WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 12 | 13 || 15 | 16 |   ...   | 83 |

В экспериментах по конкуренции с альфа-бунгаротоксином за связывание с ацетилхолинсвязывающим белком (АХСБ) моллюска, который является водорастворимым аналогом внеклеточной области н-АХР и других т.н. цис-петельных рецепторов, а21.увеличивал связывание радиоактивно-меченного альфа-бунгаротоксина с АХСБ.

В то же время, в экспериментах по определению острой токсичности для мышей, при измерении цитотоксичности на линиях клеток PC12 (феохромоцитома надпочечников крысы) и HT1080 (карцинома легких человека), а также при взаимодействии с тремя подтипами н-АХР (7, 42 и мышечного подтипов) а21.1 не проявил активности в концентрациях до 10 мкМ.

Таким образом, белок из группы орфанотоксинов способен к взаимодействию с белком, обладающим структурой, подобной внеклеточной области цис-петельных рецепторов. При этом он нетоксичен и не связывается с классическими мишенями альфа-нейротоксинов яда змей. Возможно, он действует на другой тип цис-петельных рецепторов, который теперь необходимо установить.

Влияние вальпроата натрия на активность неприлизина и холинэстераз в плазме крови взрослых крыс, подвергнутых пренатальной гипоксии Морозова Антонина Юрьевна, Багрова Д.И.

(Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М.Сеченова РАН, Россия, Санкт-Петербург, amor2703@gmail.com) Известно, что гипоксия в эмбриональный период приводит к нарушению функционирования центральной нервной системы и снижению когнитивных функций. При этом наблюдается изменение активности как холинэстераз, так и неприлизина - фермента деградации амилоидного пептида в мозге и периферических тканях организма. Недавно обнаружено, что введение вальпроата натрия приводит к восстановлению когнитивных функций у крыс, перенесших гипоксию в период эмбрионального развития. Целью данной работы являлось определение влияния вальпроата натрия на активность ацетилхолинэстеразы (АХЭ), бутирилхолинэстеразы (БуХЭ) и неприлизина (НЕП) в плазме крови взрослых крыс, перенесших пренатальную нормобарическую гипоксию на 14 день (Е14). Активность ферментов определяли в плазме крови шестимесячных крыс с эмбриональной патологией (Е14), которым в течение двух недель внутрибрюшино вводили вальпроат натрия. Оказалось, что у животных, перенесших пренатальную гипоксию, активность НЕП уменьшается в 1,2 раза по сравнению с контрольными животными (3,49 0,46 усл.ед/мкг белка). После введения вальпроата натрия активность НЕП увеличивается в 1,3 раза (3,69 0,40 усл.ед/мкг белка), что соответствует активности фермента у контрольной группы животных. У животных, перенесших пренатальную гипоксию, активность АХЭ уменьшается в 2,2 раза, а БуХЭ в 2,4 раза по сравнению с контрольными животными (2,5 0,17 пмоль АТХ/мин/мг; 0,4 0,03 пмоль БуТХ/мин/мг).

После введения вальпроата натрия активность АХЭ увеличивается в 2,6 раза (2,9 0,пмоль АТХ/мин/мг), БуХЭ - в 10,2 раза (1,7 0,2 пмоль БуТХ/мин/мг), что сопоставимо с показателями активности у контрольной группы животных. Таким образом, введение вальпроата натрия приводит к повышению активности НЕП, АХЭ и БуХЭ в плазме крови крыс, перенесших пренатальную гипоксию, до показателей активности данных ферментов у контрольной группы животных.

Работа поддержана грантом РФФИ (№10-04-01156).

Изучение неопиоидного рецептора бэта-эндорфина мембран коры головного мозга крысы Некрасова Юлия Николаевна, Садовников В.Б., Наволоцкая Е.В.

(Филиал Института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А.

Овчинникова РАН, Россия, Пущино, nekr-jul@mail.ru) Известно, что эндогенный нейропептид -эндорфин взаимодействует с опиоидными ( и ) и неопиоидными, нечувствительными к опиоидному антагонисту налоксону, рецепторами. До настоящего времени структура и функции последних остаются малоизученными.

Нами был синтезирован пептид TPLVTLFK (авторское название – октарфин), соответствующий последовательности 12-19 молекулы -эндорфина. Для изучения связывания октарфина с мембранами коры головного мозга крысы мы использовали меченный тритием октарфин (уд. акт. 28 Ки/моль).

Показано, что [3H]октарфин связывается с мембранами коры головного мозга крысы с высоким сродством (Kd=2.6±0.2 нМ). Специфическое связывание [3H]октарфина ингибирует -эндорфин (Ki 2.4±0.2 нМ), селективный агонист неопиоидного рецептора -эндорфина синтетический пептид иммунорфин (SLTCLVKGFY) (Ki 2.9±0.2 нМ) и немеченый октарфин (Ki 2.7±0.2 нМ). Немеченые синтетические аналоги октарфина проявляют низкую ингибирующую способность. Налоксон, -эндорфин, -эндорфин, [Met5]энкефалин и [Leu5] энкефалин не обладают способностью вытеснять [3H]октарфин из лиганд-рецепторного комплекса (Ki > 10 µМ). Наряду с этим определено, что немеченый октарфин полностью ингибирует специфическое связывание [3H]иммунорфина с мембранами коры головного мозга крысы (Ki 2.8 ±0.2 нМ).

Таким образом, -эндорфин, иммунорфин и октарфин связываются с общим рецептором на поверхности мембран коры головного мозга крысы. Данный тип рецептора нечувствителен к налоксону и не связывает опиоидные агонисты, следовательно, он имеет неопиоидную природу.

Протеомные исследования ядов змей на примере степной гадюки (Vipera ursinii renardi, Bonaparte, 1835) Никитин Илья Георгиевич (Институт биоорганической химии РАН им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А.

Овчинникова, Российская Федерация, Москва, gluecklich-gans@yandex.ru) Протеомика представляет собой активно развивающуюся область химии белков, основной задачей которой является изучение совокупности белков и их модификаций, их декомпозиции и взаимодействия друг с другом - т.е. изучение протеома. Частным случаем протеомики является веномика – область токсинологии, изучающая совокупность белковых компонентов животных ядов, их взаимодействие друг с другом и с белками тела жертвы.

Особенно актуальным является протеомное изучение животных ядов, ранее никогда не подвергавшихся биохимическому исследованию. К таковым относится яд степной гадюки (Vipera ursinii renardi), исследование максимального количества белковых компонентов которого и стало предметом данного исследования.

В работе использовались различные виды хроматографии, а также неотъемлемые инструменты любого протеомного исследования – электрофорез в полиакриламидном геле и масс-спектрометрия. Многообразие используемых методов объясняется необходимостью физического выделения белка из яда для его полноценной структурно-функциональной характеристики.

В результате исследования был обнаружен и охарактеризован ряд новых белковых веществ: 1) выделен инсектотоксический компонент – многосубъединичный сложно устроенный белок, проявляющий токсическое действие на насекомых; 2) выделено две протеазы, прерывающие внешний путь свёртывания и превращение фибриногена в фибрин путём разрушения -субъединицы фибриногена; 3) выделен ряд фосфолипаз А2, из которых две проявили коагулопатические свойства; 4) обнаружен блокатор никотинового холинергического рецептора прудовика (Lymnaea stagnalis, Lamarck, 1801); 5) выделен новый ингибитор сериновых протеаз типа Кунитц.

Таким образом, можно заявить, что яд степной гадюки содержит много новых белков, некоторые из которых не найдены даже у близкородственных видов и представляет собой интересный объект для протеомного исследования. Дальнейшая работа будет посвящена более подробной характеристике обнаруженных белков и нахождению новых.

Влияние кверцетина® и липофлавона® на активность глутатионтрансферазы в условиях экспериментального геморрагического инсульта Торгало Елизавета Александровна, Гайда Л.Н., Остапченко Л.И (Киевский национальный университет имени Тараса Шевченко, Украина, Киев, ОНЦ "Институт биологии", alisa210@meta.ua) Важной составляющей глутатионовой антиоксидантной системы является глутатионтрансфераза (ГТ) - ключевой фермент в механизмах защиты клеток от воздействия экзогенных и эндогенных свободных радикалов. Для профилактики и лечения послеинсультных осложнений применяют антиоксиданты кверцетин и липофлавон.

Целью нашего исследования было изучить влияние кверцетина и липофлавона на активность (ГТ) в тканях мозга, селезенки и почек при экспериментальном геморрагическом инсульте (ГИ). В опыте использовали белых крыс массой 180±10г, которых содержали на стандартном рационе вивария. Геморрагический инсульт у крыс вызывали путем введения во внутреннюю капсулу головного мозга аутогенной крови. Кверцетин вводили перорально, а липофлавон внутривенно (10 мг/кг) в течение 7 суток. Активность фермента выражали в мкмоль последнего на 1 г белка в минуту.

При экспериментальной модели геморрагического инсульта активность (ГТ) в исследуемых органах снижалась. Снижение активности фермента может указывать на инициацию процессов липопероксидации и накопление продуктов ПОЛ, которые, в свою очередь, могут быть причиной дальнейшего развития патологии. В исследованных органах в условиях развития ГИ происходит активация процессов декомпенсации антирадикальной защиты. В этих условиях снижается активность (ГТ), что может быть одной из причин нарушения пролиферации клеток.

Полученные результаты показали, что в условиях (ГИ) происходит интенсификация процессов ПОЛ, о чем свидетельствует установленное нами повышение содержания их продуктов и снижение активности антиоксидантных ферментов. Введение кверцетина и липофлавона приводит к нормализации состояния системы ПОЛ, а именно, к снижению содержания продуктов ПОЛ и активации ферментов антиоксидантной защиты.

Выявление молекулярной природы Na+/Li+ обменника: сравнительный анализ мембранных белков эритроцитов крысы и кролика методом двумерного электрофореза Трушина Юлия Александровна (Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова, Россия, Москва, yulijatryshina@gmail.com) Na+/Li+ обменник (Na+/Li+ exchanger, NLE) впервые был обнаружен при изучении стимулирующего влияния внеклеточного Na+ на скорость выхода Li+ из эритроцитов человека. В дальнейших исследованиях было установлено, что этот переносчик активирован у больных гипертонической болезнью и диабетической нефропатией. В предыдущих экспериментах нами было показано, что скорость NLE в эритроцитах крыс в 25 и в 1000 раз ниже, чем в эритроцитах человека и кролика соответственно. Но несмотря на общебиологическую и медицинскую значимость, молекулярная природа данного обменника до сих пор остается неизвестной.

Основываясь на столь большой разнице NLE в эритроцитах крысы и кролика, мы предполагаем увидеть различия в содержании интегральных мембранных белков, осуществляющих NLE и/или регулирующих активность этого переносчика, с помощью двумерного электорофореза и последующего масс-спектрометрического анализа. В работе использовались фракции мембранных белков эритроцитов крысы и кролика. Для этого кровь крысы линии Wistar и кролика последовательно центрифугировали и промывали для получения чистой фракции эритроцитов, которую затем лизировали с последующим многократным отмыванием от гемоглобина. Белковый состав полученных «теней» эритроцитов анализировали с помощью одномерного и двумерного электрофорезов.

Разделение мембранных белков эритроцитов крысы и кролика методом одномерного электрофореза в денатурирующих условиях по методу Леммли показало наличие 4-х основных белков с кажущимися молекулярными массами 240, 220, 100 и 75 кДа.

Сопоставление с данными литературы первые три белковые полосы соответствуют, спектринам и анионному обменнику (белок полосы 3). Дальнейший анализ белкового состава методом двумерного электрофорезом с последующей идентификацией массспектрометрии позволит провести детальное сравнение белковых наборов и установить молекулярную природу NLE.

Автор благодарен к.б.н. Акимовой Ольге Алексеевне и д.б.н. Орлову Сергею Николаевичу.

Работа поддержана грантом РФФИ (№09-04-00646-а).

Поиск цитопротекторных соединений в ряду синтетических аналогов простагландинов группы В Шевчук Екатерина Сергеевна (Белорусский государственный университет, Биологический факультет, Республика Беларусь, Минск, prostanoids@tut.by) Простагландины (ПГ) – мультифункциональные молекулярные регуляторы различных физиологических функций. Наличие у ПГ защитных эффектов, наблюдающихся как на уровне цельной печени, так и в условиях повреждения гепатоцитов in vitro, позволяет рассматривать данные соединения в качестве потенциальных хемотерапевтических средств.

Однако присущая природным ПГ лабильность и отсутствие селективности ограничивают возможность их практического использования. Поэтому создание стабильных и высокоактивных синтетических аналогов ПГ часто является удачной альтернативой использованию их природных прототипов.

Настоящая работа посвящена сравнительной характеристике цитопротекторных свойств простаноидов группы В на клеточной модели повреждения печени хлороформом.

Исследование выполнено с использованием природного ПГI2 и 9 синтетических аналогов ПГВ, синтезированных и предоставленных для исследований Лабораторией химии простагландинов Института биоорганической химии НАН Беларуси.

Работа проводилась на первичной суспензии гепатоцитов крыс. Простаноиды в концентрациях (10-10 – 10-6 моль/л) добавляли к опытным пробам через 30 минут после 0,14% хлороформа. Цитопротекторные свойства изучаемых соединений оценивали по их способности предотвращать утечку лактатдегидрогеназы из цитозоля, кислой фосфатазы – из лизосом и глутаматдегидрогеназы – из митохондрий гепатоцитов. Статистическая обработка результатов выполнялась с помощью пакета программ Stadia 6.0.

Установлено, что обработка клеток ПГI2 и исследованными простаноидами вызывает развитие достоверного дозозависимого защитного эффекта. Максимально эффективными оказались концентрации, равные 1·10-7 – 1·10-8 моль/л. По силе протекторного действия исследованные соединения образуют следующий ряд эффективности: Л6К (-99,0% к контролю) = Л1К (-98,5%) Л7М (-97%) > М3Г (-89%) = М2Ц (-89%) > ПГI2 (-57%) М1Ц (55,8%) > М8К (-36%) > М3Ц (-24,1%) > Л6М (-19,9%).

Максимальный защитный эффект наблюдался в присутствии соединений, обладающих 2-тиенил-пропиловым фрагментом (Л6К, Л7М), метоксикарбонильной группой (Л1К) или бензольным кольцом (М2Ц, М3Г) в -цепи. Действие этих соединений превосходило эффект ПГI2 – наиболее мощного и широко используемого в современной клинической и экспериментальной практике цитопротектора простаноидного типа.

Автор выражает глубокую благодарность научному руководителю – к.б.н., доценту Губич О.И. Работа выполнена в рамках гранта ГПНИ Республики Беларусь “Фундаментальная и прикладная медицина и фармация” (№ задания 4.36).

Pages:     | 1 |   ...   | 12 | 13 || 15 | 16 |   ...   | 83 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.