарпным тримерным пиренариям Butia-типа.

О структуре плода Ostryopsis davidiana Dec. (Betulaceae s.l.) Яценко Ольга Владимировна (Главный ботанический сад им. Н.В.Цицина РАН, Россия, Москва, olga.yatsenko.msu@gmail.com) Семейство Betulaceae распространено в умеренных и бореальных широтах Северного полушария, некоторые виды достигают Южного полушария. Плоды Betulaceae обычно односеменные, барохорные или анемохорные, могут иметь обертку, развивающуюся из 2-брактей. Анатомическое строение плодов березовых изучено слабо – в литературе встречаются данные по анатомии перикарпия некоторых видов Corylus, Betula, Alnus (Корчагина, 1991) и Ostrya (Яценко и др., 2009). Плоды Ostryopsis davidiana заключены в трубчатую, опушенную обертку с оттянутой верхушкой. Сами плоды уплощены, имеют овальные очертания на поперечном срезе с 8-10 слабо выраженными продольными ребрами.

Стенка плода дифференцирована на эпикарпий и перикарпий. Эпикарпий состоит из трех зон. Наружная зона представлена однослойной эпидермой из клеток с неутолщенными и неодревеневающими клеточными стенками. Однослойная гиподерма сформирована клетками с утолщенными неодревесневающими клеточными стенками. Внутренняя паренхимная зона представлена 6-7 слоями клеток. Клетки обеих внутренних зон содержат флобафены. Перикарпий состоит из мезокарпия, дифференцированного на периферическую и внутреннюю зоны, и эндокарпия. Наружная зона мезокарпия представлена 2-3 слоями паренхимных клеток, а внутренняя - 10-12 слоями клеток с утолщенными и одревесневающими клеточными стенками. 3-4 слоя клеток эндокарпия паренхимные, большей частью сжаты или отсутствуют в зрелом плоде. Таким образом, перикарпий O.

davidiana характеризуется массивной каменистой внутренней зоной мезокарпия и паренхиматированными не склеренхиматизированными эпикарпием, наружной зоной мезокарпия и эндокарпием. Анатомическое строение перикарпия O. davidiana имеет существенное сходство с таковым у Corylus и Ostrya: развитие массивной зоны склеренхиматизированных клеток во внутренней зоне мезокарпия. Плоды Corylus имеют каменистый эпикарпий и мезокарпий, Ostrya - одревесневающий эпикарпий и внутренний мезокарпий, которые разделены паренхиматизированной зоной. По совокупности анатомических признаков плоды O. davidiana следует относить к пиренариям Olea-типа, структура которых осложнена одревесневшими эпидермой и гиподермой эпикарпия.

Прогрессивная склеренхиматизация внутренних зон эпикарпия и наружной части мезокарпия в плодах типа Ostryopsis davidiana приводит к формированию плодов с полностью склеренхиматизированными эпикарпием и мезокарпием (орехом Corylus-типа), развивающихся у представителей рода Corylus. Плоды Ostrya представляют собой промежуточный эволюционный тип, связывающий пиренарии Olea-типа, описанные у O.

davidiana, и орехи Corylus-типа, формирующиеся у видов Corylus. Неполная склеренхиматизация эпикарпия и мезокарпия в плодах Ostryopsis является адаптацией к анемохории, уменьшающей массу плода. Ostryopsis обладает рядом архаичных карпологических признаков. Для более полного понимания эволюции плодов представителей семейства Betulaceae s.l. необходимы дополнительные онтогенетические карпологические исследования большего числа видов, представляющих все роды семейства.

ПОДСЕКЦИЯ «ВИРУСОЛОГИЯ» УСТНЫЕ ДОКЛАДЫ Использование псевдолентивирусной системы для исследования антиретровирусных препаратов на основе shRNA Григорьев Илья Владимирович1, Алембеков И.Р.2, Чересиз С.В.(1Новосибирский государственный университет, Медицинский факультет, Россия Новосибирск, 2Институт молекулярной Биологии имени В.А. Энгельгардта, Россия, Москва, ilyag2@yandex.ru) Псевдотипированные лентивирусы — это получаемые в системе in vitro вирусные препараты, в физиологическом плане практически неотличимые от природных инфекционных вирионов ВИЧ-1, но биологически безопасные, поскольку геномная РНК псевдовируса содержит лишь регуляторные последовательности ВИЧ и репортерный ген, но не гены вирусных белков Целью данной работы было проанализировать пригодность псевдовирусной системы для оценки эффективности shRNA, гомологичных консервативным участкам последовательностей вирусных генов обратной транскриптазы, интегразы, белка вирусного матрикса P17 (gag) и поверхностного гликопротеина env (gp120) ВИЧ-1. Проведен анализ зависимости ингибирующей активности shРНК от числа однонуклеотидных замен в консервативной области между последовательностями shRNA и сайта-мишени в вирусном геноме.

Псевдовирусы получали методом трансфекции последовательностей лентивирусного генома в составе 3 плазмид — векторной, упаковочной и экспрессирующей поверхностный антиген - в высокотрансфектабельные клетки линии 293Т. Инфицированные клетки экспрессируют eGFP в результате интеграции в их хромосомы провируса, содержащего репортерный ген, что использовалось для определения трансдуцирующего титра лентивирусного препарата методом проточной цитометрии (по проценту GFPположительных клеток). В экспериментах с ингибиторами делали котрансфекцию 4х плазмид, к лентивекторным добавляли экспрессирующую shRNA плазмиду. Эффективность подавления экспрессии лентивирусного генома каждой shRNA определяли как отношение доли экспрессирующих клеток в ингибированном образце к доле GFP-экспрессирующих клеток в положительном контроле. Через 48 ч после трансфекции наблюдается ингибирование образования лентивирусов в клетках-продуцентах, максимальное для shRNA, гомологичной консервативной области обратной транскриптазы ВИЧ-1, и достигает 90%.

Высокая эффективность shRNA наблюдается в случае не более одной замены между интерферирующей РНК и транскрипта-мишени, тогда как 2 или 3 замены в мишени дают падение эффективности подавления до 10-30%. Это согласуется с данными о появлении вирусных вариантов-беглецов, уходящих из-под контроля интерферирующих РНК за счет появления одной нуклеотидной замены в сайте-мишени.

Полученные результаты показывают, что данную систему можно использовать для первичного массового скрининга shRNA, для отбора максимально эффективных соединений и дальнейшей проверки в вирус-клеточных системах с многократным репликационным циклом.

Получение штаммов гибридных клеток продуцентов моноклональных антител к антигену вируса лейкоза крупного рогатого скота Жылкибаев Асылбек Айтанулы, Белялова А.Р., Кущева Н.А.

(РГП «Национальный центр биотехнологии Республики Казахстан», Республика Казахстан, Астана, askokshe@mail.ru) Лейкоз крупного рогатого скота - хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы, в большинстве случаев протекает бессимптомно, примерно у 30 % зараженных животных в течение 3 лет проявляется персистентным лимфоцитозом, образованием опухолей в кроветворных и других органах и тканях. Лейкоз наносит большой экономический ущерб, который складывается из падежа больных животных, остановки племенных работ, расхода средств на проведение комплекса ветеринарно-санитарных мероприятий, селекционно-зоотехнических работ и оздоровительных мероприятий.

Несмотря на проводимые мероприятия по оздоровлению хозяйствующих субъектов от этой болезни, в республике сохраняется высокий уровень пораженности стад, опережая темпы распространения таких социально значимых болезней, как туберкулез и бруцеллез.

Успешным решением сложившейся ситуации может являться создание эффективных тестсистем с использованием высокочувствительных реагентов-моноклональных антител, направленных на диагностику лейкоза.

В связи с этим, целью нашего исследования являлось получение гибридных клеток, продуцирующих моноклональные антитела к антигену вируса лейкоза, для дальнейшего их использования в разработке тест-систем (ИФА, РИФ). Гибридизацию миеоломной линии клеток Х63Ag8.653 и иммунных спленоцитов проводили по общепринятому методу V.Oi, L.

Herzenberg. При тестировании полученных гибридных клеток на способность продуцировать антитела выявлено, что из полученных клонов восемь клонов дали положительный результат. Гибридные клетки, продуцирующие антитела, трехкратно клонировались методом лимитирующего разведения. Клонированные штаммы гибридных клеток не меняли своих свойств в течение 16 пассажей.

В результате наших исследований отобраны 3 наиболее активных штамма гибридных клеток, (2F2, 2F5, 2F3) стабильно продуцирующих моноклональные антитела к антигену вируса лейкоза крупного рогатого скота. Полученные гибридные клетки, синтезирующие моноклональные антитела, обладают высокой продуктивностью in vivo до 32 мг/мл, in vitro до 0,05 мг/мл.

Проведенные исследования показали, что полученные штаммы гибридных клеток могут использоваться, как стабильные продуценты моноклональных антител к антигену вируса лейкоза крупного рогатого скота.

Работка модели для анализа взаимодействия пептида A и Prion protein в дрожжах Saccharomyces cerevisiae Коржова Виктория Валерьевна, Антонец К.С.

(Санкт-Петербургский государственный университет, Биолого-почвенный факультет, Россия, Санкт-Петербург, viktoria.korzhova@gmail.com) В 1997 С. Прусинер получил Нобелевскую премию за описание принципиально нового типа инфекционный агентов – прионов, основу которых составляет белок PrP (Prion Protein), являющийся нормальным клеточным белком, но находящийся в измененной конформации.

Заболевания, связанные с аномальной укладкой белков и образованием их агрегатов – амилоидов – называют амилоидозами. В настоящее время кроме инфекционных амилоидозов известны и неинфекционные. Одним из наиболее распространенных среди них является болезнь Альцгеймера, связанная с образованием агрегатов пептида А. Показано, что пептид А и белок PrP способны к взаимодействию: PrP в растворимой изоформе специфично связывает олигомеры А и, таким образом, способен влиять на проявление болезни.

Для анализа возможности взаимодействия агрегатов PrP и пептида A мы использовали дрожжи Saccharomyces cerevisiae. Мы получили дрожжевые штаммы, продуцирующие белок PrP или пептид A, слитые с одним из флуоресцирующих белков – GFP, CFP или YFP.

Методом флуоресцентной микроскопии мы показали, что продукция белков A-GFP и PrPGFP приводит к формированию в дрожжевых клетках флуоресцирующих агрегатов. Они имеют цитоплазматическую локализацию и не колокализуются с клеточными компартментами. Мы также провели биохимический анализ белков PrP-GFP и A-GFP из дрожжевых клеток и установили, что их агрегаты проявляют биохимические характеристики, сходные с агрегатами, выделенными из мозга больных млекопитающих:

устойчивость к действию протеиназы К и детергенов. Мы показали, что в дрожжевых клетках наблюдается колокализация агрегатов белков A и PrP, слитых с белками CFP и YFP. В дальнейшей работе планируется исследование возможности физического взаимодействия этих гибридных белков и их агрегатов в дрожжевых клетках методом FRET.

Таким образом, полученная нами модель позволяет изучать возможные взаимодействия белков A и PrP в живых клетках, искать факторы, влияющие на эти процессы, а также анализировать в этой системе потенциально терапевтические вещества.

Работа выполнена при поддержке ФЦП "Научные и научно-педагогические кадры инновационной России" на 2009 - 2013 годы Госконтракт П-2619.

Разработка нового вирусного вектора для суперэкспрессии целевых белков в растении и получения вирусоподобных частиц Путляев Егор Валерьевич, Смирнов А.А.

(Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова, Биологический факультет, Россия, Москва, putl@voxnet.ru) Использование вирусоподобных частиц (ВПЧ) как платформы для презентации вакциногенных эпитопов является одним из наиболее перспективных подходов для производства вакцин. Белки оболочки (БО) различных вирусов растений образуют ВПЧ в отсутствии вирусной нуклеиновой кислоты. Накопление целевых белков в растении имеет ряд преимуществ перед другими системами экспрессии: отсутствие общих с человеком патогенов, высокий уровень экспрессии, низкая себестоимость, возможность быстрого наращивания объема производства. Поэтому, накопление в растении химерных БО для образования вирусоподобных частиц является перспективным методом для получения вакцин.

Ранее в нашей лаборатории был описан новый штамм вируса мозаики альтернантеры (AltMV-MU (GenBank FJ822136.1)), БО которого способен образовывать вирусоподобные частицы в отсутствии вирусной РНК. Для эффективной сборки вирусоподобных частиц необходимо большое количество БО. Поэтому, целью данной работы было разработать вирусный вектор, обеспечивающий накопление БО вируса мозаики альтернантеры (ВМАльт) в листьях Nicotiana benthamiana, в количестве, достаточном для эффективного образования ВПЧ.

Нами был получен вирусный вектор на основе кДНК копии геномной РНК AltMV-MU, в котором гены трех транспортных белков были делетированы. По нашим сведениям, это первый вирусный вектор на основе ВМАльт, имеющий такую архитектуру. Данный вирусный вектор был агроинокулирован в листья растения Nicotiana benthamiana. Анализ трансформированной ткани показал, что полученный нами вирусный вектор в присутствии универсального ингибитора посттранскрипционного умолкания генов вируса кустистой карликовости томатов p19 обеспечивает накопление до 5 г БО ВМАльт на 1 кг сырой листовой массы, что соответствует примерно 50 % массы всех растворимых белков зараженного листа. Исследования методом просвечивающей электронной микроскопии показали, что достигнутый нами уровень накопления БО достаточен для эффективного образования ВПЧ.

Pages:     | 1 |   ...   | 15 | 16 || 18 | 19 |   ...   | 83 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.