WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 9 | 10 || 12 | 13 |   ...   | 40 |

Использование оценки ПДК вполне подходит при изучении воздействия индивидуальных факторов. При оценке мутагенной активности воды применение ПДК нецелесообразно по следующим причинам. Во-первых, вода представляет собой комплекс факторов природного и антропогенного происхождения, полный компонентный перечень которых выявить в настоящее время практически нереально. Во-вторых, пока только небольшая часть химических веществ проверена на мутагенность. В-третьих, генетическое действие каждого соединения, даже хорошо изученного в лаборатории, в натурных условиях, в комплексе с большим числом мутагенов и немутагенов может быть сильно модифицировано. В настоящее время исследование проб воды проводится в прямых токсикогенетических исследованиях по величине суммарной мутагенной активности (СМА). СМА – интегральный показатель, который выявляет суммарное действие всех генетически активных факторов, содержащихся в пробе, с учетом их взаимодействия, что позволяет более корректно определить реальный мутагенный потенциал воды.

Важным является и выбор тест-систем для оценки генетического потенциала природных вод. К настоящему времени разработано более 200 методов оценки генотоксикантов, в которых используются различные тест - объекты от вирусов до высших животных и клеток человека, и регистрируется самые различные генетические повреждения. Однако существующее многообразие методов свидетельствует о том, что не один из них не является универсальным, удовлетворяющим всех исследователей. Причины этого следующие:

1. Тесты на мутагенность являются видоспецифичными, так как есть мутагены, повреждающие геном только у определенных видов. Таким образом, мутаген, опасный для человека, может быть не выявлен на используемом исследователем тест - объекте. Поэтому необходимо использовать несколько тест - объектов.

2. Методы являются тест-специфичными, то есть каждый тест выявляет немного видов наследственных нарушений, чаще один тип мутаций. Поэтому если тест регистрирующий хромосомные мутации дал отрицательный ответ, это не означает, что фактор не вызывает генных мутаций. Следовательно, что бы не получить ложноотрицательных ответов необходимо использовать несколько тестов;

3. Исследование одним методом и на одном тест - объекте может дать различный ответ из-за тканеспецифичного действия фактора. Так в тесте рецессивных летальных мутаций у Dr. melanogaster ответ зависит от того в какие органы вводилось химическое соединение.

Тканеспецифичность отмечается и при использовании микроядерного теста (Сычева Л. Н., 2004).

4. Косвенные мутагены (промутагены) сами не обладают мутагенной активностью, но их метаболиты генотоксичны. Таким образом, даже проверка фактора несколькими методами на нескольких тест – объектах ещё не гарантирует, что его генетическая безопасность окончательно установлена;

По этим причинам для уменьшения количества возможных ложноотрицательных и ложноположительных ответов необходимо использовать широкий набор методов с применением широкого круга объектов.

Для выбора системы оценки мутагенности воды природных водоемов, которая сочетала бы высокую чувствительность с экономичностью, нами проведено сравнение широкого набора токсико-генетических методов. В результате предложена система из трех тестов, включающих разные тест-объекты или регистрирующие разные типы мутагенов (таблица 1). Выбор тестобъектов обусловлен следующими соображениями.

Таблица 1.

Методы исследования Тест-объект Метод исследования Характер регистрируемого эффекта Chlorella Учет видимых мутаций мутагенность (генные мутации) vulgaris мутагенность (хромосомные аберрации в Allium cepa Ана-телофазный метод соматических клетках) Drosophila Учет доминантных мутагенность melanogaster летальных мутаций (генные и хромосомные мутации) Chlorella vulgaris является первичным продуцентом и может аккумулировать генетически активные поллютанты, которые далее будут мигрировать и аккумулироваться по трофическим цепям. Тест с использованием Allium cepa позволяет регистрировать как прямые мутагены, так и промутагены, приобретающие мутагенную активность в процессе метаболизма в растительном организме. Введение Drosophila melanogaster в систему тестов позволяет выявлять как прямые мутагены, так и промутагены, проявляющие активность в животном организме.

Методы исследования Мутагенная активность воды оценивалась по суммарной мутагенной активности (СМА).

Для определения СМА использовалась система из трех тестов: метод учета видимых мутаций (ВМ) у Chlorella vulgaris (Ваулина и др., 1975), ана-телофазный метод учета хромосомных аберраций (ХА) в меристеме Allium cepa (Sharma, 1983), метод учета доминантных летальных мутаций (ДЛМ) у Drosophila melanogaster (Генетическая токсикология, 2006).

При постановке опыта тест-объекты подвергались воздействию концентрированных проб воды следующим образом: в тесте ВМ на воде готовилась суспензия Ch.vulgaris; луковицы A.cepa в воде проращивались, а самцы Dr.melanogaster поились водой изучаемых проб.

В контрольном варианте использовалась вода, очищенная фильтром Аквафор-Модерн.

Для оценки уровня мутагенной активности воды использовался такой показатель как «выраженность мутагенной активности» (ВМА). ВМА оценивалась во всех тестах как кратность превышения уровня мутаций над контрольным (таблица 2).

Таблица 2.

Оценка уровня СМА при использовании различных тестов Уровни СМА Метод Показатель Сильная Отсутствие СМА Слабая СМА Средняя СМА СМА Достоверные Учет ВМ у Превышение частоты Отсутствие Достоверные различия в Достоверные различия различия Chlorella ВМ над контр. достоверных 2-5 раз более 5 раз до 2 раз vulgaris уровнем (кратность) различий Превышение частоты Достоверные Учет ДЛМ у Отсутствие Достоверные различия в Достоверные различия в ДЛМ над контр. различия в 2-Drosophila достоверных 5-10 раз более 10 раз уровнем раз melanogaster различий (кратность) Достоверные Учет ХА в ана- Превышение частоты Отсутствие Достоверные различия на Достоверные различия различия менее телофазе митоза ХА над контр. уровнем достоверных 10-25% более чем на 25% чем на 10% у Allium cepa (разность) различий Если мутагенность пробы отмечалась хотя бы в одном из трех тестов, вода считалась обладающей мутагенной активностью.

Статистическая обработка результатов проводилась с использованием пакета программ EXCEL 2000 (Microsoft, USA).

Результаты Результаты представлены в Таблице 3 и на рисунках 1-3.

Таблица Выраженность мутагенной активности проб воды р. Которосль.

Частота ХА у Allium cepa Частота ДЛМ у Dr.melanogaster ВМА воды при Станция, воздействии проб Дата отбора проб воды р. Которосль Ch. vulgaris Хср. ± m,% ВМА Хср. ± m,% ВМА контроль контроль д. Белогостицы (№ 6), 2,22±0,47* 18,94±3,67* 3,24.04.07 г. 0,39±0,16 5,69 6,31±2,95 3,1,49±0,25* 4,14 29,6±3,45* 1,24.07.07 г.

0,36±0,22 10,99±2,37 2,2,11±0,43* 4,49 33,79±4,11* 2,25.09.07 г.

0,47±0,29 6,43±1,88 5,г. Гаврилов Ям 4,41±0,59* 11,31 17,15±4,20* 1,(№5) 24.04.07 г. 0,39±0,16 5,21±2,65 3,1,63±0,36* 4,53 26,46±4,95* 1,24.07.07 г.

0,36±0,22 10,90±2,60 2,0,53±0,33 1,13 24,38±6,82* 1,25.09.07 г.

0,47±0,29 6,43±1,88 3,б/о Прибрежный 3,35±1,02* 8,59 18,46±3,35* 5,(№4) 24.04.07 г. 0,39±0,16 5,21±2,65 3,1,60±0,49 4,44 26,91±1,96* 2,24.07.07 г.

0,36±0,22 10,90±2,6 2,1,62±0,30* 3,45 36,49±7,72* 1,25.09.07 г.

0,47±0,29 10,27±3,58 3,пос. Карабиха (№3) 3,15±0,25* 19,40±4,46* 3,24.04.07 г. 0,39±0,16 8,08 5,21±2,65 3,2,62±0,35* 7,28 21,47±1,96* 2,24.07.07 г.

0,36±0,22 10,90±2,6 1,1,69±0,44* 3,59 24,43±3,51* 1,25.09.07 г.

0,47±0,29 10,27±3,58 2,д. Пеньки (№2) 1,55±0,46* 3,97 24,55±6,18* 2,24.04.07 г. 0,39±0,16 5,21±2,65 4,2,27±0,32* 6,31 23,08±2,86* 1,24.07.07 г.

0,36±0,22 10,90±2,60 2,3,19±0,35* 6,79 23,53±2,77* 1,25.09.07 г.

0,47±0,29 10,27±3,58 2,Сток перед ЮВС 2,19±0,15* 5,61 21,77±4,95* 1,(№11) 24.04.07 г. 0,39±0,16 6,31±2,95 3,24.07.07 г. 3,17±0,66* 8,81 26,28±1,25* 2,39 1, 0,36±0,22 10,99±2,2,02±0,22* 4,29 21,88±4,82* 1,25.09.07 г.

0,47±0,29 6,43±1,88 3,Водозабор ЮВС 4,58±0,52* 11,74 20,81±4,59* 3,г. Ярославля (№10) 0,39±0,16 6,31±2,24.04.07 г. 3,1,28±0,52 3,55 30,75±1,25* 3,24.07.07 г.

0,36±0,22 10,99±2,37 2,2,94±0,33* 6,25 21,95±4,46* 4,25.09.07 г. 0,47±0,29 6,43±1, 3,Сточная канава ст. Яр. 5,56±0,94* 14,26 24,38±4,46* 2,Главный (№9) 24.04.07 г. 0,39±0,16 6,31±2,95 3,2,45±0,35* 6,81 33,17±4,26* 3,24.07.07 г.

0,36±0,22 10,99±2,37 3,5,89±1,30* 12,53 19,58±3,64* 3,25.09.07 г.

0,47±0,29 6,43±1,88 3,Завод «Русские краски» 2,23±0,53* 5,72 31,12±2,41* 1,(№8) 24.04.07 г. 0,39±0,16 6,31±2,95 4,1,54±0,21* 4,27 34,46±3,29* 1,24.07.07 г.

0,36±0,22 10,99±2,37 3,1,29±0,19* 2,74 37,71±3,25* 2,25.09.07 г.

0,47±0,29 6,43±1,88 5,Ливневая канава с 3,04±1,55 7,79 18,94±3,67* 2,Московского пр-та (№7) 0,39±0,16 6,31±2,24.04.07 г. 3,2,92±0,53* 8,11 30,97±1,84* 3,24.07.07 г.

0,36±0,22 10,99±2,37 2,2,85±0,88* 29,15±0,81* 4,25.09.07 г.

0,47±0,29 6,06 6,43±1,88 4, Устье реки Которосль 2,66±0,85* 6,82 25,99±6,68* 4,(№1) 24.04.07 г. 0,39±0,16 5,21±2,65 4,1,32±0,55 3,66 20,41±1,20* 0,24.07.07 г.

0,36±0,22 10,90±2,60 1,1,82±0,25* 3,87 20,39±2,10* 0,25.09.07 г.

0,47±0,29 10,27±3,58 1,16,14,12,10,Dr.melanogaster 8,00 A.cepa Ch.vulgaris 6,4,2,0,6 5 4 3 2 11 10 9 8 7 Станция Рисунок 1. ВМА проб воды р. Которосль в апреле.

ВМА 10,9,8,7,6,Dr.melanogaster 5,A.cepa 4,00 Ch.vulgaris 3,2,1,0,6 5 4 3 2 11 10 9 8 7 Станция Рисунок 2. ВМА проб воды р. Которосль в июле.

14,12,10,Dr.melanogaster 8,A.cepa 6,Ch.vulgaris 4,2,0,6 5 4 3 2 11 10 9 8 7 Станция Рисунок 3. ВМА проб воды р. Которосль в сентябре.

Мутагенная активность зарегистрирована на всех изученных участках реки.

Выраженность мутагенной активности различается на разных станциях. Минимальное мутагенное загрязнение в истоке реки (ВМА-3,00), максимальное – на ст.8 (завод Русские Краски), где ВМА составляет 4,93.

Можно было предполагать, что увеличение мутагенной активности будет нарастать от истока до устья, как это отмечается в литературе для рек. Однако, здесь закономерности другие: по ходу течения реки высокозагрязненные участки перемежаются с менее ВМА ВМА загрязненными генотоксикантами. Это связано, видимо, с массированным поступлением мутагенов из точечных источников загрязнения. Они и перекрывают естественные закономерности распределения загрязнения.

Полученные нами данные не позволяют выявить зависимости мутагенной активности воды от периода гидрологического цикла, так как на каждой станции колебания уровней МА воды различаются. Так, в истоке реки мутагенный эффект наиболее высокий в период весеннего паводка. Это обусловлено поступлением загрязнений с поверхностным стоком с сельскохозяйственных угодий. На территории города максимальный уровень мутагенной активности в июле. Это связано с тем, что при прежнем поступлении мутагенов с промышленных предприятий, их концентрация, в связи с уменьшением водности реки, увеличивается. На ст.8 другая динамика: наибольшее загрязнение в сентябре. Объекты исследования (См. Таблица 3) дают в эксперименте различные показатели мутагенной активности, что свидетельствует о присутствии в воде р. Которосль мутагенов, различных по механизму и направленности действия.

Заключение Анализ данных по загрязнению реки Которосль позволяет заключить, что предложенная нами тест-система является чувствительной. Это подтверждается тем, что практически на всех изученных станциях мутагенное загрязнение обнаружено. Следовательно, система отвечает самому главному требованию к методу в генетической токсикологии – высокая чувствительность. Она обеспечена в первую очередь тем, что подобранные нами объекты позволяют регистрировать широкий спектр типов мутаций, включающий и генные, и хромосомные, и геномные мутации. На чувствительность работает и то, что система выявляет не только мутагены, но и промутагены, активирующиеся в процессе обмена веществ как в растительных, так и в животных клетках.

Вместе с тем, система является экономичной: предложенные нами объекты:

1. Культивируются на дешевых средах.

2. быстро размножаются, что позволяет использовать при исследовании несколько поколений, что необходимо в генетических исследованиях.

3. опыты относительно краткосрочны, можно быстро получить результаты.

Таким образом, предложенная нами тест-система сочетает высокую чувствительность с экономичностью. Система может быть рекомендована для оценки мутагенного загрязнения природных водоемов, как однократных, так и мониторинговых исследований.

Литература 1. Журков В.С. Методология интегральной оценки мутагенных загрязнений водных объектов // Мутагены и канцерогены в окружающей среде. С.-Пб.: С-ПбГУ, 1998.

С. 126-130.

2. Литвинова Е.М., Шварцман П.Я. Индукция поздних эмбриональных леталей в половых клетках дрозофилы при действии этиленимина // Химический мутагенез.

Сб.науч.трудов. Л.: Изд-во ЛГУ, 1974. С. 117-119.

3. Методические указания по экспериментальной оценке СМА загрязнений воздуха и воды. М.: МЗ СССР, 1990. 25 с.

4. Прохорова И.М., Ковалева М.И. Генотоксический мониторинг экологического состояния верхней Волги // Научные аспекты экологических проблем России. М:

Наука, 2002. С. 355-362.

5. Прохорова И.М., Фомичева А.Н. Патология митоза как показатель генотоксического загрязнения водоема // Вестник Костромского государственного университета им. Н.А.Некрасова. Спец.выпуск №2. 2003. С. 15-19.

6. Современное состояние экосистемы оз. Неро. Рыбинск: ИБВВ РАН, 1991. 176 с.

7. Фомичева А.Н., Прохорова И.М., Кудряшова М.А., Пузырева И.А Мутагенное загрязнение воды р. Которосль в поздне-осенний период // Материалы Всероссийской научной конференции, посвященной 200-летию Ярославского государственного университета им. П.Г. Демидова. Биология, экология, химия, безопасность жизнедеятельности. Ярославль: ЯрГУ, 2003. С. 80-84.

8. Nielsen M.N., Rank J. Screening of toxicity and genotoxicity in wastwater by use of the Allium test // Hereditas. 1994. V.121. №3. P.249-254.

9. Trkolu. Genotoxicity of five food preservatives tested on root tips of Allium cepa L.

// Mutation Research/Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis. 2007. V. 626.

№ 1-2. P. 1-3.

СИСТЕМА АВТОМАТИЗИРОВАННОГО АУДИТА ВУЗОВСКОЙ АДАПТАЦИИ СТУДЕНТОВ Живаев Н.Г., аспирант Научный руководитель Смирнов А.А., к.пс.н.

Введение Обучения в вузе является одним из наиболее важных периодов в жизни человека, во время которого происходит становление его как личности, профессионала, члена общества.

Данный период характеризуется протеканием рядом специфичных процессов:

Pages:     | 1 |   ...   | 9 | 10 || 12 | 13 |   ...   | 40 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.