Добро пожаловать!

Pages:     | 1 ||

B – NF-B site forms two complexes with the nuclear proteins from Mecells; both complexes were disrupted by the cold probe and NF-B consensus and supershifted by p50 antibody; p65 antibody disrupted only the upper complex; C – CRE site from the human GSTP1 promoter interacts with Me45 nuclear proteins and the complex formation can be inhibited by the cold probe; AP-1, but not CRE consensus compete with the CRE for the nuclear proteins and antibodies to Fos and ER supershift the complexes observed in the reaction of genuine NF-B site NF-B site contains the p50/p65 heterodimer, while the containing oligo with nuclear extract. The unlabeled lower complex observed in binding reaction is the NF-B consensus was able to efficiently compete for p50/p50. These data together with the results of the nuclear proteins from both specific complexes transient transfection assay strongly suggest that NFleading to suggestion that NF- B binds to GSTP1 B interacts with the human GSTP1 NF-B site and NF-B site in this cell line. To clarify the matter, up-regulates gene transcription in Me45 cells.

nuclear extract was incubated with polyclonal The negative regulatory element –1162 … –antibodies to p50 and p65 subunits of NF- B before the contains a CRE site and ATAAA-repeated sequence. It probe was added to the EMSA reaction. In the was previously reported that CRE site of GSTPsupershift assay of NF-B site two new bands were mediates gene response to cAMP by interacting with observed after the incubation with p50 antibody – one CREB in Calu-6 lung cancer cells [19]. Competitive originated from the lower and one from the upper EMSA was also conducted to determine which protein complex, providing the evidence that both complexes is a part of the DNA-protein complex formed by CRE contain p50. The upper complex of nuclear proteins and site in Me45. Regarding the ability of CRE sites in CROSSTALK BETWEEN TRANSCRIPTION FACTORS IN REGULATION OF THE HUMAN GSTP1 GENE EXPRESSION IN Me45 CELLS different genes to interact with CREB [19] and second DNA-binding transcription factor to mediate AP-1[20] proteins, consensus oligonucleotides for both ER association with the DNA. ER and ER have been transcription factors were utilized in the competitive shown to act in opposite ways at Fos/Jun-binding sites.

EMSA. A representative autoradiograph in fig. 4, C, In the presence of E2 ER activates transcription via its shows, that CREB consensus oligonucleotide could not AF-1 and AF-2 transactivating domains while ER-Ecompete with GSTP1 promoter CRE for protein which lacks a functional AF-1inhibits the Fos/Junbinding, however genuine oligonucleotide CRE and dependent transcription [22]. We suggest that ER AP-1 consensus competed successfully. This suggests exerts the similar inhibitory effect at CRE site of that CRE site forms the complex with AP-1 in Me45 GSTP1 promoter. The role of ER associated with an cells. The supershift experiment with antibodies against unknown protein at ARE site is different and may the transcription factors known to interact directly or activate transcription. The dual function of ER in indirectly with CREs of other genes was performed to regulation of different promoter elements may be verify the results. Antibodies to c-Jun (cross-reactive to considered in context of enchanceosome formation.

JunB and JunD), c-Fos (cross-reactive to FosB, Fra1 Conclusions. In the present research the and Fra2), MafF/G/K, ER and Nrf3 were utilized in transcriptional mechanisms controlling the basal level this assay. The supershifted bands were observed after of GSTP1 expression in Me45 cells have been analyzed the incubation of nuclear extracts with Fos and ER for the first time. The obtained data indicate that the antibodies. The supershift analysis indicates that ER GSTP1 transcription in this cell type is positively together with Fos protein interacts with the human regulated by binding of NF-B to –323 site and ER in GSTP1 CRE in Me45 cells and this interaction has a complex with unknown protein binding to the ARE negative regulatory effect. site; the complex of ER with c-Fos at CRE site negaThe phenomenon that protein binding sites can be tively regulates the gene expression. The interaction of shared between different transcription factors is called c-Fos/ER with GSTP1 CRE site and indirect intera transcription factor crosstalk [20]. It can be realized action of ER with GSTP1 ARE site have been by interaction of a «noncanonical» transcription factor discovered.

directly with a DNA sequence which has a partial The regulation of GSTP1 transcription in Mehomology to the binding sites of this and another melanoma cells has been examined in details also for transcription factors [20] or by protein-protein inter- the first time. Several transcription factors – NF-B in actions of «noncanonical» transcription factor with a p50/p50 homodimer and p50/p65 heterodimer, ER «genuine» protein bound to its recognition site. In case and c-Fos regulate GSTP1 transcription in these cells.

of the human GSTP1 promoter both types of crosstalk Positive regulation is exerted via NF-B and ARE sites are present – noncanonical c-Fos together with ER and negative via CRE site. ER is indirectly involved crosstalks with CREB at CRE site and ER together in regulation of GSTP1 transcription. It is bound via with an unknown protein crosstalks with AP-1 at ARE c-Fos with CRE site and via unknown protein with site. In both cases CREB and Fos/Jun has an opposite ARE site.

effect on gene transcription. In case of the GSTP1 Acknowledgement. The experimental part of the promoter this negative effect is seems to be potentiated work was carried out in the Institute of Oncology in by ER binding which is known to repress Fos-driven Gliwice and was financed by the Polish Ministry of transcription [21]. In the present finding we identified Education and Science, grant number N 401 ER indirectly interacting with two promoter ele- 32/3043.

ments – CRE and ARE sites. It evidences for the A. M. Слончак, A. Кведук, Й. Жешовска-Вольни, importance of this protein for the formation of the М. Ю. Оболенська enchanceosome on GSTP1 promoter.

Переговори між транскрипційними факторами у регуляції The ER signaling mechanisms discussed until now експресії гена Р1 глутатіон-S-трансферази людини у клітинах provide an explanation for the regulation of genes меланоми Меlacking estrogen response element and requiring a SLONCHAK A. M. ET AL.

с сайтом ARE. Выводы. Позитивная регуляция гена GTазыРРeзюмe человека в клетках меланомы Me45 осуществляется через NFМета.Глутатіон-S-трансфераза (GTаза) людини є головним B и ARE-сайты, а негативная – через CRE-сайт промотора.

ферментом II фази детоксикації у більшості типів клітин.

ER опосредованно участвует в регуляции транскрипции GTаЗміна рівня експресії її гена пов’язана з канцерогенезом і форзыР1: через c-Fos он связывается с CRE-сайтом и через неизмуванням численної лікарської стійкості. Експресія GTазиРвестный белок – с ARE-сайтом.

регулюється на транскрипційному, поcттранскрипційному та Ключевые слова: глутатион-S-трансфераза, промотор, посттрансляційному рівнях. У даній роботі ми зосередилися транскрипционные факто ры, NF-B, эстрагеновый рецептор, на транскрипційній регуляції гена. Методи. Трансфекцію меланома, регуляция транскрипции.

клітин меланоми Ме45 конструкціями, які містять ген люциферази під контролем повного або вкороченого промотора REFERENCES GTазиР1, використано для встановлення ролі різних ділянок промотора в регуляції транскрипції гена GTази Р1 у клітинах Ме45. Щоб визначити транскрипційні фактори, які взає- 1. Hayes J. D., Flanagan J. U., Jowsey I. R. Glutathione модіють з промотором гена GTазиР1, виявляли зміни електроtransferases // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol.–2005.–45.– форетичної рухливості ДНК-білко вих комплексів за присутP. 51–88.

ності антитіл і конкурентних олігонуклеотидів. Результати.

2. Moscow J. A., Fairchild C. R., Madden M. J., Ransom D. T., Транскрипція гена GTазиР1 у клитинах Me45 позитивно регуWieand H. S., O’Brien E. E., Poplack D. G., Cossman J., Myлюється через зв’язування NF-B із сайтом –323 та за рахунок ers C. E., Cowan K. H. Expression of anionic glutathioneзв’язування ER y комплексі з невідомим білком – з ARE-сайS-transferase and P-glycoprotein genes in human tissues and том; комплекс ER з c-Fos негативно регулює експресію гена.

tumors // Cancer Res.–1989.–49, N 6.–P. 1422–1428.

Встановлено також пряму взаємодію c-Fos/ER із сайтом 3. Oakley A. J., Lo B. M., Nuccetelli M., Mazzetti A. P., Parker CRE гена GTазиР1 і непрямy – ER із сайтом ARE. Висновки.

M. W. The ligandin (non-substrate) binding site of human Pi Позитивна регуляція гена GTазиР1 людини в клітинах мелано- class glutathione transferase is located in the electrophile ми Me45 здійснюється через NF-B і ARE-сайти, а негативна – binding site (H-site) // J. Mol. Biol.–1999.–291, N 4.–P. 913– 926.

через CRE-сайт промотора. ER опосередковано бере участь у регуляції транскрипції GTазиР1: через c-Fos він зв’язується з 4. Zhao X., Fan Y., Shen J., Wu Y., Yin Z. Human glutathione CRE-сайтом і через невідомий білок – з ARE-сайтом. S-transferase P1 suppresses MEKK1-mediated apoptosis by regulating MEKK1 kinase activity in HEK293 cells // Mol.

Ключові слова: глутатіон-S-трансфераза, промотор, Cells.–2006.–21, N 3.–P. 395–400.

транскрипційні фактори, NF-B, естрагеновий рецептор, меланома, регуляція транскрипції. 5. Paakki P., Kirkinen P., Helin H., Pelkonen O., Raunio H., Pasanen M. Antepartum glucocorticoid therapy suppresses human placental xenobiotic and steroid metabolizing enzyA. M. Слончак, A. Кведук, Й. Жешовска-Вольны, mes // Placenta.–2000.–21, N 2–3.–P. 241–246.

М. Ю. Оболенская 6. Turella P., Pedersen J. Z., Caccuri A. M., De M. F., MastroПереговоры между транскрипционными факторами в berardino P., Lo B. M., Federici G., Ricci G. Glutathione регуляции экспрессии гена Р1 глутатион-S-трансферазы transferase superfamily behaves like storage proteins for dinitrosyl-diglutathionyl-iron complex in heterogeneous sys- человека в клетках меланомы Меtems // J. Biol. Chem.–2003.–278, N 43.–P. 42294–42299.

Рeзюмe 7. Moffat G. J., McLaren A. W., Wolf C. R. Transcriptional and post-transcriptional mechanisms can regulate cell-specific Цель. Глутатион-S-трансфераза (GTаза) человека является expression of the human Pi-class glutathione S-transferase главным ферментом II фазы детоксикации в большинстве тиgene // Biochem. J.–1997.–324, рt 1.–P. 91–95.

пов клеток. Изменение уровня экспрессии ее гена связано с кан8. Dignam J. D., Lebovitz R. M., Roeder R. G. Accurate transцерогенезом и формированием множественной лекарственcription initiation by RNA polymerase II in a soluble extract ной устойчивости. Экспрессия GTазыР1 регулируется на from isolated mammalian nuclei // Nucl. Acids. Res.–1983.– транскрипционном, поcттранскрипционном и посттрансля11, N 5.–P. 1475–1489.

ционном уровнях. В данной работе мы сосредоточились на 9. Cowell I. G., Dixon K. H., Pemble S. E., Ketterer B., Taylor J.

транскрипционной регуляции гена. Методы. Трансфекция клеB. The structure of the human glutathione S-transferase Pi ток меланомы Ме45 конструкциями, содержащими ген люциgene // Biochem. J.–1988.–255, N 1.–P. 79–83.

феразы под контролем полного или укороченного промотора 10. Xia C. L., Cowell I. G., Dixon K. H., Pemble S. E., Ketterer GTазыР1, использована для выяснения роли разных участков B., Taylor J. B. Glutathione transferase pi its minimal промотора в регуляции транскрипции гена GTазы Р1 в клетках promoter and downstream cis-acting element // Biochem.

Ме45. Чтобы выявить транскрипционные факторы, взаимоBiophys. Res. Communs.–1991.–176, N 1.–P. 233–240.

действующие с промотором гена GTазыР1, определяли изме11. Morceau F., Duvoix A., Delhalle S., Schnekenburger M., Diнения электрофоретической подвижности ДНК-белковых cato M., Diederich M. Regulation of glutathione S-transfекомплексов в присутствии антител и конкурентных олигонукrase P1-1 gene expression by NF-kappaB in tumor necrosis леотидов. Результаты. Транскрипция гена GTазыР1 в клетках factor alpha-treated K562 leukemia cells // Biochem. PharMe45 позитивно регулируется через связывание NF-B с сайmacol.–2004.–67, N 7.–P. 1227–1238.

том –323 и через связывание ER в комплексе с неизвесным бел12. Schnekenburger M., Morceau F., Duvoix A., Delhalle S., ком – с ARE-сайтом; комплекс ER с c-Fos негативно регулиTrentesaux C., Dicato M., Diederich M. Expression of gluрует экспрессию гена. Установлено также прямое взаимодейtathione S-transferase P1-1 in differentiating K562: role of ствие c-Fos/ER с сайтом CRE гена GTазыР1 и непрямое – ER CROSSTALK BETWEEN TRANSCRIPTION FACTORS IN REGULATION OF THE HUMAN GSTP1 GENE EXPRESSION IN Me45 CELLS GATA-1 // Biochem. Biophys. Res. Communs.–2003.–311, 18. Xia C., Hu J., Ketterer B., Taylor J. B. The organization of the N 4.–P. 815–821. human GSTP1-1 gene promoter and its response to retinoic 13. Moffat G. J., McLaren A. W., Wolf C. R. Sp1-mediated transc- acid and cellular redox status // Biochem. J.–1996.–313, riptional activation of the human Pi class glutathione S-trans- рt 1.– P. 155–161.

ferase promoter // J. Biol. Chem.–1996.–271, N 2.–P. 1054– 19. Lo H. W., li-Osman F. Cyclic AMP mediated GSTP1 gene 1060. activation in tumor cells involves the interaction of activated 14. Jhaveri M. S., Morrow C. S. Contribution of proximal promo- CREB-1 with the GSTP1 CRE: a novel mechanism of cellular ter elements to the regulation of basal and differential gluta- GSTP1 gene regulation // J. Cell. Biochem.–2002.–87, N 1.– thione S-transferase P1 gene expression in human breast can- P. 103–116.

cer cells // Biochim. Biophys. Acta.–1998.–1396, N 2.– 20. Manna P. R., Stocco D. M. Crosstalk of CREB and Fos/Jun on P. 179–190. a single cis-element: transcriptional repression of the steroi15. Duvoix A., Schmitz M., Schnekenburger M., Dicato M., Mor- dogenic acute regulatory protein gene // J. Mol. Endocrinol.– ceau F., Galteau M. M., Diederich M. Transcriptional regula- 2007.–39, N 4.–P. 261–277.

tion of glutathione S-transferase P1-1 in human leukemia // 21. Gottlicher M., Heck S., Herrlich P. Transcriptional crossBiofactors.–2003.–17, N 1–4.–P. 131–138. talk, the second mode of steroid hormone receptor action // J.

16. Nishinaka T., Ichijo Y., Ito M., Kimura M., Katsuyama M., Mol. Med.–1998.–76, N 7.–P. 480–489.

Iwata K., Miura T., Terada T., Yabe-Nishimura C. Curcumin 22. Marino M., Galluzzo P., Ascenzi P. Estrogen signaling mulactivates human glutathione S-transferase P1 expression tiple pathways to impact gene transcription // Curr. Genothrough antioxidant response element // Toxicol. Lett.– mics.–2006.–7, N 8.–P. 497–508.

2007.–170, N 3.–P. 238–247.

Pages:     | 1 ||

© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.