WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 48 | 49 || 51 | 52 |   ...   | 85 |

В результате скрининга 172 изолятов, 38 из них показали высокую липолитическую активность на всех трех средах. Их липазная активность составила 19,7-25,0 ЕД/мг общего белка, и на основании чего данные штаммы были отобраны для следующей серии экспериментов. При их культивировании меняли следующие условия: температуру (в диапазоне от 25°C до 45°C, pH-среды (от 4 до 9), время культивирования составляло 12-72 часа. Состав питательной среды изменяли введением: глюкозы, мальтозы, галактозы, лактозы, сахарозы, ксилозы, фруктозы, арабинозы, сорбитола и маннитола в качестве источника углерода и дрожжевого экстракта, желатины, мочевины, хлорида аммония, нитратов калия и аммония, как азот-содержащих соединений. Субстратам липаз являлись глицерин, подсолнечное, оливковое и кукурузное масла.

Установлено, что активность липаз в наибольшей степени зависит не от типа углевода и азотсодержащего соединения в составе питательной среды, а от условий культивирования.

Наилучшими вариантами являются: 32°C-42°C, pH-среды 7-9 и время 24-30 часов.

Добавление оливкового масла в качестве специфического субстрата позволило значительно увеличить показатель липолитической активности. Автор выражает признательность к.м.н. Ануарбековой С.С. и к.х.н. Хасенову Б.Б. за помощь в подготовке тезисов.

Эффекты бактериальных ауторегуляторов на характеристики окислительного взрыва нейтрофилов при фагоцитозе Свиридова Татьяна Геннадьевна (Оренбург, kobtg@yandex.ru) В процессе своей жизнедеятельности бактерии вырабатывают ряд низкомолекулярных веществ – внеклеточных ауторегуляторов, обеспечивающих межклеточную коммуникацию.

Биологическая функция факторов группы алкилоксибензолов АОБ заключается в индукции перехода клеток в метаболически неактивные формы. Молекулы группы гомосеринлактонов ГСЛ обеспечивают проявление «чувства кворума». Универсальный характер взаимодействия АОБ и ГСЛ с биополимерами допускает возможность проявления их биологических эффектов в отношении эукариотических клеток. Целью данной работы стало исследование возможных эффектов бактериальных ауторегуляторов на характеристики окислительного взрыва нейтрофилов при фагоцитозе.

В качестве материалов исследования использовались химические аналоги АОБ и ГСЛ с длиной углеводородного радикала 1, 6 и 12 атомов. Оценку хемилюминесценции проводили измеряя степень свечения нейтрофилов при фагоцитозе. При этом, фракцию выделенных клеток инкубировали с ауторегуляторными факторами в концентрациях 5·10-5, 5·10-6, 5·10-7, 5·10-8, 5·10-9 моль/л. Жизнеспособность фагоцитов изучали путем подсчёта в камере Горяева после окраски трипановым синим. Для оценки прямых про– и антиоксидантных свойств ауторегуляторов использована бесклеточная система «H2O2–пероксидаза–люминол–ауторегуляторный фактор».

Показано, что все ауторегуляторные факторы дозозависимо уменьшали уровень активности нейтрофилов при повышении их концентрации в системе, а с увеличением длины углеводородного радикала в структуре молекулы усиливалась их способность снижать степень активации фагоцитов. Объяснение подобных результатов потребовало проведения серии экспериментов по изучению про– и антиоксидантных свойств ауторегуляторов. Показано, что АОБ в зависимости от концентрации проявляют как про–, так и антиоксидантные свойства. При этом свойства антиоксиданта в более выражены у С1–АОБ. Для ряда концентраций С6–ГСЛ и С12–ГСЛ показано прооксидантное действие.

Наличие подобных свойств данных молекул никак не объясняет и даже противоречит их способности гасить респираторный взрыв при фагоцитозе у нейтрофилов, в связи с чем была дана оценка влияния АОБ и ГСЛ на жизнеспособность нейтрофилов в тестах с трипановым синим. Выявлено, что внесение в их систему значимо повышает процент гибели клеток.

Таким образом, проведенные экспериментальные исследования позволили констатировать наличие у АОБ и ГСЛ способности подавлять функциональную активность нейтрофилов, что не связано с собственными антиоксидантными эффектами АОБ и ГСЛ, но частично может быть объяснено развивающейся в этих условиях гибелью фагоцитирующих клеток.

Молекулярно-филогенетический анализ азотфиксирующих микроорганизмов, населяющих шлам химического производства Соловьева В.В., Григорьева Т.В. (Казань, solovyovavv@gmail.com) Биологическая фиксация азота – уникальная способность азотфиксирующих микроорганизмов. Способность к азотфиксации даёт возможность прокариотам существовать в экологических нишах с крайне низким содержанием азота. Играя важную роль в развитие природных экосистем в качестве первичных продуцентов биологическидоступного азота, азотфиксаторы распространены повсеместно, от арктических льдов до геотермальных источников, и представлены во всех группах прокариот. Однако устойчивость азотфиксаторов к ксенобиотикам и присутствие их в антропогенных экологических нишах недостаточно исследованы. Обнаружение специфических генов азотфиксации, в частности nifH (кодирующего малую субъединицу нитрогеназного комплекса), с помощью молекулярно-генетических методов широко применяют в исследовании данной группы микроорганизмов.

Цель нашей работы – анализ сообщества азотфиксирующих микроорганизмов, обитающих в экстремальных условиях углеводородного шлама химического производства предприятия ОАО «Казаньоргсинтез».

Для оценки аборигенного сообщества пробы отбирали из толщи депонированного отхода на глубине около 1 м. Общую ДНК выделяли из шлама с помощью фенольной экстракции.

Исследование сообщества азотфиксаторов шлама проводили по специфическому гену азотфиксации nifH с использованием универсальных праймеров, предложенных Widmer с соавторами (1999) для почвенных азотфиксаторов. Продукты ПЦР-амплификации клонировали в плазмидный вектор. Нуклеотидную последовательность клонированных фрагментов гена nifH определяли с помощью автоматического секвенирования.

Анализ полученных нуклеотидных последовательностей индивидуальных клонов свидетельствует о низком разнообразии сообщества шламовых азотфиксаторов. Среди созданной нами библиотеки клонов обнаружено всего 6 различных фрагментов гена nifH, среди которых не выявлено сходства с почвенными микроорганизмами. Более того, сопоставление нуклеотидных последовательностей фрагментов гена nifH показало низкую степень идентичности с какими-либо описанными ранее азотфиксирующими микроорганизмами. Однако филогенетический анализ позволил классифицировать подавляющее большинство аборигенных азотфиксаторов как узкую группу близкородственных организмов, принадлежащих к гамма-протеобактериям.

Полученные результаты свидетельствуют об уникальности азотфиксирующих организмов, населяющих химический углеводородный шлам. В дальнейшем мы планируем продолжить исследования по определению видовой принадлежности этих микроорганизмов и их физиолого-биохимических свойств.

Авторы выражают благодарность к.б.н, Ph.D. Ризванову А.А. и д.б.н. Наумовой Р.П.

за научное руководство, помощь в проведении экспериментов и подготовке тезисов.

Плотностно-зависимые эффекты в голодающей популяции энтеробактерии Pectobacterium atrosepticum SCRI при окислительном стрессе и повышенной температуре Сорокина Ю.В., Хусаинов И.Ш., Даминова А.Г. (Казань, yljka@mail.ru) К настоящему времени практически неизученными остаются механизмы персистенции бактериальных популяций низкой плотности. Выяснение стратегии выживания в природных условиях патогенных микроорганизмов представляется актуальным с точки зрения контроля над распространением инфекций. В настоящей работе нами исследованы особенности адаптации популяций энтеробактерии P. atrosepticum SCRI 1043 к стрессу, вызванному голоданием, с различным исходным титром бактерий, а также устойчивость голодающей культуры к окислительному стрессу и воздействию повышенной температуры.

Показано, что в условиях голодания по углероду и фосфору, титр культур P. atrosepticum SCRI 1043, инокулированных до 105 клеток/мл, повышался до значений 5·105 – 1·106 КОЕ/мл в течение первых трех дней. При высоком исходном титре 108 клеток/мл наблюдалось снижение показателей КОЕ, и достигала тех же значений. Параллельно с высевом КОЕ пробы отбирали на количественный ПЦР-анализ. Тенденции, выявленные при определении КОЕ голодающих культур, нашли свое подтверждение и по результатам ПЦР-анализа.

Показатели КОЕ/мл стабилизировались на уровне около 106 клеток/мл, независимо от исходного титра.

Электронная микроскопия показала, что клетки, инкубированные на безуглеродной среде, имеют более округлую форму и меньший размер по сравнению с вегетативными клетками.

В голодающих культурах, с высоким исходным титром 108 клеток/мл, присутствовали лизированные клетки. В то же время в культурах с низким исходным титром КОЕ (104 клеток/мл), мы наблюдали делящиеся клетки.

Установлено, что голодающие культуры с высоким начальным титром обладают повышенной устойчивостью к окислительному стрессу, вызванному 0,01% перекисью водорода, и воздействию повышенной температуры (50°С), в то время как при голодании с низким начальным титром наблюдается снижение устойчивости бактерий к указанным факторам.

Таким образом, в условиях голодания в популяциях P. atrosepticum SCRI реализуются различные стратегии выживания в зависимости от исходной плотности популяции. При высокой начальной плотности в голодающих культурах снижается количество вегетативных клеток за счет процессов автолиза и, вероятно, образования покоящихся форм, тогда как при низкой исходной плотности происходит увеличение численности популяции в результате клеточного деления, сопряженного с редукцией размеров бактериальных клеток.

Исследование способности адамантансодержащих веществ угнетать образование биоплёнки S.aureus Стрелец Т.И., Гриневич С.В. (Украина, Киев, TetianaStrelets@gmail.com) Одной из актуальных проблем медицины является профилактика и лечение заболеваний, обусловленных биопленками. Биопленки, в том числе сформированные стафилококками, развиваются на медицинских имплантантах, колонизируют медицинский инструментарий, вызывают заболевания различных органов и систем, нередко с летальным исходом, в связи с их резистентностью к антимикробным препаратам.

Цель работы – изучить способность адамантансодержащих соединений ЮК-21, ЮК-50, ЮК-86 и ЮК-97 предотвращать формирование биопленок клиническим штаммом S.aureus 155. Производные адамантана синтезированы в Институте органической химии НАН Украины канд. фарм. наук Ю.В. Коротким. Штамм S.aureus 155 выделен от больного гнойно-восполительным процессом.

Способность производных адамантана нарушать образование биопленок изучали в пластиковых планшетах для иммуноферментного анализа. Минимальные подавляющие концентрации (МПК) соединений определяли методом серийных микроразведений в жидкой среде Мюллера-Хинтон. Для определения пленкообразования суточную культуру стафилококка (плотность инокулята 107 КОЕ/мл), выращенного на среде Мюллера-Хинтон, вносили в лунки, содержащие питательную среду и адамантансодержащие вещества в концентрациях 0,5 МПК, 1МПК, 2,5 МПК и 5МПК. Планшеты инкубировали на протяжении 24 ч при 37°С. После инкубации содержимое лунок удаляли, вносили 0,1% р-р генцианвиолета и выдерживали при комнатной температуре 45 мин. После трехкратного промывания лунок дистиллированной водой в них вносили 200 мкл 96% этанола для экстракции красителя. Через 45 мин интенсивность окрашивания спирта регистрировали на ридере (ELX808, Biotek, США).

Проведенные эксперименты показали, что МПК адамантансодержащих веществ по отношению к S.aureus 155 составляют: ЮК-97 – 3,12мкг/мл; ЮК-21 – 6,3мкг/мл; ЮК-50 – 6,3мкг/мл; ЮК-86 – 12,5мкг/мл. Исследованиями установлено, что все вещества в концентрации 0,5 МПК не нарушают пленкообразование золотистым стафилококком.

В концентрации 1 МПК соединения ЮК-50, ЮК-97, ЮК-21 и ЮК-86 угнетают образование биопленки на 8%, 31%, 41% и 43% соответственно в сравнении с контролем. Повышение концентраций веществ до 2,5МПК сопровождается увеличением ингибирующей активности, значение которой составляет: для ЮК-97 – 34%, ЮК-50 – 36%, ЮК-21 – 63%, ЮК-86 – 65%.

При концентрации соединений 5 МПК способность к пленкообразованию у S.aureus под действием ЮК-86 уменьшалась на 75%, у ЮК-21 – на 67%, у ЮК-50 – на 63%, у ЮК-97 – на 62%.

Таким образом, производные аминоадамантана дозозависимо угнетают плёнкообразование S.aureus. Наиболее выраженная активность выявлена у ЮК-86.

Полученные данные свидетельствуют о целесообразности дальнейшего поиска новых более активных соединений среди производных аминоадамантана с целью разработки на их основе эффективного препарата антимикробной направленности.

Исследования были проведены на базе ГУ «Института фармакологии и токсикологии АМН Украины» под руководством и.о. зав. отдела патофизиологии, к.б.н. Врынчану Н.А.

Авторы также выражают благодарность научному руководителю доц. каф.

Промышленной биотехнологии ф-та Биотехнологии и биотехники НТУУ «КПИ», к.т.н.

Тодосийчук Т.С.

Особенности микробных сообществ лесных почв в районах нефтедобычи Субхангулова Айгуль Расыковна (Казань, ajgul_sub@bk.ru) К настоящему времени не существует единых критериев оценки состояния почвенных экосистем, подверженных антропогенному воздействию. Используемые физико-химические, токсикологические и другие параметры не могут в полной мере дать представление о степени нарушения равновесия в экосистеме и о ее способности к ремедиации (восстановлению). В то же время известно, что микробное население почвы, являясь одним из наиболее сложных и разнообразных сообществ в биосфере, реагирует на антропогенные воздействия различного характера, что проявляется в изменениях таксономического разнообразия и структуры как всего микробиоценоза в целом, так и отдельных физиологических групп в его составе. Так, определение наиболее чувствительных звеньев почвенного сообщества и выявление границ их метаболической активности может способствовать развитию методов экспресс-диагностики углеводород-загрязненных почв.

Pages:     | 1 |   ...   | 48 | 49 || 51 | 52 |   ...   | 85 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.