WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 56 | 57 || 59 | 60 |   ...   | 85 |

Нуклеотидная последовательность, кодирующая белок CrmB, также представлена в геноме вируса оспы коров (ВОК). Ранее было показано, что CrmB ВОК образует димерные формы, в отличие от образующего высокомолекулярные формы CrmB ВНО. Причины показанных различий являются не выясненными. Для установления этих отличий нами впервые выполнена работа по созданию делеционных вариантов белков CrmB ВНО и CrmB ВОК, а также рекомбинантных белков, сконструированных из функциональных доменов белков CrmB ВНО и CrmB ВОК в бакуловирусной системе экспрессии. Ожидается, что некоторые из полученных белков утратят способность к олигомеризации и будут обладать пониженной иммуногенностью относительно CrmB ВНО, но при этом сохранят способность эффективно связывать ФНО. У белка CrmB выделяют SECRET-домен, связывающий хемокины, домен, связывающий ФНО, кроме того, внутри ФНО-связывающего домена выделяют PLAD-домен, предположительно участвующий в олигомеризации. Определение вклада доменов белка CrmB в процесс олигомеризации, определение видоспецифичных отличий и установление биологических свойств и терапевтического эффекта химерных вариантов белков, созданных на основе доменов CrmB ВНО и CrmB ВОК, позволит определить наиболее оптимизированную структуру вирусных белков для создания на их основе более эффективных лекарственных препаратов.

Работа выполнена при поддержке РФФИ (грант 09-04-00055а).

Изучение возможности сборки антигенных комплексов на основе вирусов растений in vitro Трифонова Е.А., Никитин Н.А. (Москва, katecat88@mail.ru) В настоящее время активно разрабатываются подходы для получения вакцин, основанные на презентации антигенных детерминант на поверхности высокомолекулярных носителей.

Эта стратегия обладает рядом преимуществ перед традиционно используемыми вакцинами:

отсутствие реверсии к патогенной форме, высокая иммуногенность, простота хранения, дешевизна.

Целью работы является разработка подходов для сборки антигенных комплексов in vitro на основе вирусов растений. Преимущество использования фитовирусов заключается в отсутствии общих патогенов у растений и человека.

Низкомолекулярные белки не обладают достаточной иммуногенностью, тогда как высокая иммуногенность вирусов и вирусоподобных частиц (ВПЧ) широко известна. Белок оболочки (БО) Х-вируса картофеля (ХВК) способен образовывать ВПЧ с РНК ХВК in vitro, поэтому, было решено использовать его как носитель антигенной детерминанты другого вируса.

В качестве модельной системы были выбраны эпитопы вируса оспы сливы (ВОС).

Получено два варианта рекомбинантных БО ХВК, несущих на N-конце эпитоп ВОС.

В первом случае эпитоп был слит с БО ХВК, у которого были делетированы первые 20 N-концевых аминокислотных остатков. В другом варианте эпитоп был расположен на N-конце полноразмерного БО ХВК. Рекомбинантные белки имели на N-конце шесть аминокислотных остатков гистидина и сайт расщепления протеазой «фактор Ха», который позволил удалить гистидиновые аминокислотные остатки. Белки были очищены методом аффинной хроматографии и обработаны протеазой Ха.

Показано, что полученные белки эффективно реагируют с антисывороткой против ВОС, то есть эпитоп ВОС доступен в составе рекомбинантного БО ХВК.

Методом электронной микроскопии была изучена возможность сборки in vitro рекомбинантных белков с шестью гистидинами и белков, обработанных фактором Ха с РНК ХВК.

На следующем этапе работы рекомбинантные белки были экспонированы на поверхности структурно модифицированных частиц вируса табачной мозаики (ВТМ), ранее полученных в нашей лаборатории. Посадка белка на вирусную частицу происходила за счет электростатического взаимодействия. С помощью специфических антител к ВОС и вторичных антител, конъюгированных с флюорофором, методом флуоресцентной микроскопии было показано, что рекомбинантные БО ХВК, содержащие эпитоп ВОС, полностью покрывают структурно модифицированную частицу ВТМ. При этом эффективное взаимодействие антисыворотки против ВОС с полученными комплексами свидетельствует о сохранение антигенных свойств эпитопов ВОС при их презентации на структурно модифицированных частицах.

Исследована возможность получения специфических антител к ВОС с использованием ВПЧ ХВК и нанокомплексов структурно модифицированных частиц ВТМ с полученными рекомбинантными белками.

Подобные антигенные комплексы можно использовать в качестве вакцин, а также для получения дешевых антител для диагностики заболеваний человека, животных и растений.

Двухкомпонентная система сигнальной трансдукции ResDE участвует в регуляции экспрессии гена гемолизина II цереусной группы микроорганизмов Шапырина Екатерина Валерьевна (Пущино, epoxidka@rambler.ru) Bacillus cereus – грам-положительные спорообразующие бактерии, условно-патогенные для человека. Некоторые штаммы B. cereus могут вызывать пищевые отравления, посттравматические инфекции, а также другие заболевания. Патогенные свойства B. cereus определяются синтезом многочисленных белковых токсинов, которые различаются по механизму действия: Одним из таких потенциальных факторов патогенности представителей группы Bacillus cereus является гемолизин II (hlyII), токсин, относящийся к классу порформирущих токсинов. Описано, что его экспрессия контролируется собственным транскрипционным регулятором HlyIIR, а также Fur – регулятором метаболизма железа и патогенности. Недавно в промоторной области гена гемолизина II была выявлена последовательность, узнаваемая ResD – транскрипционным регулятором редокс-чувствительной системы сигнальной трансдукции ResDE. Эта двухкомпонентная система участвует в регуляции генов при анаэробном росте и регуляции генов метаболизма углеводов, а также в биосинтезе энтеротоксинов Bacillus cereus – hblC, nhe, а так же участвует в регуляции транскрипции гена капсулы – capA Bacillus anthracis.

На основе исследований штаммов цереусной группы, предсатавленной в коллекции ВКМ, а также анализа геномов, представленных в базе GenBank, нами было выявлено два типа промоторно-операторных областей hlyII. Это- PRD-, которые характерны для B. anthracis и B. cereus с патогенными свойствами, и PRD+, характерные для микроорганизмов, выделенных из почвы и насекомых. Проведены эксперименты in vivo на модели Bacillus subtilis по изучению экспрессии транскрипционных фьюжнов двух групп промоторнооператороных областей hlyII и бета-галактозидазы. В ходе этих исследований было показано, что ResD является негативным транскрипционным регулятором для гена hlyII PRD+ в аэробных условиях.

Были проклонированы генетические детеминанты гена resD и resE двухкомпонентной системы B. cereus АТСС 14579. С помощью металл-хелатной хроматографии получены препараты рекомбинантных белков ResD и ResE. Проведены эксперименты по взаимодействию продукта регуляторного гена resD в фосфорилированной и нефосфорилированной форме с двумя типами промоторно-операторных областей гена hlyII.

Cоздана транскрипционная система in vitro, включающая промоторы гена гемолизина II и отдельные субъединицы РНК-полимеразы B. сereus для выяснения детальных механизмов регуляции транскрипции.

Выражаю глубокую признательность моему научному руководителю Александру Сергеевичу Солонину, а также Шадрину Андрею.

ПОДСЕКЦИЯ «НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ И ФИЗИОЛОГИЯ ВНД» Нейрофизиологические механизмы взаимодействия сенсорных и моторных компонентов ССП в зависимости от сложности сенсомоторной реакции Айдаркина Екатерина Сергеевна (Ростов-на-Дону, aydkate@mail.ru) Взаимодействие моторный и сенсорных компонентов ССП представляет особый интерес в рамках изучения взаимосвязи между перцептивными и двигательными процессами, а также роли внимания при формировании сенсомоторной интеграции (Айдаркин, 2007;

Славуцкая, Моисеева, Шульговский, 2008; Andersen, Cui, 2009). В современных исследованиях премоторные компоненты с фокусом максимальной выраженности в лобных отведениях связывают с процессами подготовки двигательной реакции с участием внимания и памяти (Brunia et al., 2001). Активация внимания обеспечивается взаимодействием неспецифических таламо-фронтальной и таламо-париетальных систем, оказывающих модулирующие влияния на анализ сенсорной информации на уровне таламуса (Posner, 1990).

Целью работы было изучение взаимоотношений сенсорных и моторных компонентов ССП при произвольных нажатиях и сенсомоторных реакциях различной сложности.

В исследовании приняли участие 14 студентов ЮФУ в возрасте от 20 до 30 лет. В качестве зрительных стимулов применялись вспышки, для слуховой стимуляции использовались щелчки. Испытуемые выполняли 1) произвольные нажатия правой рукой с интервалом 2 с;

2) простая аудиомоторная реакция (ПАМР); 3) простая зрительно-моторная реакция (ПЗМР);

4) go-noGo тест на звуковые стимулы различной длительности; 5) сложная сенсомоторная реакция (ССМР). Вычислялись суммарные моторные ССП и на их основе изопотенциальные карты.

Анализ конфигурации моторных ССП показал, что двигательная реакция в виде негативно-позитивно-негативного комплекса с фокусом в лобно-центральных отведениях развивалась на фоне негативных (ПАМР, Go-noGo), либо позитивных (ПЗМР, ССМР) колебаний, связанных с анализом стимула. Усложнение задачи сопровождалось ростом амплитуды премоторной негативной волны, обеспечивающей подготовку двигательной реакции и анализ стимула. Анализ динамики изопотенциальных карт моторных ССП при произвольных нажатиях правой рукой показал, что подготовка движения сопровождалась формированием потенциала готовности (ПГ) с фокусом максимальной выраженности в левой центральной области, что связано с его контралатеральным доминированием (Shibasaki et al., 2006), а также с преимуществом левого полушария в контроле над двигательной сферой, процессами прогнозирования и моторного внимания (Брагина, Доброхотова, 1988; Omori, 1991; Rushworth et al., 2003). Далее следовал негативный моторный потенциал (МП). Следовавший за ним позитивный фокус (125-200 мс) соответствовал постмоторной позитивности (ПМП), которая была связана с процессами релаксации коры (Сui et al., 1999). Одновременная активация теменно-затылочной области отражала механизм коррекции текущей двигательной программы после выполнения движения. Вероятно усложнение сенсомоторной реакции, связанное с ростом премоторной негативности, обеспечивается дополнительной активацией таламо-фронтальной системы внимания, совместно с активацией стриарно-таламо-корковой петли, регулирующей активность лобных двигательных областей (Alexander et al., 1990).

Пролиферация клеток, нейрональная дифференцировка и гибель нейронов в мозге крыс при судорожной активности Аниол Виктор Александрович (Москва, aniviktor@narod.ru) Нарушения постнатального нейрогенеза наблюдаются при многих патологических состояниях мозга человека и животных. Одним из наиболее распространенных заболеваний, сопровождающихся дегенерацией и гибелью нейронов, а также нарушениями постнатального нейрогенеза, является эпилепсия. Удобным экспериментальным подходом к исследованию механизмов изменений, связанных с эпилепсией, является пентилентетразоловый киндлинг (ПТЗК). Мы использовали ПТЗК для изучения соотношения процессов нейродегенерации, пролиферации и дифференцировки клеток в мозге при развитии судорожной активности.

Хроническое введение крысам пентилентетразола (ПТЗ) в субконвульсивной дозе (37,5 мг/кг) приводило к постепенному усилению судорожной активности животных в ответ на каждое последующее введение ПТЗ. Начальные этапы ПТЗК не сопровождались выраженными морфологическими изменениями в гиппокампе, однако по мере увеличения числа инъекций ПТЗ и усиления судорожной активности нарастали проявления нейродегенерации, проявлявшиеся в увеличении числа дистрофичных нейронов и снижении общей нейрональной плотности в гиппокампе.

Для оценки интенсивности пролиферации мы использовали анализ включения бромдезоксиуридина (BrdU) в клетки мозга крыс. После 1 инъекции ПТЗ происходило существенное снижение числа BrdU-позитивных клеток в герминативных областях мозга крыс – в субвентрикулярной зоне (СВЗ) и в зубчатой фасции (ЗФ) и поле СА4 гиппокампа.

Дальнейшее развитие ПТЗК и усиление судорожной активности приводило к восстановлению числа BrdU-позитивных клеток в этих герминативных зонах. Введение ПТЗ в дозе 80 мг/кг сопровождалось развитием выраженных судорог и приводило к увеличению числа BrdU-позитивных клеток в СВЗ и ЗФ, что позволяет говорить о связи силы судорожной активности и интенсивности пролиферации клеток в мозге крыс.

Развитие ПТЗК приводило к усилению экспрессии даблкортина в гиппокампе, что может свидетельствовать об усилении гиппокампального нейрогенеза на поздних этапах ПТЗК.

Одним из механизмов, который может регулировать процессы пролиферации и дифференцировки клеток в мозге крыс, является оксид азота (NO). В связи с этим мы изучали экспрессию нейрональной изоформы синтазы оксида азота (nNOS) в мозге крыс при развитии ПТЗК. Число nNOS-позитивных нейронов снижалось в новой коре и в гиппокампе животных на поздних этапах ПТЗК. Кроме того, уменьшалось содержание мРНК nNOS.

Обнаруженные изменения экспрессии nNOS могут отражать вклад нитрергической системы в регуляцию процессов пролиферации и дифференцировки клеток в мозге при развитии судорожной активности. Исследование поддержано грантами РФФИ, РГНФ и программы ПРАН Фундаментальная медицина.

Видеоокулография и электроэнцефалография в исследованиях языковых функций Анисимов Виктор Николаевич (Москва, v_anisimov@rambler.ru) В работе описан метод регистрации движений глаз и ЭЭГ у человека во время чтения.

Уникальность метода состоит в том, что регистрация электроэнцефалограммы одновременно с видеозаписью движений глаз открывает возможность анализа зрительно-моторной деятельности и сопровождающих ее физиологических параметров, отражающих функциональное состояние головного мозга, в любой момент времени. Фиксация видеоизображения глаза с высоким временным разрешением даёт возможность анализа глазодвигательных паттернов во время чтения с высокой точностью, а также их сопоставления с ЭЭГ. Показана возможность анализа изменения в ЭЭГ человека при прочтении им предложений, содержащих синтаксическую неоднозначность. Также рассматриваются варианты оценки динамики движений глаз при чтении таких предложений.

Приводятся данные, количественно описывающие глазодвигательные паттерны человека во время чтения.

Pages:     | 1 |   ...   | 56 | 57 || 59 | 60 |   ...   | 85 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.