WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 19 |

Второй этап заключается в пересеве из флаконов, пробирок с газообразованием и изменением цвета на дифференциально-диагностическую среду Эндо и инкубации в термостате в течение суток.

На третий день при наличии фуксиново-красных колоний с металлическим блеском или без него из них готовят мазки и ставят оксидазный тест. Он заключается в следующем: на фильтровальную бумагу, смоченную раствором А-нафтола-диэтил-п-фенилендиамина, наносят штрихом материал из 2–3 колоний со среды Эндо. Кишечная палочка не обладает оксидазной активностью и поэтому не изменяет цвет бумаги, грамотрицательна. Оксидазоположительные микробы вызывают посинение бумаги в течение 1 мин.

Кроме среды Эндо, можно использовать розоловый дифференциальный агар (РДА); посев делают уколом и в конденсационную жидкость. РДА — плотная питательная среда на основе МПА с добавлением У/о желчи, 1 — лактозы, 0,1% глюкозы и индикатора — розоловой кислоты. При рН 7,0—7,2 после стерилизации среда имеет розовый цвет. Кишечная палочка вызывает пожелтение среды, вспенивание конденсационной влаги и разрывы агара.

При микроскопическом подтверждении (грамотрицательные палочки) результат анализа считается положительным. Оценку исследований осуществляют по таблице.

Метод мембранных фильтров в техническом исполнении менее трудоемкий (экспресс-метод). Сущность метода: определенный объем исследуемой воды фильтруют через специальные фильтры, задерживающие кишечную палочку, затем фильтрат помещают на плотную питательную среду Эндо, инкубируют в термостате с Определение коли-титра и коли-индекса воды Количество положительных анализов воды из Коли-титр Коли-индекс 3 флаконов 3 пробирок 3 пробирок по 100 мл по 10 мл по 1 мл 0 0 0 более 333 0 0 0 333 0 1 0 333 1 0 0 250 1 0 1 143 1 1 0 143 1 1 1 91 1 2 0 91 2 0 0 111 2 0 1 72 2 1 0 67 2 1 1 50 2 2 0 48 2 2 1 86 3 0 0 43 3 0 1 26 3 0 2 16 3 1 0 23 3 1 1 13 3 1 2 8 3 2 0 11 3 2 1 7 3 2 2 5 3 3 0 4 3 3 1 2 3 3 2 0,9 3 3 3 Менее 0,9 Выше целью обнаружения фуксиново-красных колоний, характерных для кишечной палочки; дальнейшая дифференциация проводится, как при исследовании бродильным методом.

Техника исследования Применяют стерильные градоколовые фильтры из нитроцеллюлозы, помещенные в химический стаканчик с дистиллированной водой, стерильный фильтр Зейтца, насос Комовского или водоструйный, среду Эндо в чашках Петри.

Через мембранный фильтр (№ 2 или № 3) с диаметром фильтрующей поверхности около 30 мм и средней величиной пор 0,5– 0,7 мкм пропускают такое количество воды, чтобы на фильтре получилось не более 50 колоний кишечной палочки. Так, объем исследуемой водопроводной воды составляет 300 и 500 мл, нецентрализованных источников — 10 и 100 мл. При анализе загрязненных вод следует применять фильтрование после предварительного разведения воды. Для этого в 100 мл стерильной воды добавляют 1мл испытуемой воды. Коли-индекс определяют по таблице.

Определение индекса бактерий. Группа кишечных палочек Показатели Количество положительных анализов воды Из 3 флаконов 0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 3 по 100 мл Из 3 пробирок 0 0 1 0 0 1 1 1 1 2 2 по 10 мл Из 3 пробирок 0 1 0 0 1 0 1 1 0 1 1 по 1 мл Индекс Менее 3 3 3 4 7 7 11 14 15 21 150 Контрольные вопросы 1. Какие различают зоны воды в водоемах в зависимости от микробной обсемененности 2. Какие существуют методы исследования воды с целью определения ее качества 3. Каков ГОСТ воды Лабораторная работа № 21 (8 часов) Санитарно-бактериологическое исследование воздуха Цель занятия Освоить методы микробиологических исследований воздуха.

Материалы и оборудование Насос Комовского, аппарат Кротова, 8 чашек Петри с МПА, 6 пробирок с МПА по 10–12 мл столбиком, 4 комплекта пробирок с 9 мл физраствора (стерильного), весы, 6 пипеток по 1 мл (стерильных и завернутых в бумагу), 4 пробы почвы, оборудованное место бактериолога.

Содержание темы Одним из методов санитарно-гигиенической оценки воздуха закрытых помещений является метод определения его бактериальной загрязненности. Обсемененность воздуха выражают количеством микробов в 1 м3.

Методы микробиологического исследования воздуха подразделяют на седиментационные и аспирационные. Самым простым и доступным методом, не требующим специальной аппаратуры, является седиментационный метод Коха (метод оседания).

Метод Коха. Для определения бактериальной обсемененности воздуха закрытых помещений стерильную чашку Петри с плотной питательной средой открывают в местах отбора проб воздуха и выдерживают в течение 5–30 мин, после чего закрывают, заворачивают в стерильную бумагу и помещают в термостат в перевернутом виде на 24 ч.

По количеству выросших колоний определяют микробную обсемененность, исходя из того, что на поверхность питательной среды площадью 100 cм в течение 5 мин оседает столько микробов, сколько их содержится в 10 л воздуха, учитывая, что каждая микробная клетка дает начало одной колонии. Зная количество колоний и время экспозиции, вычисляют количество микробов, содержащихся в 1 м воздуха.

Этот метод позволяет определить и некоторые группы микробов (грибов или др.), имеющих санитарно-гигиеническое значение (Е, соli / г), если в чашках Петри будут находиться специальные среды (Эндо, Чапека и др.). В таких случаях изучают колонии и получают чистую культуру.

Более совершенными являются методы инструментального исследования: воздушной ударной среды с помощью аппарата Кротова, аспирационные методы, основанные на фильтрации или аспирации (просасывании) воздуха через специальные фильтры, стерильные жидкости, индифферентные порошки, адсорбирующие микрофлору. В аппарате Кротова воздух засасывается через конусовидную щель вершиной к центру в крышке из органического стекла и ударяется о поверхность вращающейся на диске плотной питательной среды в чашке Петри, причем микроорганизмы распределяются равномерно по всей среде.

В качестве питательной среды для определения общей микробной обсемененности используют МПА, а для определения санитарно-показательных микроорганизмов — специальные среды: для выявления золотистого стафилококка — молочно-солевой или желточно-солевой агар; грибов и дрожжей — сусло-агар и агар Сабуро;

кишечной палочки — среду Эндо (рис. 1). Посевы помещают в термостат Рис. 1. Рост колоний кишечной при 37 °С на 24 ч, подсчитывают копалочки на мембранных фильличество колоний. Зная количество трах в чашках со средой Эндо литров пропущенного воздуха, определяют общую микробную обсемененность воздуха помещения. Более достоверные результаты получают, когда через сутки инкубирования в термостате посевы выдерживают сутки при комнатной температуре. Результаты заносят в таблицу.

Бактериологическое исследование воздуха Метод Время посева Количество Результат исследования или объем воздуха колоний (микробное число) По Коху По Кротову По Коху: на столах открывают чашки Петри с МПА на 5 или 10 мин, затем делают надписи, заворачивают в бумагу, помещают в термостат в перевернутом виде.

По Кротову: чашки Петри с МПА помещают в аппарат Кротова, включают, записывают показатель количества засасываемого воздуха в 1 мин, время работы аппарата, после чего чашки вынимают и делают записи на чашке или бумаге: время работы аппарата, количество л/мин пропускаемого воздуха, фамилию исполнителя. Чашки помещают в термостат вверх дном.

Окончательные результаты получают после инкубирования в термостате, подсчета колоний и заполнения таблицы; оценивают обсемененность воздуха (см. табл.).

Санитарно-микробиологическое исследование воздуха Общее 1) метод оседания (седиментационный метод Коха): чашку микробное Петри с питательной средой (МПА, агар Сабуро, агар Эндо) число — открывают в местах отбора проб воздуха и выдерживают в количество течение 5–30 мин, после чего закрывают, завертывают в микробов стерильную бумагу и помещают в термостат в перевернутом (аэробы, состоянии на сутки, затем по количеству выросших колоний мезофилы, подсчитывают общее микробное число воздуха, пользуясь гетеротрофы) правилом Омельянского, в соответствии с которым на в 1 м3 воздуха поверхность агара в чашке Петри (S =100 см2) в течение 5 мин оседает столько микробов, сколько их содержится в 10 л воздуха;

2) метод ударной струи воздуха при помощи аппарата Кротова (аспирационный метод): воздух засасывается через конусную щель в крышке из оргстекла, ударяется о поверхность вращающейся на диске среды в чашке Петри, на которой равномерно располагаются микробы, затем посевы помещают в термостат (Т = 37 °С) на 24–48 ч и подсчитывают количество колоний на агаре чашек Петри.

Зная количество пропущенного воздуха (л/мин) и время (мин), определяют общее микробное число.

Показатели Методы санитарно-микробиологического микробной исследования воздуха обсеменен- ности 3) мембранный метод: определенный объем воздуха пропускают через фильтрующие мембраны, затем фильтры накладывают на поверхность плотной питательной среды в чашке Петри, культивируют в термостате и подсчитывают количество колоний микробов;

4) фильтрационный метод Дьякова: определенный объем воздуха пропускают через стерильную питательную среду (МПБ), затем 1 мл вносят в чашку Петри, заливают расплавленным и охлажденным до 45 °С МПА, перемешивают и помещают в термостат (Т = 37 °С) на суток и подсчитывают количество колоний микробов;

Определение санитарно-показательных Применяют те же 3 метода, микробов — зеленящих и гемолитических но посев осуществляют на стрептококков и гноеродных стафилококков, специальную питательную постоянных обитателей ВДП человека и среду — кровяной МПА животных Рис. 2. Внешний вид прибора для бактериологического анализа воздуха (аппарат Кротова): 1 — вентиль ротаметра; 2 — ротаметр; 3 — накидные замки; 4 — диск вращающийся, 5 — крышка; 6 — диск; 7 — клиновидная щель; 8 — корпус; 9 — основание ГОСТ воздуха — оценка его санитарного состояния по микробиологическим показателям (по З.Н.Кочемасовой и др., 1987) Лето Зима Общее В том числе Общее В том числе микробное зеленящего и микробное зеленящего и число гемолитического число гемолитического (количество стрептококков и (количество стрептококков и всех микробов гноеродного всех микробов гноеродного в 1 м3 воздуха) стафилококка в 1 м 3 воздуха) стафилококка 1 1500 16 4500 2 2500 36 7000 № п/п Загрязненный Чистый Категория воздуха Лабораторная работа № 22 (8 часов) Бактериологическое исследование почвы Роль микробов в формировании почвы велика, поэтому она приобрела свойства живой системы. В почве встречаются водоросли, грибы плесневые и базидиомицеты, актиномицеты, бактерии. Максимальное количество микробов находится неглубоко, в пределах 10–30 cм, в верхнем слое (1–5 см) микробов очень мало, после 20 cм и глубже их еще меньше, а на глубине 2–3 м встречаются единичные, что необходимо учитывать при взятии проб почвы для исследования.

В зависимости от количества микробов почвы подразделяют на малоплодородные, среднеплодородные и высокоплодородные, содержащие биомассы, соответственно, 3–5 т/га, 5–10 т/га, свыше 10 т/га. В связи с этим микроорганизмов в 1 г почвы может быть от нескольких десятков тысяч до нескольких миллиардов и даже десятков миллиардов (скотомогильники и др.).

Основным показателем, характеризующим загрязненность почвы органическими веществами, является микробное число.

Чистыми считают почвы, когда микробное число их не превышает 1–15 млн. особей в 1 г, сильно загрязненными — 3–5 млн/га.

Почву подвергают исследованию с целью установления пригодности данного участка для строительства жилья, помещений для животных, а также для контроля за обезвреживанием органических удобрений и др. На обследуемой территории до 1000 м определяют два участка по 25 м, стерильным инструментом снимают верхний слой и с глубины 20 cм берут пробы почвы по 200– 300 г, тщательно перемешивают, помещают в стерильную посуду, маркируют, в сопроводительной указывают, какие исследования необходимо провести, после чего доставляют в лабораторию. Срок хранения проб в бытовом холодильнике — до суток.

Полное санитарно-бактериологическое исследование включает определение:

1) общего числа сапрофитных бактерий (микробного числа);

2) бактерий группы кишечной палочки;

3) количества анаэробов (Сl. perfringens);

4) термофильных микроорганизмов, определяющих характер загрязнения (навоз, фекалии, сточные воды, жидкости).

Кроме того, при необходимости проводят специальные исследования с целью выделения патогенных микроорганизмов — зоонозов и зооантропонозов (антропозоонозов).

Определение микробного числа проводят так же, как при исследовании воды, с той лишь разницей, что 1 г почвы помещают первоначально в определенный (9 мл) объем стерильной воды или физраствора и далее приготавливают десятикратные разведения.

Загрязненность почвы бактериями кишечной палочки устанавливают с помощью среды Кесслера. Среда Кесслера: 1 л дистиллированной воды, 10 г пептона, 50 мл бычьей желчи, 2,5 г лактозы, 4 мл 1 %-ного раствора генцианвиолета. Стерилизуют дробно после разлива в пробирки по 8–12 мл с поплавками. Посевы производят из различных разведений в зависимости от степени микробной обсемененности почвы, инкубируют 2 суток в термостате при 43 °С, затем высевают на среду Эндо в чашках Петри с целью обнаружения красных колоний через 1–2 суток. Наибольшее разведение, в котором обнаружена ферментация лактозы с наличием газа в поплавке, соответствует коли-титру почвы.

Другие исследования проводят по специальным методикам (см. табл.), например, выделение Сl, perfringens.

Санитарно-микробиологическое исследование почвы Показатели Методы санитарно-микробиологического исследования почвы и микробной навоза обсемененности 1 Общее микробное число — Отбирают пробы почвы на глубине 10 см массой по 200 г, затем количество из 1 г подготовленной почвы готовят 10-кратные разведения на микробов (аэробы, стерильной водопроводной воде (1:10–1:1000000000), исследуют мезофилы, при помощи метода Коха в чашках Петри с мясо-пептонным гетеротрофы) в 1 г агаром (Т = 37 °С) почвы Определение Различные 10-кратные разведения суспензии почвы санитарно- засевают отдельными стерильными пипетками в пробирки с показательных дифференциальной средой Кесслера и инкубируют 48 ч при микробов — 43 °С, затем из пробирок с газообразованием делают посев кишечной палочки штрихом на агар Эндо в чашках и культивируют сутки в (определение термостате при Т = 37 °С, красные колонии, выросшие на агаре, коли-титра) являются эшерихиями, из них готовят мазки, красят по Граму.

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 19 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.