WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 43 | 44 || 46 | 47 |   ...   | 85 |

Сравнительная характеристика микромицетов коллекционных штаммов и местных изолятов-биодеструкторов Горбань Мария Викторовна (Сургут, gmariy@yandex.ru) Большинство материалов, используемых в промышленности и в быту, подвергаются разрушающему действию микроорганизмов. Главными агентами биоповреждений являются микроскопические грибы, что объясняется их высокой физиологической избирательностью.

В системах водоснабжения и канализации всё шире применяются трубы из полимерных материалов. Полимерные трубы вытесняют металлические, так как обладают рядом преимуществ: они легче, технологичнее и не подвергаются электрохимической коррозии.

В данной работе оценивалась грибостойкость образцов полимерных труб, наиболее часто используемых в системах водоснабжения и канализации. Образцы труб изготовлены из полипропилена, полипропилена рандом-сополимера, полипропилена рандом-сополимера термостойкого, полиэтилена низкого давления, металлопластика.

Грибостойкость полимерных материалов определяли по ГОСТу 9.048–089 «Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов» методами №1, 2 и 4. Грибостойкость материала соответствует стойкости этого материала к воздействию плесневых грибов коллекционных штаммов, рекомендованных ГОСТом: Paecilomyces variotii, Scopulariopsis brevicaulis, Penicillium funiculosum, Aureobasidium pullulans var.

pullulans, Gliocladium virens (syn. Trichoderma virens), Aspergillus niger, Aspergillus terreus, Penicillium ochrochloron. Грибостойкость материалов оценивали по 6-ти балльной шкале, согласно ГОСТу. Проводилась сравнительная оценка грибостойкости полимеров по отношению к коллекционным штаммам грибов и к штаммам местных изолятов.

В исследованиях использовались 8 коллекционных штаммов микромицетов (выше перечисленные) и 8 грибов местных изолятов (5 относятся к роду Aspergillus, 3 – к роду Penicillium). Места выделения местных штаммов грибов следующие: техническая вода, почва, изоляция трубопровода, поверхность пластикового окна.

По результатам проведённых исследований наиболее стойким к воздействию плесневых грибов является образец трубы из полиэтилена низкого давления, самый негрибостойкий – образец трубы из полипропилена рандом-сополимера термостойкого. Также выявлено, что изоляты местных грибов являются более агрессивными по сравнению с коллекционными – повреждают образцы на более высокий балл. Вместе с тем, повреждения во всех случаях не превышали 2 баллов по всем методам. Наиболее агрессивным агентом биоповреждений среди всех участников испытаний является штамм местного изолята, выделенный с поверхности пластикового окна, относящийся к роду Aspergillus. Этот микромицет повреждает образцы на более высокий балл, чем остальные участники, и является единственным, повреждающим образец трубы из полиэтилена низкого давления.

Биологические эффекты бактериальных протеиназ Данилова Юлия Васильевна (Казань, Danilova146@mail.ru) В связи с тем, что ряд опасных заболеваний, таких, как инсульты, инфаркты, тромбофлебиты и др. связан с возникновением тромбов, в фокусе современной медицины – разработка новых эффективных тромболитических препаратов, в том числе на основе ферментов бактериального происхождения. Ранее в нашей лаборатории были изучены тромболитические и фибринолитические свойства протеиназы Bacillus intermedius 3-19.

Было показано, что в условиях in vitro она обладает высокой дозозависимой фибринолитической и тромболитической активностью. В настоящей работе приведены результаты изучения in vitro тромболитических и антикоагулянтных свойств металлопротеиназы рекомбинантного штамма Bacillus subtilis BG 2036, несущего на плазмиде рSA5 ген секретируемой металлопротеиназы Bacillus intermedius. Внеклеточная металлопротеиназа выделена из культуральной жидкости с применением гидрофобных сорбентов бацитрацин-силохрома и бутил-сефарозы.

Изучение антикоагулянтного и тромболитического действия протеиназы проводили в условиях in vitro на плазме крови человека. Было проведено 2 серии экспериментов.

В первой серии оценивали тромболитические свойства протеиназы, для чего аликвоту плазмы крови человека (0,25 мл) смешивали с 0,05 мл раствора тромбина и выдерживали в течение 5 минут в водяном термостате при 37°С для образования сгустков. К сгусткам добавляли по 0,5 мл раствора препарата фермента и помещали в водяной термостат (в контрольные пробирки добавляли 0,145 М NaCl). Отмечали время полного лизиса сгустков. Во второй серии для определения антикоагулянтной активности металлопротеиназы 0,25 мл плазмы крови человека инкубировали с 0,5 мл раствора препарата фермента в течении 10 минут при температуре 15-20°С, затем добавляли 0,05 мл раствора тромбина и отмечали время образования и последующего растворения сгустка.

В первой серии экспериментов было показано, что после добавления фермента к образовавшимся сгусткам, их лизис происходил в течении 24 часов на 80%. Результаты второй серии показали, что при инкубации плазмы крови с протеиназой фермент не оказывал заметного антикоагуляционного действия. Время образования сгустков после добавления тромбина было соответственно 2 мин против 1 мин в контроле, где вместо протеиназы добавляли тот же объем физиологического раствора. Таким образом, показано, что металлопротеиназа Bacillus intermedius обладает тромболитической активностью, а также антикоагуляционными свойствами. Работа поддержана грантом РФФИ 09-0499044 р-офи. Автор выражает благодарность д.б.н., проф. Шариповой М.Р. за помощь в оформлении тезисов.

Оптимизация технологии биологичекой рекультивации глубокозагрязненных нефтью почв ХМАО Егорова Анастасия Владимировна (Сургут, Lisenok8277@ya.ru) В Ханты-Мансийском автономном округе площади загрязненных нефтяными углеводородами составляют десятки тысяч гектаров. Современные технологии рекультивации составляют комплекс агротехнических мероприятий, направленных на ускорение деструкции нефти на месте разлива. После откачки свободной нефти, почва подвергается фрезерованию с целью разрушения асфальтеново-битумной корки, и улучшения воздушного режима. Параллельно с рыхлением проводится стабилизация кислотности, внесение удобрений и бактериальных препаратов. На заключительном этапе рекультивации проводится высев луговых трав. Скорость и направленность микробного разложения остаточной нефти в почве зависит от ряда условий и может занимать от недели, а при глубоком поражении биосистемы, до нескольких месяцев. Внесение семян необходимо проводить в оптимальный момент рекультивации, с целью улучшения водно-воздушного режима рекультивируемого слоя с продвижением процесса деструкции по горизонту почвы.

Это выяснялось в лабораторном эксперименте.

Образцы нефтезагрязненной почвы, отобранной непосредственно на Самотлорском месторождении (уровень загрязнения 92-94% нефти), подвергались обработке комплексом ранее выделенных нефтеокисляющих микроорганизмов (НОМ) включающим Pseudomonas spp., Rhodococcus spp., Artobacter spp. (титр 11-12 млн. клеток в мл) поддержанной системой удобрений и раскислителя (NPK+CA). Травосмесь представлена: 70% – овёс посевной (Avena sativa) и 30% – козлятник восточный (Galega orientalis). Схема эксперимента:

1) контроль (абсолютно чистая почва); 2) нефтезагрязненная почва (НЗП); 3) НЗП +НОМ;

4) НЗП + НОМ + (NPK+CA). Травосмесь сносилась с промежутками 1, 2, 3 и 4 недели с момента начала опыта.

Набольшее снижение содержания остаточной нефти отмечено в 3 и 4 вариантах, к окончанию четвертой недели эксперимента уровень загрязнения составил 17 и 9% соответственно. При этом наблюдалась очень высокая микробная активность, со средними значения 23-64 млрд. клеток НОМ на г почвы. Всхожесть травосмеси на абсолютном контроле составило 96-98%. Во втором варианте всхожесть на протяжении эксперимента отсутствовала. Применение НОМ способствовало незначительной всхожести и прорастания семян 21-24%, в не зависимости от времени внесения в почву. Наилучшие результаты прорастания травосмеси отмечены в четвёртом варианте на 4 неделе после начала действия внесенных ингредиентов, и составило 78-81% от контрольных. При этом овёс посевной – 86-88%, козлятник восточный – 68-72%.

Таким образом, выявлена высокая деструктурирующая способность данного комплекса НОМ на почвах с высоким уровнем нефтезагрязнения, и определено оптимальное время несения травосмесей, используемых в системе применения микробных препаратов.

Изменение физиолого-биохимических свойств бактерий на ранних этапах перехода к гипометаболизму Еллиева А.А., Евтюгин В.Г., Захаров И.С. (Казань, anna_mar@rambler.ru) Регулирование перехода микроорганизмов в состояние покоя имеет огромное значение для биотехнологии и медицины. Прикладной аспект этой проблемы связан с потенциальной возможностью управления такими процессами, как образование некультивируемых форм патогенов, устойчивых к различным стрессовым условиям, в том числе к фармакологическому воздействию, и сохранение целевой активности промышленных штаммов микроорганизмов – продуцентов биологически активных веществ. В связи с вышесказанным, целью нашей работы явилась оценка возможности разделения вегетативных и гипометаболических клеток бактерий в криогелях, содержащих привитые заряженные группировки. В работе решались следующие задачи: 1) сравнить ферментативную активность вегетативных и гипометаболических клеток; 2) оценить различия в зарядовых свойствах вегетативных и гипометаболических клеток микробных культур разной грампринадлежности. Для определения активности ферментов использовали стандартные методики. Для разделения микробных клеток по зарядовым свойствам использовали ряд криогелей, содержащих привитые алифатические цепи с заряженными группировками. В качестве группировки с положительным зарядом использовался трисоксиметиламинометан, с отрицательным – тиогликолевая кислота. Столбики гелей находились в медицинских шприцах на 5 мл, и доходили до середины шприца. В период между постановками экспериментов гели содержались в растворе азида натрия. В результате было установлено, что активность щелочной фосфатазы и протеазы снижается в 3-4 раза с увеличением времени инкубирования культур, в то время как активность -галактозидазы значительно (в 3-5 раз) возрастает. Также показано, что гипометаболические клетки после 4-х месяцев инкубирования адсорбируются в геле значительно хуже (в 1,5-2 раза), чем молодые 18-часовые культуры. В целом, показано, что сорбция в геле с привитыми положительно заряженными группировками выше, чем в контроле, где сорбция неспецифическая. Работа выполнена в рамках программы «Развитие научного потенциала высшей школы» (РНП 2.1.1.1005). Авторы благодарят профессора, д.х.н. Лозинского В.И.

(ИНЭОС РАН, Москва) за предоставление криогелей и участие в обсуждении результатов.

Метод ПЦР-РВ для оценки титра вируса краснухи в вируссодержащей жидкости Забияка Юлия Игоревна (Москва, yulia.zabiyaka@yahoo.fr) Одной из важнейших проблем при производстве вакцины является оценка титра вируса в процессе культивирования для определения времени сбора вирусного материала.

Специфическая активность вируса краснухи определяется в реакции бляшкообразования и титрованием по цитопатическому действию (ЦПД), которые имеют ряд существенных недостатков – они длительны, трудоемки, сложны в стандартизации и зависимы от внешних факторов. Целью данного исследования явилась разработка метода оценки титра вируса краснухи в вируссодержащей жидкости с помощью ПЦР с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (ПЦР-РВ).

К консервативному участку генома вакцинного штамма вируса краснухи RA-27/3 были подобраны последовательности двух праймеров и зонда для реакции обратной транскрипции и ПЦР-РВ. Специфичность праймеров и зонда была показана в ПЦР-РВ и подтверждена методом электрофореза в агарозном геле. В качестве калибратора был приготовлен контрольный препарат – живой аттенуированный штамм вируса краснухи с титром 6,3 lgТЦД50/мл, путём последовательных разведений которого были получены 2 калибровочных образца с титрами 5,3 lgТЦД50/мл и 3,3 lgТЦД50/мл. Вирусный материал собирали на различных сроках (1-12 дни) при культивировании вирусного штамма краснухи Wistar RA27/3 (полуфабрикат вакцинного препарата на 27 пассаже, полученный от ФГУП НПО Микроген (титр 3,8-4,0 lgТЦД50/мл)) на культуре клеток VERO и оценку титра вируса проводили параллельно методами ЦПД на культуре клеток RK-13 и ПЦР-РВ. Интервал времени после заражения, в котором разница между значениями титра вируса, полученными методом ПЦР-РВ и в реакции ЦПД, не превышает величины, рекомендуемой ВОЗ (0,3 lgТЦД50/мл), составил от 2 до 7 суток (0,04

В контрольных образцах – препарате международного стандарта краснухи (3,9 lgТЦД50/мл) и коммерческом препарате вакцины против краснухи (Индия, 4,5-4,8 lgТЦД50/мл), – разница между величиной титра вируса краснухи, определенная методом ПЦР-РВ и в реакции ЦПД, находилась в пределах 0,2lg, что меньше допустимой ВОЗ величины.

Таким образом, был разработан метод оценки титра вируса краснухи в вируссодержащей жидкости с помощью ПЦР-РВ, обеспечивающий высокую специфичность, чувствительность, стандартность и малую длительность проведения процедуры в сравнении с классическими методами.

Pages:     | 1 |   ...   | 43 | 44 || 46 | 47 |   ...   | 85 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.