WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 47 | 48 || 50 | 51 |   ...   | 85 |

Три накопительные культуры анаэробных термофильных железовосстанавливающих микроорганизмов были получены из наземных гидротерм Камчатки в слабоминерализованной бикарбонатно-забуференной среде. В качестве потенциального акцептора электронов выступал ферригидрит (90 мМ), изолированный от прямого контакта с клетками, путем заключения его в гранулы альгината (1,5%). Донором электронов служил ацетат (9 мМ). Накопительные культуры инкубировались при 60°С и 65°С и рН 6,8–7,0.

В результате филогенетического анализа основанного на сравнении нуклеотидных последовательностей генов 16S РНК в накопительных культурах были обнаружены бактерии типа Planctomycetes, ближайшими родственниками которых по данным GenBank были некультивируемые микроорганизмы. Клетки планктомицет были эллипсоидной формы c кратероморфными структурами и пилями длинной 0,6–0,8 мкм и 0,45–0,6 мкм в диаметре.

Жгутиков и сталков в электронный микроскоп не наблюдали. Для детекции планктомицет в накопительных культурах использовался метод флюоресцентной гибридизации in situ с использованием зондов (PLA886) специфичных к представителям типа Planctomycetes.

В зависимости от времени генерации накопительных культур, клетки находились в виде отдельных клеток или формировали группы из множества клеток. Накопительные культуры восстанавливали оксид Fe (III) и нитрат, заключенные в гранулы альгината. Рост отсутствовал на средах с гранулами альгината и ацетатом в отсутствии внешних акцепторов электронов. Клетки наблюдались в световой микроскоп только на пленках альгината.

По-видимому, гранулы альгината не только используются в качестве потенциального донора электронов и стимулируют рост, но и способствуют развитию биоплёнок планктомицет, очевидно требующих прикрепления к поверхности твёрдого субстрата.

Проведенное исследование расширяет наши знания в понимание биологии представителей филогенетического типа Planctomycetes и требует дальнейших исследований.

Микромицеты – возможные альтернативные источники активаторов протеина С плазмы крови Осмоловский Александр Андреевич (Москва, aosmol@mail.ru) Регуляция свертывания крови является одним из важнейших физиологических механизмов гемостаза человека и животных, где особую роль играет система протеина С.

Протеин С (PC) является витамин-К-зависимым проферментом сериновой протеиназы, который под действием комплекса тромбин-тромбомодулин на поверхности эндотелия превращается в активированный протеин С (APC). Последний выполняет антикоагулянтную и профибринолитическую функции, препятствуя чрезмерному тромбообразованию при появлении в системе кровотока первых признаков свертывания.

Недостаточность содержания в крови PC может привести к тромбоэмболическим осложнениям вплоть до летальных исходов. Ввиду значимости функционирования APC важным представляется диагностика содержания в плазме его предшественника – PC.

Экзогенные специфические активаторы PC были случайно обнаружены только в яде змей, принадлежащих к родам Agkistrodon и Gloydius. Из яда южно-американского щитомордника Agkistrodon contortrix contortrix были выделены протеиназы, способные in vitro активировать PC и нашедшие широкое применение в составе диагностикумов для клинических лабораторий.

Поиск альтернативных змеиному яду источников активаторов PC очевиден из-за дороговизны препарата, обусловленной трудностями получения таких активаторов. Ранее, в результате скрининга большого количества штаммов микроскопических грибов была показана перспективность микромицетов, в частности, Aspergillus ochraceus к продукции протеиназ, обладающих антикоагулянтными свойствами.

С помощью хромогенного пептидного субстрата pGlu-Pro-Arg-pNA было показано, что антикоагулянтная активность протеиназ Aspergillus ochraceus связана с активацией PC.

Изучение способности штаммов A. ochraceus, выделенных из экотопов разных географических регионов, позволило установить, что данная активность видоспецифична и исследованные изоляты являются высокоактивными продуцентами внеклеточных протеиназ – активаторов PC. Дальнейшее изучение физиологии A. ochraceus показало, что способность к образованию внеклеточных протеиназ – активаторов PC носит индуцибельный характер и реализуется при культивировании продуцентов на средах, богатых гидролизатами белков.

В процессе роста культур было выявлено два пика активаторной к PC активности, значения которых зависели от штамма и качества посевного материала. Наличие двух пиков может быть связано как с образованием двух ферментов с одинаковой специфичностью, так и регуляцией секреции данных ферментов по принципу отрицательной обратной связи.

На основании полученных данных был разработан микробиологический способ получения активаторов PC. Сопоставление активаторной активности белков культуральной жидкости штаммов A. ochraceus и препаратов активаторов из яда щитомордника разных фирм показало, что их активность сопоставима, в связи с чем микробные активаторы PC в дальнейшем могут найти применение в составе аналогичных диагностикумов.

Новая грамотрицательная ультрамикробактерия из рода Chryseobacterium – факультативный эпибионт Bacillus subtilis Поливцева В.Н., Абашина Т.Н. (Пущино, eritro@rambler.ru) Из ила озера Байкал и многолетнего нефтешлама Нижнекамского нефтекомбината выделены изоляты грамотрицательной хемоорганотрофной, аэробной бактерии – штаммы NF4 и NF5, представленные ультрамелкими коккоидными клетками и короткими палочками с размерами от 0,2 до 0,4 мкм в поперечнике и от 0,2 до 0,5 мкм в длину; их объем составляет в среднем от 0,004 до 0,04 мкм3; среди них значительную часть (30–60%) занимают наноформы – предельно мелкие клетки с диаметром 180–300 нм и объёмом 0,004–0,02 мкм3.

На основании этих данных изолированные бактерии можно отнести к наиболее мелким ультрамикробактериям. Характерным признаком изолятов является отсутствие у них экзоклеточных деполимераз, таких как протеазы, липазы, пектиназы и целлюлазы.

По сходству в последовательности нуклеотидов в гене 16S рДНК и составу клеточных жирных кислот изоляты наиболее близки к некоторым видам рода Chryseobacterium (C. antarcticum, C. jeonii и C. marinum). Однако имеющиеся различия в нуклеотидных последовательностях гена 16S рДНК, а также в фенотипических признаках, таких как образование ультрамелких клеток, отсутствие ряда экзогидролаз, выраженный олиготрофизм и способность к эпибиозу на бактериальных клетках позволяют предполагать, что охарактеризованные изоляты являются, новым видом рода Chryseobacterium.

Особым свойством выделенных изолятов является их способность к эпибиозу – существованию в плотно прикрепленном состоянии на хозяйских клетках Bacillus subtilis.

Предполагается, что адгезия к хозяйским клеткам у штаммов NF4 и NF5 (представителей филума Bacteroidetes) осуществляется тем же уникальным механизмом, который описан нами ранее у представителей альфапротеобактерий (Kaistia sp., штаммы NF1 и NF3), у которых в качестве улавливающих и стягивающих клетки канатов функционируют ловчие полисахаридные цепи, снабженные липкими узелками–гранулами.

Работа выполнена при поддержке гранта Аналитической ведомственной целевой программы «Развития научного потенциала высшей школы» № 2.1.1/1187. Выражаю благодарность руководителю проф., д.б.н. Дуде Виталию Иосифовичу за помощь и ценные советы при выполнении работы.

Внеклеточная протеазная активность микроорганизмов гидротерм Байкальской рифтовой зоны Раднагуруева А.А., Лаврентьева Е.В. (Улан-Удэ, aryuna_rg@mail.ru) В работе представлены результаты изучения внеклеточной протеазной активности культур из коллекции лаборатории микробиологии ИОЭБ СО РАН: Т4, Ur-6, Br-2-2, Ga-9-2, Al-9-1, Se-1-10, выделенных из горячих источников Байкальской рифтовой зоны.

Особенностью этих гидротерм являются высокие значения температуры до 84°С и значения pH до 9,9. По данным молекулярно-генетического анализа наибольшее сходство у культуры Ur-6 выявлено с Bacillus hemicellulosolyticum C-11 (99%), Br-2-2 на 97% с B. licheniformis BBDC6, Ga-9-2 на 95% с A. flavithermus DSM 2641 (Z26932). Штамм Al-9-1 образует отдельный кластер на филогенетическом дереве и ближайшим гомологом является Anoxybacillus pushchinoensis AT-2 (AB234214), сходство составляет 96%. Штамм Т4 отнесен к новому виду «Anoxybacillus mongoliensis».

Анализ внеклеточной протеолитической активности показал, что все изученные штаммы культур активны на субтилизин-подобном субстрате. Многие авторы считают, что именно усиленный синтез субтилизинпободобных протеиназ является одним из способов адаптации бактерий к экстремальным условиям окружающей среды. Интересен факт, что культуры Ur-6, Br-2-2, Ga-9-2, выделенные из микробных матов горячих источников, кроме субтилизиноподобной, обладают высокой аминопептидазной активностью. Характерно, что штаммы не гидролизуют субстраты, специфичные для химотрипсинподобных и цистеиновых протеиназ.

Отмечено, что синтез протеаз у культур Т4 и Se-1-10 начинается в конце экспоненциальной фазы роста культуры. Это связано с тем, что в конце экспоненциальной фазы роста, когда в среде истощается запас легкометаболизируемых низкомолекулярных субстратов, возникает потребность в экзоферментах, обеспечивающих поступление питательных веществ в результате разложения полимерных веществ.

Выживание микроорганизмов в гидротермах и их функционирование обеспечивается благодаря сохранению каталитической активности в широких пределах рН и температур.

Было показано, что все изученные культуры активны в широком диапазоне значений рН от 7,3 до 12. Протеазы стабильны в диапазоне 40-60°С, оптимум активности наблюдался при 50°С.

Проведенный анализ функциональных групп активного центра показал, что активность внеклеточных протеиназ по субстрату GlpAALpNA, у большинства изученных культур, подавляется специфическим ингибитором сериновых протеиназ – фенилметилсульфонилфторидом (ФМСФ). Полученные в работе результаты позволяют отнести их к классу сериновых протеиназ субтилизиноподобного типа. Культура Se-1, кроме сериновой протеазы синтезирует металлопротеазу, ингибируемая специфическим ингибитором этилендиаминтетрауксусной кислотой (ЭДТА).

Работа выполнена при поддержке грантов МО РФ РНП 2.1.1/2165, НОЦ «Байкал».

Авторы выражают глубокую благодарность д.б.н., проф. Дунаевскому Я.Е. за оказанную помощь в проведении работы.

Участие метаболитов Bacillus subtilis СКБ 256 в защите растений Ражабов Улугбек Рахимбаевич (Узбекистан, Ташкент, u.rajabov@mail.ru) Использование бактерий-антагонистов или препаратов полученных на их основе, является одним из эффективных биологических методов борьбы с фитопатогенными микроорганизмами. Одним из перспективных и широко изучаемых объектов являются спорообразующие бактерии рода, Bacillus. Из различных видов бацилл выделены ряд вещества с антибиотической активностью и описана их природа. Среди метаболитов Bacillus subtilis есть и низкомолекулярные вещества с пептидной природы. Ранее нами было показано, что Bacillus subtilis СКБ 256 является активным антагонистом Fusarium oxysporum и Pseudomonas syringiae, что свидетельствует о широком спектре антагонистических веществ у этого штамма.

С целью выделить экзометаболитов с антифунгальной активностью, из культуральной жидкости штамма Bacillus subtilis. Изучены внеклеточные метабалиты штамма Bacillus subtilis СКБ 256. Из фильтрата культуральной жидкости выделено термолабильное вещество пептидной природы, ингибирующие рост и развитие фитопатогенного гриба Fusarium oxysporum. Проведено хроматографическая очистка веществ с ингибирующей активностью.

Определена минимальная ингибирующая концентрация очищенного вещества, по отношению к Fusarium oxysporum, которая составила 0,10-0,15 мг/мл.

ТСХ и БХ, позволили выявить фракции после мембранной очистки в составе внеклеточных метаболитов Bacillus subtilis СКБ 256 шесть компонентов, различающихся по подвижности. Анализ данных БХ показала присутствие трёх компонентов с антифунгальной активностью в отношении Fusarium oxysporum. Два из них с перекрывающимися относительную подвижность (Rf), а один минимальную. Приблизительная оценка их молекулярной массы с использованием низкомолекулярных белковых маркеров показала, что два наиболее подвижных компонента имели мол. массу <6 кДа, поскольку мигрировали дальше инсулина (6,2 кДа.). Менее подвижный компонент имел массу (14 кДа), сравнимую с мол. массой цитохрома С, лизоцима и соевого ингибитора трипсина.

Действие внеклеточных метаболитов Bacillus subtilis СКБ 256 на Fusarium oxysporum в условиях питательной среды характеризовалось нарушениями морфологического развития мицелия гриба, сопровождавшимися ограничением роста гиф, частичным лизисом спор.

Изучение физико-химических свойств низкомолекулярной фракции Bacillus subtilis СКБ 256 показало, что её активные компоненты стабильны в диапазоне значений рН 6,0-8,0 и 40-60°С. Препарат практически не инактивировался при 40-50°С и сохранял более 80% от первоначальной активности в течение 1 часа при 60°С.

Влияние условий культивирования Bacillus sp.

на липолитическую активность экстрацеллюлярных ферментов Сармурзина З.С., Кожахметов С.С. (Казахстан,Астана, sarmurzina@list.ru) В пищевой и перерабатывающей промышленности, в производстве мыла, всевозможных детергентов, красок и платмасс наиболее перспективным в настоящее время является использование ферментов, катализирующих разложение триглицеридов до моно-, диглицеридов и жирных кислот. В качестве таких ферметов наиболее привлекательными являются липазы бактериального происхождения. Среди бактерий основными продуцентами липаз выступают штаммы родов: Bacillus, Pseudomonas, Staphylococcus, Serratia и Rhodococcus. Известно, что на ферментативную активность липаз, выделенных из различных штаммов влияют такие параметры культивирования как: состав, температура и рН питательной среды.

Объектами исследований являлись бактерии рода Bacillus sp. выделенных из различных источников окружающей среды: активный ил, сточные воды мясокомбината, речная вода, почва. В задачу входило выявление липазной активности выделенных изолятов и определение наиболее оптимальных условий их культивирования.

Для определения липолитической активности, исследуемые изоляты высевали на среды, содержащих твины лауриловой, стеариновой и олеиновой кислот. На наличие липаз, в качестве экстрацеллюлярных ферментов, указывали образованные вокруг колонии непрозрачных зон кальциевых солей жирных кислот, высвобожденных из твина. Липазную активность определяли по методу Лонона (Lonon M.K.).

Pages:     | 1 |   ...   | 47 | 48 || 50 | 51 |   ...   | 85 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.