WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 79 | 80 || 82 | 83 |   ...   | 85 |

Контрольной группе животных вводили 0,9% раствор NaCl по той же схеме. ГРГ-нейроны выявляли у 17 и 19 сут плодов крыс (Э17, Э19) при помощи иммуногистохимии и подсчитывали их количество в трех различных областях миграции: назальной, в области обонятельных луковиц и переднем мозгу. Согласно полученным данным, у контрольных животных основная часть ГРГ-нейронов располагалась в переднем мозгу, кроме того, они обнаруживались в назальной области и области обонятельных луковиц. После введения ЛПС количество ГРГ-нейронов на Э17 в переднем мозгу снижалось на 50%, на Э19 – на 30%, тогда как в назальной области на Э17 и Э19 их количество увеличилось на 40%, а в области обонятельных луковиц на Э17 увеличилось на 20%, на Э19 практически не менялось. Были зафиксированы достоверные различия между группами на Э17 и Э19. У животных опытной группы было отмечено одиночное расположение нейронов в переднем мозгу, в то время как в ростральных отделах ГРГ-нейроны располагались группами по 3-4.

Таким образом, ЛПС, введенный беременным самкам крыс, подавляет миграцию ГРГ-нейронов в передний мозг у плодов на 17- и 19 сут эмбрионального развития.

Наблюдаемые эффекты могут быть опосредованы провоспалительными цитокинами, уровень которых значительно увеличивается после введения ЛПС. Основным медиатором, влияющим на миграцию и функционирование ГРГ-нейронов, является ЛИФ, который был найден в назальной области у плодов мышей.

ПОДСЕКЦИЯ «ЦИТОЛОГИЯ» Роль микротрубочек в упорядоченном распределении эндоплазматического ретикулума в клетках меристемы корня пшеницы Triticum аestivum L.

Ван Вэньчжу (Москва, wangwenzhu@yandex.ru) Локализация внутриклеточных органелл меняется в течение клеточного цикла, и на каждой стадии расположение органелл в цитоплазме неслучайное. Однако до настоящего времени неизвестно, каким образом поддерживается структурно-функциональная компартментализация цитоплазмы. Целью работы было изучение связи между распределением эндоплазматического ретикулума (ЭПР) и системами микротрубочек в клетках корня пшеницы Triticum aestivum L. на разных стадиях клеточного цикла.

Для этого были поставлены следующие задачи: 1) изучить локализацию микротрубочек и ЭПР в одних и тех же клетках на разных стадиях клеточного цикла; 2) исследовать распределение ЭПР после разборки микротрубочек колхицином. Для решения этих задач был использован метод иммуноцитохимического выявления микротрубочек с помощью антител к тубулину и ЭПР с помощью антител к белку-маркеру ЭПР. Показано, что на стадии интерфазы ЭПР в клетках диффузно распределяется в цитоплазме, и образует плотные скопления, расположенные вокруг ядра. В конце G2 периода, ЭПР образует полярные скопления, которые колокализуются с полярными шапочками профазного веретена. В профазе, прометафазе и метафазе скопления ЭПР выявляется над веретеном.

Во время анафазы ЭПР локализуется над веретеном и в интерзональной области между расходящимися хромосомами. В ранней телофазе ЭПР располагается в зоне фрагмопласта и на периферии веретена, а в поздней телофазе равномерно между и вокруг дочерних ядер.

Таким образом, мы не установили прямой пространственной связи между микротрубочками и ЭПР, но распределение ЭПР менялось в зависимости от фазы клеточного цикла.

Длительная обработка колхицином вызывает разрушение микротрубочек в интерфазных и митотических клетках. В этих условиях происходит сборка немикротрубочковых тубулиновых структур, которые представляют собой разные типы паракристаллических тяжей. В клетках на стадии интерфазы ЭПР диффузно распределяется цитоплазме и скапливается вокруг ядра в виде кластеров. В профазе, прометафазе и К-метафазе митотическое веретено отсутствует. В таких клетках ЭПР локализуется вокруг сгруппированных хромосом, однако, его распределение может варьировать. В одних клетках ЭПР образует неравномерные кластеры, а в других клетках располагается в виде полярных скоплений, которые имитируют форму веретена. На стадии К-телофазы ЭПР также локализуется вокруг хромосом и ядер, и его распределение может быть как диффузным, так и в виде кластеров. Таким образом, в ходе клеточного цикла изменение организации системы микротрубочек совпадает с перераспределением ЭПР; разрушение микротрубочек и формирование немикротрубочковых тубулиновых тяжей не вызывает изменений в локализации и распределении ЭПР по сравнению с контролем. Можно предположить, что зависимая от стадий клеточного цикла упорядоченная локализация и перераспределение ЭПР зависит от другого компонента цитоскелета – актиновых микрофиламентов.

Митохондриом кардиомиоцитов левого желудочка сердца крыс при моделировании эффектов космического полёта Вареник Евгения Николаевна (Москва, evdiva@rambler.ru) На организм человека (или животного) в космическом полёте могут оказывать влияние три основные группы факторов. Однако, как неоднократно показано ранее, именно невесомость является основным фактором, вызывающим при космическом полёте развитие специфических изменений в организме человека и животных. Поэтому основными профилактическими мероприятиями, проводящимися в полёте являются мероприятия, направленные на противодействие адаптации к невесомости. В полёте биоспутника «Космос-936» впервые были получены данные о том, что искусственная гравитация, создаваемая с помощью бортовой центрифуги, может предупредить многие неблагоприятные эффекты невесомости, в том числе на структуру сердца. Однако морфометрических данных получено не было. Поэтому интересным представляется детальное изучение ультраструктуры кардиомиоцитов (КМЦ) при действии искусственной силы тяжести.

В данной работе представлены данные о структуре митохондриома КМЦ при моделировании эффектов невесомости и действии гипергравитации.

В эксперименте были использованы самцы крыс линии Вистар. Для моделирования некоторых эффектов невесомости использовали антиортостатическое вывешивание, а для создания гипергравитации – центрифугу (2G). Изучены 5 групп животных: «контроль» (1) – интактные животные; 2 – крыс на 1 час в день в течение 19 сут помещали в пеналы, но не подвергали никаким воздействиям; 3 – круглосуточное антиортостатическое вывешивание в течение 24 сут; 4 – ежедневное вращение на центрифуге (крыс, помещённых в пеналы) по 1 ч в течение 19 сут; 5 – вывешивание, такое же как 3 группы, но при этом на 1 ч в день (начиная с 4-суток) крыс снимали и подвергали вращению на центрифуге.

Постановка эксперимента осуществлялась на базе ГНЦ РФ – ИМБП под руководством ведущего научного сотрудника, к.м.н. Краснова И.Б. Анализ ультраструктуры КМЦ левого желудочка сердца крыс проводился методом трансмиссионной электронной микроскопии.

Осуществлялся подсчёт количества межмитохондриальных контактов (ММК), как динамичный и универсальный показатель общего состояния митохондриома КМЦ. Проверка достоверности отличий от контрольных значений проводилась в программе STATISTICA при помощи непараметрического U-теста Манна-Уитни.

Ультраструктура митохондрий (МТХ) во всех изученных группах схожа. При этом морфометрический анализ количества ММК, приходящихся на 100 МТХ, показал, что этот параметр меняется неодинаково в 3 зонах клетки в разных опытных группах.

В межфибриллярной зоне КМЦ увеличивается число ММК по сравнению с группой «контроль» в группах 4 и 5, в остальных группах данный параметр остаётся без изменения.

В субсарколеммальной околососудистой зоне увеличивается число ММК группах 2, 3, по сравнению с интактными животными, а в группе 5 не изменяется. В околоядерной зоне количество ММК возрастает в группах 2, 4, 5, но не меняется в группе 3. Таким образом, реакция митохондриома КМЦ на комплексное действие эффектов невесомости и гипергравитации является качественно иной, чем реакция КМЦ на каждое из этих воздействий.

Реакция культивируемых нормальных и трансформированных клеток кожи человека на действие растительных факторов роста Вильданова Мария Сергеевна (Москва, vch41048@mail.ru) Жасмоновая (ЖК) и абсцизовая кислоты (АБК) – факторы роста растений, которые часто называют растительными гормонами. ЖК участвует в ответе растений на повреждение и внедрение патогена. ЖК и ее производные (жасмонаты) в некоторых экспериментальных системах проявляют противоопухолевую активность в отношении клеток животных, однако механизмы этого влияния не известны. АБК участвует в регуляции процессов перехода растения в состояние покоя, но практически ничего не известно о том, какое действие АБК оказывает на клетки животных. В связи с этим, целью исследования было изучение реакции нормальных и трансформированных клеток человека на действие данных растительных гормонов. В качестве объектов исследования использовались культивируемые клетки человека линий А431 (эпидермоидная карцинома) и НаСаt (нормальные кератиноциты).

С помощью МТТ-теста было показано, что в одних и тех же диапазонах концентраций ЖК цитотоксична как для трансформированных клеток линии А431, так и для нетрансформированных клеток линии HaCat, а АБК цитотоксична только для А431.

В частности, при концентрации 2мМ ЖК вызывала гибель 30% клеточной популяции в обеих линиях. Эта же концентрация АБК вызывала гибель 25% клеток линии А431, в то время как для клеток линии HaCat стимуляции клеточной гибели не наблюдалось.

Мы провели анализ клеточных структур, на которые, как на потенциальные мишени, может быть направлена цитотоксическая активность ЖК и АБК при данной концентрации.

Иммуноцитохимическое и прижизненное окрашивание, а также электронномикроскопическое исследование показали, что ЖК вызывает гипертрофию элементов вакуолярной системы в обоих типах клеток. При этом наблюдается расширение диктиосом аппарата Гольджи, возрастание числа вторичных лизосом и аутофагосом. АБК вызывает резкое увеличение протяженности диктиосом аппарата Гольджи и возрастание числа вторичных лизосом и аутофагосом в трансформированных клетках. Кроме этого, только в клетках линии А431, АБК индуцировала изменения состояния митохондрий и актинового цитоскелета. Реакция митохондрий проявлялась в нарушении целостности наружной мембраны, а реакция актинового цитоскелета проявлялась в появлении скоплений актина в области межклеточных контактов. В клетках линии HaCat, АБК вызывала появление гигантских аутофагосом и большого числа кавеол. Сопоставление реакции нормальных и трансформированных клеток человека на действие разнонаправленных растительных гормонов показало, что в определенных концентрациях ЖК является цитотоксичной по отношению к обеим клеточным линиям, тогда как АБК цитотоксична только для трансформированных клеток. В этих условиях одной из мишеней воздействия является вакуолярная система клеток. Вместе с тем, для АБК только в клетках А431 есть и другие мишени воздействия – актиновый цитоскелет и митохондрии.

Работа поддержана РФФИ № 08-04-00750-а, НШ 1861.2003.Электронно-микроскопический анализ кожи шпорцевой лягушки (Xenopus laevis Daudin) в период метаморфоза Виноградская Ирина Сергеевна (Москва, irina_www@mail.ru) В предыдущих исследованиях, проведенных нами на личинках бесхвостой амфибии – шпорцевой лягушке (Xenopus laevis Daudin), было показано, что по мере приближения личинок к метаморфозному климаксу происходит нарушение динамики физиологических реакций дермальных меланофоров покровов, которое, как показал гистологический анализ, сопровождается начинающимися перестройками в покровах амфибий. Для более глубокого и детального анализа мы использовали метод электронно-микроскопического анализа покровов в разные периоды метаморфоза. Проведенный анализ позволил выявить значительные ультраструктурные изменения покровов, затрагивающие все слои кожи:

эпидермис, базальную мембрану, коллаген и, конечно, дерму. Клетки эпидермиса соединены в основном десмосомальными контактами, однако, могут встречаться и плотные. В клетках поверхностного слоя эпидермиса идет активная секреция, о чем свидетельствует большое количество пиноцитарных пузырьков под мембраной клетки, кроме того, поверхностный слой клеток образует большое количество микроворсинок. Коллаген, лежащий под базальной мембраной, имеет плотную упаковку. Дермальные меланофоры локализованы строго под слоем коллагена. На стадиях прометаморфоза и метаморфозного климакса в эпидермисе сохраняются десмосомальные контакты, однако, отмечена способность к образованию выростов клетками не только поверхностного слоя, но и более глубоких слоёв эпидермиса, выступающих в увеличенное межклеточное пространство, что обуславливает заметное разрыхление толщи эпидермальных клеток. Кроме того, в поверхностном слое этих эпидермальных клеток выявлено большое количество пиноцитарных пузырьков, секреторных гранул, что свидетельствует об интенсивной секреторной активности данных клеток. Значительные изменения обнаружены нами в структуре коллагена – наблюдается сильное разрыхление коллагена по сравнению с преметаморфозом. В толще коллагена нами были выявлены как единичные клетки, так и отдельные части клеток, содержащие коллапсированные участки. Это свидетельствует о миграции клеток сквозь коллаген. Значительные изменения претерпевает и сама дерма в период метаморфозного климакса. В дерме отмечено большое количество коллапсированных отростков дермальных клеток, в том числе и меланофоров, причем пигментные клетки, в отличие от преметаморфоза, располагаются в более глубоком слое дермы, а не строго под коллагеном. Интересным оказался тот факт, что на данном этапе в самих дермальных меланофорах и в отдельных коллапсированных участках клеток мы отметили большое количество премеланосом. Это свидетельствует как о возможном возобновлении синтеза меланина в самих дермальных меланофорах, так и о появлении дермальных меланофоров de novo в дерме в период метаморфозного климакса.

Таким образом, можно заключить, что формирование новой структурно-функциональной единицы кожи в период метаморфоза сопровождается не только серьезными перестройками клеточного пласта, но и появлением новых клеток de novo.

Тубулогенез клеток амниотической жидкости в коллагеновом геле Давыдова Дарья Александровна (Москва, davydovad@gmail.com) Амниотическая жидкость содержит гетерогенную популяцию клеток, в которой присутствуют стволовые клетки, обладающие высоким пролиферативным потенциалом и способные дифференцироваться in vitro в производные трех зародышевых листков. Обычно эти клетки культивируют на пластике. В то же время значительный интерес представляет культивирование в трехмерном матриксе, поскольку это дает возможность изучать поведение клеток в условиях, приближенных к условиям в организме. Целью нашей работы было изучение поведения клеток в трехмерном коллагеновом геле и оценка их морфогенетического потенциала.

Pages:     | 1 |   ...   | 79 | 80 || 82 | 83 |   ...   | 85 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.