WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


Фармакокоррекция нитроксидергических процессов, морфобиохимиче-ского и иммунологического статуса у телят при бронхопневмонии и диспепсии

Автореферат докторской диссертации по ветеринарии

  СКАЧАТЬ ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТА  
Страницы: | 1 | 2 | 3 |
 

ЕРМОЛИНА сВЕТЛАНА АЛЕКСАНДРОВНА

ФАРМАКОКОРРЕКЦИЯ НИТРОКСИДЕРГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ,

МОРФОБИОХИМИЧЕСКОГО И ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО СТАТУСА

У ТЕЛЯТ ПРИ БРОНХОПНЕВМОНИИ И ДИСПЕПСИИ

06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией

06.02.01 – диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

доктора ветеринарных наук

Троицк – 2011


Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Вятская государственная сельскохозяйственная академия"

 


Официальные оппоненты:                     доктор ветеринарных наук,

профессор Лыкасова

Ирина Александровна

доктор ветеринарных наук,

профессор Уразаев

Дмитрий Николаевич

доктор ветеринарных наук,

профессор Зухрабов

Мирзабек Гашимович

Ведущая организация: Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородская государственная сельскохозяйственная академия"

Защита состоится "_____" ________________ 2011 г. в "_____" часов на заседании диссертационного совета Д.220.066.01 при ФГОУ ВПО "Уральская государственная академия ветеринарной медицины" по адресу: 457100, г. Троицк, Челябинской области, ул. Гагарина, 13, тел.: 8(351-63) 2-48-88; факс: 8(351-63) 2-04-72; E-mail: tvi_t@mail.ru, официальный сайт: www.usavm.ac.ru.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО "Уральская государственная академия ветеринарной медицины".

Автореферат разослан "_____" ________________ 2011 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета                                                       Борисенко Е.В.


1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Заболевания органов дыхания и пищеварения до настоящего времени являются самой частой патологией у молодняка животных, в частности у телят. Несмотря на достижения в вопросах диагностики и лечения патологии этих органов, имеются объективные сложности в определении патогенеза, проведении дифференциального диагноза и в подходах к их фармакокоррекции.

В последние годы большое внимание уделяется оксиду азота, которому приписываются многогранные свойства: вазодилятаторное действие, участие в неспецифической защите организма против бактерий, вирусов, раковых клеток, регуляции тонуса и просвета дыхательных путей, антиоксидантные свойства и др. (K. Hishika-wa, 1992; R. Hanano, 1998).

Известно, что при чрезмерной выработке оксид азота может проявлять цитотоксический эффект, что объясняется способностью образования в организме комплекса оксида азота с супероксидным анионом. В результате происходит реакция нитрирования и окисления многих структурных и ферментных белков, наблюдается их деструкция, усиливаются процессы свободнорадикального перекисного окисления (Х.М. Марков, 1996; К.С. Раевский, 1997; А.Ф. Ванин, 1998; А.К. Урзаев с соавт., 1999; А.А. Сосунов, 2000; D.S. Bredt et al., 1992; M. Keipes, 1995; О.З. Нагашян с соавт., 1991; И.С. Северина, 1998; А.Ф. Ванин, 2000; Л.И. Ратникова с соавт., 2002; М.В. Степаненко с соавт., 2001; Н.М. Сухов, 2002; И.А. Пахмутов с соавт., 2003; S. Moncada et al., 1993; M. Phillippo et al., 1997 и др.).

Представлено значительное количество работ по особенностям функционирования гомеостаза, состояния иммунной системы, характеристике изменений ПОЛ, белкового, углеводного, солевого и других обменов у больных с респираторными и желудочно-кишечными заболеваниями воспалительного генеза (И.М. Карпуть с соавт., 1974, 1989; В.А. Белопольский с соавт., 1993; Г.А. Ноздрин с соавт., 1997; А.Л. Аляви с соавт., 2002; И.П. Кондрахин, 1997; В.В. Митюшин, 1984; О.З. Нагашян с соавт., 1987, 1988, 1990, 1991; В.А.Томчук с соавт., 2003; М.И. Рецкий с соавт., 2004; К.Х. Папуниди с соавт., 2002; И.В. Сидоров с соавт., 2003 и др.).

При поступлении из очага воспаления токсинов, в организме накапливаются многие биологически активные метаболиты, в том числе и оксида азота, которые легко встраиваются в биомембранные структуры клеток, нарушая их функцию. Поэтому в настоящее время при различных патологических состояниях организма уделяют большое внимание синдрому эндогенной интоксикации, которая способствует повреждению барьерных систем и проникновению токсических веществ в межклеточную жидкость и клетки (М.Л. Уманский с соавт., 1979; Н.И. Габриэлян с соавт., 1985; М.Я. Малахова, 1995).

Традиционные методы лечения бронхопневмонии и диспепсии нередко мало эффективны, что приводит к удлинению сроков выздоровления, переходу острой формы болезни в хроническую. Мало изученными остаются вопросы о воздействии на обмен оксида азота основных групп лекарственных средств, особенно растительных (Х.М. Марков, 1996; И.Ю. Малышев с соавт., 2000). Включение в базисную терапию средств с антинитроксидергической направленностью, стимулирующих иммунную реактивность, обладающих отхаркивающими, вяжущими, противовоспалительными, спазмолитическими и другими свойствами может быть патогенетически обосновано.

В связи с этим научное обоснование возможности применения в ветеринарии препаратов из растительного сырья позволяет сократить расходы сельскохозяйственных предприятий на проведение лечения и профилактики заболеваний молодняка.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилась разработка способа фармакокоррекции нитроксидергических процессов, морфобиохимического и иммунологического статуса у телят при бронхопневмонии и диспепсии с различной степенью тяжести заболевания.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Установить физико-химические свойства препарата "Альгасол".

2. Определить его острую, хроническую токсичность и кумулятивные свойства.

3. Выявить эмбриотоксическое, тератогенное действие, и его влияние на постнатальное развитие.

4. Изучить местнораздражающее, аллергизирующее и сенсибилизирующее действие препарата.

5. Определить фармакологические свойства препарата "Альгасол".

6. Изучить общее действие его на организм телят.

7. Выяснить распространенность бронхопневмонии и диспепсии у телят в сельхозпредприятиях Кировской области.

8. Изучить микробиоциноз верхних дыхательных путей при бронхопневмонии и желудочно-кишечного тракта при диспепсии у телят.

9. Определить суммарное содержание метаболитов оксида азота в крови и моче у больных животных.

10. Установить взаимосвязь нитроксидемии с изменениями в морфо-биохимическом и иммунологическом статусе у телят, больных бронхопневмонией и диспепсией с различной степенью тяжести заболевания.

11. Дать комплексную оценку эффективности разных способов лечения бронхопневмонии и диспепсии телят.

Научная новизна результатов исследования. Впервые разработан препарат "Альгасол" на основе экстрактов морской бурой водоросли (Laminaria saccharina) и корня солодки (Glycyrrhiza glabra L.), показана возможность его использования в ветеринарной практике. В процессе доклинических исследований установлено, что препарат "Альгасол" является малотоксичным. Изучены его фармакологические свойства. Клинические испытания показали, что он обладает антиоксидантным, иммуномоделирующим действием, нормализует обменные процессы в организме.

Установлено, что у телят, больных бронхопневмонией и диспепсией неспецифической этиологии происходит интенсификация нитроксидергических процессов, причем прослеживается прямая зависимость содержания метаболитов эндогенного оксида азота в крови и моче от степени тяжести заболевания. В условиях нитроксидемии отмечаются существенные сдвиги, как в количественных, так и в качественных показателях крови; происходят изменения физико-химических свойств эритроцитарных мембран. Показано, что у больных телят нарастают процессы ПОЛ, образуются среднемолекулярные пептиды и снижается механизм АОА, что приводит к образованию токсических продуктов, их поступлению в кровь, развитию эндогенной интоксикации и изменению гомеостаза; развивается диспротеинемия; имеет место выраженная тенденция к снижению уровней содержания в крови глюкозы, холестерина и ?-липопротеидов, возрастает активность ферментов ЛДГ, АсАТ и АлАТ. Установлено, что у больных телят в условиях нитроксидемии происходит снижение фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови; наблюдаются существенные изменения в лимфоцитарном звене иммунной системы, касающиеся снижения уровней Т- и В-лимфоцитов и их субпопуляций, JgM и JgG и возрастания циркулирующих иммунных комплексов; в крови отмечается снижение показателей БАСК.

Предложен способ лечения и профилактики желудочно-кишечных и легочных заболеваний у молодняка животных и птиц с использованием препарата "Альгасол" (Патент № 2407537 от 27.12.10 г).

Теоретическая и практическая значимость работы. Предложен препарат "Альгасол", обладающий антиоксидантным, иммуномоделирующим действием, нормализующим обменные процессы в организме. В установленном порядке утверждена инструкция по его применению (в Россельхознадзоре РФ), в Федеральной службе по ветеринарному и фитосанитарному контролю получено свидетельство о государственной регистрации лекарственного средства для животных (учетная серия 24-2-11.9-4296, регистрационный № ПВР-2-11.9/02525).

Разработан пакет нормативно-технической документации для его производства (ТУ 9337-001-60614688-2010), разработан технологический регламент на производство препарата "Альгасол". Выпуск препарата "Альгасол" организован на базе ООО "Инкрис-Гэйн" в г. Кирове.

Некоторые положения, вытекающие из материалов диссертационной работы используются в педагогическом процессе в 19 Федеральных государственных образовательных учреждениях высшего профессионального образования Российской Федерации, а также в Казахском национальном аграрном университете (при чтении лекций и проведении лабораторных и практических занятий) по курсу терапии (раздел "Болезни новорожденных животных") и по курсу фармакологии (раздел "Препараты растительного происхождения"), при подготовке студентов по специальности 111201 – "Ветеринария".

Результаты работы могут быть использованы при написании книг, учебников и монографий.

Соответствие диссертации паспорту научных специальностей. Содержание работы соответствует паспорту специальности 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией по пунктам: п. 1 – механизм действия лекарственных веществ на организм животных, его отдельные системы и функции (фармакодинамика); п. 7 – теоретическое обоснование и разработка рецептур лекарственных веществ, обеспечивающих наибольшую эффективность при наименьших дозах и кратностях применения; п. 8 – токсичность лекарственных веществ для животных и характер их побочного действия, разработка показания и противопоказания для применения в ветеринарной практике, а также  методов устранения побочных эффектов; п. 11 – изучение эмбриотоксического, тератогенного, мутагенного, аллергенного и канцерогенного действия лекарственных веществ и опасных химических загрязнений объектов ветеринарного надзора; паспорту специальности 06.02.01 – диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных по пунктам: п. 2 – вопросы клинической ветеринарии, принципы, методы и технологии обследования, общей, специальной и инструментальной диагностики болезней животных, частная синдроматика (кардио-, нейро-, гепато-, нефропатоголия, желудочно-кишечные, респираторные, репродуктивные расстройства); п. 3 – этиология, патогенез незаразных болезней, патологических и стрессовых состояний, патология обмена веществ у животных; п. 4 – принципы и методы общей и частной лекарственной, физиотерапии и профилактики незаразных болезней, научные основы диспансеризации продуктивных и мелких домашних животных.

Апробация работы и реализация результатов исследования. Результаты исследований были представлены на: IV международной научно-практической конференции "Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных", Троицк, 2001 г.; Международной конференции ветеринарных фармакологов и токсикологов, посвященной 125-летию Н.А. Сошественского", Казань, 2001; Всероссийской научно-практической конференции "Современные проблемы диагностики и лечение болезней животных", Киров, 2004; Международной научно-практической конференции "Повышение эффективности лечения и профилактики акушерско-гинекологических заболеваний и биотехники размножения животных", Киров, 2005; Международной научно-практической конференции, посвященной 90-летию Кабыша А.А., "Современные проблемы ветеринарной терапии и диагностики болезней животных", Троицк, 2007; научно-практической конференции фармакологов РФ, посвященной 85-летию Рабиновича М.И., "Фармакологические и экотоксикологические аспекты ветеринарной медицины" Троицк, 2007; научно-практической конференции "Вопросы физиологии, содержания, кормопроизводства и кормления, селекции с.-х. животных, биологии пушных зверей и птиц, охотоведения", Киров, 2008; Международной научно-практической конференции "Достижения ветеринарной науки и практики", Киров, 2008; Международной научно-практической конференции "Трансферт инновационных технологий в молочном скотоводстве", Орел, 2008; III Международной научно-практической конференции "Аграрная наука – сельскому хозяйству", Барнаул, 2008; Международной научно-практической конференции "Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях", Воронеж, 2008; Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 90-летию сельскохозяйственного образования на Урале "Инновационный потенциал аграрной науки – основа развития АПК", Пермь, 2008; Международной научно-практической конференции "Инновационные подходы в ветеринарии, биологии, экологии к здоровьесбережению в сельском хозяйстве", Троицк, 2008; Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 95-летию Х.В. Аюпова "Современные достижения ветеринарной медицины и биологии – в сельскохозяйственное производство", Уфа 2009; Международной научно-практической конференции "Проблемы и перспективы современной морфологии, ветеринарии, зоотехнии и охотоведения", Киров, 2009; Всероссийской научно-практической конференции "Аграрная наука – сельскому хозяйству", Курск, 2009; Всероссийской научно-практической дистанционной конференции "Современные достижения ветеринарной медицины сельскохозяйственному производству", Персиановка, 2009; II съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов России "Современные проблемы ветеринарной фармакологии и токсикологии", Казань, 2009; Международной научно-практической конференции "Зоотехническая наука на Удмуртской земле. Состояние и перспективы", Ижевск, 2009; Международной научно-практической конференции "Инновационные подходы в ветеринарии, биологии и экологии", Троицк, 2009, 2010; Международной научно-практической конференции "Актуальные проблемы ветеринарной медицины", посвященной 90-летию МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, Москва, 2009; Х Сибирском ветеринарном конгрессе "Актуальные проблемы ветеринарной медицины", Новосибирск, 2010; Международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию ВГСХА "Современные научно-практические достижения в ветеринарии", Киров, 2010; Международной научно-практической конференции "Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития", Саратов, 2010; Международной научно-практической конференции, посвященной 75-летию факультета ветеринарной медицины "Современные тенденции развития ветеринарной медицины и инновационные технологии в ветеринарии и животноводстве" – Улан-Удэ, 2010; Международной научно-практической конференции "Роль высшей школы в реализации проекта "Живое мышление – стратегия Чувашии" – Чебоксары, 2010.

Публикации результатов исследований. По теме диссертационной работы опубликовано 75 работ, из них 12 – в научных изданиях, определенных ВАК РФ; 2 монографии; патент РФ № 2407537 (от 27.12.10). Общий объем публикаций составляет 603 страницы или 37,7 печатных листов. Личный авторский вклад по публикациям 543 страницы (90%).

Основные положения, выносимые на защиту:

  1. токсико-фармакологическая оценка препарата "Альгасол";
  2. взаимосвязь нитроксидергических процессов с морфо-биохимическим и иммунологическим статусом у телят, больных бронхопневмонией и диспепсией различной степени тяжести;
  3. терапевтическая эффективность комплексного лечения телят, больных бронхопневмонией и диспепсией в сочетании с препаратом "Альгасол".

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 272 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 63 таблицами и 17 диаграммами, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Список литературы включает 444 источника, из них 78 зарубежных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ   ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материал и методы исследований

В работе обобщены результаты научных исследований, проводимых в период с 1990 по 2010 год. Экспериментальную часть работы выполняли на базе лабораторий ФГОУ ВПО "Вятская государственная сельскохозяйственная академия", Кировского НИИ гематологии, областной ветеринарной бактериологической лаборатории и диагностических центров городов Кирова и Челябинска, лаборатории ветеринарной иммунологии Кировского зонального НИИСХ Северо-Востока им. Рудницкого. Тема диссертационной работы утверждена на заседании Ученого совета ФГОУ ВПО "Вятская государственная сельскохозяйственная академия" 31 марта 2011 года (протокол № 3) и является разделом государственного плана научно-исследовательской работы академии (регистрационный № 01.200.206492).

Материалом для исследования служили препарат "Альгасол", цельная кровь, плазма и сыворотка крови, утренняя моча, а объектом наблюдения – лабораторные животные (белые мыши, крысы, морские свинки, кролики) и подопытные телята: клинически здоровые и больные различными формами бронхопневмонии и диспепсии.

Научно-производственные опыты проводили в ряде хозяйств Кировской и Челябинской областей, в частности в учхозе ФГОУ ВПО "ВГСХА", ЗАО племзавод "Красногорский", ЗАО Агрофирма "Дороничи", колхозе "Карсы" Челябинской области и других.

Таблица 1 – Схема опытов

№ п/п

Вид работ

Объем работы

1

Физико-химические свойства препарата Альгасол

25 проб

2

Токсикологическая оценка препарата Альгасол:

Острая токсичность (белые мыши)

Кумулятивные свойства (белые мыши)

Хроническая токсичность (белые крысы)

20 голов

20 голов

48 голов

3

Эмбриотоксическое и тератогенное действия (белые крысы)

Влияние на постнатальное развитие (белые крысы)

15 голов

10 голов

4

Изучение раздражающих свойств препарата Альгасол:

на слизистую оболочку глаза на белых крысах/кроликах

на слизистую оболочку желудка (белые крысы)

10/6 голов

20 голов

5

Изучение аллергизирующего и сенсибилизирующего действия препарата Альгасол: морские свинки/белые крысы

10/5 голов

6

Фармакологические свойства препарата Альгасол:

Определение адсорбирующих свойств

Изучение бактериостатической эффективности

Определение иммуномоделирующего действия (белые мыши)

5 проб

5 проб

25 голов

7

Изучение общего действия препарата Альгасол на организм телят

20 голов

8

Ретроспективный анализ данных ветеринарной отчетности по распространенности бронхопневмонии и диспепсии у телят в хозяйствах Кировской области

2003-2006 гг.

9

Изучение микробиоциноза верхних дыхательных путей при бронхо-пневмонии и желудочно-кишечного тракта при диспепсии у телят

20 голов

10

Изучение нитроксидергических процессов, морфобиохимического и иммунологического статуса у телят, больных бронхопневмонией и диспепсией

72 головы

11

Фармако-экспериментальное обоснование схем терапии телят больных: бронхопневмонией/диспепсией

110/110 голов

В соответствии с поставленными задачами на первом этапе наших исследований были изучены физико-химические свойства препарата "Альгасол" по стандартным методикам, в полном соответствии с указаниями, приведенными в части II "Общие методы физико-химического, химического и биологического исследования" Государственной Фармакопеи СССР (10 издание, 1964). Исследования проводили с учетом следующих показателей: плотность, рН, нелетучий остаток (зольность), массовая доля йода, массовая доля глицирризиновой кислоты.

Лабораторные, а также опытно-промышленные образцы препарата, отвечающие регламентированным показателям по физико-химическим характеристикам, использовали в дальнейшем для тестирования в научно-производственных опытах на лабораторных и сельскохозяйственных животных в соответствии с установленными требованиями.

Первичное фармакологическое и токсикологическое исследование препарата "Альгасол" проводили согласно "Требованиям к доклиническому изучению общетоксического действия новых фармакологических веществ" (1976), "Методическим указаниям по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве" (1991), а также с учетом имеющихся по этому вопросу других руководств (И.В. Саноцкий, 1965; И.А. Кассирский, Г.А. Алексеев, 1970; В.Я. Антонова, П.Н. Блинова, 1971; К.К. Сидоров, 1973; В.В. Гацура, 1974; И.П. Западнюк, Е.А. Захария 1974; И.В. Саноцкий, В.Н. Фоменко, 1979; И.П. Западнюк с соавт., 1983; А.Г. Малахов, С.И. Вишняков, 1984; Б.И. Антонов с соавт., 1989, 1991;  В.В. Меньшиков с соавт., 1987; Б.И. Любимов, М.И. Миронова 1988; В.М. Холод, Г.Ф. Ермолов, 1988; Н.Б. Тарасова с соавт., 1996 и др.).

Изучение острой токсичности препарата "Альгасол" проводили по методу Кербера (М.Л. Беленький, 1963; О.Н. Елизарова, 1971; И.В. Саноцкий, В.Н. Фоменко, 1979) на белых мышах, при однократном пероральном введении с определением средней смертельной дозы (LD50). О токсическом действии препарата судили по клинической картине, количеству погибших животных и результатам патологоанатомического вскрытия (Б.И. Антонов с соавт., 1989).

Экспериментальное определение максимально переносимой дозы (LD0) препарата "Альгасол" осуществляли в диапазоне доз от 0,1 до 0,8 мл.

Выявление кумулятивных свойств препарата "Альгасол" проводили на белых мышах. В основу метода их выявления был взят тест субхронической токсичности (Лим с соавт. 1961). В опыте было использовано 20 животных.

Препарат животным вводили внутрь в подогретом виде (на водяной бане до температуры 37,5?С) при помощи шприца и иглы с оливой в следующих дозах: первые 4 дня – 4 мл/кг массы тела (что составляло 1/10 от максимально переносимой дозы LD0), затем каждые последующие 4 дня дозу повышали в 1,5 раза. К концу опыта ежедневная доза составила – 40 мл/кг массы тела. Наблюдения за животными проводили в течение 28 дней. При этом учитывали: общее состояние, характер и степень активности, координацию движений, реакцию животных на ориентировку, тактильные и болевые раздражители, наличие тремора, судорог, параличей и других признаков.

Хроническую токсичность препарата "Альгасол" определяли на двух группах белых крыс, одна из которых была контрольной, другая – опытной. Каждая группа животных включала 12 самок и 12 самцов. Препарат вводили перорально в дозе – 1 мл/кг массы тела в нативном виде ежедневно в течение 3-х месяцев. Животным контрольной группы перорально вводили дистиллированную воду в том же объеме.

В течение всего экспериментального периода животные находились под ежедневным наблюдением, во время которого учитывали общее состояние, потребление корма и воды, состояние волосяного покрова и видимых слизистых оболочек, частоту дыхания. Предварительно до и че­рез 30, 60 и 90 дней после дачи препарата определяли массу животных и проводили анализ крови на содержание эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, выводили лейкограмму. В конце периода наблюдения под легким эфирным наркозом из каждой группы умерщвляли (декапитацией) по 6 животных для проведения патоморфологических исследований (К.И. Вертинский с соавт., 1973). В сыворотке крови определяли общий белок, содержание глюкозы и изменения активности трансаминаз. Внутренние органы изолировали от окружающих тканей, взвешивали, вычисляли их относительную массу и в дальнейшем подвергали патоморфологическому исследованию.

Изучение эмбриотоксических и тератогенных свойств препарата "Альгасол" проводили согласно "Методическим указаниям по изучению эмбриотоксического действия фармакологических веществ и влияние их на репродуктивную функцию" (1986). Препарат вводили самкам белых крыс (10 голов) ежедневно внутрижелудочно в дозе 1/10 от LD0 – 4 мл/кг. Учитывали предымплантационную (1-13 сутки) и постимплантационную гибель плодов (с 14 по 20 сутки). Третья группа (5 голов) служила контролем. Животным этой группы вводили внутрь воду в том же объеме, что и препарат.

Родившиеся плоды взвешивали, определяли их кранио-каудальные размеры. После внешнего осмотра половину от числа взятых плодов фиксировали в жидкости Буэна для последующего изучения внутренних органов по методике Вильсона (Wilson), остальные заливали 96% этиловым спиртом для последующего изучения их скелета по методике Доусона (Dawson) (А.Т. Иванов с соавт., 1989).

Влияние препарата "Альгасол" на постнатальное развитие изучали на родившихся крысятах, матерям которых изучаемый препарат ежедневно вводили внутрижелудочно в дозе 1/10 от LD0 на протяжении всей беременности. За 1-2 дня до родов самок рассаживали по одной в клетки. Регистрировали день родов, число крысят в помете. В дальнейшем создали две группы животных – контрольную и опытную. Крысят распределяли по 8 на самку, для более равномерного вскармливания. Учитывали массу плодов (1 раз в неделю до пятимесячного возраста), а также показатели их общего развития – время обрастания шерстью, время открытия ушей и глаз, у самок – открытие вагины (В.В. Меньшиков с соавт., 1987).

Изучение раздражающих свойств препарата "Альгасол" на слизистую оболочку глаза проводили на лабораторных животных (крысах и кроликах) по методам В.В. Гацура (1974), Б.И. Любимова, М.И. Миронова (1988). В конъюнктивальный мешок правого глаза подопытным животным вносили 2 капли препарата, а в контроле – по 2 капли дистиллированной воды или изотонического раствора натрия хлорида.

Оценку раздражающего действия проводили через 1, 2, 3, 4 и 24 часа с учетом кровенаполнения сосудов конъюнктивы, наличия лакримации, состояния роговицы и век глаза.

Действие препарата "Альгасол" на слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки изучали на белых крысах (20 голов) при многократном (6 дней) оральном его введении, в дозе 1/10 от LD0 и пятикратно ее превышающей. Контрольным животным тем же путем и в том же объеме вводили дистиллированную воду. На 7 день крыс декапитировали под легким эфирным наркозом, у каждой из них вскрывали желудок и двенадцатиперстную кишку, проводили макроскопическое исследование их слизистых оболочек. Ульцерогенность оценивали по числу животных с язвами.

Аллергизирующее действие препарата "Альгасол" при нанесении на кожу изучали на 30 морских свинках. Белые участки кожного покрова депилировали (на площади 2х2 см) и в течение 20 суток наносили испытуемый препарат в дозе 1/10 от LD0. Через 21 сутки на интактный участок противоположной стороны наносили препарат в разрешающей дозе (LD0 – 4 мл/кг). В контрольной группе животных применяли вазелиновое масло в тех же объемах. В ходе опыта у животных учитывали изменения в живой массе, температуре тела, определяли степень покраснения кожи, а в крови – количество эритроцитов, лейкоцитов, выводили лейкоцитарную формулу. Для выявления аллергической реакции замедленного типа ставили РСАЛ в цитратной крови по Флексу. Положительной считали пробу, в которой агломерация лейкоцитов превышала контрольные данные не менее чем на 30% (Б.И. Любимов, М.И. Миронова, 1988).

Изучение сенсибилизирующего действия препарата "Альгасол" проводили на белых крысах путем 20 повторных накожных аппликаций (2 раза в неделю) на участок боковой поверхности туловища размером 2х2 см2.

Адсорбционную способность препарата "Альгасол" оценивали по изменению оптической плотности растворов метиленового синего. Метиленовый синий готовили в разведении: 1 мг (точная навеска) в 300 мл воды (0,00033%) по ГФ Х (с. 423). К 10 мл 0,00033% раствора метиленового синего добавляли 1 мл исследуемого препарата, тщательно перемешивали и центрифугировали при 2000 об./мин., в течение 15-20 минут. Определяли оптическую плотность исходного раствора красителя и центрифугата против воды на фотоэлектроколориметре при длине волны 670 нм в толщине слоя 10 мм. Определение повторяли трижды.

Определение бактериостатической активности препарата "Альгасол" производили методом серийных разведений в жидкой питательной среде (МПБ) и методом разведений в плотной питательной среде (МПА) на культурах: E. coli в концентрации (1 млн. микробных тел на 1 см3).

Влияние препарата "Альгасол" на иммунную систему оценивали по реакции лимфатических фолликулов селезенки у белых мышей. С этой целью были проведены две серии опытов на 20 мышах (самцах) массой 18-20 г. В первой серии изучали влияние препарата "Альгасол" на площадь лимфатических фолликулов селезенки у мышей после 7-суточного скармливания препарата. Во второй серии опытов оценивали влияние препарата "Альгасол" на лимфатические фолликулы в селезенке мышей с депрессией иммунной системы.

В первой серии опытов мыши экспериментальной группы получали с кормом по 0,02 мл препарата в течение недели. Контрольные животные получали такой же корм, но без препарата. На 8 сутки животных убивали, селезенки отпрепарировали. Кусочки селезенок после глубокого замораживания резали в криостате. Гистологические срезы окрашивали по Бранше на РНК (Э. Пирс, 1962). В гистологических срезах селезенок с помощью микроскопа измеряли площадь лимфоидных узелков (фолликулов).

Во второй серии опытов все животные, кроме контрольных, получали циклофосфан внутрибрюшинно по 4 мг на мышь или 200 мг/кг. Мышам экспериментальной группы в корм добавляли препарат "Альгасол". Суточная доза препарата составляла 0,02 мл на мышь или 1 мл/кг. Животные получали препарат ежедневно в течение 6 суток. На 7 сутки их убивали, селезенку отпрепаровывали и фиксировали в жидкости Боуэна (Э. Пирс, 1962). Метод подсчета проводили визуально на продольном разрезе всей селезенки.

С целью выяснения влияния препарата "Альгасол" на организм телят была проведена серия экспериментов. Для этого были сформированы 4 группы животных (по 5 голов в каждой) в возрасте 10 дней. Первая группа служила контролем (животные данной группы препарат не получали), животным опытных групп препарат выпаивали в смеси с молоком в дозах 0,5; 1,0 и 2,0 мл/кг массы тела соответственно в течение 10 дней.

Клиническому обследованию было подвергнуто 332 теленка черно-пестрой породы возрастом от 1-го до 15-и дней и от 2 до 3 месяцев, клинически здоровых и больных различными формами бронхопневмонии и диспепсии.

Диагностику болезней осуществляли с учетом эпизоотической ситуации в хозяйствах, характерных признаков, выявленных при клиническом обследовании поголовья. При диагностике бронхопневмонии у телят дополнительно использовали цинк-сульфатный бронхолегочной тест по И.П. Кондрахину (1997).

Инфекционные болезни исключали по результатам бактериологических исследований, проведенных в Кировской областной ветеринарной бактериологической лаборатории. Здесь же выявляли чувствительность микрофлоры к антибиотикам.

Для изучения микробиоценоза желудочно-кишечного тракта и дыхательных путей у телят были сформированы две группы в возрасте от 1-го до 15-и дней и от 2 до 3 месяцев, включающие клинически здоровых и больных диспепсией и бронхопневмонией. Материалом для бактериологических исследований служили пробы фекалий и носовой слизи, а также пробы патологического материала от павших телят. В исследованиях руководствовались Методическими указаниями по бактериологической диагностике смешанной кишечной инфекции молодняка животных, вызываемой патогенными энтеробактериями (1999). Идентификацию микроорганизмов проводили в соответствии с критериями, изложенными в определителе бактерий Берджи (Дж. Хулт с соавт., 2001).

С целью определения состояния нитроксидергических процессов и иммуно-биохимического статуса у подопытных телят брали кровь из яремной вены в утренние часы до кормления в динамике: исходный фон и на 5, 10 и 15 и 20 сутки после применения средств корригирующей терапии у телят, больных бронхопневмонией и на 3, 5, 7 и 10 сутки – у телят, больных диспепсией. Одновременно вели сбор утренней мочи.

Уровень концентрации эндогенного оксида азота в организме оценивали по количеству конечных стабильных метаболитов указанной нитроксидмолекулы, каковыми являются нитриты и нитраты (Н.Л. Емченко с соавт., 1994). Суммарную концентрацию стабильных метаболитов рассчитывали сложением концентрации содержания нитратов и нитритов (H. Grasemann et al., 1997).

Определение осмотической резистентности эритроцитов проводили в соответствии с методикой В.В. Меньшикова (1987). Устойчивость эритроцитов к кислотному гемолизу оценивали по методике В.Д. Прокопьева с соавт. (1998). Определение сорбционной способности эритроцитов осуществляли по методике А.А. Тогайбаева с соавт., (1988) в модификации В.М. Аксеновой с соавт., (1994).

О состоянии ПОЛ в плазме и эритроцитах судили по содержанию вторичных продуктов (МДА), реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (Н.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвили, 1977). Для оценки общей антиоксидантной активности (АОА) плазмы и эритроцитов использовали эффект торможения или скорость ПОЛ модельной системы, которая инициировалась ионами двухвалентного железа (Г.И. Клебанов с соавт., 1988). Исследование активности каталазы проводили по методике, описанной М.А. Королюк с соавт. (1988). Содержание среднемолекулярных пептидов (СМП) в плазме (сыворотке) крови определяли по методу Н.И. Габриэлян с соавт. (1985).

В качестве тестов оценки морфо-биохимического статуса у животных использовали: определение содержания в крови гемоглобина – гемоглобинцианидным методом, подсчет количества эритроцитов и лейкоцитов в камере Горяева, выведение лейкограммы по Филипченко в окрашенных по Романовскому-Гимза мазках крови.

Изучение способности нейтрофилов крови к захвату частиц проводили на модели поглощения частиц полистерольного латекса диаметром 1,7 мкм по методу И.С. Фрейдлин с соавт. (1976) в модификации Л.Я. Эберта с соавт. (1983).

Лизосомальную активность нейтрофилов определяли по суммарному свечению числа лизосом в цитоплазме клеток, окрашенных акридиновым оранжевым, при люминесцентной микроскопии. Подсчет лизосом вели полуколичественно в "крестах" (И.С. Фрейдлин, 1984).

Исследование внутриклеточного кислородозависимого метаболизма фагоцитов проводили, используя НСТ-тест. Метод основан на учете интенсивности восстановления клетками нитросинего тетразолия (НСТ) в его нерастворимую форму – диформазан (А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский, 1989). Параллельно с помощью НСТ-теста определяли способность нейтрофилов крови отвечать повышением метаболической активности на стимуляцию частицами латекса – индуцированный НСТ-тест (А.Н. Маянский, О.И. Пикуза, 1993).

Определение Т- и В-лимфоцитов в крови осуществляли в реакции спонтанного розеткообразования по методу M. Jondal et al. (1972) в модификации Р.В. Петрова с соавт. (1984) и А.В. Зурочка (1984). Учет реакции осуществляли с помощью иммерсионной микроскопии и определяли количество образуемых розеток из 100 сосчитанных лимфоцитов в каждом мазке.

Концентрацию иммуноглобулинов класса М и G в сыворотке крови определяли по общепринятой методике (Mancini et al., 1965) в модификации А.А. Тихомирова (1992). Эти исследования проведены в медицинском центре "Familia" г. Челябинска при консультативной помощи доктора медицинских наук, профессора Зурочка А.В. Определение циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови проводили по методике, предложенной В. Гашковой с соавт. (1978).

Об изменениях в белковом обмене судили по содержанию в сыворотке крови общего белка, определяемого рефрактометрически, белковых фракций – нефелометрическим экспресс-методом (Б.И. Антонов с соавт., 1991), тиоловых (SH) групп белков – по Фаломееву (1981), активности ферментов переаминирования: аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы по методу Райтмана и Френкеля с использованием набора "Био-ла-тест", ЛДГ (В.С. Камышников, 2001; И.П. Кондрахин с соавт., 2004), мочевины по цветной реакции с диацетилмонооксимом, креатинина – по цветной реакции Яффе, цинк-сульфатный бронхолегочной тест по И.П. Кондрахину (2004).

О состоянии углеводного обмена судили по количеству глюкозы, определяемой глюкозооксидантным методом с набором "Глюкоза-ФДК" (В.В. Меньшиков с соавт., 1994); липидного – по содержанию общего холестерина по реакции Любермана-Бурхарда в модификации Илька, ?-липопротеидов – по Бурштейну в модификации Виноградовой.

Изучение различных схем терапии больных телят бронхопневмонией и диспепсией проводили в четырех сериях опытов в условиях учхоза ВГСХА, ЗАО племзавод "Красногорский" и колхоза "Карсы" Челябинской области. В каждом хозяйстве были подобраны телята с признаками острой и хронической бронхопневмонии и простой и токсической диспепсией. Контрольные группы включали клинически здоровых животных. С целью оценки различных схем лечения нами были сформированы десять групп опытных телят (по 6 животных): первая – контрольная (здоровые телята в возрасте 1-3 месяца); вторая – базисная схема лечения при острой форме бронхопневмонии; третья – базисная схема лечения при хронической форме бронхопневмонии; четвертая и пятая – рекомендуемые схемы лечения при острой и хронической формах бронхопневмонии соответственно; шестая – контрольная (здоровые телята в возрасте 3-7 дней); седьмая и восьмая – базисная схема лечения при простой и токсической формах диспепсии; девятая и десятая – рекомендуемая схема лечения при простой и токсической формах диспепсии соответственно.

Базисная терапия телят, больных бронхопневмонией в учхозе ВГСХА включала следующие препараты: внутримышечное введение 4% раствора гентамицина (согласно наставлению по его применению), внутривенное введение 10% раствора кальция хлорида и 10% раствора глюкозы, а при диспепсии внутрь таблетки тримеразина, внутримышечное введение 4% раствора гентамицина (согласно наставлению по их применению), внутрибрюшинное введение раствора Рингера-Локка, выпойка внутрь отвара коры дуба. Базисная терапия бронхопневмонии телят в ЗАО Племзавод "Красногорский" включала: раствор энромага 5% внутримышечно – 3 мл 1 раз в день, раствор кальция хлорида 10% – 20 мл и раствор глюкозы 40% – 20 мл внутривенно через день, раствор кофеина бензоата натрия 10% подкожно 2 мл через день. В колхозе "Карсы" Челябинской области при простой диспепсии – травяной чай, таблетки тримеразина, а токсической – внутрибрюшинно жидкость Рингер-Локка.

Комплексная терапия, разработанная нами дополнительно к базовому лечению включала препарат "Альгасол", созданный на основе экстрактов из морских бурых водорослей и корня солодки.  Его назначали внутрь из расчета 1 мл/кг массы два раза в день (утром и вечером). Дополнительно животным при обоих заболеваниях вводили нитамин; при бронхопневмонии – норсульфазол растворимый, согласно наставления по их применению. Курс лечения при острой форме бронхопневмонии длился от 5 до 7, при хронической – от 10 до 14 дней; при простой форме диспепсии – 3-5 дней, при токсической – 5-7 дней.

На заключительном этапе была проведена клиническая оценка предлагаемых схем терапии на больных телятах в ряде хозяйств Кировской и Челябинской областей, а также испытаны профилактические свойства препарата "Альгасол" в комплексе мероприятий при этих заболеваниях.

Обработку полученных данных проводили в рамках программы Statistica for Windows Ver. 6.0. Результаты исследования анализировали путем вычисления средней арифметической (М), ошибки средней арифметической (м), достоверности различий (Р) (В. Боровиков, 2001, В.И. Сергиенко, И.Б. Бондарева, 2000).

  СКАЧАТЬ ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТА  
Страницы: | 1 | 2 | 3 |
 





© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.