WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Авторефераты по темам  >>  Разные специальности - [часть 1]  [часть 2]

ГЕЛЕОБРАЗУЮЩИЕ КОМПОЗИЦИИ НА ОСНОВЕ ХИТОЗАНА И ПРОИЗВОДНЫХ НУКЛЕОТИДОВ

Автореферат кандидатской диссертации

 

На правах рукописи

 

 

Азарова Анна Игоревна

Гелеобразующие композиции на основе хитозана и производных нуклеотидов

 

Специальность: 05.17.06 – Технология и переработка  полимеров и композитов

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата химических наук

 

 

 

Москва – 2012


Работа выполнена на кафедре аналитической, физической и коллоидной химии федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Московский государственный текстильный университет имени А.Н. Косыгина»

Научный руководитель:

доктор химических наук  профессор

Кильдеева Наталия Рустемовна

Официальные оппоненты:

доктор химических наук  профессор

Зеленецкий Александр Николаевич,

заведующий лабораторией твердофазных химических реакций Федерального государственного бюджетного учреждения науки Институт синтетических полимерных материалов имени Н.С. Ениколопова РАН

доктор химических наук  профессор

Вихорева Галина Александровна,

профессор кафедры технологии химических волокон и наноматериалов федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Московский государственный текстильный университет имени А.Н. Косыгина»

Ведущая организация:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт элементоорганических соединений имени А.Н.Несмеянова Российской академии наук

Защита диссертации состоится «24» мая 2012 года в 10-00 часов на заседании диссертационного совета Д 212.139.01 при Московском государственном текстильном университете имени А.Н. Косыгина по адресу: 119071, Москва, Малая Калужская, д.1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Московский государственный текстильный университет имени А.Н. Косыгина»

Автореферат разослан « 23 » апреля 2012 года

Ученый секретарь                                                     

диссертационного совета                                          к.х.н. Алексанян К.Г.


ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Разработка биологически активных полимерных систем с заданными свойствами имеет большое значение для создания новых материалов, предназначенных для применения в медицине, биотехнологии, экологии и других областях. Одним из наиболее перспективных полимеров для создания таких материалов является биосовместимый и биодеградируемый аминополисахарид хитозан. В отличие от других доступных полисахаридов элементарное звено хитозана содержит аминогруппу, которая обладает большей реакционной способностью по сравнению с гидроксильными группами, поэтому хитозан может быть легко модифицирован с целью придания различных свойств.

В последние десятилетия все возрастающий интерес вызывают полимерные гидрогели, на основе которых разрабатываются материалы различной физической формы и назначения (биосорбенты, матрицы для выращивания клеток, носители для иммобилизации ферментов, системы с контролируемым выделением лекарственных соединений, раневые покрытия). Ковалентное сшивание хитозана бифункциональными реагентами приводит к формированию непрерывной сетки геля, обладающей прочностью и в то же время обеспечивающей свободную диффузию воды. Наиболее эффективным сшивающим реагентом является глутаровый альдегид (ГА). В процессе его взаимодействия с хитозаном происходит не только сшивка полисахаридных цепей, но также и альдольно-кротоновая конденсация ГА, приводящая к образованию токсичных продуктов нерегулярного строения. Это ограничивает использование системы хитозан - ГА в биомедицинских целях. Актуальным является поиск новых сшивающих реагентов, способных, подобно ГА, эффективно реагировать с хитозаном, но не образующих при этом олигомерных продуктов. В качестве таких соединений могут быть использованы окисленные нуклеотиды, являющиеся по химическому строению производными 3-оксаглутарового альдегида. Наличие заместителей в 2,4-положениях препятствуют кротоновой конденсации. Такие соединения могут быть легко получены периодатным окислением нуклеозидов и нуклеотидов. Выполняя в живых организмах важную роль структурных единиц носителей генетической информации (ДНК и РНК), нуклеотиды и нуклеозиды имеют природное происхождение и содержат несколько функциональных групп, способных связывать различные соединения.

Работа выполнена в соответствии с основными направлениями исследований кафедры аналитической, физической и коллоидной химии МГТУ им. А.Н. Косыгина, в рамках АВЦП «Развитие научного потенциала высшей школы» (2009–2010 гг.) (проект № 2.1.1/2859), ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России на 2009 – 2013 годы» (Госконтракт № 16.740.11.0059), гранта РФФИ 08-04-12065-офи.

Цель и задачи исследования. Целью работы являлось научное обоснование использования диальдегидных производных нуклеотидов и нуклеозидов: уридин-5'-фосфата (oUMP), аденозин-5'-фосфата (оАМР) и уридина (oUrd) в процессах получения биосовместимых гидрогелей хитозана.

Для достижения поставленной цели были определены основные задачи:

- установить особенности гелеобразования в растворах хитозана в присутствии диальдегидов  оАМР и oUMP по сравнению с ГА и oUrd;

- установить закономерности и механизм сшивания хитозана окисленными производными нуклеотидов и нуклеозидов;

-  на основе установленных закономерностей оптимизировать условия получения полимерных материалов различной физической формы (гидрогелей, пленок, гранул);

- изучить возможность использования предложенных сшивающих реагентов для получения на основе хитозана биосорбентов и носителей для иммобилизации ферментов.

Научная новизна. Установлены особенности гелеобразования в растворах хитозана в присутствии различных диальдегидов:

- показано, что скорость гелеобразования в растворах хитозана в присутствии окисленных производных нуклеотидов значительно выше, чем  при использовании нуклеозидов, что обусловлено наличием в их составе фосфатной группировки, при этом строение гетероциклического основания в молекуле диальдегидного производного основания не влияет на кинетику гелеобразования;

- установлено, что меньшая скорость  роста вязкости раствора хитозана в присутствии oUrd обусловлена существенно более низким по сравнению с ГА содержанием свободных (дегидратированных форм) альдегидных групп, определяющем скорость сшивки хитозана.

- предложен механизм сшивки хитозана диальдегидными производными нуклеотидов, лежащий в основе процесса гелеобразования, включающий ионные взаимодействия фосфатных групп с протонированными аминогруппами хитозана, стерически облегчающие реакцию образования альдиминных связей, с последующим отщеплением фосфатной группы, стабилизирующим альдиминную связь; показано, что хитозан ускоряет рН-зависимый процесс ?-элиминирования фосфатной группы.

Установлено, что в результате реализации многоточечных межмолекулярных контактов в процессе испарения растворителя не растворимые в воде хитозановые пленки могут быть получены при  соотношении oUrd/NH2 в 4-8 раз меньшем, чем при получении гидрогелей.

Практическая значимость.  Предложены сшивающие реагенты для химической модификации хитозана - диальдегидные производные нуклеотидов, использование которых позволило совместить процесс гелеобразования с функционализацией гидрогеля, что расширяет возможности создания  новых материалов на основе хитозана. Показана эффективность использования функционализованных гидрогелей хитозана в качестве носителей для иммобилизации или систем с контролируемым выделением биологически активных белков, а также биосорбентов для удаления ионов меди из водных сред.

Установлено, что увеличение рН раствора хитозана позволяет не только увеличить число депротонированных аминогрупп, но и снизить скорость кислотного гидролиза хитозана.

Публикации. Основные результаты диссертации изложены в 9 печатных работах: 8 статьях и тезисах докладов, в том числе, 2 статьях в научных журналах, включенных в перечень ВАК. Получен патент РФ.

Апробация результатов исследования. Материалы диссертации обсуждались и докладывались на: XV и XVII Всероссийских Конференциях «Структура и динамика молекулярных систем» (Яльчик, 2008, 2010); 9th International Conference of The European Chitin Society (Venice, Italy, May, 2009); ХIX International Round Table «Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids» (Lyon, France, 2010), Пятой Всероссийской Каргинской конференции «Полимеры – 2010» (Москва, 2010); Десятой Международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана» (Нижний Новгород, 2010).

Личный вклад соискателя заключается в проведении анализа литературных данных по теме диссертации, определении совместно с руководителем задач и путей их решения, выполнении основной части эксперимента по изучению процессов сшивки хитозана и гелеобразования в его растворах, получению сорбентов и носителей для иммобилизации ферментов, в обобщении полученных результатов и подготовке публикаций по работе. Подготовлены образцы для анализа и обсуждены результаты ЯМР-спектроскопии с к.х.н. Новиковым В.В. (ИНЭОС им. В.А.Несмеянова РАН) и проф. д.х.н. Михайловым С.Н. (ИМБ им.В.А.Энгельгарда РАН), ИК-спектроскопии с к.х.н. Владимировым Л.В. (ИХФ им. Н.Н.Семенова РАН).

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 158 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, обсуждения результатов, методической части, выводов, списка цитируемой литературы из 121 ссылки. Работа содержит 10 таблиц и 53 рисунка.

Содержание работы. Во введении дано обоснование актуальности диссертационной работы и указаны ее цели и задачи. В литературном обзоре проанализированы основные методы получения полимерных материалов на основе хитозана и сшивающих реагентов и механизмы гелеобразования в растворах хитозана. В методическом разделе дана характеристика используемых реагентов, описаны методы исследования, включая фотометрические методы: УФ-, ИК-спектроскопию, ЯМР-спектроскопию, электронную микроскопию, титриметрический и реологический методы и методы математической обработки результатов.

Основные результаты и их обсужденИЕ

Закономерности получения и свойства гидрогелей на основе растворов хитозана и альдегидных производных нуклеотидов и нуклеозидов.

С целью создания на основе хитозана нетоксичных и биосовместимых материалов медицинского и биотехнологического назначения, а также новых сорбционно-активных материалов, для получения гидрогелей хитозана предложены новые сшивающие реагенты, окисленные нуклеотиды, являющиеся по химическому строению производными 3-оксаглутарового альдегида (2,2'-оксидиацетальдегида) и проведено исследование эффективности процесса взаимодействия хитозана с диальдегидными производными нуклеотидов по сравнению с ГА и диальдегидным производным нуклеозида. Строение диальдегидов приведено на рис.1.

 Рис.1 - Строение ГА и окисленных производных уридина, уридинмонофосфата и аденозинмонофосфата.

В процессе гелеобразования в растворах полимеров в присутствии сшивающих реагентов происходит образование трехмерной сетки пространственно сшитого полимера. В результате происходит увеличение вязкости вплоть до полной потери системой способности к течению.

1. Особенности гелеобразования в растворах хитозана в присутствии окисленных нуклеотидов и нуклеозида

Кинетика гелеобразования оценивалась как по времени потери текучести, так и скорости роста вязкости, а свойства полученных гидрогелей хитозана – по значениям предельной вязкости, после которого происходило разрушение геля, и модуля сдвига. Сравнительное исследование времени гелеобразования в растворе хитозана при использовании разных по строению диальдегидов: глутарового альдегида (ГА) и окисленного производного уридина (oUrd) показало, что oUrd взаимодействует с хитозаном значительно медленнее. При добавлении 0,1 моль ГА на 1 моль аминогрупп гель в растворе хитозана с рН 5.6 образуется в течение 3,5 минут, что в 100 раз быстрее, чем при добавлении эквимольного количества oUrd. При рН 4.1, когда более 90% аминогрупп хитозана протонированы, и невысоком соотношении реакционно-способных групп образующийся гель через несколько часов после гелеобразования растворяется.

На основании изучения ЯМР спектров было показано, что в 1H-ЯМР спектре oUrd отсутствует сигнал альдегидной группы, который обычно проявляется в области 9 – 10 м. д., это свидетельствует о том, что его водный раствор, в отличие от ГА, не содержит заметных количеств свободного альдегида, и oUrd существует в виде смеси различных гидратированных форм. Это может быть связано с введением в структуру молекулы электроотрицательного атома кислорода. Таким образом, различие в скорости сшивания хитозана оUrd и ГА может быть связано с различной концентрацией свободных альдегидных групп.

Наличие фосфатной группировки в составе молекулы нуклеотида создает условия для реализации не только ковалентных, но и ионных взаимодействий. Поэтому можно предположить большую эффективность сшивки нуклеотидами, по сравнению с нуклеозидами. На pис. 2 приведены сравнительные данные времени гелеобразования в растворе хитозана с рН 5.6 в присутствии различных диальдегидов (ДА).

Рис.2 - Влияние соотношения ДА/NH2 на время гелеобразования в растворе хитозана в присутствии оUrd, (1), oAMP (2) и ГА (3). ММ хитозана 190 кДа, рН 5.6.

Время, необходимое для гелеобразования в растворе хитозана в присутствии oAMP, сопоставимо с временем гелеобразования раствора полимера, содержащего эквимольные количества ГА – наиболее эффективного из используемых для сшивки биополимеров сшивающего реагента, при этом oAMP сшивает хитозан значительно быстрее окисленного уридина.

Характер полученных для разных сшивающих реагентов зависимостей сохраняется при увеличении ММ хитозана до 470 кДа. Увеличение ММ привело к снижению количества диальдегида, необходимого для гелеобразования в системе. При соотношении  2,5 моль оUrd/моль NH2 время гелеобразования составило 35 минут, что в 3 раза меньше, чем при использовании более низкомолекулярного хитозана. В более структурированном растворе полимера с высокой ММ для прекращения подвижности макромолекул требуется меньшее количество сшивок. 

Кинетика изменения модуля сдвига гелей, полученных в разных условиях, исследовалась после завершения гелеобразования (рис. 3). Несмотря на близкие времена гелеобразования прочность гелей на основе хитозана, сшитого эквимольными количествами оАМР и ГА, сильно различаются. Причем образование геля в результате сшивки хитозана как окисленным  нуклеотидом, так и окисленным нуклеозидом (хотя и большим его количеством) приводило к повышению прочности геля по сравнению с ГА, и сопровождались выделением свободной воды. Этот факт связан с тем, что глутаровый альдегид, в основном, расходуется на увеличение длины межмолекулярных сшивок в результате кротоновой конденсации, а рост концентрации окисленного уридина приводит к увеличению числа коротких межмолекулярных сшивок. Этот вывод подтверждается результатами изучения кинетики роста вязкости растворов хитозана в присутствии ГА, оUrd и оАМР (рис.4).

Рис. 3 - Кинетика изменения модуля сдвига сшитых гелей хитозана. оАМР (1,4), оUrd (2) и ГА (3).

1- оАМР, 0,025 моль/моль, рН 5.6;

2- оUrd, 1,0 моль/моль рН 5.6,

3- ГА, 0,025 моль/моль, рН 5.6;

4- оАМР, 0,06 моль/моль, рН 4.1.

Рис. 4 - Кинетика изменения вязкости в растворе хитозана в присутствии оUrd (1), оАМР (2) и ГА (3) при соотношении ДА/NH2, моль/моль: 0,67 (1); 0,024 (2, 3);  рН 5.6.

2. Изучение механизма взаимодействия хитозана с окисленными нуклеотидами

Строение продуктов взаимодействия хитозана с окисленным уридин -5'-фосфатом было изучено с использованием ИК-спектроскопии.  Для того чтобы ослабить спектральный вклад исходных соединений, был использован метод последовательного вычитания спектров реагентов. В результате, кроме характеристических полос уридинового цикла  и полос поглощения фосфорсодержащих функциональных групп, присутствующих в спектре oUMP (1078 и 1708 см), на разностном спектре, обогащенном спектральной информацией о продуктах реакции, был обнаружен характерный пик 1632 нм, соответствующий поглощению C=N связей. Это свидетельствует о присоединении сшивающих реагентов к аминогруппам хитозана через образование альдиминных связей.

Cтроение гетероциклического основания нуклеотида практически не оказывает влияния на скорость гелеобразования. Диальдегидные производные  AMP и UMP сшивают хитозан с одинаковой скоростью (рис. 5). Времена гелеобразования компонентов, содержащих одинаковое азотистое основание (урацил), но различающихся наличием фосфатной группировки (oUrd и оUМР), отличается на два и более порядка. Эти факты могут быть обусловлены двумя причинами:

Рис. 5 - Влияние соотношения ДА/NH2 на время гелеобразования в растворе хитозана в присутствии oAMP (1, 2) и oUMP (3, 4) при рН 5.6 (1, 3) и 4.1 (2, 4). ММ хитозана 190 кДа

а) фиксация структуры гидрогеля происходит не только за счёт ковалентных С=N связей, но и за счёт ионных связей; б) при взаимодействии хитозана с окисленными нуклеотидами может ускоряться процесс отщепления фосфатной группировки, в результате возникает С=С связь, которая образует сопряжение с альдиминной связью и стабилизирует продукт реакции. Для однозначного ответа на вопрос о механизме взаимодействия хитозана с диальдегидными производными нуклеотидов с использованием методов ЯМР и дифференциальной УФ-спектроскопии было проведено исследование стабильности диальдегидных производных oUMP и оАМР в водных растворах в присутствии и отсутствие хитозана.

В процессе элиминирования фосфатной группы образуется система сопряженных связей H2С=СR–СH=О или H2C=COR-СН=N- с максимумом поглощения около 235 нм. Таким образом, за ходом реакции элиминирования можно наблюдать по увеличению оптического поглощения в этой области спектра. Рассчитанные значения констант скорости химической реакции (k) 1-го порядка показывают, что хитозан ускоряет реакцию элиминирования фосфатной группы: k реакции в присутствии хитозана даже при 20оС  в 3 раза превышает значения констант скорости реакции отщепления фосфата в окисленных нуклеотидах при 37°С, если она протекает в отсутствие хитозана (таблица 1).

Таблица 1 - Характеристики реакции ??элиминирования в oUMP и оАМР в присутствии и отсутствие хитозана при pH 5.6.

Диальдегид

t,

°С

Константа скорости

k, ч-1

Соотношение

ДА/ NH2, моль/моль

?max

Хромофор

оUMP

37

0,09

 

235

H2C=COR-СН=О

оUMP

20

0,27

1:10

237

H2C=COR-СН=NR?

oAMP

37

0,08

 

235

H2C=COR–СН=О

oAMP

20

0,26

1:10

236

H2C=COR-СН=NR?

Результаты 31Р ЯМР-спектроскопии показали, что в процессе реакции между оАМР и хитозаном при pH 5.6 значительная часть молекул оАМР претерпевает элиминирование фосфата (возникает сигнал, соответствующий неорганическому фосфату), но также сохраняются и молекулы, содержащие фосфат (присутствует сигнал, соответствующий эфиру фосфорной кислоты (HO)2Р(О)–СН2–).

Тот факт, что сшивка хитозана с образованием гидрогеля в присутствии оАМР является быстрым процессом, а ?-элиминирование фосфата в оАМР значительно более медленным, а также данные, полученные при изучении взаимодействия оАМР с хитозаном методом 31Р ЯМР-спектроскопии позволяют заключить, что первой стадией химического взаимодействия этого сшивающего реагента с хитозаном является образование альдиминных связей (которой предшествовали ионные взаимодействия фосфатных групп с протонированными аминогруппами хитозана), затем следует ?-элиминирование фосфатной группы (рис. 6). Процесс ?-элиминирования является рН-зависимым: при значении рН, равном 4.1 оАМР устойчив в течение длительного времени, в то время как при более высоком значении рН (5.6) он претерпевает отщепление фосфатной группы, которая, в свою очередь, может выступать в качестве ионного сшивающего реагента.

Таким образом, в основе процесса гелеобразования, лежит механизм сшивки хитозана, включающий ионные взаимодействия фосфатных групп с протонированными аминогруппами хитозана, стерически облегчающие реакцию образования альдиминных связей, с последующим отщеплением фосфатной группы, стабилизирующим альдиминную связь (рис. 6).

Рис. 6 – Строение продуктов взаимодействия хитозана с oАМР.

3. Разработка полимерных материалов на основе функционализованных гидрогелей хитозана и исследование их свойств

Получение нерастворимых в воде полимерных материалов на основе хитозана путем взаимодействия с бифункциональными реагентами осуществляется без его перевода в форму полиоснования, что, с одной стороны, исключает  использование денатурирующих белки растворов щелочей, а с другой  - представляет интерес с точки зрения сохранения высокой влагоудерживающей способности сшитого хитозана, содержащего протонированные аминогруппы. Ковалентное присоединение белка в этом случае происходит в одну технологическую стадию, т.к. и белок и хитозан содержат аминогруппы.

При получении пленок в процессе испарения растворителя из тонкого слоя полимерного раствора концентрация хитозана увеличивается, и для потери подвижности макромолекул достаточно меньшего числа сшивок. В зависимости от рН раствора хитозана и его молекулярной массы равновесная степень набухания пленок, полученных сшиванием хитозана в растворе, содержащем в 2-20 раз меньшее количество диальдегида, вследствие реализации многоточечных межмолекулярных взаимодействий снижается до 4-8 раз. На рис. 7 показано, что равновесная степень набухания хитозановой пленки, полученной при соотношении oUrd/NH2 0,06 моль/моль (рН 5.6), в 5 раз меньшем, чем необходимо для завершения гелеобразования в 2%-ном растворе хитозана, составляет 900%.

  Рис. 7 – Кинетика набухания пленки из хитозана, сшитого oUrd/NH2 0,06 моль/моль, рН 5.6.

Установлена возможность иммобилизации протеолитического фермента трипсина в структуре пленок из хитозана, полученных из совместных растворов полисахарида и белка в присутствии oUMP и oUrd. Пленки были получены на твердых подложках, а также на поверхности целлюлозной ткани. Показано, что за счет использования разных сшивающих реагентов можно регулировать скорость выделения фермента.

При иммобилизации трипсина другим способом: инкубируя пленки, сшитые диальдегидами, в водном растворе фермента, были достигнуты высокие значения эффективности иммобилизации трипсина (78–81%) (Таблица 2). Реализация электростатических взаимодействий приводит к тому, что из пленки, полученной с использованием oUMP, в процессе обработки в течение 1 часа буферным раствором с рН 3 в раствор десорбируется в 3 раза меньшее количество фермента, чем из пленок, сшитых ГА или  oUrd.

Таблица 2 – Активность трипсина, иммобилизованного на хитозановых пленках, сшитых диальдегидами.

Сшивающий реагент

Соотношение ДА/NH2, моль/моль

Активность пленки, Е/г

Выход по активности, %

Количество десорбированного трипсина, %

oUMP

0,01

2,16

78,9

25,4

oUrd

0,08

2,32

84,7

75,0

ГА

0,01

2,22

81,2

74,7

Природное происхождение нуклеотидов и нуклеозидов, наряду с возможностью получения гидрогелевых биокатализаторов с заданными свойствами (активностью, стабильностью, скоростью выделения из материала во внешний раствор), как показано с использованием двух методов иммобилизации ферментов, позволяет рекомендовать предложенные  сшивающие реагенты для получения новых материалов медицинского и биотехнологического назначения с контролируемым выделением лекарственных соединений.

Для изучения влияния строения сшивающего реагента на сорбционные свойства хитозана был получен гранулированный сорбент, представляющий собой зерна набухшего в воде гидрогеля хитозана, сшитого oАMP (ХТЗ-АMP). Гелеобразование проводили в 4%-ном растворе хитозана в 4%-ной уксусной кислоте при соотношении оАМР/NH2  0,3 моль/моль и рН 4.1. Через 30 минут после завершения гелеобразования полученный гель продавливали через калиброванные сита и промывали раствором. Характеристика полученного сорбента приведена в Таблице 3.

Таблица 3 – Характеристика сорбентов на основе хитозана, сшитого АMP и ГА.

Сорбент

Соотношение

ДА/NH2 в реакционной смеси, моль/моль

Степень сшивки ДА/NH2, моль/моль

Содержание АМР, моль/г

Сорбционно-активные группы

Равновесная адсорбция*, мг/г

ХТЗ-АMP

0,3

0,18

1,1

-NH2, -NH-,

76,7

ХТЗ-ГА

0,2

-

-

-NH2,

55,2

* Aравн. при концентрации раствора CuSO4 С0= 7,8 ммоль/л

Изучение процесса сорбции ионов Cu2+ сорбентом ХТЗ-АMP  из растворов CuSO4 показало увеличение равновесной сорбционной емкости с ростом концентрации до 133 мг Cu2+/г сорбента или 2 ммоль/г при С0=23 ммоль/л.

На основании значений равновесной адсорбции, полученных при разных концентрациях раствора CuSO4, была построена изотерма сорбции в координатах Аравн = f (Cравн) (рис. 8а). Линеаризация полученных данных в координатах Ленгмюра и показала, что изотерма описывается уравнением Ленгмюра с низким коэффициентом корреляции и хорошо аппроксимируется уравнением Фрейндлиха (рис. 8б).

Кинетика сорбции была исследована в условиях, исключающих гидролиз и осаждение продуктов гидролиза сульфата меди (низкие концентрации растворов CuSO4, рН 5.6), поэтому тот факт, что процесс хемосорбции ионов Cu2+ функционализованным гидрогелем хитозана описывается только эмпирическим уравнением Фрейндлиха, свидетельствуют о сложном характере процесса, реализующегося на разных типах функциональных групп.

 а

 б

Рис. 8 – Изотерма адсорбции ионов Cu2+ сорбентом ХТЗ-АMP1 (экспериментальная кривая - а, линеаризация в координатах уравнения Фрейндлиха - б)

Сравнительное изучение кинетики сорбции ионов меди из растворов Cu2+ с концентрацией 0,5 г/л сорбентомХТЗ-АMP и полученным в аналогичных условиях сорбентом ХТЗ-ГА показало, что равновесная сорбционная емкость ХТЗ-ГА в 1,4 раза ниже, чем сорбционная емкость ХТЗ-АMP (Таблица 3).

Таким образом, использование окисленных нуклеотидов дает возможность совмещения процесса сшивки при получении гелевых форм сорбентов с функционализацией хитозана. Это открывает возможности создания на основе исследуемых гелеобразующих композиций новых сорбентов и энтеросорбентов.

Выводы

1. С целью создания на основе хитозана гидрогелей медико-биологического назначения предложены новые сшивающие реагенты – диальдегидные производные структурных единиц нуклеиновых кислот нуклеотиды oUMP и оАМР. Использование этих соединений позволяет наряду со сшиванием вводить в гель функциональные группы. Установлено строение продуктов взаимодействия хитозана с oUMP и оАМР.

2. Установлено, что причиной низкой скорости гелеобразования в растворах хитозана в присутствии диальдегидного производного уридина по сравнению с ГА является отсутствие в составе его равновесных форм свободных альдегидных групп. В растворе ГА присутствует до 30% гидратированных форм альдегида.

3. Установлены закономерности гелеобразования в растворах хитозана в присутствии oUMP и оАМР. Показано, диальдегидные производные нуклеотидов представляют собой сшивающие реагенты ковалентно-ионного типа. Предложен механизм сшивания хитозана окисленными нуклеотидами.

4. Установлено, что для потери подвижности макромолекул при получении не растворимых в воде пленок путем испарения растворителя из тонкого слоя гелеобразующего раствора достаточно меньшего числа сшивок, чем при получении гидрогелей, поэтому содержание сшивающих реагентов может быть существенно снижено.

5. Показана возможность использования полимерных композиций на основе растворов хитозана, содержащих предложенные сшивающие реагенты, для иммобилизации белков; обнаружен эффект стабилизации трипсина в хитозановых пленках, сшитых оАМР.

6. Получены гранулированные сорбенты на основе хитозана, сшитого оАМР. Обнаружено отклонение экспериментальной зависимости равновесной сорбции от концентрации ионов Cu2+ от уравнения Ленгмюра, связанное с наличием разного типа функциональных групп.

Список опубликованных работ по теме диссертации:

  1. Азарова А.И., Перминов П.А., Кильдеева Н.Р., Михайлов С.Н., Владимиров Л.В. Гелеобразование композиций для модификации волокнистых материалов // Химические волокна. - 2011. - №2. - С. 7-11.
  2. Перминов П.А., Донецкая А.И., Симаненкова Л.М., Ефременко Е.Н., Кильдеева Н.Р. Получение волокнистых форм иммобилизованной органофосфатгидролазы с использованием хитозана и его производных // Изв. вузов. Технология текстильной промышленности. - 2011. - № 7. - С. 95-99.
  3. Михайлов С.Н., Кильдеева Н.Р., Перминов П.А., Никоноров В.В., Захарова А.Н., Донецкая А.И.. Новые сшивающие агенты для получения биосовместимых материалов на основе хитозана // Патент РФ № 2408618, приоритет от 21.07.2008, опубликовано 10.01.2011, Бюлл. № 1.
  4. Никоноров В.В., Перминов П.А., Захарова А.Н., Донецкая А.И., Кильдеева Н.Р., Михайлов С.Н. Гелеобразование в растворах хитозана в присутствии сшивающих реагентов // Структура и динамика молекулярных систем. Сб. статей. - Москва-Йошкар-Ола-Уфа-Казань, - 2008. - Т.15. - С.139-142.
  5. Zakharova A.N., Novikov V.V., Donetskaya A.I., Perminov P.A., Kildeeva N.R., S.N.Mikhailov. Dialdehyde derivatives of nucleosides and nucleotides: novel Effective crosslinking reagents. //Proceedings of the 9th International Conference of the European Chitin Society, Venice, Italy 23-26 May 2009, P.283-288.
  6. Донецкая А.И., Симаненкова Л.М., Перминов П.А., Кильдеева Н.Р., Михайлов С.Н. Влияние рН уксуснокислотных растворов хитозана на их стабильность и кинетику гелеобразования // Матер. Десятой международной научной  конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана» - Нижний Новгород, 2010. - С. 98-101.
  7. Zakharova A.N., Novikov V.V., Donetskaya A.I., Perminov P.A., Kildeeva N.R., Mikhailov S.N. Dialdehyde derivatives of nucleosides and nucleotides: novel effective crosslinking reagents // Proceedings of the ХIX International Round Table «Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids» -  Lyon, France, 2010. - P. 568-569.
  8. Донецкая А.И., Симаненкова Л.М., Перминов П.А., Новиков А.В., Кильдеева Н.Р., Михайлов С.М. Влияние степени протонирования аминогрупп на свойства растворов хитозана и кинетику гелеобразования в присутствии диальдегидов // Структура и динамика молекулярных систем. Сб. статей. Москва-Йошкар-Ола-Уфа-Казань, 2010.- Т.17. ч.2. - С. 58-61.
  9. Перминов П.А., Симаненкова Л.М., Донецкая А.И., Кильдеева Н.Р., Михайлов С.Н.. Синтез наночастиц серебра на поверхности хитозановых пленок  Тезисы устных и стендовых докладов. Пятой Всероссийской каргинской конференции «Полимеры - 2010» - Москва, 2010. - С. 48.

 

 
Авторефераты по темам  >>  Разные специальности - [часть 1]  [часть 2]



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.