WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 31 | 32 || 34 | 35 |   ...   | 97 |

The objective of the research is to study the role of polymorphic variants of Tumor Necrosis Factor (TNF) — (TNFA), Bcl2-associated X protein (BAX) p53-Binding Protein (MDM2), vascular endothelial growth factor (VEGFA) and basic fibroblast growth factor (bFGF) genes in chronic lymphocytic leukemia (cLL). Methods: The comparative analysis of alleles and genotypes distributions in cLL patients (N=133) and healthy individuals (N=196) from Bashkortostan Republic has been carried out. Results: Analysis of the distribution frequency of genotypes and alleles of the genes studied has showed an increase in frequency of genotypes GG and allele G polymorphic locus-308G> A TNFA gene, GG and allele G of the polymorphic locus-248G>A BAX gene, allele G of the polymorphic locus 309T> G gene MDMand allele c polymorphic locus 773c>T bFGF gene in patients with cLL.

Key words: oncogenesis genes, genetic polymorphism, chronic lymphocytic leukemia.

Введение. Хронический лимфолейкоз — онко- главный регулятор супрессора опухолей р53 — белогическое заболевание лимфатической ткани, при лок MDM2 (OMIM 164785). N-концевой домен белка котором опухолевые клетки накапливаются в пери- MDM2 связывается с N-концевым трансактивируюферической крови, костном мозге и лимфатических щим доменом белка р53, что ведет к снижению акузлах. ХЛЛ имеет В-клеточное происхождение и яв- тивности последнего. Показано, что повышенная ляется самым частым заболеванием среди всех лей- экспрессия белка MDM2 является важным фактором козов у взрослых [1].

прогрессии опухолей [4]. Ген белка MDM2 локалиХарактерными клиническими симптомами ХЛЛ зован на длинном плече 12-й хромосомы в локусе являются анемия, тромбоцитопения, увеличение 12q14.3-12q15 [5].

лимфоузлов и гепатоспленомегалия. Установлено, В регуляции процессов апоптоза важную роль что на момент постановки диагноза эти симптомы играют также белки семейства Вс1–2, осуществляюотсутствуют примерно у 40 % больных. В большинщие свои специфичесике функции на уровне митостве случаев диагноз ХЛЛ ставится уже на поздних хондрий. Представители этого большого семейства стадиях болезни после присоединения осложнений.

включают белки, предотвращающие апоптоз и проВ связи с этим важной задачей онкогематологии явапоптозные белки. Продукция BАХ кодируется геляется поиск прогностических критериев, позволяюном Bcl-2 — ассоциированного X белка (BAX, OMIM щих в наиболее ранние сроки оценить риск развития 600040). В его составе имеется участок, с которым заболевания [1, 2].

может связываться белок р53 и вызывать, таким обК числу ведущих причин развития ХЛЛ, как и люразом, активацию гена. Ген BAX кодирует проапопбого онкологичексого процесса, относятся нарушетотический белок, который способствует выбросу из ние апоптоза (фактор некроза опухолей (TNF), митохондрий цитохрома c. В комплексе с цитозольглавный регулятор белка p53 (MDM2), проапоптотиным белком APAF1 цитохром c принимает участие ческий белок BAX) и контроля клеточной пролифев активации каспазы 9, запускающей апоптозный рации (фактор роста эндотелия сосудов (VEGFA), каскад. Соответственно, снижение экспрессии гена основной фактор роста фибробластов (bFGF)).

BAX может привести к нарушению процессов апоптоВ осуществлении механизмов апоптоза приза и развитию опухолевого процесса. Ген ВАХ распонимают участие цитокины, в частности фактор неложен у человека на длинном плече 19-й хромосомы кроза опухолей (TNF; OMIM 191160). Действие в локусе 19q13.3-q13.4 [6].

TNF на опухолевые клетки обусловлено нарушениДля ХЛЛ характерно нарушение процесса кроем функционирования митохондрий: его контакт со ветворения, в регуляции которого принимают учаспецифическими рецепторами приводит к развитию стие множество факторов, среди которых важными окислительного стресса, вызывает нарушения мемявляются фактор роста эндотелия сосудов VEGFA бран клеток и ДНК и, как следствие, заканчивается (OMIM 192240) и основный фактор роста фиброблаих гибелью. Ген TNF, кодирующий соответствующий стов — 2 bFGF (OMIM 134920). VEGFA представляет цитокин, располагается на коротком плече 6-й хромособой гликозилированный белок-митоген, который сомы в локусе 6p21.1-6p21.3 [3].

специфически действует на эндотелиальные клетки Белок p53 — это транскрипционный фактор, котои обладает различными эффектами, включая стирый регулирует клеточный цикл и является супрессомулирование ангиогенеза, роста и пролиферации ром образования злокачественной трансформации эндотелиоцитов, подавление их апоптоза [7]. Кроме клеток (p53, OMIM 191170). В нормальных условитого, VEGFA регулирует процессы кроветворения, ях, наряду с белком р53, в клетке экспрессируется управляя выживанием стволовых кроветворных клеОтветственный автор — Бакиров Булат Ахатович.

ток. Различные дефекты, связанные с подавлением Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Достоевского, 132.

функции VEGFA, ведут к снижению резистентности Тел.: (347) 2289572, +7917-776-9988.

E-mail: bakirovb@gmail.com кроветворных клеток, а также нарушению процесса Саратовский научно-медицинский журнал. 2011. Т. 7, № 4.

INteRNAL DISeASeS формирования их колоний. Ген VEGFA расположен В качестве контроля были использованы обна коротком плече 6-й хромосомы в локусе 6p12. разцы ДНК 196 практически здоровых индивидов, Белок bFGF представляет собой фактор широко- отобранные с учетом возраста (47,3±1,6), половой го спектра действия, обладающий митогенной, анги- принадлежности (107 мужчин — 54,6 %, 89 женогенной и нейротрофической активностью. Он стиму- щин — 45,4 %), и этнического состава (97 русских (49,5 %), 79 татар (40,3 %), 20 башкир (10,2 %)).

лирует пролиферацию эндотелиальных клеток путем Образцы ДНК были выделены из лимфоцитов активации серин / треониновой протеинкиназы rafпериферической венозной крови методом фенольнои опосредует организацию эндотелиальных клеток в хлороформной экстракции [8].

капилляроподобные структуры. Белок bFGF играет Изучение полиморфных локусов проводилось меважную роль в процессах быстрого увеличения котодом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК.

личества бластных клеток, которые являются общим Для генотипирования использовались локусспеципредшественником гематопоэтических и эндотелифические олигонуклеотидные праймеры и эндонуальных клеток — гемангиобластов. Ген bFGF распоклеазы рестрикции, взятые из литературных источложен в коротком плече 4-й хромосомы (4q25-q27).

ников (табл. 1).

Цель настоящего исследования заключалась в Математическую обработку результатов исслесравнительном анализе полиморфных локусов гена дования проводили на IBM-Pentium IV с использоваTNFA (-308G>A), гена BAX (-248G>A), гена MDMнием статистических программ BIOSTAT (Primer of (309T>G), гена VEGFA (936c>T) и гена bFGF (773c>T) Biostatistics, 4th edition, S. A. Glantz, McGraw — Hill), а у больных ХЛЛ и здоровых индивидов, проживающих также в программах Statistica, Microsoft Excel; рассчиРеспублике Башкортостан, и поиск возможных ассотывали критерий c2 с поправкой Йэйтса. Статистичециаций полиморфных вариантов и этих генов с разски значимыми считали различия между частотами витием ХЛЛ.

сравниваемых генотипов или аллелей изучаемого Методы. Молекулярно-генетическоий анализ обгена начиная с 95 %-ного (p<0,05) уровня безоширазцов ДНК проведен у 329 человек — жителей Респубочного суждения. Относительный риск заболевания блики Башкортостан. В группу больных ХЛЛ вошли по конкретному признаку вычисляли как отношение пациента, находившихся на стационарном лечении шансов, доверительный интервал для относительнов гематологическом отделении Республиканской го риска.

клинической больницы г. Уфы (2008-2010). Средний Результаты. Частоты генотипов полиморфных возраст обследованных пациентов, отобранных слулокусов генов TNA, BAX, MDM2, VEGFA и bFGF в чайным образом, составил 49,6±1,4 года. На долю группах больных и здоровых индивидов представлемужчин приходилось 56,4 % (75 человек), женщин ны в табл. 2. Во всех группах распределение частот 43,6 % (58 человек). По этнической принадлежности генотипов соответствовало ожидаемому по равновесреди больных ХЛЛ оказалось 62 русских (46,6 %), сию Харди — Вайнберга.

татар (40,6 %), 17 башкир (12,8 %). Клиническое об- При сравнении общей выборки больных ХЛЛ и следование больных проводилось врачами больницы группы контроля выявлены достоверные различия по и включало обязательные и дополнительные методы частотам генотипов полиморфного локуса -308G>A исследования. гена TNF (табл. 2).

Таблица Характеристика изученных локусов и условий их анализа Эндонуклеаза Литературный Полиморфный вариант Последовательность праймеров рестрикции источник -308G>A ген TNFA 5’-AGG cAA TAG GTT TTG AGG Gcc AT-3’ Bsp19I [7] 5’-Tcc Tcc cTG cTc cGA TTc cG-3’ -248G>A ген BAX 5’-cATTAGAGcTGcGATTGGAccG-3’ MspI [5] 5’-GcTcccTcGGGAGGTTTGGT-3’ 309T>G ген MDM2 5’-cGcGGGAGTTcAGGGTAAAG-3’ Msp A1I [8] 5’-cTGAGTcAAccTGcccAcTG-3’ 936c>T ген VEGF 5’-AGGAAGAGGAGAcTcTGcGcAGAGc-3’ Hin1II [10] 5’-TAAATGTATGTATGTGGGTGGGTGTGTcTAcAGG-3’ 773c>T ген bFGF 5’-cAGGATTTGTGTGcTGTGG-3’ BsuRI [10] 5’-GGTTcGAGAAGTTTTTGAAGA-3’ Таблица Частоты генотипов и аллелей полиморфных локусов в группах больных ХЛЛ и здоровых индивидов Генотипы, Больные Контроль Полиморфный вариант 2 p OR 95% cI аллели N=133 N=GG 81,95% 64,80% 10,67 0,002 2,46 1,45-4,GA 17,30% 32,7% 8,84 0,004 0,43 0,25-0,AA 0,80% 2,60% 0,60 0,438 0,29 0,03-2,-308G>A ген TNFA G 90,60% 81,12% 10,41 0,002 2,24 1,38-3,A 9,40% 18,90% 10,41 0,002 0,44 0,27-0, Saratov Journal of Medical Scientific Research. 2011. Vol. 7, № 4.

830 внУтренние БолеЗни Окончание табл. Генотипы, Больные Контроль Полиморфный вариант 2 p OR 95% cI аллели N=133 N=GG 74,30% 46,30% 16,25 0,001 3,35 1,87-5,GA 21,90% 38,00% 5,79 0,017 0,45 0,25-0,AA 3,80% 15,70% 7,24 0,008 0,21 0,06-0,-248G>A ген BAX G 85,20% 65,30% 21,64 0,001 3,07 1,91-4,A 14,80% 34,70% 21,64 0,001 0,32 0,20-0,TT 27,12% 38,12% 3,02 0,082 0,60 0,35-1,TG 53,43% 50,01% 0,17 0,683 1,14 0,69-1,GG 19,45% 11,87% 2,21 0,137 1,80 0,89-3,309T>G ген MDMT 53,80% 63,10% 4,14 0,042 0,67 0,47-0,G 46,24% 36,86% 4,14 0,042 1,47 1,03-2,cc 96.12% 99,17% 1,32 0,256 0,21 0,02-1,cT 3,10% 0,83% 0,68 0,413 3,81 0,42-34,TT 0,78% 0,00% 0,01 0,978 0,01 0,99-19,936c>T ген VEGF c 97,67% 99,58% 2,04 0,152 0,18 0,02-1,T 2,33% 0,42% 2,04 0,152 5,69 0,68-47,TT 40,65% 56,44% 4,92 0,027 0,52 0,31-0,cT 48,78% 36,63% 2,86 0,091 1,64 0,96-2,cc 10,57% 6,93% 0,51 0,475 1,58 0,61-4,773c>T ген bFGF T 65,00% 74,75% 4,48 0,035 0,62 0,41-0,c 35,00% 25,25% 4,48 0,032 1,57 1,05-2,П р и м е ч а н и е : N – объем выборки; жирным шрифтом выделены ячейки с достоверным уровнем значимости (p0,05).

В группе больных ХЛЛ достоверно чаще встре- граммируемую клеточную смерть. Каждый из генов, чался генотип GG по сравнению с группой контроля принадлежащих к этим трем категориям, выполняет (82 и 65 % соответственно, 2=10,67; p=0,002). Ча- свою роль по разным механизмам. Вопрос о том, как стота аллеля G полиморфного локуса -308G>A гена они взаимодействуют в многоступенчатом процессе, TNF в группе больных ХЛЛ оказалась выше, чем в приводящем в конечном счете к возникновению ракогруппе контроля (91 и 81 % соответственно, 2=10,41; вой клетки, и какова их роль в нормальных процессах p=0,002). Проведенный сравнительный анализ ча- жизнедеятельности, до конца не раскрыт.

стот полиморфных вариантов локуса -248G>A гена Цитокин TNFa играет важную роль в защите орBAX показал достоверные различия по генотипу GG, ганизма от развития опухолевых процессов путем на долю которого в группе больных ХЛЛ приходи- индукции апоптоза в трансформированных клетках.

лось 74,30 %, а в группе контроля 46,30 % (2=16,25; По данным литературы, транзиция гуанина на адеp=0,001) (см. табл. 2). нин в положении –308 промоторной области гена При анализе полиморфного локуса 309T>G гена TNFa приводит к повышению промоторной активноMDM2 установлено, что частота аллеля G в группе сти и, как следствие, к повышению экспрессии гена больных ХЛЛ составила 46 %, в группе здоровых [3]. Соответственно, наличие генотипа GG может обиндивидов 37 % (2=4,14; p=0,042; OR=1,47; 95 % cI уславливать более низкую активность данного гена 1,03–2,11). и приводить к развитию опухоли, что согласуется с При сравнении частоты встречаемости геноти- данными, полученными в нашей работе, в частности, пов и аллелей полиморфного локуса 936 c>T гена в отношении ХЛЛ.

VEGFA в группе больных ХЛЛ и в контрольной группе Белок MDM2 является онкогенным фактором, так достоверных различий выявлено не было. как он непосредственно влияет на активацию главЧастоты встречаемости генотипа TT полиморф- ного регулятора супрессора опухолей р53. По литеного локуса 773c>T гена bFGF была выше в группе ратурным данным, аллель G полиморфного локуса контроля по сравнению с группой больных (40,65 309T>G гена MDM2 ассоциирован с повышенной против 56,44 %, 2=4,92; p=0,027). Напротив, аллель экспрессией этого гена. Эти данные подтверждаются С чаше встречался в группе больных (35,00 против проведенными нами исследованиями, где аллель G 25,25 %, 2=4,48; p=0,03). был ассоциирован с повышенным риском развития Обсуждение. При исследовании механизмов та- ХЛЛ (OR=1,47; 95 % cI 1,03–2,11) [4].

кого сложного многостадийного процесса, как опу- При связывании белка BcL-2 с геном ВАХ образухоль, мутациям генов отводится большая роль. Хотя ется комплекс BcL-2: ВАХ, что сопровождается угнеизменение отдельного онкогена может вызывать тением апоптоза, вследствие чего нарушение экспреспредрасположенность к раку, для того чтобы опухоль сии данного гена может способствовать онкогенным развилась, необходимы последующие мутации, за- трансформациям и развитию ХЛЛ. В результате протрагивающие другие онкогены, в частности гены-суп- веденных исследований была обнаружена ассоциация прессоры опухолей или гены, контролирующие про- генотипа GG (OR=3,35; 95 % cI 1,87–5,97) и аллеля Саратовский научно-медицинский журнал. 2011. Т. 7, № 4.

INteRNAL DISeASeS 6. Suneel S. Mapping of the human BAX gene to chromosome G (OR=3,07; 95 % cI 1,91–4,93) полиморфного локуса 19q13.3 — q13.4 and isolation of a novel alternatively spliced -248G>A гена BAX с риском развития ХЛЛ [6].

transcript, BAX // Genomics. 1995. Vol. 26. P. 592–594.

Также известно, что стволовые клетки функци7. Basic fibroblast growth factor positively regulates онируют в тесном контакте с кроветворным микроhematopoietic development / P. Faloon, E. Arentson, A. Kazarov окружением, важным компонентом которого явля[et al.] // Development. 2000. Vol. 127. P. 1931–1941.

ются веретеновидные остеобласты, формирующие 8. Mathew C. C. The isolation of high molecular weight вместе с другими клетками функциональную нишу eucariotic DNA // Methods in Molecular Biology / ed. J. M. Walker.

N. Y.; L.: Human Press, 1984. Vol. 2. P. 31–32.

Pages:     | 1 |   ...   | 31 | 32 || 34 | 35 |   ...   | 97 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.