WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 80 | 81 || 83 | 84 |   ...   | 85 |

При культивировании на пластике клетки, выделенные из амниотической жидкости человека сохраняют высокий пролиферативный потенциал по меньшей мере до 18-20 пассажей. Популяция характеризуется экспрессией маркеров мезенхимного (CD73, CD90, CD105), нейрального (3-tubulin, Nestin) и эпителиального (кератин 19, р63) типов дифференцировки. Кроме того, в клетках выявляются некоторые из маркёров плюрипотентности (Oct4, Nanog). В коллагеновом геле в течение первых 5 сут клетки амниотической жидкости, в отличие от мезенхимных стволовых клеток и фибробластов, сохраняют округлую форму, при этом контракции геля не происходит. В это время клетки формируют в геле цисты и тубулярные структуры. Формирование таких структур характерно для кератиноцитов кожи и эндотелиальных клеток. Иммуногистохимический анализ показал, что клетки амниотической жидкости на пластике экспрессируют спектр цитокератинов, среди которых кератин 19, кератин 18, кератин 7. В коллагеновом геле экспрессия цитокератинов сохраняется только в одиночных клетках, в то время как в большинстве трубочек клетки не окрашиваются антителами к этим промежуточным филаментам, при этом в них появляется экспрессия эндотелиального маркера CD31. В то же время, экспрессия другого маркера зрелых эндотелиальных клеток – фактора фон Виллебранда – не выявляется. Возможно, это свидетельствует о том, что культивирования в трёхмерном матриксе недостаточно для дифференцировки амниотических клеток в эндотелиоциты и в культуральную среду необходимо добавлять специфические ростовые факторы.

Полученные данные свидетельствуют о том, что клетки амниотической жидкости обладают выраженными морфогенетическими потенциями. Культивирование в трехмерном коллагеновом геле может способствовать детерминации клеток в эндотелиальном направлении.

Воздействие митохондриально-направленного антиоксиданта SkQ1 на процесс заживления кожных ран Демьяненко И.А., Федоров А.В. (Москва, ilya871@rambler.ru) Исследования последних лет показывают, что в тканях раневой области происходит интенсивное образование активных форм кислорода (АФК), выполняющих как бактерицидную, так и регуляторную функции, однако повышенное образование АФК в области повреждения считают одной из возможных причин нарушения заживления ран при старении, а также при таком заболевании как диабет. В связи с этим актуальными являются исследования воздействия антиоксидантов, предотвращающих отрицательное действие АФК, на процесс репарации тканей после повреждения с целью разработки новых способов лечения ран, особенно хронических.

В работе исследовано воздействие антиоксиданта SkQ1 [10-(6'-пластохинонил) децилтрифенилфосфония], избирательно нейтрализующего образование АФК митохондриями, на процесс заживления ран. Проведены 3 независимых эксперимента на крысах и мышах. Животным под наркозом наносили резаную полнослойную кожную рану на спине в межлопаточной области. В первом эксперименте белым беспородным крысам (170-200 г) ежесуточно после операции под кожу вокруг ран инъецировали 50 мкл 200 нМ раствора SkQ1 в 0,9% NaCl. Во втором эксперименте крысам линии Sprague-Dawley (450-520 г) на раны накладывали плёночное покрытие на основе хитозана и поливинилового спирта, содержавшее 0,019 мкг SkQ1/г плёнки. Третий эксперимент проведен на старых мышах (28 месяцев) линии Balb/С. Животные с 3-х месячного возраста до окончания эксперимента получали SkQ1 ежедневно с питьевой водой (25 нмол/кг веса в сут). Для анализа процессов репарации тканей в области ран проводили макроскопическое (измерение площади ран на фотоизображениях), гистологическое и иммуногистохимическое исследования.

Статистический анализ полученных численных данных проводили, используя непараметрический U-критерий Манна-Уитни.

Показано, что введение SkQ1 под кожу вокруг полнослойной кожной раны у крыс вызывает более чем двукратное достоверное (р<0,05) уменьшение нейтрофильной инфильтрации области повреждения на 1 сут и трёхкратное достоверное (р<0,05) увеличение числа миофибробластов в грануляционной ткани на 5 сут после нанесения раны. При введении SkQ1 в составе плёночных раневых покрытий наблюдалось заметное уменьшение площади раны в течение всех фаз раневого процесса. Статистически значимое уменьшение площади раны по сравнению с контролем (р<0,05) было обнаружено на 4 и 7 сут эксперимента. В опытах на старых мышах показано, что долговременный (25 мес) приём SkQ1 c питьевой водой вызывал ускоренное сокращение площади ран, уменьшение продолжительности острой фазы воспаления, а также ускорение эпителизации и новообразования соединительной ткани дермы. При этом темпы заживления ран у старых мышей, получавших SkQ1, и молодых контрольных животных были сходными. Полученные данные свидетельствуют о перспективности применения митохондриально-направленных антиоксидантов в терапии длительно незаживающих ран. Работа выполнена при финансовой поддержке ООО Митотехнологии МГУ имени М.В.Ломоносова.

Определение степени морфологической деструкции печени крыс при острой циркуляторной гипоксии Иванская Наталья Николаевна (Ульяновск, naivanskaya@yandex.ru) При циркуляторной гипоксии нарушения кровоснабжения приводят к изменению функции и структуры клеток и тканей. Для выявления степени повреждения органа в зависимости от времени и дозы воздействия недостаточно дать его гистологическую характеристику. Отдельные участки органа в разной степени подвержены деструкции, а местами возможна нормальная гистологическая картина. Проблему решает метод интегральной оценки степени морфологической деструкции ткани (А.В. Муратов, 2001).

Световой микроскопией исследовали окрашенную гематоксилин-эозином ткань печени крыс через 3, 7 и 24 часа после острой кровопотери объемами 1,5% и 0,75% от массы тела (модель острой циркуляторной гипоксии по Sapirstein). На каждом микропрепарате учитывали 100 точек. Интегральное значение морфологических изменений в каждом случае оценивали показателем информативности, который является произведением веса фактора во всей рассматриваемой совокупности факторов (коэффициент А) на значение конкретной характеристики фактора (признак В). В качестве морфологических факторов рассматривали изменения: зернистая дистрофия, гидропическая дистрофия, баллонная дистрофия, некроз, внутри- и внеклеточный холестаз, расширение синусоидов, расширение центральных вен, расширение желчных протоков, наличие в синусоидах стаза. За условную единицу выраженности показателей принята величина 1 балл. Коэффициент А указывает на значение этого фактора во всей рассматриваемой совокупности факторов: 1 балл – морфологически обратимые изменения; 2 балла – изменения, приводящие к структурной перестройке ткани печени без угрозы для жизни; 3 балла – необратимые изменения с угрозой для жизни.

Для определения значений характеристик факторов (признак В) принята 7-балльная шкала: 0 баллов – нет морфологических изменений, 1 балл – локальные изменения, 2 балла – мелкоочаговые изменения локализуются в одной из зон печеночных долек; 3 балла – крупноочаговые изменения локализуются в одной из зон печеночных долек; 4 балла – мелкоочаговые изменения локализуются как в перипортальных зонах печеночных долек, так и в центролобулярных зонах печеночных долек; 5 баллов – изменения носят крупноочаговый характер как в перипортальных зонах печеночных долек, так и в центролобулярных зонах печеночных долек; 6 баллов – изменениям подвержена полностью одна из зон печеночных долек паренхимы; 7 баллов – диффузные патоморфологические изменения в паренхиме всей печеночной дольки.

По данному методу экспериментально получено, что через 3 часа после кровопотери объемами и 0,75% и 1,5% степень повреждения печени средняя. Через 7 часов она остается средней при 1,5% объеме потери крови, а при 0,75% становится легкой. Спустя 24 часа после кровопотери степень повреждения становится легкой при объеме кровопотери 1,5%, а при объеме 0,75% ткань печени восстанавливается до нормы.

Действие хлорпромазина на организацию мембран в дроблении водных животных Ивашкин Евгений Геннадьевич (Москва, veliger@ya.ru) В дроблении многоклеточных животных цитокинез начинается с инвагинации плазматической мембраны в зоне формирования борозды. Этот процесс сопровождается активным эндоцитозом на участках плазмалеммы, непосредственно прилегающих к месту прохождения борозды. Для исследования процессов эндоцитоза широко используется фармакологическое ингибирование. Одним из веществ, оказывающих подавляющее действие на процесс эндоцитоза считается хлорпромазин. Хлорпромазин (аминазин) принадлежит к группе фенотиазинов и является ингибитором ряда клеточных рецепторов.

Кроме того, многие физиологические эффекты хлорпромазина определяются его катионными амфифильными свойствами и являются результатом непосредственного связывания с холин-богатыми участками клеточных мембран (т.н. «липидными плотиками»). Целью данной работы является описание ранее не известных эффектов действия хлорпромазина на организацию мембран в дроблении водных животных.

В качестве объектов исследования были выбраны ранние зародыши пресноводного моллюска большого прудовика (Lymnaea stagnalis), а также двух видов костистых рыб:

данио (Brachydanio rario) и вьюна (Misgurnus fossilis).

У большого прудовика на стадиях 8-24 бластомеров, морулы и бластулы инкубация в 10-100 мкМ растворе хлорпромазина вызывала округление бластомеров, уменьшение площади контактной поверхности клеток и последующее распадение зародыша на отдельные клетки. У вьюна на стадиях 4-64 бластомеров инкубация в хлорпромазине приводила к интенсивному сокращению поверхности мембраны бластомеров и впячиванию бластодиска в объём желточного мешка, в результате чего происходил его разрыв. У данио подобный эффект отмечен не был. Мы наблюдали нарушение цитокинеза и образование синцитиальных структур, что соответствует описанному в литературе. Так как известно, что хлорпромазин является флуорофором, было проведено исследование зародышей с помощью флуоресцентного и конфокального микроскопов. Непосредственно после начала инкубации флуоресценция локализовалась пятнами на поверхности мембран. Через 5 минут мы наблюдали наличие сферических светящихся гранул, сосредоточенных на поверхности или непосредственно под поверхностью клеточной мембраны. Через 30 мин количество светящихся гранул существенно возрастало, они рассредотачивались по всему объему клетки. Электронно-микроскопическое исследование зародышей показало, что происходит интенсификация образования эндоцитарных везикул сразу после помещения в хлопромазин, а через 30 минут значительно изменяется состав везикул кортикального слоя бластомеров.

Таким образом, мы показали, что хлорпромазин может являться не только блокатором, но и агонистом процесса эндоцитоза. Существенное различие в действии этого катионного амфифильного вещества на организацию мембран у разных животных, вероятнее всего, связано с принципиальной разницей в липидном составе мембран дробящихся бластомеров.

Автор выражает признательность д.б.н. Воронежской Елене Евгеньевне за неоценимую помощь в работе и подготовке тезисов, а также профессору Балатонского лимнологического института (Тихань, Венгрия) Каролю Элекешу за методическую поддержку. Работа была поддержана грантом РФФИ №09-04-01326.

Цитогенетические показатели сосны обыкновенной, заражённой сосновой корневой губкой Игнатова Ирина Викторовна (Воронеж, irina777.84@list.ru) Сосновая корневая губка (Fomes annousus (Fr.)) – один из наиболее распространенных возбудителей заболевания сосны. Он способствует морфоанатомическим и физиологическим нарушениям и приводит к гибели дерева. Для раннего выявления болезни важно знать не только изменения на организменном уровне, но и нарушения, протекающие на уровне клетки. Изучение цитогенетических характеристик больных деревьев является актуальным направлением, поскольку в имеющейся литературе отсутствуют данные подобного рода исследованиях. В качестве территории исследования послужил Хоперский государственный заповедник, в котором заболевание сосны корневой губкой имеет достаточной устойчивый характер. В лабораторных условиях выращены проростки, из апикальной меристемы которых изготовлены препараты по методике Буториной (Butorina, Evstratov, 1996).

На препаратах учитывали митотическую активность; ядрышковую активность; долю и спектр нарушений митоза; микроядерный тест. Полученные данные обработаны с помощью статистической программы Stadia.

Обнаружено, что у семенного потомства деревьев, поражённых корневой губкой, наблюдается достоверное увеличение малоядрышковых клеток (клетки с 1 и 2 ядрышками (р<0,01 и р<0,05) и уменьшение многоядрышковых клеток (клетки с 5 (р<0,01), 6 (р<0,01) и 7 (р<0,01) ядрышками в ядре). Это позволяет предполагать снижение синтетических процессов у инфицированных деревьев. В единичных случаях в апикальной меристеме проростков деревьев сосны выявлены микроядра (как следствие отставаний хромосом и протекания многополюсных митозов) (0,002±0,002% у больных деревьев, и 0,01±0,005% у здоровых деревьев). Присутствие остаточного ядрышка свидетельствует об увеличении активности рибосомальных цистронов. По нашим данным, частота их встречаемости у деревьев сосны, пораженных губкой, вдвое выше, чем для здоровых деревьев (6,3±2,5% и 3±0,8% соответственно).

Таким образом, проведенное исследование показывает, что инфицированные корневой губкой деревья сосны обыкновенной испытывают снижение синтетических процессов, что было выявлено ранее у проростков сосны, развивавшихся в присутствии фактора облучения (Сенькевич, 2007). Изменения ядрышковых характеристик могут рассматриваться как первичные изменения генома и пролиферативной системы на функциональном уровне, еще до структурных перестроек (Калаев, 2009).

Структурно-метаболические особенности лимфоцитов и нейтрофилов у больных хроническим лимфолейкозом в зависимости от стадии заболевания Коростилева Ксения Александровна (Красноярск, kksua@rambler.ru) В последние годы наблюдается тенденция к увеличению случаев заболеваний хроническим лимфолейкозом и рост числа госпитализаций по данному поводу. Одним из факторов, обусловливающих развитие онкологического заболевания, является снижение реактивности иммунной системы. С одной стороны, иммунодефицитное состояние определяет развитие злокачественной опухоли. С другой стороны, сама опухоль индуцирует развитие иммунной супрессии. Несмотря на ряд проведенных исследований, многое в патогенезе хронического лимфолейкоза (ХЛЛ) остается неизученным: недостаточно полно исследованы механизмы иммунной реактивности, особенности иммунного статуса, состояние параметров нейтрофильных гранулоцитов в зависимости от стадии ХЛЛ.

Pages:     | 1 |   ...   | 80 | 81 || 83 | 84 |   ...   | 85 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.