WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 42 | 43 || 45 | 46 |   ...   | 85 |

4-(2-метил-1Н-бензимидазол-1-ил-метил)фенол (I); 1-(2-метил-1Н-бензимидазол-1-илметил)фенол (II) на рост и протеолитическую (ПР) и дегидрогеназную (ДГ) активность E.coli. Полученные в ходе исследования данные выявили изменение биомассы (y) E.coli при добавлении в среду культивирования I и II в дозе 100 мкг/мл. Снижение прироста биомассы за первые 24 часа при добавлении вещества I составило 21%, а в присутствии вещества II количество биомассы уменьшилось на 18% от контроля. Максимальное значение удельной скорости роста () и минимальное значение времени удвоения биомассы (td) из контрольной пробы были выявлены через 3 и 5 часов культивирования с момента засева в присутствии вещества II и I, а в опытном варианте через 4 и 6 часов. При действии вещества I в дозе 100 мкг/мл снижение, по сравнению с контролем, составляет 1,10, а td больше контрольного в 1,12 раза; для вещества II – 1,8; 2,9 раза соответственно. Культивирование E.coli на среде с добавлением вещества II в дозе 100 мкг/мл сопровождается достоверным снижением протеолитической и дегидрогеназной активности на 21% и 56% от контроля.

Таким образом изученные соединения достоверно уменьшают интенсивность роста и ингибируют ПР и ДГ активность E.coli. При этом II, которое характеризуется параположением ОН-группы, оказывает достоверно более выраженное антибактериальное действие. В дозе 100 мкг/мл разница в действии между веществами составило 8% (y); 50% (); 33% (td); 3% (ПР) и 14% (ДГ) соответственно.

Генотоксическая активность метаболитов микоплазм Баязитова А.А., Гуляев П.Е. (Казань, alinabayazitova@yandex.ru) В последние годы постоянно растет интерес к гипометаболическим формам бактерий.

Большой интерес вызывают механизмы перехода в состояние анабиоза. Очевидно, что переход в покоящееся состояние может происходить под влиянием различных факторов и наряду с универсальными чертами обладать какими-то особенностями и уникальными механизмами регуляции. Предполагают, что происходят морфофизиологические перестройки и изменения биохимического состава клеточной поверхности, в связи с чем могут усиливаться адгезивные свойства, что приводит к накоплению на поверхности клетки метаболитов и/или компонентов среды, что в совокупности может привести к увеличению токсического и генотоксического потенциала клеток. В связи с вышесказанным, целью нашей работы явилась оценка возможности индукции мутаций продуктами метаболизма микоплазм при длительном культивировании. В работе решались следующие задачи:

1) сравнить генотоксическую активность вегетативных клеток и наноформ микоплазм M. hominis PG37 и M. gallisepticum S6; 2) оценить возможность индукции SOS-ответа культуральной жидкости микоплазм разного возраста. Было показано, что вегетативные клетки микоплазм обладают различным генотоксическим потенциалом. Фактор индукции SOS-ответа для M. gallisepticum S6 составил 19.54 ед., а для M. hominis PG37 – 3.79. В то же время наноформы микоплазм не обладали генотоксическими эффектами. При этом культуральная жидкость микоплазм проявила генотоксичность только в случае вегетативных клеток M. galliseptticum (фактор индукции SOS-ответа 7.8 ед.). Возможно, генотоксический потенциал клеток зависит от строения и физиологического статуса клетки. Молекулярные аспекты изменения генотоксических эффектов вегетативных клеток пока остаются не выясненными. Работа поддержана ГК 02.512.12.2010.

Внеклеточная протеолитическая активность Proteus mirabilis Бондырева Наиля Марсовна (Казань, nelya-zamalutdinova@rambler.ru) Энтеробактерии Proteus mirabilis очень часто становятся причиной заболеваний мочевыводящих путей у людей с физиологическими нарушениями. P. mirabilis обладают различными факторами вирулентности, к которым относятся и внеклеточные протеиназы.

Например, показано, что внеклеточные протеиназы могут расщеплять иммуноглобулины класса А, которые играют важную роль в местном иммунитете. Однако не доказана роль внеклеточных протеиназ в процессах инвазии в чувствительные клетки, что, зачастую, является причиной образования камней.

Целью настоящей работы было исследование протеолитической активности в культуральной жидкости P. mirabilis. Известно, что некоторые бактерии при инвазии используют цитоскелет эукариотической клетки, поэтому в качестве субстратов для определения активности использовали актин, выделенный из ацетонового порошка мышц кролика, и азоказеин. Исследовалась динамика роста бактерий и динамика появления активности по отношению к азоказеину и актину, а также чувствительность внеклеточной протеолитической активности к различным ингибиторам. Активность по отношению к актину определяли электрофоретически.

Исследование динамики роста бактерий показало, что на среде LB с аэрацией бактерии выходят на стационарную фазу роста на 9-10 час культивирования. Протеолитическую активность в культуральной жидкости определяли, начиная с 2 и по 24 часы роста бактерий, через каждые два часа. Показано, что уже на 4 час культивирования бактерий в культуральной жидкости появляется протеолитическая активность, расщепляющая азоказеин и ограниченно расщепляющая в данных условиях актин с образованием большого фрагмента с молекулярной массой 36 кДа. Протеолитическая активность достигает своего максимума к началу стационарной фазы роста и сохраняется на этом уровне до 24 часа культивирования.

Ингибиторный анализ с использованием о-фенантролина – ингибитора металлопротеиназ и PMSF – ингибитора сериновых протеиназ, показал, что основная протеолитическая активность в культуральной жидкости определяется металлопротеиназой (90% активности по азоказеину) и незначительная часть обусловлена сериновой протеиназой (10%).

Расщепление актина с образованием 36 кДа фрагмента полностью подавляется 2 мМ о-фенантролином и не подавляется 10 мМ PMSF. Таким образом, в культуральной жидкости P. mirabilis обнаружены металлопротеиназы и сериновые протеиназы. Ограниченный протеолиз актина обусловлен действием металлопротеиназы.

Получение рекомбинантных белковых антигенов для диагностики локализованного агрессивного пародонтита, вызываемого Aggregatibacter actinomycetemcomitans Вертиева Еватерина (Москва, v-kate@list.ru) Среди поражений пародонта (околозубных тканей десен) наиболее тяжёлым течением характеризуется локализованный агрессивный пародонтит (ЛАП). Этим заболеванием подвержены и дети, и взрослые. Заболевание слабо поддается лечению. В основе патогенеза лежит прогрессирующее разрушение тканей пародонта, приводящее к потере зуба.

Возбудителем является Aggregatibacter actinomycetemcomitans, – грамотрицательная анаэробная неподвижная бактерия, относящаяся к семейству Pasteurellaceae. Основную роль в патогенезе играют продуцируемые им токсины: токсин гигантских клеток (cytolethal distending toxin, Cdt) и лейкотоксин (Ltx). Эти токсины относятся к группе малоизученных токсинов. Cdt – это термолабильный белок, состоящий из трех субъединиц (А, В и С). Cdt-А и Cdt-С необходимы для взаимодействия с эукариотическим рецептором для проникновение в клетку-мишень. Сdt-В обладает ДНКазной активностью. В результате действия токсина возникают повреждения в ядерном аппарате,что приводит к задержке клеточного митотического цикла на этапе G2-М. В итоге клетка подвергается апоптозу. Лейкотоксин относится к группе RTX токсинов. Основная мишень токсина – клетки лимфоидного и миелоидного ряда.

Трудность в быстрой постановке диагноза определяется отсутствием методов быстрой диагностики. Как известно, факторы патогенности бактерий могут являться удобными маркерами соответствующих микроорганизмов. Поэтому разработка тест-систем, направленных на индикацию соответствующего продукта бактерий может приводить к появлению чувствительных, специфичных и быстрых методов идентификации возбудителя и диагностики заболевания.

Целью нашей работы было создание генетических конструкций и штаммов-продуцентов Escherichia coli для получения токсинов в препаративных количествах.

В результате исследования были клонированы соответствующие гены и на их базе были созданы генетические конструкции. Однако экспрессия клонированных генов была низкой.

В связи с этим был проведен анализ гидрофобности соответствующих молекул и были получены редуцированные,но обладающие достаточной иммуногенностью фрагменты субъединиц Cdt и лейкотоксина. Иммунизация лабораторных животных позволила получить высокоспецифичные антисыворотки с титром 1/100 000 – 1/1 000 000 в иммуноблоте. На их базе будут созданы иммуно-серологические тест-системы для выявления токсинов в клиническом материале, пригодные для лабораторной диагностики заболеваний, вызываемых А. actinomycetemcomitans.

Контроль синтеза экзополисахарида Paracoccus denitrificans с применением реологических методов Гапченко Алиса Александровна (Москва, gapchenko_gubkin@mail.ru) Бактерии P.denitrificans образуют полимерный биопродукт ритизан, основным компонентом которого является ацилированный кислый экзополисахарид (ЭПС). Это новый на рынке ЭПС биопродукт, уже получивший положительные оценки в качестве компонента буровых растворов. Требуемое улучшение технологических характеристик этого полимера и их стабильности было достигнуты путем изменения параметров его получения. Известно, что от условий выращивания штамма бактерий зависит не только количество синтезированного ЭПС, но также его молекулярная масса и процентное содержание неуглеводных заместителей. Эти изменения должны отражаться на реологическом поведении культуры. Поэтому для экспресс-контроля синтеза ЭПС проводили измерение динамической вязкости сырого ритизана.

Было установлено, что вязкость культуры P. denitrificans зависит от состава среды и условий выращивания продуцента. Варьировали наличие в исходной среде пантотеновой кислоты и второго источника углерода – этанола; природу источника азота; концентрацию дрожжевого экстракта и глюкозы; аэрацию и дозу инокулята.

Установлено, что дрожжевой экстракт и глюкоза требуются в средних концентрациях (0,5% и 1%, соответственно), обеспечивая высокие показатели синтеза ЭПС и вязкости.

Этанол и пантотеновая кислота не обязательны, т.к. практически не влияют на развитие культуры, выход полимера и реологические характеристики. Нитрат натрия предпочтительнее нитрата аммония, т.к. обеспечивает высокую вязкость культуры. Доза инокулята 5% способствует оптимальной продуктивности процесса при уменьшении его длительности. Дополнительная аэрация приводит к ускорению развития штамма и увеличению вязкости культуры без повышения выхода полимера.

Подобранная улучшенная среда способствует получению полимерного реагента с более ценными технологическими характеристиками: динамическая вязкость ЭПС биопродукта на улучшенной среде при малых скоростях сдвига почти в два раза превышает таковую образца, выращенного на исходной среде.

При замене 25% среды молочной сывороткой P.denitrificans синтезирует полисахарид (ритизан-С), отличающийся по физико-химическим свойствам от классического ритизана значительно более высокими значениями динамической вязкости и адгезивными свойствами. В то же время полисахарид сохраняет многие технологически ценные качества ритизана, в том числе стабильность реологических характеристик в процедуре многократного замораживания-оттаивания.

Для расширения областей применения ритизана и ритизана-С определяли его реологические характеристики в широком диапазоне физико-химических условий, моделирующих реальные условия нефтегазоносного пласта, а именно, температуры, рН и минерализации.

Выделение и скрининг перспективных азотфиксаторов для экологических биотехнологий Гаязова Диана Сергеевна (Казань, dianagajazova@rambler.ru) Изначально широкий интерес исследователей к азотфиксаторам был обусловлен нуждами сельского хозяйства. Результатом научных достижений в этой области стало масштабное производство и применение биоудобрений на основе азотфиксаторов для увеличения плодородия почв и повышения урожайности растений.

В настоящее время большие площади почв загрязнены отходами промышленных производств. В экономически развитых странах мира все чаще прибегают к восстановлению антропогенно нарушенной окружающей среды с помощью растений, которые не только активно участвуют в процессах фиторемедиации, но и во многих случаях благоприятно действуют на микрофлору почв. Однако в условиях загрязнения почвы рост растений и развитие их корневой системы сильно угнетается. Исследования принципов и механизмов взаимодействия микроорганизмов и растений выявили примеры взаимовыгодных отношений. Микроорганизмы ризосферного сообщества, оказывающие положительное влияние на растения, условно названы plant growth promoting rhizobacteria (PGPR).

В последнее время возрастает интерес к PGPR в связи с фиторемедиацией загрязненных объектов. Рядом авторов показано положительное влияние интродукции диазотрофов и PGPR на деструкцию нефтяных углеводородов в загрязненной почве, однако, типично почвенные изоляты зачастую не способны функционировать в условиях загрязнения. В связи с неблагоприятными условиями загрязненных почв целесообразно использовать адаптированную микрофлору, устойчивую к загрязнениям.

Цель данной работы – выделение перспективных азотфиксаторов из многолетних скоплений углеводородных отходов для экологических биотехнологий. Первоначальный отбор изолятов проводили на селективной безазотистой среде, с целью выделения микроорганизмов, способных к фиксации атмосферного азота. На основании данных о величине азотфиксирующей активности, оцененной методом газовой хроматографии, были выбраны наиболее активные изоляты. Дальнейший скрининг включал тесты на дополнительные свойства (синтез фитогормона ауксинового ряда, индолил-3-уксусной кислоты (ИУК), растворение фосфатов, антагонизм по отношению к бактериальным и грибным фитопатогенам), позволяющие оценить их с точки зрения рост-стимулирующей активности по отношению к растениям. Все выделенные азотфиксаторы в той или иной степени оказались способными к синтезу ИУК (от 3,8 до 9,25 мг/мл). Шесть из десяти исследуемых азотфиксаторов показали способность к солюбилизации труднодоступных соединений фосфора. Большинство исследуемых изолятов проявили антагонистическую активность в отношении широкого спектра фитопатогенов, включая Pseudomonas syringae, Ervinia caratovora, Xantomonas solunocerum, Aspergillus niger, Aspergillus sp., Fusarium sp., Alternaria sp. Половина исследуемых изолятов сочетала в себе все оцененные нами свойства PGPR. Полученные нами данные позволяют рассматривать промышленные углеводородные отходы как источник биотехнологически ценных изолятов для технологии фиторемедиации.

Pages:     | 1 |   ...   | 42 | 43 || 45 | 46 |   ...   | 85 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.