WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 19 |

Определение Отбирают пробы почвы на глубине 10 см массой по 200 г, затем санитарноиз 1 г подготовленной почвы готовят 10-кратные разведения на показательных стерильной водопроводной воде (1:10–1:1000000000), исследуют микробов — при помощи метода Коха в чашках Петри со средой Китгаанаэробных Тароцци или агаром Вильсона-Блэра, инкубируют 24–48 ч в клостридий термостате при Т = 43 °С. На агаре Вильсона-Блэра растут (Closlridium клостридии в глубине среды, образуя черные колонии perfringens), (восстанавливается сернистое железо) и разрыв плотной среды т.е. определение из-за газов.

перфрингенс-титра 1 Определение коли- Отбирают пробы почвы на глубине 10 см массой по 200 г, чества термофиль- затем из 1 г подготовленной почвы готовят 10-кратные ных микробов в 1 г разведения на стерильной водопроводной воде почвы (для выявле- (1:10–1:1000) и исследуют при помощи метода Коха ния характера загря- в чашках Петри с мясо-пептонным агаром (Т = 43–50°С) знений почвы (наво- зом, стоками, ком- постом, фекалиями) Определение коли- 10-кратные разведения суспензии почвы на стерильной чества протейных водопроводной воде (1:10–1:10000) исследуют палочек в 1 г почвы при помощи метода Шукевича: вносят по 1 мл разведения (для выявления в конденсационную воду свежескошенного МПА, фекальных 48 ч при Т = 37 °С загрязнений почвы) Определение пато- Различные 10-кратные разведения суспензии почвы генных микробов – засевают отдельными стерильными пипетками в пробирки возбудителей сибир- или чашки Петри со специальными и дифференциальноской язвы, ботулиз- диагностическими средами с последующей идентификацией ма, столбняка, выделенных чистых культур возбудителей болезней, включая сальмонеллезов и биопробу и серологический метод исследования др. (проводится при необходимости) Качественный и количественный состав микрофлоры в объектах внешней среды (воде, воздухе, почве и навозе) приведен в таблице.

Качественный и количественный состав микрофлоры объектов внешней среды Процентное содержание микробов в объектах внешней среды Группы микробов в почве в навозе в воде в воздухе 1 2 3 4 63 % 50–67 % 10 % 87 % (микрококки, (микрокок- Бактерии (Echerichia coli, (Echerichia coli, сарцины, ки, сарцины термофилы и др.) термофилы и др.) псевдомонады) и др.).

5–15 % 50 % (сенная Бациллы (Bacillus subtilis, 5 % 10 % и карто- Clostridium) фельная бациллы) 10 % (весной) Актиномицеты 1 % — 3 % 15 % (осенью) Спирохеты 1–2 % 3 % 2–4 % — 1 2 3 4 7 % 20 % Плесени (на севере Pen., 2 % 3 % (Мисor, Muc.) Asp.,Pen.).

Дрожжи и 1,0 % 1 % 0,5 % 2 % кандиды Вирусы 1–2 % (бактериофаги, энтеровирусы) 0,5 % 1 % Простейшие 5 % 1 % 10 % — (амебы и др.) Растения 10 % — 5 % — (водоросли) В 1 м3 воз- В 1 г почвы В 1 г навоза В 1 мл воды духа нахо- содержится содержится находится от дится от 3 до от 1 млрд. до 25 от 1 до 90 млрд. 10 до 1 млрд. 120000 мик- Общее млрд. в микробов в микробов в робов в зави- содержание зависимости от зависимости от зависимости от симости от всех микробов химического температуры, сапробной зо- времени года в единице состава почвы, ее аэрации, срока и ны воды: и места: 3–объема влажности и способа хранения: 1)олиго- (тайга, лес, или массы температуры, аэробное сапробная 10– поле), 4000– конкретного расположения хранение — 1000; 2) мезо- 10000 (го- объема почвы по 90 млрд., сапробная: род), внешней среды отношению к анаэробное — 1000–100000; (парк гороповерхности, а 33 млрд; аэробно- 3) полисапроб- да), также климата и анаэробное — ная:100000 — (молокоза- времени года 17 млрд. 1000000000. вод), (птичник).

Окончательную оценку микробной обсемененности дают в соответствии с показателями ГОСТа (см таблицу).

ГОСТ почвы — оценка ее санитарного состояния по микробиологическим показателям (по З.Н. Кочемасовой и др., 1987) Общее Количество № Категория микробное Коли-титр, Перфрингенстермофилов, п/п почвы число, г титр / г тыс/г млн/г 1 Чистая Менее 2 Более 1,0 Более 0,1 Менее Слабо 2,0–2,4 1,0–0,01 0,1–0,001 10–загрязненная Умеренно 2,5–3,0 0,01–0,001 0,001–0,0001 100–загрязненная Сильно 4 Более 3 Менее 0,001 Менее 0,0001 1000 и более загрязненная Контрольные вопросы 1. Какие методы используют для определения микробной обсемененности воздуха 2. Каковы критерии санитарной оценки воздуха в зависимости от режима 3. Что такое коли-титр почвы 4. Какая почва считается загрязненной Лабораторная работа № 23 (8 часов) Санитарно-бактериологическое исследование молока и молочных продуктов Цель занятия Освоить санитарно-бактериологические методы оценки качества молока и молочных продуктов.

Материалы и оборудование Пробы молока свежего, сомнительного качества, пастеризованного, творога, сметаны, кефира, ацидофилина хорошего и сомнительного качества, 4 комплекта по 6 пробирок с 9 мл стерильной воды или физраствора, чашки Петри, пробирки с МПА по 12–15 мл, 4 комплекта по 6 пробирок со средой Кесслера, 4 комплекта градуированных пипеток по 1,2 мл без «мертвого» пространства, растворы метиленового синего (голубого) для редуктазной пробы резазурина, молочный и сусло-агар.

Содержание темы Для бактериологического исследования после тщательного перемешивания в стерильную колбу отбирают 200–500 мл молока.

Методы определения общего количества микробов в молоке подразделяются на косвенные и прямые. Косвенные методы микробной обсемененности основаны не на установлении количества микробов в 1 мл, а на выявлении некоторых продуктов обмена микробных клеток, так как имеется прямая зависимость: чем больше микробов, тем больше продуктов обмена (редуктазы). Прямые методы включают способы определения микробов в определенном объеме молока, основанные на посеве в плотную питательную среду с целью получения от каждой микробной клетки колоний и их подсчета.

Каждый из этих методов, кроме положительных факторов, имеет и недостатки. Так, косвенные улавливают всю имеющуюся редуктазу, тогда как микробная обсемененность составляет ее определенную часть; метод прямого подсчета трудоемкий, требует определенного оборудования (счетные камеры, камера Вольфлюгеля для счета колоний, счетчики и др.), методы посева улавливают только количество живых микроорганизмов.

Микробная редуктаза (анаэробная дегидрогеназа) — экзофермент, выделяемый микроорганизмами в процессе жизнедеятельности, способный обесцвечивать краски в молоке и восстанавливать его первоначальный цвет.

Косвенные методы определения микробной обсемененности молока Пробы с метиленовым голубым. Вначале приготавливают рабочий раствор метиленового голубого для редуктазной пробы, для чего берут 195 мл дистиллированной воды и 5 мл насыщенного спиртового раствора краски, т.е. 0,025 %-ный раствор. Для ускоренной редуктазной пробы раствор разбавляют еще в 10 раз.

Техника постановки В пробирки Ру наливают 1 мл рабочего раствора краски и 20 мл молока или в бактериологические пробирки (150–15 мм), соответственно, 0,6 и 10 мл, закрывают резиновой пробкой, тщательно перемешивают неоднократным осторожным переворачиванием пробирок и вращением их между ладонями, затем ставят их в водяную баню или термостат при 38–40 °С. Учет результатов проводят через 20 мин, 3 ч и 5 ч 30 мин. В зависимости от времени обесцвечивания красителя молоко подразделяют на классы. Хорошее — 1-й класс — продолжительность обесцвечивания — свыше 5 ч 30 мин, количество микробов в 1 мл молока менее 500 000.

Далее, соответственно: 2-й класс — удовлетворительное — свыше 2 ч до 5 ч 30 мин, количество микробов — от 500 000 до 4 млн.; 3-й класс — плохое — свыше 20 мин до 2 ч, от 4 млн. до 20 млн.; 4-й класс — очень плохое — до 20 мин —20 млн. и выше.

Для постановки ускоренной редуктазной пробы к 10 мл молока добавляют 1 мл раствора метиленового голубого в 10-кратном разведении. Техника постановки такая же. Одновременно ставят контроль: 1) 10 мл исследуемого молока + 1 мл дистиллированной воды; 2) кипяченое исследуемое молоко + метиленовый голубой 1мл— результат контроля отрицательный. Учет результатов проводят через 10 мин, 1 ч, 3 ч и более. Качество молока устанавливают по времени обесцвечивания. Хорошее молоко — продолжительность обесцвечивания — свыше 3 ч, количество бактерий — менее 0,5 млн.; удовлетворительное — обесцвечивается от 1 ч до 3 ч, количество бактерий — от 0,5 до 4 млн в 1 мл; плохое обесцвечивается свыше 10 мин до 1 ч, микробная обсемененность составляет от до 20 млн/мл; очень плохое — обесцвечивание наступает за 10 мин и менее, количество микробов — более 20 млн/мл.

Проба с резазурином. Преимущество пробы: результат по исследованию микробной обсемененности молока получают за 1 ч.

Недостатки: срок годности препарата ограничен, препарат из разряда дефицитных, рабочие растворы хранятся недолго (при 3– 5°С) — 2–3 недели.

Перед постановкой опыта готовят рабочий раствор резазурина в концентрации 0,005%, для чего вначале готовят маточный раствор: в 100 мл кипяченой охлажденной дистиллированной воды растворяют 0,05 г резазурина, а перед постановкой опыта разбавляют дистиллированной водой еще в 10 раз.

Ход исследования В пробирку с 10 мл молока вносят 1 мл рабочего раствора резазурина и далее поступают, как при исследовании с метиленовым голубым. Учет результатов проводят через 20 мин и 1 ч. Через 20 мин обесцвеченные пробирки исследуемых проб молока удаляют, остальные после перемешивания снова помещают в водяную баню или термостат. Качество молока устанавливают по обесцвечиванию и окраске с учетом количества затраченного времени.

Хорошее молоко — 1-й класс (через 1 ч приобретает сине-стальной цвет, содержит менее 0,5 млн. микробных тел в 1 мл); далее, соответственно: удовлетворительное (2-й класс — через 1 ч окраска молока сиреневая или сине-фиолетовая, 0,5–4 млн. микробных тел в 1 мл); плохое (3-й класс — через 1 ч окраска розовая или белая, 4-20 млн. микробных тел в 1 мл); очень плохое (4-й класс — до 20 мин, свыше 20 млн микробных тел в 1 мл, белого цвета).

Методы прямого подсчета микроорганизмов в молоке Метод Фроста. На предметном стекле, чаще с обратной стороны, обозначают площадь в 1 см, в центр ее вначале вносят 0,1мл исследуемого молока, смешивают с каплей расплавленного и охлажденного до 45–47 °С МПА и равномерно распределяют на этой площади. Инкубируют при 37 °С 24 ч, подсчитывают количество колоний на поверхности среды и в среде, умножают на 10, получают количество микробных тел в 1 мл исследуемой пробы молока. Этот метод называют методом агаровых пластин.

Метод серийных разведений с высевом в МПА. Вначале приготавливают разведения молока, они могут быть двукратными и т.д., но чаще готовят десятикратные. Берут 6 пробирок с 9 мл стерильной воды или физраствора, в первую пробирку стерильной пипеткой вносят 1 мл молока, тщательно перемешивают, другой пипеткой берут 1 мл в первой пробирке и переносят во вторую, тщательно перемешивают и 1 мл переносят в третью и т.д., включая 6-ю. Таким образом получают разведения молока 1:10, 1:100, 1:1000 и т.д. до 1:1000000. В зависимости от предполагаемой обсемененности из двух пробирок (например, 4-й и 5-й) по 1мл вносят в стерильные чашки Петри, заливают расплавленным и остуженным до 45 °С МПА по 12–15 мл, перемешивают, чашки оставляют для застывания среды, затем заворачивают в бумагу и помещают в термостат вверх дном. На бумаге указывают номер пробы молока, степень разведения, дату посева. Разведения молока следует выбирать таким образом, чтобы было от 50 до 300 колоний. В случае, когда колоний вырастает более 150, дно чашки расчерчивают восковым карандашом и подсчитывают только половину (умножая затем на 2). Количество колоний умножают на разведение молока и получают число микроорганизмов в 1 мл после суточной инкубации посевов в термостате.

Определение коли-титра молока. Коли-титр молока — наименьшее его количество, в котором обнаружена хотя бы одна кишечная палочка. Исследованию на коли-титр подвергают свежее (сырое) и пастеризованное молоко, сливки и другие молочные продукты.

Коли-титр молока устанавливают бродильным методом на среде Кесслера, в состав которой, кроме необходимых для размножения микробов питательных веществ, входят генциановый фиолетовый, бычья желчь — вещества, угнетающие рост и развитие грамположительных микробов. Кроме того, режим инкубации (43 °С) посевов создается в пределах температурного максимума, при котором кишечная палочка еще способна развиваться, размножаться (хотя и с трудом), но зато рост других микроорганизмов угнетается.

Приготовление среды Кесслера. К 1 л дистиллированной воды прибавляют 10 г пептона, 50 мл свежей бычьей желчи, смесь кипятят 30 мин и фильтруют. Добавляют 10 г лактозы, доводят объем до 1 л. К среде добавляют 4 мл 10 %-ного водного раствора генцианового фиолетового, разливают в пробирки по 5 мл с поплавками (бродильными трубочками) и стерилизуют 15 мин при 1 атм.

Методика приготовления Вначале готовят 10-кратные разведения молока в 6 пробирках. Затем берут 6 пробирок со средой Кесслера. Используя стерильные градуированные пипетки, вносят последовательно в первые три пробирки со средой Кесслера по 1 мл молока в разведении 1:10, 1:100, 1:1000; в 3 пробирки со средой Кесслера по 0,1 мл молока в разведении 1:10 000, 1:100000, 1:1000000. Засеянные пробирки помещают в термостат при 43 °С на 24–48 ч, после чего производят учет результатов исследований.

Появление газа в поплавках свидетельствует о возможном загрязнении продукта кишечной палочкой. Для подтверждения этого и установления вида микробов содержимое забродивших пробирок высевают на среду Эндо в чашках Петри и инкубируют в термостате 1–2 суток при 37 °С. При появлении на среде Эндо красных с металлическим блеском или розовых слизистых колоний их изучают выборочно, из них готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. При необходимости для выявления цитратотрицатель-ных бактерий производят посев на среду Симонса или Козера: штаммы кишечной палочки, изменяющие среду Симонса из оливково-зеленого в светло-синий цвет, не учитываются.

Оценка качества молока по коли-титру 1) коли-титр молока более 3 мл — отсутствие газообразования во всех 6 пробирках;

2) коли-титр равен 3 мл — газообразование наблюдается в одной из 3 пробирок, засеянных по 1 мл разведении молока;

3) коли-титр равен 0,3 мл — брожение обнаруживают более чем в одной пробирке с посевом 1 мл или хотя бы в одной из трех пробирок с посевом 0,1 мл;

4) коли-титр менее 0,3 мл — газообразование обнаруживают в 5 или 6 пробирках. Такое молоко к употреблению непригодно.

Окончательную оценку молока дают согласно таблице.

Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 19 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.