WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 9 | 10 || 12 | 13 |   ...   | 85 |

Второе направление работы связано с разработкой препаратов антибактериального действия. Исследования связаны с применением механохимической стадии в технологическом цикле производства антибактериального препарата из слоевищ лишайников на этапе обработки сухого сырья и последующей водно-спиртовой экстракцией, что позволяет выделять более полную группу природных веществ антибиотического действия (ПВАД). При этом углеводосодержащие метаболиты (амино--поли- и олигосахариды) слоевищ лишайников образуют с ПВАД комплексы, представляющие собой типичные наноструктуры. Результаты клинических исследований показали высокую антибиотическую активность данного препарата даже в отношении лекарственноустойчивых форм микобактерий туберкулёза.

Молекулярные механизмы цитотоксичности наночастиц на основе Au+ и Ag+ на первичную культуру клеток карциномы Герена in vitro Шмараков И.А., Риджак Н.М., Свереда И.В. (Черновцы, igor.shmarakov@gmail.com) Современные подходы в коррекции онкогенеза основаны на использовании нанобиотехнологических препаратов (НЧ) на основе Ag+ и Au+ Способ получения, форма, размеры и компонентный состав наночастиц определяют их метаболическую активность, а также возможные токсические эффекты, молекулярные механизмы которых требуют разноуровневого мониторинга. Цель работы – провести скрининговую оценку цитотоксичности наночастиц на основе Ag+ и Au+ на первичную культуру клеток карциномы Герена in vitro. После культивирования первичной культуры с наночастицами Ag+, Au+, Ag+/Au+ через 6, 24, 48 часов оценивали их цито- и генотоксичность на основе определения жизнеспособности клеток в тесте с трипановым синим, уровня значений ЛДГ-«вытока», МТТ-теста и степени поврежденности ядерной ДНК методом микрогельэлектрофореза единичных клеток. Исследуемые наночастицы проявляли высокую цитотоксичность, снижая количество жизнеспособных клеток до 50% по сравнению с контролем уже через 6 часов после кокультивирования. Часть жизнеспособных клеток в дальнейшем достигала 5-20% от контроля на 48 час инкубации. В то же время, наивысшей токсичностью владели композитные НЧ Ag+/Au+ (жизнеспособных клеток 5%). Установленное повреждение мембран и некротическая гибель согласовывалась с возрастанием ЛДГ-«вытока» (4–мккат/мг) при низкой жизнеспособности клеток на 48 час инкубации и снижении метаболической активности. По данным проведенного комет-анализа максимальное повреждение ДНК, наблюдалось на 48 час инкубации с наночастицами Ag+ (индекс ДНКкомет (Идк) = 3,27) и композита Au+/Ag+ (Идк = 3,3), в то время как менее генотоксичными были наночастицы Au+ (Идк = 2,8). Однако, на ранних этапах эксперимента после проведения микроэлектрофореза визуализовались кометы, соответсвующие С0-С3 типам с моментом хвоста 50-100 мкм, свидетельствующим о гибели клеток по механизму апоптоза.

На 48 час кокультивирования резко возрастало количество комет С4 типа, значение момента хвоста которых (до 300 мкм) свидетельствовало о значительной деструкции генома, что, наряду с понижением общей метаболической активности, подтверждало некротический механизм гибели клеток. Таким образом, наивысшим цито- и генотоксическим эффектом по отношению к первичной культуре клеток карциномы Герена владеет нанокомпозит Au+/Ag+, что указывает на перспективность его использования, как противоопухолевого средства.

Работа поддержана Грантом Президента Украины для молодых учёных.

ПОДСЕКЦИЯ «БИОХИМИЯ» Состояние про- и антиоксидантного баланса в митохондриях сердца старых крыс при введении комплекса предшественников и модуляторов синтеза убихинона Андреева А.С., Петухов Д.Н., Кучменко Е.Б. (Украина, Киев, parpa@list.ru) Старение – физиологический процесс, связанный с морфологическими и функциональными изменениями в клеточных структурах, которые приводят в конечном этапе к прогрессивному дисбалансу регуляторных систем организма, в том числе гормональных, нейроэндокринных, и гомеостатических механизмов.

Одной из теорий старения является свободнорадикальная теория старения, которая предполагает, что старение является результатом повреждения тканей и органов вследствие действия свободных радикалов, что в свою очередь приводит к окислению липидов, белков, повреждению ДНК. Изменения баланса между активностью про- и антиоксидантных систем может привести к оксидативному стрессу.

Цель работы – исследовать действие комплекса предшественников и модулятора биосинтеза убихинона (CoQ), а именно витамина Е, пара-оксибензойной кислоты (предшественника синтеза бензохинонового ядра) и метионина (донора метильных груп в бензохиноновом ядре молекулы CoQ) на активность оксидоредуктазных систем и интенсивность свободнорадикальных процессов в митохондриях сердца старых крыс.

Объектом исследования были взрослые крысы-самцы в возрасте 6-7 месяцев и старые крысы-самцы в возрасте 24 месяца, которым в течение 10 дней перорально вводили комплекс предшественников и модулятора биосинтеза CoQ. После чего проводили декапитацию животных и выделяли митохондриальную фракцию сердца.

В митохондриях сердца определяли содержание витамина Е и CoQ, активность сукцинат- и NADH-CoQ-оксидоредуктазных систем. Состояние про- и антиоксидантных систем оценивали по содержанию ТБК-позитивных продуктов, диеновых конъюгатов и продуктов свободнорадикального окисления белков.

При введении комплекса предшественников и модуляторов биосинтеза CoQ наблюдается уменьшение NQR-активности в митохондриях сердца старых животных по сравнению с контрольными старыми животными. Исследование содержания витамина Е в митохондриях сердца старых крыс показало, что при введении исследуемого комплекса его содержание возрастает и значительно превышает этот показатель у взрослых животных. Вместе с тем наблюдается достоверное уменьшение в митохондриях сердца животных, которым вводили комплекс биологически активных веществ, содержания вторичных продуктов окисления липидов – ТБК-позитивных продуктов, по сравнению со старыми и взрослыми контрольными животными, которым не вводили комплекс. Результаты проведенных исследований показали, что введение комплекса предшественников и модуляторов биосинтеза CoQ приводит к достоверному уменьшению содержания продуктов свободнорадикального окисления белков в митохондриях сердца старых животных по сравнению со старыми контрольными животными.

Результаты исследования показывают, что при действии комплекса биологически активных веществ наблюдается коррекция возрастных изменений содержания CoQ, функционирования NADH-CoQ-оксидоредуктазных ферментных систем в митохондриях, интенсивности свободнорадикального окисления липидов и белков в митохондриях сердца.

Роль матриксного белка фибулина-5 в регуляции функциональных свойств урокиназы Аниол Наталия Владимировна (Москва, koptelovaN@gmail.com) Фибулин-5 – это секретируемый внеклеточный матриксный гликопротеин, который связывается с тропоэластином и необходим для нормальной структурной организации эластина. Фибулин-5 также связывается с интегриновыми рецепторами (51, 41, v3, v5, 91) и опосредует интегрин-зависимую клеточную адгезию и миграцию.

Ранее в нашей лаборатории было показано, что фибулин-5 связывается с протеолитическим доменом активатора плазминогена урокиназного типа (урокиназа или uPA), который является ключевым регулятором системы внеклеточного протеолиза, деградации и ремоделирования межклеточного матрикса. Известно, что урокиназа регулирует клеточную миграцию не только за счет протеолитического действия, но и путем активации внутриклеточной сигнализации. Рецептор урокиназы (uPAR) играет центральную роль в передаче сигнала от урокиназы внутрь клетки. Однако GPI-рецептор урокиназы лишен трансмембранного и внутриклеточного доменов и поэтому не может самостоятельно запускать внутриклеточные сигнальные каскады. Считается, что активация сигнальных путей происходит опосредованно через некоторые трансмембранные рецепторы, с которыми взаимодействует uPAR. Особую роль среди таких посредников играют интегрины, рецепторы, ассоциированные с G-белками и тирозинкиназные рецепторы фактора роста EGFR. Однако механизмы внутриклеточной сигнализации урокиназы все еще до конца не ясны и нуждаются в изучении.

Мы предположили, что урокиназный тип активатора плазминогена стимулирует клеточную миграцию опосредованно через матриксный белок фибулин-5. Для проверки данной гипотезы были исследованы две линии клеток: эмбриональные мышиные фибробласты дикого типа (MEFwt) и нокаутированные по гену фибулина-5 (MEFko).

Оказалось, что адгезивные свойства и подвижность клеток MEFwt и MEFko различны.

Клетки MEFko быстрее прикрепляются к субстрату, но медленнее движутся по сравнению с клетками дикого типа. Влияние урокиназы на клеточную подвижность было изучено в камере Бойдена и на модели царапины. Оказалось, что урокиназа стимулирует направленную миграцию клеток обоих типов по градиенту урокиназы, однако статистически достоверная разница в движении клеток под действием урокиназы по сравнению с контролем наблюдалась лишь у клеток дикого типа. Таким образом, полученные данные могут свидетельствовать об участии фибулина-5 в регуляции миграции клеток, вызванной урокиназой.

Светособирающий комплекс LH2 из серной фотосинтезирующей бактерии Eсt. haloalkaliphyla Ашихмин Александр Александрович (Орел, alex-asch@rambler.ru) Изучен светособирающий комплекс LH2, выделенный из мембран серной бактерии Eсt. haloalkaliphyla методом ПАГЭ. Его спектр поглощения в ближней ИК области характеризуется двумя полосами при 800 и 850 нм. Полоса поглощения при 800 нм у данного комплекса была гомогенной, как у комплексов LH2 из несерных бактерий. В LHкомплексе Alc. minutissimum полоса при 800 нм была гетерогенной (два компонента) и с этой характеристикой связывают способность комплексов собираться без каротиноидов.

Основные каротиноиды в комплексе LH2 из Eсt. haloalkaliphyla – ангидрородовибрин (34%) и спириллоксантин (37%). Изучена возможность подавления синтеза каротиноидов Eсt. haloalkaliphyla с помощью ДФА. Были выращены клетки с различным содержанием каротиноидов (60-70%, 35-45% и 25-30% от контроля). Определен состав каротиноидов во всех видах образцов. При концентрации ДФА 12 мг/л в среде выращивания были получены практически бескаротиноидные клетки (3-5% от контроля), которые содержали следы -каротина и ОН-нейроспорина. Популяции комплексов LH2 из клеток с различным содержанием каротиноидов исследованы на гетерогенность состава. В любой из данных популяций присутствовала часть комплексов LH2 с более высоким содержанием каротиноидов, чем в исходной мембране. Они были более термоустойчивы и выделялись, как «выжившие» комплексы после нагревания мембран при 80°С. Полученные результаты согласованы с ранее имеющимися данными по гетерогенности LH2 комплексов у Alc. minutissimum.

Проведено встраивание экстрактов каротиноидов из бактерии Alc. minutissimum (основной каротиноид – родопин 68%) в бескаротиноидные хроматофоры Eсt. haloalkaliphyla. Удалось добиться максимального встраивания (95%) по сравнению с контролем. Изучены спектры поглощения, КД, флуоресценции и возбуждения флуоресценции, а также фотоустойчивость, термостабильность полученных комплексов со встроенными каротиноидами. Данные характеристики соответствуют характеристикам комплекса LH2 из контрольных клеток.

Активность ацетилхолинэстеразы и бутирилхолинэстеразы в плазме крови пациентов с мягким когнитивным снижением и болезнью Альцгеймера Багрова Д.И., Морозова А.Ю. (Санкт-Петербург, darushka87@gmail.com) Нарушения функционирования ЦНС, возникающие при когнитивных расстройствах и нейродегенеративных заболеваниях, таких как болезнь Альцгеймера, сопровождаются изменениями биохимических показателей активности ферментов в различных тканях и органах. С целью оценить активность ацетилхолинэстеразы (АХЭ) и бутирилхолинэстеразы (БуХЭ) при нейродегенеративных и когнитивных расстройствах у человека была исследована плазма крови, как в наиболее доступный экспериментальный материал.

В работе исследована активность АХЭ и БуХЭ в плазме крови пациентов разного пола с диагнозом мягкого когнитивного снижения (МКС) и болезни Альцгеймера, характеризующихся разной степенью нарушений внимания и памяти.

Было показано, что у пациентов мужского пола с диагностированным МКС активность БуХЭ (0,256±0,008 нмоль БуТХ/мин/мг) выше активности БуХЭ пациентов с диагностированной болезнью Альцгеймера (0,107±0,001 нмоль БуТХ/мин/мг) в 2.4 раза.

Показатели активности БуХЭ у пациентов мужского пола с диагнозом МКС сопоставимы по значениям активности с пациентами без нарушений внимания и памяти.

Исследование активности АХЭ и БуХЭ в плазме крови пациентов женского пола с диагностированным МКС показали, что активность БуХЭ снижается по сравнению с контрольной группой (с 0,153±0,004 нмоль БуТХ/мин/мг белка до 0,114±0,002). После применения препарата – глиатилина, активность БуХЭ восстанавливается до контрольных значений (0,201±0,014 нмоль БуТХ/мин/мг белка). Достоверных изменений (р<0,05) в активности АХЭ не выявлено у представителей разного пола.

Полученные нами данные, свидетельствуют о различии в активности холинхэстераз у пациентов разного пола с диагнозами МКС и болезни Альцгеймера. Вероятно, при назначении медикаментозного лечения пациентам с диагнозом МКС одним из факторов, который необходимо учитывать, является пол пациента. При своевременной диагностике и применении индивидуально подобранных лекарственных препаратов можно смягчить симптомы когнитивных нарушений и, возможно, развивающейся болезни Альцгеймера.

Показатели биохимической активности ферментов получены нами на пациентах прошедших физиологический тест ADAS-соg (шкала оценки МКС и БА – когнитивная часть).

Коэффициент ADAS-соg исследованных пациентов с МКС соответствует 2, а у пациентов с болезнью Альцгеймера колеблется от 15 до 49.

Таким образом, исследование ферментов АХЭ и БуХЭ в плазме крови человека позволяет оценить степень когнитивных нарушений, при развитии патологического состояния, такого как МКС и болезнь Альцгеймера. Работа поддержана грантом РФФИ (№ 06-04-48414), и грантом Президиума РАН «Фундаментальные науки – медицине» 2009-2010 и «Стипендия им. Л.А. Орбели» ИЭФБ РАН. Работа выполнена на базе Института Эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова, РАН, в лабораториях «Молекулярной эндокринологии» и «Сравнительной физиологии и патологии ЦНС», Санкт-Петербург.

Pages:     | 1 |   ...   | 9 | 10 || 12 | 13 |   ...   | 85 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.