WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


Микробиологическое, иммунологическое и биохимическое обоснование комплексной терапии при криптоспоридиозе поросят

Автореферат докторской диссертации по ветеринарии

  СКАЧАТЬ ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТА  
Страницы: | 1 | 2 | 3 |
 

Особенности эпизоотологии криптоспоридиоза поросят

Данные литературных источников свидетельствуют о том, что криптоспоридиоз домашних и диких животных и птиц зарегистрирован повсюду. При изучении распространения этого заболевания среди свиней исследования проводили как в хозяйствах промышленного производства свинины, так и в личных подсобных хозяйствах граждан в Саратовской области и республике Башкортостан. Всего было обследовано 9428 животных разного возраста и выделено 40,4% инвазированных криптоспоридиями. По возрастным группам ситуация выглядит следующим образом: поросята от рождения до 3 дн – от 4,2% до 62,7%, 4…10 дн – от 15,8% до 90,6%, 11…17 дн – от 17,5% до 89,7%, 18…24 дн – от 5,6% до 68,8%, 25…31 дн – от 7,0% до 68,9%, 32…38 дн – от 5,7% до 81,1%, 55…65 дн – от 2,0% до 20,0%, 170…190 дн – от 0,9% до 20,0%.

Высокая пораженность молодняка понятна, поскольку развитие инвазии происходит стремительно, с ярко выраженными признаками, особенно у поросят до отъемного периода. Такая картина наблюдалась в хозяйствах различных способах содержания животных. Экстенсивность криптоспоридиоза поросят в личных подсобных хозяйствах (ЛПХ) была ниже и максимальная зараженность приходилась на двухнедельный возраст, с последующим снижением. Иначе обстоит дело у поросят выращиваемых в условиях свиноводческих товарных ферм (СТФ). Экстенсивность инвазии в таких условиях содержания была высокой – более месяца.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что криптоспоридиоз у свиней регистрируется в течении всего года. Однако, наибольшее количество пораженных поросят выявили в осенний (ЛПХ – до 73,2%; СТФ – до 81,3%) и весенний (ЛПХ – до 59,4%; СТФ – до 74,0%) периоды. Сезонная динамика определяется наличием большего числа восприимчивых животных, и связана с плановой технологией опоросов именно в апреле и октябре.

Все перечисленные данные подтверждают, что эпизоотический процесс при криптоспоридиозе поросят практически беспрерывен, так как возбудитель устойчив во внешней среде и животные заражаются постоянно, что, в свою очередь, ведет к снижению уровня естественной резистентности их организма.

Анализ имеющихся данных позволил нам определиться с выбором возрастной категории подопытных животных для решения вопросов оценки состояния микробоценоза кишечника, функционального состояния иммунной системы и метаболического статуса при криптоспоридиозе, а также для изучения эффективности разных методических подходов к лечению данной инвазии.

Влияние криптоспоридиозной инвазии, антикокцидантной,

антибиотико-пробиотикотерапии на фоне иммуностимуляции на

состояние естественного микробиоценоза кишечника поросят

Результаты исследования изменений в микробиоценозе кишечника поросят при проведении разных лечебных мероприятий представлены на рисунке 1а. Показано, что фоновый уровень бифидофлоры в кишечнике поросят всех опытных групп был снижен до 4,9-5,4 lg КОЕ/г, уступая контролю в 1,77-1,85 раза (на 3,8-4,6 lgКОЕ/г). У животных 2 группы, не подвергнутых лечению, этот показатель продолжал снижаться на 10, 20,30, 45 и 60 день наблюдения в 2,08; 2,13; 2,4; 2,81 и 3,14 раза. В кишечнике поросят 3–7 опытных групп отмечено повышение содержания бифидобактерий, однако превышение контрольного значения в 2,44 было только в кишечнике поросят 7 группы. Подобным образом изменялась в кишечнике животных и динамика лактобацилл (рис. 1б).

Рис. 1. Бифидобактерии (а), лактобактерии (б), стафилококки (в), клостридии (г),

псевдомоны (д), протеи (е), в lgКОЕ/г

Одновременно со снижением содержания нормофлоры в кишечнике больных поросят происходило повышение уровня условно-патогенных микроорганизмов, особенно выраженное у животных 2 группы, не подвергнутых лечению. Проведенные лечебные мероприятия способствовали снижению размножения условно-патогенной флоры. Данный процесс имел различную степень проявления и выраженности по группам. Наиболее эффективно восстанавливался микробный баланс в сторону физиологических норм в кишечнике поросят 6 и 7 групп (рис.1 в, г, д, е).

У больных криптоспоридиозом животных 2-7 групп уровень стафилококков был повышен до 10,4-11,6 lgКОЕ/г. Этот показатель в кишечнике поросят 2 группы интенсивно повышался и превышал контрольное значение на 10, 20, 30, 45 и 60 день в 1,86; 2,69; 2,74; 3,26 и 3,32 раза. У животных 3–7 опытных групп отмечено снижение содержания стафилококков, по сравнению с исходным значением и достигало физиологической нормы в кишечнике поросят 7 группы к 45 дню.

У больных криптоспоридиозом поросят 2-7 групп были выявлены в кишечнике микроскопические грибы, относящиеся к родам Candida, Aspergillus, Penicillium (рис. 2), которые не содержались в кишечнике здоровых животных (за исключением представителей рода Candida в единичных экземплярах). Фоновый уровень грибов рода Candida в кишечнике поросят опытных групп колебался от 3,9 до 4,2 lgКОЕ/г; грибов рода Aspergillus – от 2,4 до 2,6 lgКОЕ/г; рода Penicillium – от 2,0 до 2,2 lgКОЕ/г. В кишечнике животных 2-й группы эти показатели увеличивались в динамике наблюдения и превысили фоновый уровень на 60-й день в 1,56 раза (на 2,3 lgКОЕ/г), в 1,92 раза (на 2,3 lgКОЕ/г), в 2,09 раза (на 2,3 lgКОЕ/г) соответственно.

Рис. 2. Динамика содержания микрогрибов из родов Candida (а), Aspergillus (б), Penicillium (в) в кишечнике животных по вариантам опыта, в lgКОЕ/г

Содержание микроскопических грибов в кишечнике поросят опытных групп динамично снижалось. Однако, до конца экспериментов они выделялись из кишечника животных 3, 4 и 5 групп, у поросят 6 группы не регистрировались к 60 дню, а у 7 группы – к 45 дню.

Таким образом, обработка поросят только антикокцидантами и химкокцидом на фоне антибиотикотерапии не оказывала существенного позитивного действия на восстановление нарушенного микробиоценоза кишечника. Применение антикокцидантной и антибиотикотерапии на фоне иммуностимуляции Т- и В-активином или прополисом значительно улучшает состояние микробиоценоза кишечника, но не является достаточными для полного восстановления. Обработка животных химкокцидом на фоне антибиотикотерапии и иммуностимуляции с применением пробиотика способствует наиболее полному восстанавлению естественного микробиоценоза кишечника поросят, до физиологической нормы.

Оценка иммунного статуса и характеристика функциональной

активности иммунной системы поросят при криптоспоридиозной

 инвазии и разных методах терапии

Состояние естественной резистентности организма поросят при криптоспоридиозе и разных методах терапии

Для оценки состояния естественной резистентности определяли у здоровых, больных криптоспоридиозом и леченных по разных схемам поросят показатели лизоцимной, комплементарной, бактерицидной активности сыворотки крови и фагоцитарной активности лейкоцитов крови активности сыворотки крови.

Установлено, что лизоцимная активность сыворотки крови поросят, больных криптоспоридиозным заболеванием (опытные группы 2-7), до начала лечения была ниже контрольных значений (показатели у здоровых животных) на 17,9 – 18,7%. В процессе опытов лизоцимная активность сыворотки крови больных животных (2 группа) продолжала снижаться: на 10, 20, 3, 45 и 60 сутки экспериментов ее значения были меньше контрольных в 1,3, 1,6, 1,93, 2,29 и 2,71 раза соответственно (рис. 3а).

В сыворотке крови животных опытных групп (3–7) отмечено повышение уровня лизоцимной активности в процессе лечения по разным схемам и значительное превышение показателей у животных 2-ой группы во все сроки наблюдения. Эта положительная динамика имела различную степень выраженности  в группах в зависимости от выбранного метода лечения и способа иммуностимуляции. Показатели лизоцимой активности сыворотки крови животных во всех опытных группах были максимальными к 30 дню эксперимента и превышали значения у больных поросят, соответственно, в 2,37; 2,59; 3,83 и 4,69 раза (т.е. на 17,5; 20,3; 36,0 и 46,9%). Такое соотношение в показателях сохранялось до конца срока (60-е сутки) наблюдения (рис. 3а).

Подобным образом изменялась динамика комплементарной (рисунок 3б) и бактерицидной (рисунок 3в) активности сыворотки крови, а также фагоцитарная активность лейкоцитов крови (рис. 3г).

Рис. 3. Динамика изменения лизоцимной (а), коплементарной (б), бактерицидной (в)

активности сыворотки крови, фагоцитарной (г) активности лейкоцитов у животных

разных групп (обозначения рис.1)

Параллельно с этими показателями представляло интерес оценить уровень эозинофилов в крови поросят опытных групп как традиционного показателя при паразитозах. Выявлено, что фоновый уровень эозинофилов в крови поросят опытных групп (2–7), зараженных криптоспоридиями, свидетельствовал о выраженной эозонофилии: содержание эозинофилов было повышено по сравнению с показателями здоровых поросят на 11,9 – 14,0% и составляло 800,2 – 1044,0 ед/мкл (рис. 4а). У больных и не леченных животных 2 группы содержание эозинофилов в организме интенсивно повышалось: на 10, 20, 30, 45 и 60 сутки наблюдений их уровень был выше контрольного в 2,81 раза и в 3,05 раза; в 3,18 раза и в 3,6 раза; в 3,67 раза и в 3,76 раза; в 3,62 раза и в 3,92 раза; в 3,57 раза и в 3,95 раза.

Лечение больных поросят химкокцидом в комплексе с полимиксином (3 группа) не восстанавливало содержание эозинофилов, хотя способствовало некоторому снижению. Уровень эозинофилов в крови поросят 4 и 5 групп значительно снижался по сравнению с исходным, но превышал в динамике лечения контрольные значения на 10 день опыта в 1,62 и 1,79 раза и в 1,21 и 1,22 раза, на 20 день – в 1,35 и 1,39 раза и в 1,08 и 1,09 раза, на 30 день – в 1,2 и 1,26 раза и в 1,005 и 1,01 раза, на 45 день – в 1,06 и 1,08 раза и в 1,01 и 1,03 раза, на 60 день – в 1,09 и 1,16 раза и в 1,02 и 1,04 раза. У животных 6 и 7 групп содержание эозинофилов в крови восстановилось до уровня физиологических норм к 30 и 21 дню соответственно, и до конца опытов не изменялось.

Оценка Т- и В- систем иммунитета и методы коррекции их

функционального состояния при криптоспоридиозе поросят

Параллельно с оценкой показателей естественной резистентности поросят исследовали состояние Т- и В- систем иммунитета у них и результативность методов коррекции их функционального состояния при криптоспоридиозе. Установлено, что фоновый уровень CD2Т-клеток в крови зараженных криптоспоридиозом поросят был снижен до 33 – 34,5% (рис. 4). У больных и не леченных животных 2 группы процесс снижения их содержания прогрессировал до конца срока наблюдения, на 60-е сутки  уровень этих клеток был ниже, чем в контроле, в 2 раза. Содержание CD2Т-лимфоцитов в крови поросят 3-ей группы превышало эти показатели в 1,5 раза, но не достигало контрольного уровня. В крови животных 4 и 5-ой опытных групп в начале опыта уступали контрольной цифре, а в последующие сроки эксперимента приблизились в сторону контрольной цифры. Содержание этих лимфоцитов в крови поросят 6-ой и особенно 7-ой групп восстанавливалось к 20-му дню наблюдения и превышало  данные содержания в крови контрольных поросят в последующие сроки, на 60 день – в 1,09 и 1,15 раза (см. рис. 4).

Подобным образом изменялась в крови поросят и динамика Т-хелперов (CD4 клеток) и CR1В-лимфоцитов. Отмечено, что параллельно с восстановлением и увеличением числа этих иммунокомпетентных клеток в крови поросят, леченных по разным схемам, особенно 6 и 7 опытных групп, снижалось количество Т-супрессоров (CD8 клеток).

Рис. 4. Динамика изменения содержания в % эозинофилов (а), CD2Т-клеток (б), CD4Т- клеток (в), CD8Т-клеток (г), CR1В-лимфоцитов (д) в крови больных криптоспоридиозом поросят при разных схемах лечения

Аналогичными были изменения в динамике популяций лимфоцитов и в органах иммунной системы поросят. В брыжеечных лимфатических узлах и селезенке животных опытных групп к началу лечения содержание CD2Т-клеток было ниже, чем у контрольных животных на 20 – 22%.

У поросят 2-ой группы процесс снижения числа этих клеток в селезенке прогрессировал по срокам опыта, и к 60-му дню исследований значения уступали контрольным в 3,5 раза. В селезенке поросят 3 группы в процессе лечения происходило некоторое повышение числа этих лимфоцитов, однако их содержание превышало только фоновый уровень и показатели животных 2-й группы (рис. 5-а).

Рис. 5. Динамика изменения содержания в % CD2Т-клеток (а), CD4Т- клеток (б),

CD8Т-клеток (в), CR1В-лимфоцитов (г) в селезенке больных криптоспоридиозом поросят при разных схемах лечения (обозначения как на  рис. 4)

Более активное повышение числа CD2 Т-клеток регистрировалось в селезенке животных 5 и 6-ой групп, к концу срока лечения значения соответствовали данным контрольной группы. Максимальное количество CD2Т-клеток отмечено в селезенке поросят 7 группы, превышение контрольных значений к концу срока наблюдения было в 1,24 раза, а аналогичных показателей у животных других групп – в 4,45; 1,7; 1,53; 1,46 и 1,2 раза. Это отражает активность процессов пролиферации и дифференцировки Т-лимфоцитов в тимусзависимых зонах лимфоидных органов поросят при комплексном лечении криптоспоридиоза.

Фоновый уровень CR1В-лимфоцитов в селезенке зараженных криптоспоридиозом поросят был также снижен до 24,8 – 26,1%. Динамика изменения их содержания в селезенках поросят 2 группы была аналогичной данным по Т-лимфоцитам; количество CR1В-клеток к 60 дню уступало контрольным значениям в 3,49 раза. У поросят других опытных групп в процессе лечения происходило постепенное повышение числа этих клеток, причем этот процесс имел разную степень выраженности и проявления. Более выраженное увеличение количества предшественников антителообразующих клеток отмечено в селезенках поросят 6 и, особенно, 7-ой опытных групп, максимальное значение этих клеток регистрировалось к 20 дню эксперимента, когда превышало контрольные значения на 44,9%, и сохранялось до конца наблюдения.

В тимусе поросят, больных криптоспоридиозом, к началу опытов содержание CD2 Т-клеток было снижено до 395– 415 млн. клеток/орган. У поросят 2 группы это снижение происходило до конца срока наблюдения и к 60-му дню их содержание было ниже фонового и контрольного уровня в  2,01 и 2,94 раза. В тимусе поросят всех опытных групп, подвергнутых разным методам лечения и иммуностимуляции, отмечено повышение  уровня этих лимфоцитов. Более значительное увеличение числа иммунокомпетентных клеток происходило в тимусе животных 5 и 6-ой групп, а самое высокое содержание выявлено  в тимусе поросят 7-ой группы. У этих поросят к 20-му дню от начала лечения число CD2Т-клеток превысило фоновый показатель 1,12 раза, а значения в тимусе поросят других опытных групп в 1,86; 1,25; 1,17; 1,13 и 1,03 раз соответственно. К концу лечения эти значения были выше контроля в 1,6 раза.

Содержание сывороточных иммуноглобулинов при

криптоспоридиозе и разных методах терапии

В ходе диссертационного исследования было установлено также, что криптоспоридиоз поросят сопровождался значительным угнетением выработки иммуноглобулинов. В сыворотке крови больных криптоспоридиозом животных, к началу лечения регистрировалось снижение уровня иммуноглобулинов G до 16,9 – 17,3 мг/мл, IgА до 1,15 – 1,20 мг/мл, IgМ до 2,5 – 2,7 мг/мл. Этот процесс у поросят 2 группы без лечения прогрессировал и к 60-му дню наблюдения содержание  этих иммуноглобулинов уступало контрольным значениям в 3,5; 7,4 и 3,5 раза соответственно. В сыворотке крови животных других опытных групп, после проведения курсов терапии, регистрировалось повышение уровня исследованных антител в различной степени. Незначительное – в сыворотке крови поросят 3 группы, несколько выше – у поросят 4 и 5 групп. Более выраженное увеличение иммуноглобулинов происходило в организме животных 6-ой группы, а максимального значения достигло в сыворотке крови поросят 7 группы с предложенным нами комплексным лечением. На 10 день лечения уровень IgG был выше, по сравнению с данными для животных 1 и 2 групп, в 1,02 и 1,69 раза, на 60 день – в 1,1 и 3,95 раза. Содержание IgA достигло контрольного уровня и соответствовало ему на 20, 45, и 60 дни, превысив показатели больных поросят уже на 10 день в 2,0 раза, а на 60 день – в 7,4 раза. Уровень IgМ был также максимальным и превышал значения у поросят 1 и 2 групп уже на 10 день эксперимента в 1,4 и 2 раза.

Таким образом, лечение больных криптоспоридиозом поросят антикокцидантом в комплексе с антибиотикотерапией не восстанавливало нарушенный иммунный статус организма. Стимуляция Т- и В-активином или прополисом на фоне лечения химкокцидом и полимиксином значительно активизировала иммунные реакции в организме поросят, но не оказывала достаточного пролонгированного действия. Антикокцидантная и антибиотикотерапия, проводимая на фоне иммуностимуляции Т- и В- активинами, и особенно прополисом, а также пробиотикотерапия полностью восстанавливали иммунный статус организма леченых поросят.

Иммуноморфологические и гистохимические реакции в

структурах лимфоидных органов, миелограммы при

криптоспоридиозной инвазии и разных методах терапии

В брыжеечных лимфатических узлах экспериментальных животных проводили морфометрические измерения площадей лимфатических фолликул и мякотных тяжей для оценки состояния  В-зависимой зоны и морфометрическую оценку паракортикальной зоны как Т-зависимой. Для характеристики иммунной реактивности лимфатического узла измеряли площадь его коркового плато. Все измерения проводили в динамике: до начала лечения и через 10, 20, 45 и 60 дней лечения по разным схемам.

Установлено, что у зараженных криптоспоридиозом поросят по сравнению со здоровыми было значительно расширено корковое плато лимфоузлов, на 28,7-29,6%, и уменьшена площадь, занимаемая лимфатическими фолликулами: без светлых центров – до 4,5-5,3%, со светлыми центрами – до 0,84-0,96%, мякотными тяжами –  до 10,3-11,6%, уменьшение паракортикальной зоной  отмечено на 8,0-8,6%. Процесс деструктивных изменений в лимфоузлах прогрессировал в динамике наблюдения у поросят 2 группы, и к 45-60 дням исследований лимфатические фолликулы со светлыми центрами не регистрировались, а  площадь паракортикальной зоны была меньше, чем в контроле, в 2,5 раза. Одновременно с уменьшением площади В- и Т-зависимых зон отмечено расширение площади коркового плато органа на 26,8%. В тоже время у поросят 6 и 7 групп на фоне комплексного лечения криптоспоридиоза площадь лимфатических фолликулов без светлых центров была максимальной к 20 дню эксперимента, превысив показатели всех опытных групп и контрольные в 1,31 и 1,42 раза соответственно. Паракортикальная  Т-зона лимфоузлов поросят этих опытных групп значительно превышала по площади контрольные показатели, а корковое плато динамично уменьшалось по сравнению с фоновым уровнем. Гистохимические исследования выявили умеренную реакцию на щелочную фосфатазу вокруг лимфатических фолликул и в мякотных тяжах брыжеечных лимфоузлах здоровых поросят. Реакция на неспецифическую эстеразу была положительной в паракортикальной зоне и, частично, в синусах и мякотных тяжах. В зоне лимфатических фолликул встречались единичные клетки с положительной реакцией. У зараженных криптоспоридиями поросят реакция на щелочную фосфатазу была слабо выраженной и по мере прогрессирования заболевания уровень реакции снижался. Слабовыраженной была и реакция на неспецифическую эстеразу в паракортикальной зоне лимфоузлов. Дегельминтизация химкокцидом на фоне антибиотикотерапии полимиксином способствовала повышению до 30 дня числа клеток с положительной реакцией на щелочную фосфатазу вокруг лимфатических фолликул. К концу наблюдения реакция клеток становилась слабовыраженной. Аналогичные данные получены и для реакции на неспецифическую эстеразу, которая так и не достигала контрольного уровня. Дегельминтизация химкокцидом на фоне антибиотикотерапии полимиксином, пробиотикотерапии и иммуностимуляции Т- и В-активином или прополисом способствовала более ранней активизации реакции на щелочную фосфатазу и расширению мест ее локализации в корковом плато. Реакция на неспецифическую эстеразу была более высокой и продолжительной у поросят 7 группы к 30 дню опытов. В последующие сроки происходило постепенное угасание реакции и ослабление активности клеток.

Гистохимический анализ селезенок поросят контрольной и всех опытных групп выявил сходную динамику изменений в активности реакций на щелочную фосфатазу и неспецифическую эстеразу (рис. 6).

Рис. 6. Динамика соотношения структурных компонентов в селезенке поросят: а – красная пульпа, б – белая пульпа, в – переваскулярные лимфоидные муфты (т- зона), г – лимфатические узелки без светлых центров, д –лимфатические узелки со светлыми центрами, %

У поросят 6 и, особенно, 7 групп, отмечена интенсивная реакция на щелочную фосфатазу не только в лимфатических фолликулах селезенки, но и в красной пульпе.

Морфометрическое определение площади коркового и мозгового вещества тимуса поросят опытных групп позволило установить, что криптоспоридиозное заболевание вызывает выраженные деструктивные изменения в этом центральном органе иммунной системы, проявляющиеся в уменьшении площади коркового слоя, непосредственно ответственного за дифференцировку и количество Т- лимфоцитов, и расширения площади мозгового вещества. Фоновые показатели площади коркового вещества были снижены до 59-62%, при расширении площади мозгового вещества до 37 – 40%.

В тимусе не леченных животных 2 группы площадь коркового вещества органа прогрессирующе уменьшалась. На фоне лечения этот показатель динамично восстанавливался к 45-му дню в 1,8 раз и 60-му дню – в 2,2 раза. Более выраженное расширение площади коркового вещества тимуса регистрировалось у поросят 6 и 7 групп.

Данные, представленные на рисунок 7 свидетельствуют, что криптоспо-ридиозная инвазия поросят приводит к глубоким нарушениям в центральном органе иммунитета – костном мозге в виде ослабления продукции клеток зернистого ростка, эритроидного ростка, лимфоидных клеток, а также моноцитов и мегакариоцитов, но усиления образования эозинофилов.

Рис. 7. Миелограмма  костного мозга животных опытных и контрольной групп: а - клетки зернистого ростка лейкоцитов (без эозинофилов), б – эозинофиллы, в - клетки эритроид-ного ростка, г - лимфоидные клетки, д - моноциты, мегакариоциты, плазматические

клетки, в %

Антикокцидантная терапия химкокцидом на фоне антибиотико- и пробиотикотерапии, а также иммуностимуляции Т- и В-активином и, особенно, прополисом, восстанавливала дисбаланс в миелограмме к 20 суткам.

  СКАЧАТЬ ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТА  
Страницы: | 1 | 2 | 3 |
 





© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.