WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 |

Чувствительность нового неинвазивного метода диагностики Helicobacter pylori-инфекции в кале у взрослых составила 91,1%.

Созданная тест-система на основе ПЦР, позволяет верифицировать ДНК H.pylori в кале у детей и взрослых и не уступает по чувствительности и специфичности Premier Platinum HpSA - тесту.

При проведении первой серии экспериментов верификации ДНК H.pylori в кале у взрослых чувствительность созданного теста оказалась значительно ниже и составила 75,6%. Было сделано предположение, что снижение чувствительности ПЦР-теста при первичной диагностике H.pylori-инфекции у взрослых связано, скорее всего, с более длительной эвакуацией каловых масс. Более длительная эвакуация каловых масс у взрослых, по сравнению с детьми, по-видимому, способствовала разрушению ДНК H.pylori. В связи со сделанным предположением, для увеличения скорости эвакуации кала, всем взрослым пациентам накануне исследования в качестве слабительного была назначена лактулоза (Дюфалак) Солвей Фарма, Франция по 30 мл утром и вечером. После назначения слабительного и сокращения времени эвакуации кала чувствительность ПЦР-метода при первичной диагностике H.pylori-инфекции у взрослых стала такой же, как при первичной диагностике у детей и составила 91,1%.

Использование ПЦР-теста на 4-ой неделе после успешно проведенной противохеликобактерной терапии показало низкую специфичность теста, которая составила - 75,7%. При проведении контроля лечения на 6-ой неделе была отмечена тенденция к снижению количества ложноположительных результатов и специфичность, составила - 93,9%. На 8-ой неделе специфичность теста составила 100%. Не было получено ни одного ложноположительного результата.

В 1999 г L. Trevisani и соавт. в 2000 г R. Ohkura и соавт. также обратили внимание на высокий процент ложноположительных результатов при постановке Premier Platinum HpSA теста на 4-неделе после успешно проведенной противохеликобактерной терапии. Полученные ложноположительные результаты они объяснили возможностью персистенции в организме пролеченных пациентов кокковых форм H. pylori, количество которых, скорее всего, начинает со временем снижаться и полностью отсутствует на 8-12 неделе. G. Masoero и соавт. показали, что подобные проблемы могут встречаться и при использовании для контроля лечения С УДТ.

Тем не менее, следует отметить, что потеря специфичности при использовании неинвазивных методов для контроля лечения не сопровождается потерей их чувствительности.

К преимуществам созданного НПФ «Литех» ПЦР-теста можно, прежде всего, отнести его неинвазивность, простоту и быстроту выполнения (на постановку 30 исследований необходимо 4,5 - часов) и относительно низкую себестоимость по сравнению с ИФА, дыхательным тестом, бактериологическим и гистологическим методами исследования. Ввиду невысокой стоимости данного теста он может быть использован не только для первичной диагностики H. pylori-инфекции, но и для эпидемиологических исследований.

РАЗДЕЛ III. Результаты собственных исследований Обследовано 93 больных с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки (ЯБДК) в фазе обострения. Больных с ЯБДК, осложненной кровотечением, было 136 человек, неосложненного течения – 107. В группу исследования были включены только мужчины. Формирование группы обеспечивало ее однородность, что позволило исключить различия гормонального фона и их влияние на течение заболевания, иммунную систему. Средний возраст больных с осложненным течением ЯБДК составил 40,8±3,54 года. Больные с неосложненным течением ЯБДК были сопоставимы по возрасту (41,3±4,79 года) и длительности заболевания с основной группой.

Около 30% больных ЯБДК с кровотечениями были в возрастных группах 20-29 и 40-49 лет. В 13% случаев ЯБДК манифестировала с осложнения в виде кровотечения.

Пациентам проводилось эндоскопическое исследование с прицельной биопсией в 2 точках из СО антрального отдела желудка и в 2 точках из тела желудка. Для диагностики H. рylori применялся гистологический метод, ПЦР в биоптате, ИФА сыворотки крови для выявления антител класса IgG к H. pylori, хеликотест-экспресс.

Степень обсемененности СО желудка H. рylori оценивали по критериям Аруин Л.И. с соавт. Оценку морфологических изменений СО желудка проводили с помощью визуальноаналоговой шкалы.

ДНК H. рylori в биоптатах определяли наборами реагентов «Хеликопол» НПФ «Литех» (Россия). Амплификацию проводили в программируемом термостате для проведения ПЦР – анализа ТПЧПЦР-01- «Терцик». После 40 циклов продукты амплификации идентифицировали в 1,5% агарозном геле в присутствии бромистого этидия со смесями праймеров CagA, VacA, IceA, BabA.

Для серологического исследования на антитела к H. pylori использовали диагностические наборы «ВСМ DIAGNOSTIC SYSTEMS LABORATORIES INC –05-10 HELICOBACTER PYLORI Ig G ELISA». Образец рассматривался качественно позитивным на наличие специфических Ig G если отношение между средним значением образца и Cut – Off >1; сомнительным, если +10% от Cut – Off; негативным, если отношение <0,9. По количественному критерию результат считали положительным при показателе оптической плотности >15 арбитражных единиц (AU).

Экспресс-метод, основанный на уреазной активности H. pylori, неинвазивный (Корниенко Е.А., Милейко В.Е., 1996, патент № 2100010).

Результаты диагностики H. pylori гистологическим методом из антрального отдела СОЖ при тяжелом течении ЯБДК представлены в таблице 8 (дополнительно проанализированы архивные данные еще 150 больных ЯБДК).

Таблица 8.

Результаты диагностики H. pylori гистологическим методом у больных ЯБДК тяжелого и нетяжелого течения ЯБДК тяжелого ЯБДК RR течения нетяжелого течения Абс % Абс % (n=136) (n=107) НР + 123 90,4 102 95,Обсеменен ность, степень:

I 0 0 8 7,II 35 28,4 75 73,III 88 71,6 19 18,7 *10,НР - 13 9,6 5 4,RR – вклад степени обсемененности H. pylori в развитие осложнений (относительный риск);

*– p<0,001, достоверность определяли по критерию Пирсона.

При тяжелом течении ЯБДК инфекция H. pylori выявлена в 90,4% случаев, в группе дуоденальных язв без осложнений (95,3%).

В структуре степени обсемененности СОЖ H. pylori при тяжелых формах дуоденальных язв достоверно преобладали случаи с высокой степенью обсемененности H. pylori – 71,6% (RR=10,9;

2=14,76; p<0,001), в то время как у больных с доброкачественным течением преобладали случаи умеренной степени обсемененности H. pylori – 73,5%.

Уреаза H. pylori представляет собой важнейший энзим микроорганизма, определяющий основные звенья патогенеза заболеваний, ассоциированных с H. pylori. Уреаза и ее продукты выступают в роли токсиканта, фактора агрессии и модулятора иммунных воспалительных реакций.

Таблица Показатели положительного уреазного экспресс-теста у больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки Концентра- ЯБДК p ция Осложн. Неосл.

аммиака,C (n =56) (n =32) мг/мM±m M±m Базальная, C 0,36±0,08 0,47±0,0 >0,Нагрузочная, 1,60±0,07 1,22±0,2 >0,СПрирост 1,24±0,12 0,75±0,2 <0,концентр., C p – достоверность различий между концентрацией аммиака при осложненном и неосложненном течении ЯБДК.

У больных ЯБДК независимо от тяжести течения в 94% случаев получены критерии, позволяющие оценить тест положительно. Анализ всех составных характеристик уреазного аэротеста при ЯБДК позволяет считать только показатель прироста концентрации аммиака (C) критерием наличия H. pylori (Муталов А.Г., 1999). Несмотря на положительные результаты уреазного аэротеста у больных с осложнениями и без осложнений, при осложнениях все же преобладает прирост концентрации аммиака (p<0,01). Это может быть обусловлено более высокой степенью контаминации слизистой гастродуоденальной зоны инфекцией H. pylori при осложненном течении ЯБДК, а возможно и большей агрессивностью штаммов H. pylori при этих клинических вариантах ЯБ (Жуховицкий В.Г., 1993). При помощи метода ПЦР положительный результат на ДНК H. pylori из биоптатов желудка у больных ЯБДК в обеих группах получен в 100%.

Варианты вирулентных генотипов и их частота представлены в табл. 10.

Таблица Варианты вирулентных генотипов H. pylori у больных ЯБДК по результатам ПЦР Варианты ЯБДК осл. ЯБДК неосл.

n/n генотипов течения, течения, (%) H. pylori (%) (n=15) (n=11) 1 сagA - 2 vacA m2 15 3 vacA s1/s2 40 4 vacA s1/s2+ 7 m1+m5 vacA s1/s2 + m2 7 6 vacA s1/s2+ 7 сagА 7 vacA s1/s2 + iceA8 vacA m1 + сagA + iceA9 babA - Вирулентные гены H. pylori обнаружены в биоптатах у 13 из больных с тяжелым течением заболевания (86%), в группе больных с благоприятным течением заболевания - у 2 больных из 11 (18%), (p<0,01). В 12 случаях при тяжелом течении (92%) вирулентные штаммы были VacA – позитивными (vacuolating-associated cytotoxin) (p<0,01), из них 69% были с генотипом s1/s2. В группе больных с ЯБ ДК нетяжелого течения вирулентные штаммы были представлены в 66% VacA геном (генотип m2) c исходно незначительной токсической активностью.

В нашем исследовании смешанный генотип по аллелям VacA гена и генов CagA (cytotoxin-associated gene), Ice A(induced by contact with epithelium) определялся в 77% случаев тяжелого течения ЯБ ДК. VacA-позитивные штаммы имели вариабельные участки гена (VacA s регион и VacA m регион), с помощью которого можно идентифицировать аллельные типы. Особую значимость представляют данные о том, что большинство штаммов Н. pylori с генотипом VacA s1 также имеют островок патогенности cag, что позволяет его расценивать как суррогатный маркер островка патогенности.

В ходе нашего исследования не установлено какой – либо ассоциации между BabA (blood group antigen-binding adhesin) геном Н. pylori и клиническими вариантами ЯБДК, хотя по данным Gerhard M. et al. (1999) ген BabA2 может являться маркером для выявления больных, которые имеют высокую степень вероятности осложнений. Вероятно, у изучаемых нами штаммов Н. pylori, высокая адгезионная способность обеспечивалась преобладанием в структуре штаммов VacA гена, изначально обладающего способностью к более сильной адгезии и внутриклеточной инвазии путем вмешательства в сигнальный каскад интегрина и полимеризации актина внутри эпителиоцитов (Su.B. et al., 1999).

Количественные показатели специфичеcкого IgG ответа на H.

pylori у больных с осложнениями (87,6±9,27 AU) были достоверно ниже, чем у больных с доброкачественным течением заболевания (137,3±9,80 AU; р <0,001). Возможной причиной этого является нестабильность генома H. pylori, с которой связывают полиморфизм штаммов и многообразие патологических изменений в организме человека (Hazell S.L. et al., 1997).

РАЗДЕЛ IV. Заключение Современное состояние проблемы заболеваний желудка и двенадцатиперстной кишки предполагает обязательное обследование пациентов на наличие инфекции H. pylori.

Имеющиеся в арсенале клиницистов методы диагностики позволяют выявить H. pylori практически в 100% случаев.

Грамотный подход в выборе диагностического теста обеспечивает качественную, своевременную и экономичную верификацию возбудителя. Наличие международных и отечественных рекомендаций по выявлению инфекции, основанных на многолетнем опыте, облегчает тактический поиск лечащего врача.

Соблюдение этих рекомендаций делает возможным назначение адекватного лечения при хроническом гастрите и язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, предупредить их осложнения и рак желудка.

В предложенном пособии приведены сведения о существующих на данный момент диагностических методиках выявления H. pylori-инфекции и перспективах их усовершенствования, а также собственный клинический опыт.

Сравнительный анализ диктует необходимость использования в практической деятельности комбинации диагностических тестов.

Материальные затруднения не должны быть препятствием к адекватному обследованию. Актуальной проблемой геликобактериологии является разработка путей оптимизации диагностики H. pylori у инфицированных больных.

РАЗДЕЛ V. Контрольные тесты 1. Обязательным показанием для диагностики инфекции H. pylori является:

А. Рак желудка у родственников Б. Язвенная болезнь желудка В. Эзофагит Г. В12-дефицитная анемия 2. «Золотым стандартом» первичной диагностики H.

pylori является:

А. Цитологический метод Б. ПЦР в кале В. Гистологический метод Г. Иммуноферментный анализ 3. «Золотым стандартом» оценки эрадикации H. pylori является:

А. Дыхательный тест Б. Быстрый уреазный тест В. Иммуноферментный анализ Г. ПЦР в биоптате 4. Когда проводится оценка эффективности эрадикации H. pylori:

А. Сразу после лечения Б. Через 3 месяца после эрадикации В. Через 1 год после эрадикации Г. Через 4 недели после эрадикации 5. К неинвазивным методам диагностики относится:

А. Гистологический Б. Быстрый уреазный В. ПЦР в биоптате Г. Дыхательный 6. Бактериологический метод позволяет оценить все, кроме:

А. Чувствительности к антибиотикам Б. Морфологических изменений слизистой оболочки желудка В. Биохимических свойств H. pylori Г. Штаммоспецифичности H. pylori 7. Снижает чувствительность уреазных тестов прием:

А. Маалокса Б. Мотилиума В. Омепразола Г. Фестала 8. К преимуществам гистологического метода относится возможность оценить:

А. Биохимические свойства H. pylori Б. Характер морфологических изменений слизистой В. Антибиотико-чувствительность H. pylori Г. Вирулентность штаммов H. pylori 9. Оценить вирулентность штаммов H. pylori позволяет метод:

А. Дыхательный Б. Гистологический В. ПЦР Г. ИФА 10. Проведение дыхательного теста основано на:

А. Уреазной активности H. pylori Б. Адгезионной способности H. pylori В. Цитотоксичности H. pylori Г. Иммуногенности H. Pylori 11.С какой целью в диагностике геликобактерной инфекции используется чаще всего метод определения антител к H. pylori А. Для скрининговых исследований Б. С целью первичной диагностики В. С целью контроля полноты эрадикации Г. С целью определения чувствительности H. рylori к антибиотикам Д. Для определения патогенных штаммов H. рylori 12. Назовите основные недостатки микробиологического метода диагностики геликобактерной инфекции А. Невозможность применения с целью первичной диагностики Б. Невозможность применения с целью контроля полноты эрадикации В. Технические трудности, связанные с выращиванием культуры H. Рylori Г. Необходимость длительного ожидания результатов исследования Д. Сравнительная дороговизна ОТВЕТЫ:

1-Б 2-В 3-А 4-Г 5-Г 6-Б 7- В 8-Б 9-В 10-А 11 – А 12 – В, Г,Д СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 1. Аруин Л.И., Григорьев П.Я., Исаков В.А., Яковенко Э.П.

Хронический гастрит – Амстердам, 1993. – 362 с.

Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.