WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 78 | 79 || 81 | 82 |   ...   | 85 |

Аппликация NaHS приводило к снижению силы сокращения полоски миокрада сердца лягушки. Эффект NaHS был обратимым и доза-зависимым. В концентрации 100 мкМ происходило снижение амплитуды сокращения до 92,5±1,21% к 3 мин аппликации и до 75,86±1,66% по отношению к контролю (n=15, p<0,05) к 15 мин аппликации. Блокатор КАТФ-каналов глибенкламид в концентрации 50 мкМ не вызывал изменения силы сокращения полоски миокарда (n=15, p>0,05), что свидетельствует о незначительной роли данного типа каналов в регуляции сократимости миокарда в нормальных условиях. Однако, эффект NaHS на фоне действия изменялся: происходило повышение амплитуды сокращения до 110,17±2,59% (n=9, p<0,05) по отношению к контролю к 3 мин аппликации, затем сила сокращения угнеталась и достигала 76,62±0,866% (n=9, p<0,05), что не отличалось от эффекта NaHS в контроле. Можно предположить множественность мишеней действия H2S на миокард лягушки. В условиях блокирования КАТФ-каналов выявляется двухфазность эффекта NaHS: положительный инотропный эффект вначале аппликации, сопровождающийся снижением силы сокращения. По-видимому, активация КАТФ-каналов H2S не играет ведущей роли в механизме его действия на миокард лягушки.

Работа поддержана грантами РНП No 2.1.1/786, РФФИ 09-04-00748.

Участие внутриклеточных кальциевых депо в регуляции синхронного и асинхронного вызванного освобождения квантов ацетилхолина Хузахметова Венера Фаритовна (Казань, venerik87@mail.ru) Во время ритмической активности, характерной для работы синаптического контакта в условиях in vivo, наблюдаются изменения процесса освобождения квантов медиатора.

При сниженном уровне вероятности освобождения квантов ритмическая стимуляция вызывает увеличение числа синхронно освобождаемых квантов (квантовый состав) в ответ на нервный стимул и возрастание асинхронного освобождения. Эти явления объясняются теорией «остаточного» кальция, который накапливается в нервном окончании в ходе ритмической стимуляции нерва. Однако существование в пресинаптической области кальциевых депо, которые могут регулировать внутриклеточное содержание ионов кальция при участии рианодиновых рецепторов, ставит вопрос об их роли в модуляции вызванного освобождения ацетилхолина. Целью данного исследования было изучение влияния блокирования рианодиновых рецепторов с помощью рианодина и специфического агента ТМВ-8 (изменяющего интенсивность работы внутриклеточных кальциевых депо) на уровень синхронного и асинхронного освобождения квантов ацетилхолина в нервно-мышечном синапсе мыши. С помощью экстраклеточной микроэлектродной регистрации измеряли истинные синаптические задержки одноквантовых токов концевой пластинки в условиях сниженной до 0,5 ммоль/л концентрации ионов кальция при ритмической стимуляции с разной частотой (от 0,5 до 15 Гц). При этом сопоставляли количество квантов, освобождаемых в течение первых 3 мс после развития пресинаптического тока действия, т.е. представляющих синхронную фазу секреции, и количество квантов, задержки которых имели значения в диапазоне от 3 до 50 мс, формирующих асинхронную фазу секреции.

Рианодин, в концентрации 3 мкмоль/л, блокирующей рианодиновые рецепторы, вызывал снижение количества квантов синхронной и асинхронной фаз секреции, однако выраженность этого снижения была разной. Число квантов, освобождаемых в синхронную фазу при редкой частоте стимуляции (0,5 Гц) снизилось на 29,2%, тогда как в асинхронную фазу на 51,5%. Аналогичный эффект имел ТМВ-8 (25 мкмоль/л), снижая синхронное освобождение на 33,1% и асинхронное на 49,2%. При повышении частоты стимуляции двигательного нерва до 15 Гц наблюдалось возрастание как синхронного, так и асинхронного освобождения квантов медиатора: в исходных условиях синхронное освобождение увеличивалось на 18%, а асинхронное на 39%. Под действием рианодина и ТМВ-8 при частоте стимуляции 15 Гц синхронное освобождение уменьшалось на 16,7% и 9,1%, соответственно, тогда как асинхронное на 41,1% и 52,7%. Полученные данные свидетельствуют о том, что кальций, выходящий из внутриклеточных кальциевых депо, принимает участие в обеспечении возрастания уровня синхронной и асинхронной секреции квантов медиатора при ритмической стимуляции двигательного нерва. При этом зависимость асинхронной секреции от активности кальциевых депо более выражена, чем для синхронного выделения квантов медиатора. Поддержано грантами «Ведущая научная школа», РФФИ – 08-04-00923, РФФИ- 09-04-01280, грант президента РФ МК – 2704.2009.4.

Опиоидный нейропептид -эндорфин увеличивает уровень внутриклеточного Ca2+ у ранних эмбрионов мыши Чернов Александр Сергеевич (Пущино, c.h.e.r.n.o.v@rambler.ru) В раннем эмбриогенезе млекопитающих ионы Са2+ имеют большое значение, оказывая влияние на процессы дробления и дифференцировки. Изменение [Са2+] в клетке может быть обусловлено воздействием различных внешних факторов, в том числе гормональных. Одним из таких факторов может быть опиоидный нейропептид -эндорфин. Ранее нами было показано, что -эндорфин оказывает стимулирующее действие на развитие ранних эмбрионов in vitro, повышает жизнеспособность, снижает количество аномально развитых бластоцист. Установлено, что гормон стимулирует развитие 2- и 8-клеточных эмбрионов мыши через неопиоидные рецепторы. Известно, что -эндорфин может взаимодействовать как с опиоидными, так и с неопиоидными рецепторами (не чувствительными к блокатору опиодных рецепторов налоксону). Причем взаимодействие с опиодными рецепторами происходит при участии инозитолфосфатного цикла с быстрым (в течение 100-600 сек) выбросом Са2+ из внутриклеточных депо. Пути передачи внутриклеточного сигнала в клетку через неопиоидные рецепторы -эндорфина в настоящее время не изучены. Поэтому, в данной работе было проведено исследование действия -эндорфина на изменение уровня внутриклеточного Са2+ у ранних эмбрионов мыши.

Объектом исследования были 2- и 8-клеточные эмбрионы мыши. Измерения внутриклеточного уровня Са2+ проводили с помощью флуоресцентного красителя Fluo-3 AM в концентрации 2 М, с использованием двухволнового микрофлуориметра «Радикал ДМФ2». Флуоресценция эмбрионов возбуждалась при длине волны 488нм.

В ходе проделанной работы установили, что добавление -эндорфина (10-7М) приводило к увеличению уровня внутриклеточного Са2+ в 1,5-2 раза по сравнению с начальным уровнем. Причем увеличение происходило быстро, в течение 1,5-2 минут после добавления -эндорфина, а затем наблюдался спад до начальных значений. Показатели уровня внутриклеточного Са2+ в контроле оставались неизменными на протяжении всего времени исследования. Полученные результаты совпадают с литературными данными, и позволяют предположить, что -эндорфин связываясь с опиоидными рецепторами на мембране эмбрионов, активирует выброс Са2+ через инозитолфосфатный путь. При добавлении -эндорфина вместе с налоксоном также наблюдали увеличение уровня внутриклеточного Са2+ в 1,5-2 раза. Однако это изменение происходило плавно, в течение 15-20 минут после добавления -эндорфина,а затем вновь возвращалось к начальному уровню.

Таким образом, -эндорфин, вызывая увеличение уровня внутриклеточного Са2+, стимулирует раннее развитие эмбрионов. Это воздействие осуществляется как через опиоидные, так и через неопиоидные рецепторы -эндорфина. Однако механизм действия через неопиоидные рецепторы до конца не ясен. Поэтому представляется интересным в дальнейшем продолжить изучение внутриклеточной сигнализации -эндорфина.

Влияние даларгина и его структурного аналога на стрессобусловленный сосудистый тонус у крыс линии Wistar Шабалина И.А., Курицын С.Н. (Архангельск, ira_sha@mail.ru) Целью работы была оценка влияния неселективных агонистов - и -опиатных рецепторов на сосудистый тонус в условиях иммобилизационного стресса. Тонус сосудов оценивали методом ревазографии, используя показатели периферического тонуса сосудов (индекс периферического сопротивления, индекс эластичности) На модели стрессорной вазоконстрикции было выявлено, что протективный эффект неселективного агониста - и -опиатных рецепторов даларгина и его структурного аналога (H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-NHEt) на стрессобусловленный рост периферического сосудистого тонуса имеет дозозависимый характер.

Использование даларгина и его структурного аналога в дозе, в которой они не проникают через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ), приводит к снижению стрессобусловленной вазоконстрикции. Причём, увеличение дозы с 10 мкг/кг до 100 мкг/кг ведёт к усилению протективного эффекта. Нарастание дозы пептидов до 1000 мкг/кг (в данной дозе даларгин и его структурный аналог оказывают не только периферический, но и центральный эффект, так как проникают через ГЭБ) приводит к усилению стрессобусловленной вазоконстрикции.

Такое «ускользание» протективного эффекта при превышении оптимальной дозы пептидов характерно для опиоидных пептидов.

Полученные данные свидетельствуют об участии периферических опиатных рецепторов в регуляции сосудистого тонуса при остром стрессе. Оптимальной дозой, в которой проявляется протективный эффект даларгина и его структурного аналога на стрессобусловленную вазоконстрикцию, можно считать дозу 100 мкг/кг.

Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ №08-04-98817. Авторы выражают благодарность за помощь в подготовке материалов д.б.н., проф. Н.А.Бебяковой.

АФК – зависимый путь пуринергического контроля процесса передачи возбуждения в нервно-мышечном синапсе лягушки: роль НАДФ(Н) оксидазы Шаймуратов Р.И., Гиниатуллин А.Р. (Казань, sulla80@mail.ru) Двигательные нервные окончания (НО) содержат большое количество везикул, заполненных молекулами нейромедиатора. Эти везикулы вовлечены в процессы экзо- и эндоцитоза формирующие так называемый везикулярный цикл, который за счет рециклирования синаптических везикул, обеспечивает сохранение высокого уровня секреции медиатора при высокочастотной активности синапса. Аденозинтрифосфорная кислота (АТФ) является широко распространенным ко-медиатором, высвобождаемым в ходе экзоцитоза вместе с основным медиатором (ацетилхолин – в периферических синапсах) в синаптическую щель, и опосредовано через специфические пурино рецепторы (P2Y и P2X семейства) регулирует процесс передачи возбуждения по механизму обратной отрицательной связи.

Ранее, нами было показано что в области нервно-мышечного синапса эффект экзогенной АТФ, выраженный в угнетении секреции медиатора и опосредованный метаботропными P2Y рецепторами, может реализовываться не только путем активации PKC, PLC, PLA2 и эффектом на кальциевые каналы НО, но и через образованием эндогенных активных форм кислорода (АФК), в частности перекиси водорода (H2O2). Целью данного исследования стало выяснение возможной причастности одного из основных источников эндогенных АФК в клетке мембрана-связанной НАДФ(Н) оксидазы к реализации эффекта АТФ.

Эксперименты проводились в осенне-зимний период на изолированных нервно-мышечных препаратах портняжных мышц лягушек (Rana ridibunda) фиксированных в стеклянной ванночке с постоянной перфузией стандартным раствором Рингера (рН 7,2-7,4; 20-23°С) для холоднокровных. Для регистрации токов концевой пластинки (ТКП) при раздражении двигательного нерва (0,05Гц) применяли метод двух-электродной фиксации мембранного потенциала мышечных волокон с использованием стеклянных микроэлектродов. Ранее нами было показано, что аппликация АТФ (100мкМ/л) приводит к угнетению секреции медиатора, проявляющемуся в обратимом снижении амплитуды ТКП. Причем этот эффект имеет пресинаптическую природу. Для решения задачи исследования, мы использовали два различных по характеру действия ингибитора НАДФ(Н) оксидазы аминоэтилбензенсульфонилфлорид (AEBSF) и дифенилен йодониум (DPI). Предварительная инкубация препаратов в растворе содержащим или AEBSF или DPI приводила к существенному ослаблению эффекта АТФ. Так амплитуда ТКП к пятнадцатой минуте аппликации АТФ составляла 85±3% (n=6; p<0,05) и 88±4% (n=5; p<0,05) с предварительной инкубацией в растворе содержащим AEBSF (1000мкМ/л) или DPI (1мкМ/л) соответственно.

Тогда как в контроле амплитуда ТКП при действии АТФ снижалась до to 66±3% (p<0,05;

Mann–Whitney test). С учетом ранее полученных нами данных можно предположить, что одним из звеньев сигнального каскада активируемого метаботропными P2Y рецепторами нервного окончания является НАДФ(Н) оксидаза (как источник эндогенных АФК), активность которой может определяться PKC нервного окончания.

Работа поддержана грантами РФФИ № 08-04-00203 и НШ № 3368.2008.4.

Влияние цитокинов воспаления на миграцию и дифференцировку нейронов, синтезирующих гонадотропин-рилизинг гормон, в онтогенезе млекопитающих Шарова Виктория Сергеевна (Москва, sarovav@mail.ru) Характерной особенностью нейронов, синтезирующих гонадотропин-рилизинг гормон (ГРГ), является их небольшая численность (800-2000), диффузное расположение в гипоталамусе и внемозговое онтогенетическое происхождение. У позвоночных животных большая часть ГРГ-нейронов образуется в пренатальный период из эпителия обонятельных плакод и затем мигрирует в передний мозг. Наряду с основной репродуктивной функцией ГРГ контролирует становление и функционирование иммунной системы. В свою очередь, иммунная система оказывает регуляторное влияние на развитие нейроэндокринной системы.

Известно, что бактериальный эндотоксин липополисахарид (ЛПС) индуцирует синтез провоспалительных цитокинов в иммунной системе матери, а также в различных органах плода, которые оказывают влияние на его развитие. Целью данной работы являлось изучение влияния ЛПС E.coli на миграцию ГРГ-нейронов в онтогенезе крыс и оценка наличия лейкемия ингибирующего фактора (ЛИФ) у мышей.

Исследования проводили на крысах Wistar и мышах линии BALB/c с датированной беременностью. Была подобрана оптимальная доза ЛПС, при введении которой эмбриональная смертность составляла 25-35%. ЛПС вводили внутрибрюшинно крысам в дозе 18 мкг/кг на 12 сут беременности и мышам в дозе 0,12 мкг/г на 8,5 сут беременности.

Pages:     | 1 |   ...   | 78 | 79 || 81 | 82 |   ...   | 85 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.