WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 22 | 23 || 25 | 26 |   ...   | 85 |

Предварительные результаты анализа экспрессии гена Grp на уровне трансляции свидетельствуют об активности продукта этого гена в тканях взрослых мух.

Изучение роли гена Arabidopsis thaliana ICE2 в развитии холодового ответа Курбидаева Амина Султановна (Москва, amina.kur@gmail.com) В процессе развития растения испытывают стрессовые воздействия как биотической, так и абиотической природы. Изучение генетической регуляции адаптивных ответов растений на стрессовые воздействия является важнейшим направлением генетики, экологии и биотехнологии. Одной из наиболее актуальных проблем является изучение генетических механизмов устойчивости к холоду. Открытия в этой области имеют потенциальное практическое значение для повышения холодоустойчивости сельскохозяйственных культур.

В генетическом контроле ответа на стрессы участвует множество генов – как кодирующих специфические защитные белки, так и транскрипционные факторы, обеспечивающие передачу сигнала и активацию защиты. Существуют два основных механизма активации холодового ответа. Зависимый от абсцизовой кислоты требует синтеза АБК, активирующей каскад генов защиты. Ключевым регулятором АБК-независимого ответа является регуляторный ген ICE1. Недавно был идентифицирован новый ген Arabidopsis thaliana ICE2, участвующий в активации холодового ответа и повышении холодоустойчивости.

На основании данных о высокой степени гомологии 2-5 экзонов данного гена гену A. thaliana (ICE1), возникло предположение об участии гена в холодовом ответе. В то же время оставалось неясно, является ли 1-ый экзон, экспрессия которого не была обнаружена, отдельным геном либо функциональной частью ICE2. В ИОГен им. Н.И. Вавилова были получены трансгенные растения Arabidopsis thaliana двух групп линий: несущие полноразмерную копию гена и несущие 2-5 экзоны гена под 35S промотором CAMV.

Мы показали, что суперэкспрессия полноразмерной копии гена вызывает повышение экспрессии гена NCED3, кодирующего ключевой фермент биосинтеза АБК, а также конечных генов в пути АБК-зависимого холодового ответа – RAB18, RD29A, RD29B, кодирующих высокогидрофидбные белки (дегидрины); в то же время суперэкспрессия только второй части гена вызывает незначительное повышение экспрессии этих генов.

Также было показана роль генаICE2 в регуляции АБК-независимого холодового ответа путем активации транскрипционного фактора CBF1, причем 1-ый экзон ICE2, содержащий F-бокс, также играет значительную роль. Обнаружены изменения морфологии устьиц у трансгенных растений: суперэкспрессия второй части гена вызвала появление кластеров недоразвитых устьиц, остановленных в развитии на стадии меристемоидов. В то же время при суперэкспрессии полноразмерной копии гена аномалий не наблюдалось. Эти результаты указывают на роль генаICE2 и особенно его первого экзона в регуляции АБК-зависимого и АБК-независимого путей ответа на холод, а также на формирование устьиц. Участие этого транскрипционного активатора одновременно в холодовом ответе и в дифференцировке устьиц может быть отражением стратегии растений объединить внешние сигналы и программы развития, наиболее точно подстраиваясь таким образом к условиям окружающей среды. Автор выражает искреннюю благодарность научному руководителю Новокрещёновой Марии Габриэловне. Работа выполнена при поддержке грантов РФФИ 0904-12216-офи_м и 09-04-01639-а..

Функциональный анализ доменов интегразы ретротранспозона gypsy Drosophila melanogaster Маннанова Мария Маратовна (Москва, mannanova_m@mail.ru) У ретровирусов и ретротранспозонов одним из ключевых ферментов, участвующих в транспозиции, является интеграза. Этот фермент имеет в своей структуре три функциональных домена: N-концевой, каталитический и С-концевой. Роль каждого из доменов в интеграции в хозяйскую хромосому изучена на примере ретровирусов позвоночных, однако неизвестно, аналогично ли функционирование интегразных доменов при транспозиции мобильных элементов.

Для изучения эндонуклеазной активности доменов интегразы ретротранспозона gypsy D. melanogaster были использованы три фрагмента гена pol: фрагмент, кодирующий полноценную интегразу, и два фрагмента, кодирующих интегразу без N- или C-концевого домена. Каждый фрагмент был клонирован в экспрессионном векторе pET-30. Полученные конструкции, названные pETint, pETint N и pETint C, были трансформированы в штамм E. coli Rosetta. В результате были получены рекомбинантная интеграза, размером около 45 кДа, и две формы усеченного белка (N и C), каждая размером около 30 кДа.

Субстратом для изучения in vitro эндонуклеазной активности N- и C-форм интегразы служила конструкция на основе вектора pBlueScript KS (+) - pBSLTR, несущая длинный концевой повтор ретротранспозона gypsy. В качестве контроля использовалась полная форма интегразы.

Показано, что в результате реакций как с полноценной формой интегразы, так и с N-формой происходит однонитевое расщепление матрицы. C-форма фермента не расщепляет субстрат. По-видимому, без С-домена белок не способен связаться с субстратом.

Это соответствует данным о ретровирусных интегразах, у которых каталитический домен обладает эндонуклеазной активностью, а роль в узнавании и связывании хромосомы хозяина принадлежит С-домену. N-домен не участвует в расщеплении ДНК хозяина, поэтому его отсутствие не влияет на эндонуклеазную активность интегразы.

Хромосомная «хореография» в профазе I мейоза Матвеевский Сергей Николаевич (Москва, sergey8585@mail.ru) Термин «хромосомная хореография» предложен Page & Hawley (2003) и, как нельзя точно, отражает специфику сложнейших генетически предопределенных и строго выверенных движений хромосом в профазе I мейоза. Наиболее точные представления о деталях спаривания, синапсиса и десинапсиса гомологичных хромосом на этой стадии мейоза стали доступны, благодаря открытию Мозесом осевых структур мейотических хромосом: осевого элемента (ОЭ), объединяющего сестринские хроматиды, и синаптонемного комплекса (СК), объединяющего гомологичные хромосомы в период их синапсиса, рекомбинации и десинапсиса.

Настоящее сообщение посвящено анализу поведения СК в профазе I мейоза у видовдвойников Ellobius talpinus (2n=54, NF=54) и Ellobius tancrei (2n=54, NF=56) и гибридов Fмежду ними. Эти виды характеризуются изоморфностью половых (ХХ) хромосом у самцов и самок. У Ellobius tancrei описан полный робертсоновский веер с 2 n от 34 до 54 при NF=у всех хромосомных форм (Ляпунова, Воронцов, 1978). Также исследованы СК у внутривидовых гибридов F1 Ellobius tancrei, гетерозиготных по Rb-транслокациям.

Иммуноокрашивание с помощью антител против белка латеральных элементов СК – SYCPи центромерного белка CENPA позволили выявить динамику движения хромосом на стадиях лептотены-диплотены. На стадиях лептотены-зиготены прослежен переход от кластрирования центромерных районов хромосом в области одного полюса ядра (фигуры Рабля) к формированию фигуры букета, и выпрямления хромосом на стадии пахитены, и далее детали десинпсиса хромосом. Установлено, что у гомозиготных самцов Ellobius talpinus и Ellobius tancrei половые хромосомы на стадии зиготены формируют закрытый половой бивалент с двумя прителомерными участками СК, на всех стадиях профазы I располагающийся на периферии ядра. У стерильных гибридов половые хромосомы формируют открытый половой бивалент, который перемещается в центральную область ядра. У гибридов, гетерозиготных по множественным Rb-транслокациям, «хромосомная хореография», обусловленная поиском гомологии, определяет формирование сложных конфигураций хромосом, включающих как закрытые Rb-триваленты, так и цепочки, образованные Rb-метацентриками, гомологичными друг другу по одному из плеч, и акроцентриками. Количество элементов в цепочке может увеличиться за счет синапсиса между короткими С-гетерохроматиновыми плечами негомологичных акроцентриков.

Сочетание методов электронной микроскопии и иммуноокрашивания позволяет идентифицировать элементы движения и синапсиса хромосом на всех стадиях профазы мейоза, оценить степень их гомологии по структуре СК и расширить представления о природе эволюции хромосом в разных популяциях животных одного вида и видовдвойников. Все животные кариотипированы и предоставлены для исследования д.б.н И.Ю. Баклушинской и д.б.н. Е.А. Ляпуновой (ИБР РАН). Работа выполнена на средства гранта РФФИ № 08-04-01725.

Поиск и разработка молекулярных маркёров генов устойчивости к киле у капусты пекинской Нгуен Мин Ли (Москва, minhlyvn_21@yahoo.com) В современное время традиционные методы селекции дополняются новым молекулярным маркированием. Созданные за последние годы различные методы молекулярного маркирования генов и признаков позволили в значительной мере сократить продолжительность селекционного процесса у сельскохозяйственных культур.

Целью работы является изучение эффективности различных маркеров для дифференциации устойчивых и восприимчивых к киле генотипов в расщепляющейся по устойчивости популяции пекинской капусты из коллекции Селекционной станции им.

Н.Н.Тимофеева (РГАУ-МСХА имени К.А.Тимирязева) и разработка маркеров гена устойчивости к киле.

На первом этапе исследований была проведена оценка и дифференциация растений по устойчивости/восприимчивости к киле на искусственном инфекционном фоне. В анализе использовали инбредные родительские линии различного происхождения, F1 гибридные и расщепляющиеся потомства F2 и ВС1S (беккросс от скрещивания с восприимчивым родителем).

На втором этапе работы оценена эффективность пяти специфических молекулярных маркеров, разработанных российскими и японскими учеными: SCARp91F- SCARp61R (Монахос, Игнатов, 2007), BRMS-088 и BRMS-096 (Hirai, 2004), OPC11-1S и OPC11-2S (Suwabe, 2003) в трех комбинациях устойчивых и восприимчивых родительских форм капусты и их расщепляющихся потомствах. В результате оценки только два маркера SCARp91F - SCARp61R и BRMS-088 показали полиморфизм во всех исследуемых комбинациях линий, но при анализе популяций ВС1S их эффективность не была выявлена.

На третьем этапе был проведен молекулярный анализ с 287 RAPD -праймерами в комбинации 20-2cc1 x ES1 и их популяции ВС1S и выявлен 394RAPD-маркер, локализующийся на расстоянии 2,8 сМ от гена устойчивости.

394RAPD-маркер является пригодным для селекции пекинской капусты на устойчивость к киле. В дальнейшем на основе данного маркера будет разработан высокоспецифичный SCAR-маркер. Выражаю благодарность своим научным руководителям Монахосу С.Г. и Готовцевой И.П. за оказанную большую помощь при подготовке тезисов и доклада.

Геномный скрининг для выявления гена-детерминанта прионоподобного фактора [NSI+] дрожжей Saccharomyces cerevisiae Нижников А.А., Магомедова З.М. (Санкт-Петербург, Ant.nizhnikov@gmail.com) Прионами называют амилоидогенные белки, обладающие инфекционными свойствами.

Наиболее изученным прионом дрожжей S. cerevisiae является [PSI+], представляющий собой амилоидную изоформу фактора терминации трансляции Sup35. Прионоподобная агрегация Sup35 вызывает супрессию ряда нонсенс-мутаций (например, ade1-14UGA), что приводит к прототрофности штамма на селективной среде без аденина. Нами был выявлен новый нехромосомный фактор S. cerevisiae, который аналогичен [PSI+] по фенотипическому проявлению, однако не связан с прионизацией Sup35. Этот фактор был назван [NSI+]. Ранее нами было показано, что фактор [NSI+] обладает свойствами дрожжевого приона:

демонстрирует доминантный неменделевский тип наследования в мейозе и обратимую элиминацию, способен к спонтанному возникновению de novo и обладает цитоплазматической инфекционностью.

Нашей приоритетной задачей является идентификация гена-детерминанта [NSI+], а также выявление взаимодействующих с ним белков. Все известные прионы с повышенной частотой индуцируются при сверхэкспрессии соответствующих генов-детерминантов.

Для выявления кандидатов на роль гена-детерминанта [NSI+] мы провели скрининг с использованием адресной дрожжевой геномной библиотеки YSC4613. Библиотека включает 1588 клонов Escherichia coli, каждый из которых несет плазмиду на основе челночного многокопийного вектора с уникальным фрагментом генома S. cerevisiae с известной нуклеотидной последовательностью. Трансформация дрожжей этими плазмидами приводит к сверхэкспрессии соответствующих генов. Полный скрининг библиотеки (1588 индивидуальных трансформаций) позволил выявить тридцать последовательностей, сверхэкспрессия которых приводила к индукции прототрофности по аденину в штамме [nsi-].

Таким образом, целый ряд белков прямо или опосредовано взаимодействует с прионным детерминантом [NSI+]. Среди выявленных последовательностей пять содержали гены, кодирующие аспарагин-глутамин обогащенные белки (DEF1, HAA1, NAB2, PUF4, YAK1).

Поскольку наличие аспарагин-глутамин обогащенных трактов является отличительной особенностью дрожжевых прионов, перечисленные белки являются приоритетными кандидатами на роль детерминанта [NSI+]. Дальнейшая работа с использованием комплекса генетических и биохимических методов позволит идентифицировать ген-детерминант прионоподобного фактора [NSI+] среди выявленных в скрининге кандидатов.

Научно-исследовательская работа выполняется в рамках реализации ФЦП “Научные и научно-педагогические кадры инновационной России” на 2009-2013 годы. Также проект поддержан грантом правительства Санкт-Петербурга 2.6/04-05/122.

Экспрессия рецепторов серотонина в эмбриогенезе шпорцевой лягушки Xenopus laevis Никишин Д.А., Кремнёв С.В. (Москва, embryopluteus@gmail.com) Вещества, идентичные медиаторам нервной системы, являются универсальными регуляторами онтогенеза, включая наиболее ранние стадии зародышевого развития. В частности, была продемонстрирована способность лигандов холино-, адрено- и, предположтельно, серотонинорецепторов влиять на процесс делений дробления у шпорцевой лягушки Xenopus laevis. В последние годы показана и экспрессия 1адренорецептора на всех стадиях эмбриогенеза. В ранних эмбрионах X. laevis также выявлено присутствие серотонина, паттерн локализации которого изменяется в ходе раннего развития, и его функциональная активность. При инкубации эмбрионов с момента оплодотворения и до конца гаструляции антагонисты 5–НТ3- и 5–НТ4-рецепторов вызывают нарушения формирования лево-правой асимметрии. При этом молекулярно-биологические данные о рецепторном звене донервной серотонинергической системы малочисленны – экспрессия серотониновых рецепторов продемонстрирована лишь в раннем эмбриогенезе Caenorhabditis elegans, дрозофилы и мыши. Данная работа посвящена изучению экспрессии рецепторов серотонина (5–НТ3A и 5–НТ1A) в эмбриогенезе шпорцевой лягушки.

Pages:     | 1 |   ...   | 22 | 23 || 25 | 26 |   ...   | 85 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.