WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 44 | 45 || 47 | 48 |   ...   | 85 |

Влияние гомосеринлактона на активность бета-галактозидазы Ибрагимова В.Р., Маргулис А.Б., Бушманова О.В. (Казань, ibragimovaviktoriya@yandex.ru) Гомосеринлактон является одним из важнейших факторов коммуникации бактерий и широко используется в межвидовых взаимодействиях в качестве сигнального агента. В связи с этим, интересным представляется изучение влияния гомосеринлактона на биосинтез и активность конститутивных и индуцибельных ферментов микроорганизмов. Известно, что бета-галактозидаза штамма Escherichia coli PQ 37 находится под промотором SOS-оперона и синтезируется в ответ на сигнал, представляющий собой появление оноцепочечной и частично фрагментированной ДНК вследствие действия сильных ДНК-повреждающих агентов. В нашу задачу входило выяснение вопроса, может ли гомосеринлактон как сигнальная молекула, вызывающая активацию многих оперонов, включить гены SOS-оперона. Было установлено, что гомосеринлактон, добавленный непосредственно в реакционную смесь, вызывал изменение активности фермента, увеличивая её в среднем в 5 раз, то есть являлся эффектором белка бета-галактозидазы. При этом уровень экспрессии генов SOS-оперона при совместном добавлении гомосеринлактона и известного SOS-индуктора митомицина С оставался фоновым, то есть гомосеринлактон блокировал их экспрессию. Увеличение времени инкубации должно было бы привести к увеличению биосинтеза бета-галактозидазы, если гомосеринлактон является индуктором SOS-оперона, но этого не было (и это подтверждается данными SOS-хромотеста, полученными ранее).

Отсюда следует, что гомосеринлактон, по-видимому, вызывал блокирование экспрессии генов SOS-оперона, хотя оказывал стимулирующее действие непосредственно на активность фермента бета-галактозидазы. Таким образом, можно сделать вывод, что гомосеринлактон увеличивает активность бета-галактозидазы E. coli, не влияя на уровень ее биосинтеза.

Работа выполнена в рамках программы «Развитие научного потенциала высшей школы» (РНП 2.1.1.1005).

Поликомпонентный иммобилизованной пробиотик с антимутагенными свойствами Кистаубаева Аида Сериковна (Казахстан, Алматы, aida_kaz@mail.ru) Лечебно-профилактическое действие пробиотиков обусловлено синтезом метаболитов, которые, оказывая корригирующее действие на нарушенную нормальную микрофлору, обладают еще и целым комплексом полезных для макроорганизма свойств, одним из которых является их генопротекторная способность. Для усиления эффекта пробиопротектора необходим рационально подобранный состав штаммов микроорганизмов и обеспечение их адресной доставки в целевой орган – толстый кишечник, что может быть обеспечено созданием иммобилизованных форм пробиотиков, в которых бактериальные клетки прикреплены к поверхности носителей-сорбентов.

Цель исследования: Конструирование бактериального консорциума на основе штаммов L.acidophilus, L.fermentum и L.plantarum, иммобилизированных на карбонизованном носителе. Исследованы генопротекторные свойства 12 штаммов лактобацилл с помощью алгоритма, включающего бактериальный Rec- и SOS-хромотеcты, систему Эймса и метафазный анализ костного мозга белых мышей. Селекционированы штаммы лактобацилл, обладающие высокой антимутагенной активностью в отношении модельных мутагенов.

При оценке технологических свойств отобраны 3 биосовместимых штамма лактобацилл, в дальнейшем используемые для иммобилизации бактериальных клеток на карбонизованном сорбенте из зауглероженной рисовой шелухи. На модели антибиотикового дисбактериоза, вызванного пероральным введением ципрофлоксацина мышам, изучены лечебнопрофилактические свойства конструируемого препарата. Показано, что новый иммобилизованный пробиотик характеризуется повышенным лечебным эффектом за счет более длительного сохранения вводимых бактериальных клеток в кишечнике экспериментальных животных.

Установлено, что препарат полностью подавляется мутагенез, индуцируемый N-нитрозоN-метилмочевиной и 2-нитрофлуореном, оцениваемый по частоте реверсий в гистидиновом локусе у индикаторных штаммов Salmonella typhimurim TA 100 и ТA 98. Мутагенный эффект N-метил-N-нитро-N-нитрозогуанидина снижается на 97%, 4-нитрохинолин-1-оксида на 82%.

Число хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей, индуцированных прямым мутагеном N-нитрозо-N-метилмочевиной и промутагеном N-нитрозоморфолином, при введении в рацион питания препарата исследованного препарата снижается на 70–75%.

Выявлено также снижение генотоксичности фекалий у экспериментальных животных, получавших иммобилизованные клетки лактобацилл после предварительной мутагенной нагрузки.

Таким образом, разработан новый сорбированный на носителе из зауглероженной рисовой шелухи комплексный лактосодержащий пробиотик с выраженным антимутагенным и лечебно-профилактическим действием. Препарат зарегистрирован в качестве биологически активной добавки к пище.

Результаты применения технологии микробной биорекультивации биоценоза, поражённого трансформаторным маслом Конева Ирина Сергеевна (Сургут, oduvanchik_live@mail.ru) Наряду с углеводородным загрязнением в округе увеличиваются площади, нарушенные иными загрязнителями, в частности трансформаторными маслами. Представленный участок является боковым поверхностным водотоком (3-4°), расположенный в лесном массиве с поступлением осадочных вод с загрязнителем. После поступления трансформаторного масла (2005 год) был проведён его механический сбор, что привело к смещению верхнего горизонта почвы с обнажением подзолистого горизонта. В последующем произошло проникновение загрязнителя в почвенные участки с образованием анаэробных условий и угнетению растительности. Для формирования технологии рекультивации в отобранных почвенных образцах определён ряд показателей (31.07.2009 г.): содержание углеводородов – 9,3±0,4 г/кг почвы, общее микробное число (ОМЧ) – 3,6103 клеток/г почвы, активность углеводородокисляющей микрофлоры (УОМ) – не выявлена.

Предложена следующая технология рекультивации:1) внесение комплекса бактерий;

2) формирование оптимальной экологической ниши для жизнедеятельности бактерий и прорастания высеянных семян травосмеси путем внесения минеральных удобрений и вермикулита; 3) рыхление на доступную глубину (20-25 см). Биопрепарат представлен ранее выделенными из загрязнённых почв углеводородокисляющими бактериями: Pseudomonas spp., Rhodococcus spp., Artobacter spp. и азотфиксирующих бактерии: Rhizobium spp.

Минеральное удобрение: нитроаммофоска дозой до 60 г/м2. Сорбент: вермикулит (доза внесения 0,2 литра/м2). Травосмесь: 40% – тимофеевка луговая (Phleum pratense), 20% – овсяница луговая (Festuca pratensis), 20% – райграс многолетний (Lolium perenne L.), 20% – козлятник восточный (Galega orientalis).

Через 3 недели после применения технологии визуально выявлено следующее:

исчезновение (местами полное) корки на поверхности почвы, отсутствие запаха анаэробно разлагающейся органики, прорастание семян внесенной травосмеси с формированием узлов кущения и активизация аборигенной растительности. Контрольные показатели составили:

содержание углеводородов 0,2±0,02 г/кг почвы, ОМЧ – 2,7107 клеток/г почвы, активность УОМ – 1,5104 клеток/г почвы. Всхожесть внесенной травосмеси составила 38-42%.

При проведении контроля (30.09.2009) было выявлено поступление (благодаря поверхностному стоку) дополнительного количества загрязнителя с участка основного разлива, расположенного непосредственно на трансформаторной площадке и проведена его повторная рекультивация по той же технологии. На лесном участке проведено повторное рыхление всего участка с последующим внесением семян травосмеси.

По окончании сезона контрольные показатели составили: содержание углеводородов 0,34±0,02г/кг почвы, ОМЧ – 2,3108 клеток/г почвы, активность УОМ – 4,8104 клеток/г почвы. Всхожесть внесенной травосмеси составила 76-77%. Автор выражает благодарность Фахрутдинову Айвару Инталовичу, научному руководителю.

Изучение биоразнообразия сульфатредуцирующих бактерий в аэробных водах и зоне хемоклина Черного моря с использованием метода FISH Корнеева Валерия Алексеевна (Москва, busenica@yandex.ru) Чёрное море представляет собой самый большой в мире меромиктический водоём (Lin et al., 2006). Глубже границы аэробных и анаэробных вод в черноморских водах присутствует сероводород, концентрация которого на глубине 2000 м достигает 370 мкМ.

Накопление H2S в водной толще Чёрного моря происходит, главным образом, в результате жизнедеятельности сульфатредуцирующих бактерий (CPБ) (Ivanov, Lein, 2006). Однако рядом гидрохимиков зафиксировано присутствие восстановленных серных соединений и в аэробных водах (Волков и др., 1992), что, по их мнению, может происходить за счёт биогенного восстановления сульфатов СРБ.

В данном исследовании был проведен анализ распространения СРБ в аэробных водах и зоне хемоклина Чёрного моря, а также накопительных культур, выделенных из соответствующих горизонтов, с помощью метода гибридизации in situ с 16S рРНКспецифичными олигонуклеотидными зондами, меченными флуоресцентным красителем цианином 3 (метод FISH).

В аэробной зоне на глубине 30 м было выявлено значительное количество сульфатредуцирующих бактерий, относящихся к родам Desulfotomaculum, Desulfovibrio и Desulfobacter, тогда как на глубинах 150 м у верхней границы хемоклина среди сульфатредукторов преобладали представители рода Desulfomicrobium. Количество активных клеток сульфатредукторов, обнаруженных в пробах воды в летний период, значительно превышало таковое в зимних пробах из глубоководной зоны Чёрного моря.

Присутствие физиологически активных сульфатредукторов в кислородных водах и зоне хемоклина Чёрного моря подтверждает полученные ранее данные гидрохимиков, отмечающие наличие восстановленных соединений серы в аэробной водной толще.

В анаэробных накопительных культурах СРБ, выделенных из аэробной зоны (30 и 70 м) Чёрного моря, преобладали представители родов Desulfomicrobium. Накопительные культуры СРБ, полученные из водных проб нижней зоны хемоклина глубоководной части Чёрного моря, содержали представителей родов Desulfovibrio, Desulfotomaculum и Desulfomicrobium. Представители рода Desulfobacter обнаружены не были.

Ферментативная активность бактерий при действии гомосеринлактона Кудрявцева Д.Н., Белоногова Н.В. (Казань, foxy_foxy@rambler.ru) Значимой проблемой медицинской практики является распространение устойчивых форм микроорганизмов, снижающее эффективность применения антибактериальных препаратов.

Особенно высока лекарственная устойчивость бактерий в биоплёнках. Для формирования биоплёнок, а также для синтеза факторов вирулентности бактерии используют реакции кворум-сенсинга. Такие межклеточные сообщения играют ключевую роль во взаимодействии бактерий с высшими организмами, животными и растениями, как при симбиозе, так и при патогенезе и, следовательно, определяют инфекционные процессы и развитие болезней. Изучение механизмов кворум-сенсинга открывает новые возможности для предупреждения и лечения болезней, вызванных микробными агентами, а также позволяет понять сложный комплекс межвидовых бактериальных взаимодействий в природных местах обитания микроорганизмов. В связи с вышеизложенным, целью настоящей работы явилась оценка возможности гомосеринлактона изменять активность гидролитических ферментов прокариот. В качестве модельных объектов выбраны протеаза и щелочная фосфатаза Lactobacillus plantarum 8P-A3 и Escherichia coli К12. На пути к достижению цели решались следующие задачи: 1) охарактеризовать токсические эффекты гомосеринлактона по отношению к микроорганизмам; 2) определить содержание ацилированных лактонов гомосерина в культуральной жидкости с добавлением и без добавления гамма-бутиролактона; 3) выявить влияние гомосеринлактона на активность и биосинтез протеазы и щелочной фосфатазы. Было показано, что гомосеринлактон не проявил токсических эффектов по отношению к микроорганизмам в исследуемых концентрациях (10-1000 мкг/мл). Исследуемые микроорганизмы при краткосрочном культивировании образуют гомосеринлактоны разных видов (бутирил-, гексаноил-, октаноил-) в незначительных количествах (200-2000 нг/мл). Гомосеринлактон в концентрациях 10 и 50 мкг/мл не изменял активность протеазы, но проявлял концентрационнозависимый эффект в отношении щелочной фосфатазы, увеличивая её активность примерно в 2 раза. Биосинтез щелочной фосфатазы с возрастом культуры увеличивался у Lactobacillus plantarum и уменьшался у E. coli, как в присутствии гомосеринлактона (50 мкг/мл), так и без него. Работа выполнена в рамках программы «Развитие научного потенциала высшей школы» (РНП 2.1.1.1005).

Дисбиотические изменения в микрофлоре кишечника теплокровных животных под действием дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis Купцова Анна Александровна (Ульяновск, kloushel@mail.ru) Нормальную микрофлору кишечника можно рассматривать как индикатор здоровья теплокровных животных и человека. При воздействии дестабилизирующих внешних или внутренних факторов микробиота реагирует количественными и качественными сдвигами в популяциях микроорганизмов. Одним из факторов нарушения микробоценоза кишечника может являться попадание в желудочно-кишечный тракт вместе с пищей белковых токсинов бактериального происхождения, таких, как дельта-эндотоксины бактерии B. thuringiensis, являющиеся основой для производства биопрепаратов, широко применяемых в сельском и лесном хозяйстве для борьбы с вредными организмами.

Целью настоящего исследования явилось изучить действие дельта-эндотоксина B. thuringiensis subsp. kurstaki Z-52 на изменение количественных и качественных показателей микробиоты кишечника теплокровных животных.

Было установлено, что при дозе препарата от 100 мг/кг подавлялся рост нормальной микрофлоры в толстой кишке – количество доминирующих видов бактерий (встречающихся в 50-100% исследований) – бифидобактерий и лактобактерий – на 14 и 28 сутки после начала перорального введения уменьшалось по сравнению с контролем в 1,5-2 раза. Применение дельта-эндотоксина оказало также влияние на изменение количества бактероидной микрофлоры и эшерихий с нормальной ферментативной активностью. В результате снижения количества представителей облигатной микрофлоры размножаются микробы, попавшие извне или эндогенные виды, устойчивые к лекарственным препаратам – стафилококки, в том числе и самый патогенный вид – S. aureus а также клебсиэллы, протеи и дрожжевые грибы. Выявлялись также эшерихии, обладающие гемолитической активностью.

Количество дрожжеподобных грибов увеличивается в 2,3 раза, а стафилококки, не обнаруживающиеся ранее в контроле, высеваются на 28 сутки в количестве 1,47 lg КОЕ/г.

Pages:     | 1 |   ...   | 44 | 45 || 47 | 48 |   ...   | 85 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.