WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 49 | 50 || 52 | 53 |   ...   | 85 |

Нами проведены микробиологические исследования экстремальной по физико-химическим параметрам среды обитания, а именно застарелого углеводородного отхода (бурового шлама), а также незагрязненных почв в районе нефтедобычи, подверженных тем не менее высокой антропогенной нагрузке (почвы с промышленных площадок). Контролем служила лесная почва в сходном экотопе. Согласно результатам высева на плотные питательные среды, микробное сообщество шлама характеризуется наименьшим среди исследованных образцов почв разнообразием микромицетов (идентифицировано 4 морфотипа по сравнению с 9-13-ю морфотипами в почвах с промышленных площадок) и полным отсутствием культивируемых мицелиальных актиномицетов. При этом общая численность аэробных гетеротрофных бактерий в шламе выше, чем в лесной почве, и сравнима с численностью аэробных гетеротрофов в почвах с промышленных площадок (3,5·106 КОЕ / г сухого шлама против 1,8·106 КОЕ / г сухой лесной почвы). Отсутствие метаболически активных представителей автохтонной почвенной биоты (таких, как актиномицеты, играющие ключевую роль в гумусообразовательных процессах и разложении труднодоступной органики) в шламе на фоне высокой численности других групп микроорганизмов может свидетельствовать о низком потенциале высокозагрязненных почв к биологическому и физико-химическому восстановлению. С другой стороны, установление и устранение возможных причин низкого разнообразия мицелиальных организмов в таких биоценозах (механическая деградация почвы, отсутствие вегетационного покрова в местах нефтедобычи, крайне высокий уровень гидрофобного углеводородного загрязнения) будет способствовать разработке технологий ремедиации.

Резистентность Lactobacillus spp. к желчному шоку Тыныбаева Индира Кажымухановна (Казахстан, Астана, indiara@mail.ru) В настоящее время применение пробиотических препаратов и продуктов является наиболее перспективным при профилактике и лечении различных заболеваний. Поступая в организм пробиотические микроорганизмы подвергаются действию различных стрессовых факторов, поэтому важным критерием отбора является их выживаемость. В тонкой кишке пробиотики подвергаются воздействию желчных кислот и панкреатических ферментов.

Вследствие этого многие микробы почти полностью погибают. Это может объясняться усилением проницаемости клеточной мембраны бактерий, которое возникает в ответ на воздействие желчных кислот. Выживание же большинства бактерий зависит от того, каким образом они принимаются: в защитной капсуле, в виде йогурта, с молоком или без всякой защиты. Так, согласно Kailasapathy К., многие штаммы, например, лактобациллы из кисломолочных продуктов либо не достигают кишечника, либо выживают в нем только в течение нескольких дней.

Желчные кислоты являются амфипатическими молекулами и играют важную роль в усвоении жиров и поглощении растворимых в жирах витаминов. Концентрация желчных кислот в тонком кишечнике человека находится в диапазоне от 0,2 до 2%. Настоящая работа выполнена на 13 штаммах L.casei, выделенных из кумыса, айрана, шубата, и являющихся уникальными, что было подтверждено с использованием метода мультилокусного секвенс типирования. В качестве контрольной группы использовались штаммы L.fermentum, L.helveticus, L.casei, L.fermentum ATCC 9338 из фонда Республиканской коллекции микроорганизмов Казахстана.

Резистентность к желчному шоку исследовали с использованием 0,3% желчи. Культуры в стадии лаг-фазы с оптической плотностью OD600 0,5 подвергали действию 0,3% желчи, инкубировали в течении 30 минут при комнатной температуре, и затем инокулировали на МРС-агар в разведениях 103–109. Учет результатов проводился через 48 часов. Аналогично проводили контрольный опыт, без воздействия желчи.

В результате было установлено, что у 18 культур имеется резистентность, которая составила 103–106, у оставшихся 5 культур имеется чувствительность к действию желчи.

При этом показатели резистентности контрольных штаммов L. fermentum составили – 104, L.helveticus – 104, L.fermentum ATCC 9338 – 104, L.casei – 106, а из числа уникальных штаммов L.casei, 2 продемонстрировали высокую резистентность 105.

Наряду с резистентностью к действию желчи, для пробиотических микроорганизмов важным является сохранение их функциональных характеристик. Основными пробиотическими свойствами являются адгезивная активность, антагонизм по отношению к условно-патогенной и патогенной флоре, устойчивость к действию антибиотиков и антиоксидантные свойства. Нами проводятся работы по исследованию вышеуказанных свойств с использованием технологии real-time PCR анализа генов ldh, ccpA, mucus adheson gene.

Lactococcus lactis subsp. lactis 194 – продуцент антибиотического комплекса широкого спектра действия Устюгова Екатерина Александровна (Москва, ustyugova.katya@mail.ru) Молочнокислые бактерии имеют большое значение в хозяйственной деятельности человека в связи с их способностью образовывать метаболиты, обладающие антибиотическими свойствами. К антимикробным веществам, образуемыми бактериями Lactobacillus, Lactococcus, Pediococcus, являются органические кислоты, диацетил, гидроксипропионовый альдегид и ингибиторы пептидной природы – бактериоцины. Штаммы, принадлежащие к роду Lactococcus, как правило, являются продуцентами большого разнообразия бактериоцинов, широко используемых в качестве биоконсервантов. Известны лактицин 3147, лактицин 481, лактококцин 140, низины (A, B, C, D, E, Z, R, Q). В пищевой промышленности широко используют препарат «Nisaplin», активным веществом которого является низин А.

Выделенный нами из коровьего молока Бурятии штамм L. lactis ssp. lactis 194 обладал широким спектром антимикробного действия: подавлял рост грамположительных бактерий, в том числе и термостойкие споровые, кислотоустойчивые бактерии Bacillus coagulans, а также грамотрицательных – Esherichia сoli, Comamonas terrigena, грибов рода Aspergillus.

В популяции штамма присутствовали колонии двух типов, различающиеся по уровню антибиотической активности на 15%. Штамм 194 образовывал сложный антибиотический комплекс, состоящий из четырех биологически активных веществ (А,В,С,D). Отдельные компоненты комплекса различались по хроматографической и электрофоретической подвижности, растворимости и спектру антимикробного действия. Компонент 194-А являлся гидрофобным высокомолекулярным веществом, содержащим ароматические и алкильные группы, и не имел аналогов в компьтероной базе данных биологически активных веществ (Database I.Berdy). Этот компонент был активен в отношении грамположительных и некоторых грамотрицательных бактерий. Компонент 194-C являлся гидрофильным веществом, обладающим фунгицидным действием. По химической природе компонент 194-D – пептид, но отличается от низина А, продуцируемого многими штаммами Lactococcus lactis, по ряду физико-химических свойств. Компонент 194-B является минорным веществом этого антибиотического комплекса.

Очистка Х-вируса картофеля и приготовление антисыворотки Файзиев В.Б., Хусанов Т.С. (Узбекистан, Ташкент, vaxid@inbox.ru) При помощи индикаторных методов с использованием Gomphrena globolsa (некротическое симптомы) и Datura stramonium (системная реакция-мозаика), контролированием иммуноферментным анализом (фирма CIP) из местного сорта картофеля «Дияра» выявлен ХВК. Перезаражением через мононекроз ХВК накопили на растениях D. stramonium.

Очищенные препараты ХВК получили из листьев, зараженных вирусом растений D. stramonium. Для этого взяли 500 г мозаичных листьев дурмана (D. stramonium), гомогенизировали в присутствии 0,1 М фосфатного буфера содержащий 0,01 М ЭДТА и натрий тиосульфата, рН 7,5. Полученный гомогенат центрифугировали в течение 20 минут при 8000 об./мин. Надосадочную жидкост обрабативали 1/8 хлороформом и снова центрифугировали. Вирус из надосадочной жидкости осаждали 4% полиэтиленгликолом (ПЭГ) с м.м. 6000 и 4% NaCl. Через час вирусный осадок отделили центрифугированием при 8000 об./мин. в течение 20 минут. Полученный частично очищенный препарат подвергали гельфильтрации на колонке, в котором верхняя часть заполнена сефадексом (G-200), а нижняя с 3% агаром. В процессе гельфильтрации вирус элюировался в свободном объёме, а пигментированные клеточное компоненты во втором элюиционном пике. Полученные пиковые фракции тестировали на инфекционность. Первый пик содержал инфекционные вирусные частицы, о чём свидетельствовали некрозы на G. globolsa. Пиковые фракции снова концентрировали ПЭГ (м.м. 6000). При спектрофотометрировании вирус поглощала УФ максимум при 260 нм, минимум 240 нм, соотношение 260/ 280 было равно 1,2.

Выход вируса из 1 кг заражённого материала составляет 1,35 мг. Полученный вирусный препарат использовали для приготовления антисыворотки путём иммунизации кроликов пароды Шиншилла. Иммунизировали кроликов введением очищенного препарата ХВК внутримышечно с адъювантом Фрейнда, всего было введено 20 мг вируса в каждого кролика. Титр полученной антисыворотки был равен 1:16 при постановке двойной диффузии по Ухтерлони.

Влияние симбиотических инокулянтов на микробное сообщество ризосферы Medicago sativa Федоренчик Анастасия Александровна (Белоруссия, Минск, ar7nica@mail.ru) В условиях интенсивного земледелия перспективным способом повышения урожайности многолетних бобовых трав является инокуляция растений высокоэффективными штаммами симбиотических микроорганизмов, таких как клубеньковые бактерии и арбускулярные микоризные грибы (АМГ) и их симбиотрофными ассоциациями. Клубеньки бобовых растений способны усваивать за вегетацию до 125-480 кг/га азота воздуха. Это обеспечивает высокие урожаи дешевого растительного белка без применения дорогостоящих и экологически небезопасных минеральных азотных удобрений.

Цель настоящей работы состояла в изучении влияния штамма клубеньковых бактерий Sinorhizobium meliloti S3, арбускулярных микоризных грибов (субстратно-корневой инокулюм) и их ассоциации, интродуцированных в ризосферу люцерны посевной, на состав микробного сообщества. В начале сезона до посева люцерны изучали количественный состав и структуру сапрофитного микробного сообщества почвы опытных делянок. В ходе исследования определяли численность микроорганизмов группы азота (олигонитрофильные, аммонифицирующие, в том числе спорообразующие аммонификаторы; усваивающие минеральные формы азота, в том числе актиномицеты), фосфатмобилизующих микроорганизмов и микроскопических грибов. Общая биогенность почвы до посева составила 4,33·107 КОЕ/г абс. сух. почвы с преобладанием микроорганизмов группы азота.

Дальнейший отбор образцов почвы производился на стадиях первого тройчатого листа, стеблевания и ветвления.

Изучение функционирования микробоценоза дерново-подзолистой почвы в условиях мелкоделяночного опыта показало, что интродукция АМГ и S. meliloti S3 оказывает положительное влияние на общую биогенность ризосферы на протяжении всего периода вегетации. Общая численность микроорганизмов была максимальна в варианте с обработкой S. meliloti S3 в фазу первого тройчатого листа и составила 7,01·107 КОЕ/г абс. сух. почвы, в фазе стеблевания в варианте с совместной обработкой АМГ и клубеньковыми бактериями она равнялась 7,79·108 КОЕ/г абс. сух. почвы, а в фазе ветвления общая биогенность была практически одинакова во всех вариантах с обработкой симбиотическими микроорганизмами и достигала 2,5·107 КОЕ/г абс. сух. почвы. Преимущество в развитии имели следующие группы микроорганизмов: аммонифицирующие, усваивающие минеральный азот и олигонитрофильные. В конце периода наблюдения за ростом и развитием люцерны в условиях полевого опыта снижалась температура почвы, что в значительной степени отразилось на численном составе микроорганизмов отдельных эколого-трофических групп.

Таким образом, использование симбиотических инокулянтов (S. meliloti S3 и АМГ) при возделывании люцерны M. sativa увеличивает количество микроорганизмов различных эколого-трофических групп в ризосфере, что приводит к повышению общей биогенности.

Влияние горизонтального переноса генов на разнообразие клубеньковых бактерий, вступающих в симбиоз с чиной весенней (Lathyrus vernus (L.) Bernh.) Халитова Ляйсан Халиловна (Уфа, andr0002@list.ru) Ранее сотрудниками лаборатории молекулярной биологии и биотехнологии ИБГ УНЦ РАН на территории Республики Башкортостан (РБ) была обнаружена популяция чины весенней, вступающей в симбиоз преимущественно с бактериями Rhizobium tropici (больше 90%), на долю Rhizobium leguminosarum, обычного симбионта данного растения приходилось менее 10%. Остальные исследованные популяции данного растения на территории РБ вступали в симбиоз только с Rhizobium leguminosarum. Rhizobium tropici является симбионтом фасоли, и симбиоз данных бактерий с чиной весенней только в отдельно взятой популяции растений вызывает некоторый интерес. В настоящее время описано большое количество случаев, когда за счет горизонтального переноса симбиотических генов бактерии меняли не только свою специфичность, но даже из несимбиотических превращались в симбионты бобовых растений. Для проверки предположения участия процесса горизонтального переноса генов при образовании симбиоза между чиной весенней и Rhizobium tropici мы провели сравнительный анализ генов nifD и nifH. В начальном этапе анализ проводили методом ПЦР-ПДРФ. По результатам данного анализа с использованием трех мелкощепящих эндонуклеаз рестрикции было обнаружено, что размеры и расположение рестрикционных фрагментов на электрофореграмме были идентичны. Исходя из этого можно было сделать предположение, что превичные структуры исследуемых генов у Rhizobium leguminosarum и Rhizobium tropici идентичны, или имеют незначительные отличия. Для более точного сравнения последовательностей генов nifD и nifH у исследуемых штаммов Rhizobium leguminosarum и Rhizobium tropici данные последовательности были секвенированы. При сравнительном анализе полученных последовательностей были обнаружены определенные отличия в нуклеотидной последовательности как между генами nifD, так и между генами nifH.

Но тем не менее, филогенетический анализ показал, что секвенированные последовательности генов nifD и nifH у исследуемых штаммов Rhizobium tropici родственно более близки к таковым последовательностям Rhizobium leguminosarum, чем Rhizobium tropici. Таким образом, можно предположить, что именно за счет горизонтального переноса генов между Rhizobium leguminosarum и Rhizobium tropici последние стали способны вступать в симбиоз с чиной весенней.

Aliivibrio logei KCh1 (изолят Камчатка):

Pages:     | 1 |   ...   | 49 | 50 || 52 | 53 |   ...   | 85 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.