WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


Микробиологическое, иммунологическое и биохимическое обоснование комплексной терапии при криптоспоридиозе поросят

Автореферат докторской диссертации по ветеринарии

  СКАЧАТЬ ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТА  
Страницы: | 1 | 2 | 3 |
 

Калюжный

Сергей Иванович

Микробиологическое, иммунологическое и

биохимическое обоснование комплексной терапии при криптоспоридиозе поросят

03.02.11 – паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора ветеринарных наук

Саратов – 2011


Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова»

Научный консультант:               доктор ветеринарных наук, профессор,

Ларионов Сергей Васильевич

Официальные оппоненты:          доктор биологических наук, доцент

Ильина Наталья Анатольевна

                                                           доктор ветеринарных наук, профессор

Архипов Иван Алексеевич

                                                  доктор ветеринарных наук, профессор

Енгашев Сергей Владимирович

Ведущая организация:                ФГОУ ВПО «Московская государственная

академия ветеринарной медицины и

биотехнологии им. К.И. Скрябина».

Защита состоится «     »                    2011 г. в        часов на заседании диссертационного совета Д.220.061.04 при ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова» (410005, г. Саратов, ул. Соколовая 335).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «СГАУ им. Н.И. Вавилова» (410005, г. Саратов, ул.Соколовая 335).

Отзыв на автореферат направлять по адресу: 410012, г. Саратов, Театральная пл., 1, ученому секретарю совета.

Автореферат разослан  «____»  __________________     2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук, профессор                                      Л.В. Карпунина


ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

В последние годы значительно возрос удельный вес криптоспоридиоза (Бейер, 1993; 1998; Бочкарев 1996; Никитин, 2003; 2007; Тайчинов, 1996; 2000; Мальцев, Сковородин, 2003; Миронов, 2007; Дмитриева и др., 2008). Это вызвано трудностями профилактики и лечения данной патологии, связанными с непродолжительностью приобретаемого иммунитета, большой репродуктивной способностью паразита, его устойчивостью к терапевтическим средствам, недостаточным ассортиментом препаратов и способностью простейших постепенно адаптироваться к ним. На сегодня достаточно хорошо изучен цикл развития и биология криптоспоридий, предложено и исследовано ряд антикокцидантных препаратов применяемых в борьбе с криптоспоридиозом животных (Тайчинов, 1996; 2000; Никитин, 2003; 2007; Миронов, 2007; Дмитриева и др., 2008).

На настоящий момент известно, что нарушения колонизационной резистентности кишечника, развитие дисбактериозов, сопровождающихся угнетением физиологического, иммунологического, биохимического статуса организма животных, связаны с тем, что спорозоиты, вышедшие из спороцист после перорального попадания в желудок, мигрируют преимущественно в задние участки тонкого отдела кишечника. Однако, изменения микробиоценоза кишечника, иммунного, гормонального и биохимического статуса при криптоспоридиозе поросят остаются малоизученными. Выяснение особенностей формирования дисбиозных микробных ассоциаций в кишечнике на фоне паразитарных инвазий и их влияния на резистентность организма животных является одной из актуальных задач современной прикладной паразитологии. Отсутствуют также данные о формировании состояния вторичного иммунодефицита при криптоспоридиозе и необходимости использования иммуномодулирующих препаратов. В связи с этим особенно востребованной является разработка обоснованной системы профилактики и лечения данной патологии, обеспечивающей восстановление естественного микробиоценоза кишечника, иммунного статуса и резистентности организма, а также повышение продуктивности свиней.

В настоящее время в ветеринарной практике при специфической терапии различных инфекционных и инвазионных заболеваниях рекомендуется применять иммуностимуляторы, пробиотики, а также лекарственные растения и продукты пчеловодства, для восстановления естественной резистентности организма животных.

Цель работы – исследование эпизоотологических особенностей криптоспоридиоза поросят, состояния иммунного, биохимического статуса и микробиоценоза кишечника при инвазии криптоспоридий и разработка обоснованной системы лечебных мероприятий при данной патологии.

Задачи исследований:

1. Уточнить особенности эпизоотологии криптоспоридиоза поросят и обосновать выбор возрастных групп для экспериментальных исследований и производственных испытаний.

2. Провести сравнение состояния иммунного статуса поросят при криптоспоридиозе и на фоне разработанных схем комплексной терапии.

3. Оценить иммуноморфологические изменения, характер гистохимических реакций в структурах лимфоидных органов и показатели миелограммы при криптоспоридиозе и на фоне разработанных схем комплексной терапии.

4. Провести сравнительные исследования изменений биохимических показателей в организме поросят при криптоспоридиозе и на фоне разработанных схем комплексной терапии.

5. Изучить состав микробиоценоза кишечника поросят при криптоспоридиозе и на фоне разработанных схем комплексной терапии.

6. Определить влияние комплексной терапии криптоспоридиоза на сохранность поголовья и продуктивность животных.

7. Усовершенствовать и обосновать систему мер борьбы с криптоспоридиозом, обеспечивающую реабилитацию физиологических показателей и продуктивность животных.

Научная новизна. Проведен детальный анализ особенностей эпизоотологии криптоспоридиоза поросят, содержащихся в условиях хозяйств разных категорий в Саратовской области и Республике Башкортостан. Установлена высокая степень моноинвазии криптоспоридий (до 40,4%) в ранние сроки жизни поросят независимо от условий выращивания. Показано, что сезонность заболевания более выражена в условиях промышленных комплексов; при этом распространение криптоспоридиоза связано преимущественно с плановыми турами опоросов.

Впервые дана комплексная системная оценка состояния иммунного и общего биохимического статуса, микробиоценоза кишечника, продуктивности и безопасности мяса свиней при криптоспоридиозе. Детально изучены морфофизиологические изменения в органах иммунной системы животных (тимусе, костном мозге, селезенке, лимфатических узлах), определены характер и степень перестроек в Т- и В- зависимых зонах структурных компонентов брыжеечного лимфатического узла и селезенки, Т- зависимой зоне тимуса; изучены иммуноклеточные реакции в миелограмме. Исследованы показатели активности клеточного (по уровню субпопуляций Т- и В- лимфоцитов) и гуморального (содержание сывороточных иммуноглобулинов классов G, М и А) иммунитета; определены факторы естественной резистентности организма: комплементарная, лизоцимная и бактерицидная активности сыворотки крови, фагоцитарная активность нейтрофилов крови и альвеолярных макрофагов; определены биохимические показатели метаболизма по изменению активности основных ферментов белкового, углеводного и липидного обмена при криптоспоридиозе поросят.

Установлены изменения состава микрофлоры кишечника: резкое снижение активности лактобацилл и бифидобактерий, увеличение роста и развития условно-патогенных бактерий, в частности стафилококков, клостридий, псевдомонад, протеев, грибов рода Candida, родов Aspergillus и Penicillium при криптоспоридиозе. Доказано, что данная патология сопровождается формированием дисбактериоза кишечника и развитием вторичного иммунодефицитного состояния у поросят.

Показана возможность коррекции нарушений состава микрофлоры кишечника, биохимических показателей метаболических процессов, восстановления функциональной активности иммунной системы поросят при использовании в комплексной терапии криптоспоридиоза кокцидиостатиков, антибиотиков, пробиотиков и иммуномодуляторов.

Впервые проведен сравнительный анализ влияния криптоспоридиозной инвазии и антикокцидантной, антибиотико-пробиотикотерапии и иммуностимуляции на динамику показателей гемопоэза, содержания в крови эозинофилов, глюкозы, общего билирубина, креатинина, триглицеридов, холестерина в печени поросят. Установлена высокая эффективность биологического действия использованных препаратов для комплексного лечения криптоспоридиоза. Доказана целесообразность комплексной терапии криптоспоридиоза поросят для восстановления колонизационной резистентности кишечника, способствующая повышению активности лактобацилл и бифидобактерий, торможению роста условно-патогенных бактерий и микроскопических грибов рода Candida, резкому снижению содержания грибов родов Aspergillus и Penicillium.

Разработана обоснованная система лечения криптоспоридиоза с использованием в комплексной терапии данного заболевания пробиотиков, иммуномодуляторов, антибиотиков и кокцидиостатиков, обеспечивающая профилактику вторичных иммунодефицитных состояний.

Впервые показано, что комплексное использование пробиотиков, иммуномодуляторов и кокцидиостатиков сопровождается нормализацией показателей комплементарной, лизоцимной и бактерицидной активности сыворотки крови, фагоцитарной активности нейтрофилов крови и макрофагов, параметров Т- и В- систем иммунитета в крови и лимфоидных органах, восстановлением баланса сывороточных иммуноглобулинов G, М, А, и способствует повышению продуктивности животных.

Практическая значимость. Предложенное комплексное лечение больных криптоспоридиозом поросят, включающее пробиотикотерапию и иммуностимуляцию на фоне действия кокцидиостатиков, является наиболее эффективным для элиминации возбудителя, способствует сохранению поголовья, повышению продуктивности и улучшению показателей качества мяса. Полученные результаты позволяют рекомендовать комплексную антикокцидантную, антибиотико-пробиотикотерапию на фоне иммуностимуляции для широкого внедрения в производство при криптоспоридиозе поросят и профилактики вторичных иммунодефицитных состояний.

Разработаны оптимальные схемы пробиотикотерапии, иммуностимуляции и введения кокцидиостатиков при криптоспоридиозной инвазии поросят.

Результаты экспериментальных исследований вошли в отчеты по НИР «Провести поиск новых методических подходов для получения фундаментальных знаний об экологических особенностях формирование паразитоценозов, биоценотических взаимоотношениях и генетической структуре их сочленов, об эпизоотическом процессе, механизме иммунитета, и разработать относительно простые и экономные средства диагностики, специфической профилактики и борьбы с паразитарными болезнями» Российского координационного НТП (задание 02), а также исследований, (государственная регистрация 0288068085), выполняемых по ГНТП Академии наук Республики Башкортостан «Стабилизация и развитие агропромышленного комплекса РБ», использованы при разработке и составлении рекомендаций, предложенных к внедрению в животноводство и ветеринарную практику.

Результаты исследований использованы в свиноводческих товарных фермах Саратовской области и Республики Башкортостан.

По материалам диссертации опубликованы: «Рекомендации по применению пробиотика, прополиса, Т- и В- активина на фоне антикокцидантной и антибиотикотерапии при криптоспоридиозе поросят» (соавт. Р.Т. Маннапова, С.В. Ларионов, Москва, 2010); «Рекомендации по восстановлению иммуноморфологических показателей, микробиоценоза и повышению продуктивности при криптоспоридиозе свиней» (соавт. Р.Т. Маннапова, С.В. Ларионов, Москва, 2010), одобренные Департаментом ветеринарии Минсельхоза России; монография «Влияние разных методов комплексной терапии на морфофункциональные, иммунобиохимические и микробиологические реакции в организме при криптоспоридиозе свиней» Москва, 2010, 320 с. (соавт. Р.Т. Маннапова).

Результаты диссертационного исследования используются в лекциях по курсу «Паразитология и инвазионные болезни животных» на факультете ветеринарной медицины и биотехнологии ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ», на ветеринарном факультете ФГОУ ВПО «Донской ГАУ» (Акт о внедрении от 15.12.2010), ФГОУ ВПО «Воронежский ГАУ» (Акт о внедрении от 08.12.2010), ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургский ГАУ» (Акт о внедрении от 22.12.2010).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Криптоспоридиоз поросят, содержащихся в условиях хозяйств разных категорий в Саратовской области и Республике Башкортостан регистрируется в течение года, чаще в первые недели жизни.

2. Развитие вторичного иммунодефицитного состояния в организме поросят инвазированных криптоспоридиями сопровождается морфофункциональными, иммунологическими, биохимическими, микробиологическими изменениями.

3. Комплексная терапии при криптоспоридиозе поросят восстановливает микробоценоз и колонизационную резистентность кишечника.

4. При криптоспоридиозе и на фоне комплексной терапии изменяются иммунный статус, состояние гемопоэза, показатели естественной резистентности, иммуногистохимические реакций лимфоидных органов.

5. Криптоспоридиоз способствует угнетению метаболической активности в организме поросят и восстанавливается комплексной терапией.

6. Криптоспоридиоз поросят влияет на снижение показателей роста, развития и продуктивности.

7. Комплексная терапия больных криптоспоридиозом способствует улучшению показателей качества и безопасности мяса свиней.

Работа выполнена на кафедре паразитологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова».

Апробация работы. Основные положения диссертации были представлены на: научно-практических конференциях Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова (Саратов, 2000–2009); Башкирского государственного аграрного университета (Уфа, 2000–2009); ежегодной научно-практической конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2002–2008); Международной научной конференции «Интермед 2002» (Москва, 2002); Международной научно-практической конференции «Проблемы и перспективы развития агропромышленного комплекса регионов России» (Уфа, 2002); Всероссийской научно-методической конференции «Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных» (Москва, 2003); Международной научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2003); Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Ульяновск, 2003); Всероссийской научно-практической конференции «Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития» (Москва, 2004); Международной научно-практической конференции «Современные проблемы иммуногенеза, теории и практики борьбы с паразитарными и инфекционными болезнями сельскохозяйственных животных» (Москва–Уфа, 2004); Международной научно-производственной конференции «Актуальные вопросы теоретической и практической паразитологии» (Омск, 2004); Международном симпозиуме «Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных болезней» (Казань, 2005); Международной научной конференции «Современные проблемы интенсификации производства в реализации национального проекта «Развитие АПК» (Москва, 2007); Всероссийской научно-практической конференции «Интеграция аграрной науки и производства: состояние, проблемы и пути решения» (Уфа, 2008); Международной научно-практической конференции «Биологические науки в 21 веке. Проблемы и тенденция развития» (Бирск, 2008); Международной научно-практической конференции «Экология, природные ресурсы. Рациональное природопользование, охрана окружающей среды» (Москва, 2009).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 58 работ, из них 12 статей в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 335 страницах машинописного текста, иллюстрирована 41 таблицей, 24 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы и собственных исследований, включающих материал и методы, результаты исследований, а также заключения, выводов и списка использованных литературных источников, содержащего 523 наименования.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы исследований

Работа выполнялась с 1998 по 2010 гг. на кафедре паразитологии эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ им. Н.И. Вавилова».

В эксперименте было использовано 426 поросят крупной белой породы в возрастном периоде от 3 до 90 дней, подобранных по принципу аналогов, составляющих группы опытных (с высокой и средней интенсивностью инвазии) и контрольных (свободных от криптоспоридий) животных.

Для исследований в производственных условиях выбирали хозяйства с экстенсивностью инвазии от 20 до 45%; наблюдали и исследовали 5420 поросят, спонтанно зараженных криптоспоридиозом, которые составили группы для лечения разными способами, а также отправленных на убой.

В качестве материала для исследований использовали:

– кровь и сыворотку 2680 контрольных, больных и леченых животных;

– органы иммунной системы (тимус, селезенка, лимфатические узлы, костный мозг) 825 контрольных, больных и леченых животных;

– содержимое толстого кишечника (840 проб) и фекалии 9370 контрольных, больных и леченых животных;

– мясо 925 животных после убоя;

– леченые и профилактические препараты: химкокцид, полимиксин, лактобифид, Т- и В-активины и прополис.

При проведении экспериментальных исследований были сформированы группы животных: 1-я группа – контрольная (условно здоровые поросята), 2-7 группы – больные криптоспоридиозом поросята (с высокой и средней интенсивностью инвазии). Животные 2 группы (больные, не леченные) являлись контролем по отношению к здоровым и опытным группам; поросят 3 группы лечили химкокцидом в комплексе с полимиксином; в 4 группе давали химкокцид с полимиксином на фоне иммуностимуляции Т- и В- активином; 5 группу лечили композиционной формой химкокцид + полимиксин на фоне иммуностимуляции прополисом; 6 группу лечили композиционной формой двух препаратов, включающих химкокцид в комплексе с полимиксином на фоне иммуностимуляции Т- и В- активином и пробиотикотерапии лактобифидом; поросят 7 группы лечили химкокцидом + полимиксином, на фоне иммуностимуляции прополисом и пробиотикотерапии лактобифидом.

Химкокцид применяли из расчета 180 мг/кг живого веса с кормом в течение 10 дней, а затем из расчета 15-20 мг/кг в течение 30 дней; полимиксин – внутрь из расчета 10000 ЕД/кг с кормом в сутки в течение 30 дней, Т-активин вводили подкожно в дозе 2 мкг/кг 1 раз в сутки в течение 14 дней, В-активин (миелопид) – подкожно в дозе 50 мкг/кг, через день, 7 инъекций. Прополис использовали в виде прополисного молочка: 2 раза в день, в течение 30 дней, в дозе 50 мл, с питьевой водой. Лактобифид применяли по 0,5 дозы (в 1г порошка – 10 доз), два раза в сутки в течение 14 дней для одного животного (согласно наставлению по применению препарата).

До начала опытов, а затем через 10, 20, 30, 45 и 60 и 90 дней от начала эксперимента проводили взятие фекалий для проведения паразитологических и бактериологических исследований; крови – для биохимических и иммунологических исследований, а также выборочно из каждой группы животных лимфоидные органы (лимфатические узлы, селезенку, тимус, костный мозг) для иммуноморфологических и гистохимических исследований. В последующем за животными велись наблюдения для оценки проведенных лечебно-профилактических манипуляций на производственные показатели: в 100, 130, 160, 190-дневном возрастах изучали промеры экстерьера молодняка периода «после доращивания» и выявления индексов телосложения.

Перечень используемых методических приемов представлен в таблице 1.

Паразитологические исследования. Исследование фекалий для обнаружения ооцист криптоспоридий проводили флотационно-центрифужным методом и модифицированным центрифужно-флотационным методом по В.Ф.Никитину (2002); использовали также метод обогащения. Проводили микроскопическое исследование препаратов, окрашенных по Цилю-Нильсену и по Романовскому-Гимза. Микропрепараты изучали путём световой микроскопии в микроскопе «Биолам-6» и с использованием цифровой камеры-окуляра для микроскопа SCOPETEK® DCM 35 с выведением изображения на экран компьютера (увеличение 900Х). Оценку интенсивности инвазии проводили путем подсчета в среднем по 10 полям зрения, наличие 1–3 ооцист расценивалось как низкая степень (+), до 25 ооцист – средняя (++) и более 25 – высокая (+++).

Исследование нативных препаратов фекалий проводили по методу И. Павласека (1990) с применением глицерина. Использовали количественный метод диагностики криптоспоридиоза в рекомендациях Акбаева (2004); проводили дифференциальную диагностику по мазкам-отпечаткам со слизистой оболочки кишечника: ориентировочный диагноз «криптоспоридиоз» ставили на основании обнаружения в мазках, окрашенных по Граму, преимущественно неокрашенных образований округлой формы со светлым ободком (Акбаев и др., 2004).

Микробиологические методы. Исследования содержимого толстого кишечника и фекалий на количественно-качественный микробный состав проводили в соответствии с методическими рекомендациями О.Н. Минушкиной, В.И. Минаевой (1997).

Таблица 1 – Объем проведенных исследований

Методы

исследований

Перечень выполняемых исследований

Кол-во исследований

Паразитологические

Копрологический анализ, выявление инвазии, флотационное исследование; применение центрифугирования в сочетании с флотацией; использование метода обогащения; микроскопическое исследование препаратов, окрашенных по Цилю-Нильсену, по Романовскому-Гимза; использование количественного метода диагностики криптоспоридиоза и дифференциальной диагностики по мазкам-отпечаткам со слизистой оболочки кишечника (Акбаев и др., (2004).

10720

Микробиологические

Выделение микроорганизмов из содержимого толстого кишечника и фекалий животных; посев на дифференциально-диагностические среды; идентификация бактерий и грибов по морфологическим, тикториальным, культуральным и биохимическим признакам; определение ОМЧ, ОКБ, БГКП, КМАФАнМ по общепринятым методикам.

12640

Иммунологические

Определение показателей естественной резистентности; фагоцитарной активности лейкоцитов; содержания эозинофилов в крови, Т-, В-лимфоцитов и их субпопуляций в крови и органах иммунной системы; содержания сывороточных иммуноглобулинов М, G и Е; иммуноморфологических изменений в структурах лимфоидных органов; миелограммы.

9880

Биохимические

Оценка содержания в крови и сыворотке крови гемоглобина, глюкозы, общего билирубина, креатинина, триглицеридов, холестерина и показателей ферментативного обмена (ЛДГ, АлАт, АсАт, щелочной фосфатазы и амилазы).

11980

Ветеринарно-санитарные

Определяли качество мяса и его микробиологические показатели общепринятыми методами

2730

Статистические

Расчёт результатов с применением пакета прикладных программ Statistica 6.0 (for Windows; «Stat Soft Inc.», США), Statgraph (Version 2.6; Cоulter), Microsoft Еxcel 2003 (for  Windows XP).

Для выделения энтеробактерий использовали среды Эндо, Плоскирева, Сабуро, Блаурокка, Левина и висмут-сульфитный агар. Для выявления стафилококков использовали солевой и кровяной мясо-пептонный агар (МПА); с выделенной чистой культурой ставили реакции на определение плазмокоагулазы, фибринолизина, лецитиназы, ДНК-азы и скрытой гемолитической активности. Для выявления клостридий использовали среды Китта-Тароцци, Вильсона-Блера, глюкозо-кровяной агар Цейсслера. Лактобациллы определяли по характерному росту на среде МРС. Через 24 – 48 часов после инкубации при 37 ?С определяли морфологические и физиологические характеристики: численность популяции бактерий и число КОЕ, морфологию колоний и клеток, особенности роста на питательных средах («Об унификации микробиологических методов использования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях и лечебно-профилактических учреждениях» № 535 от 22.04.1985 МЗ РСФСР; Теппер и др., 2004; Нетрусов и др., 2005). Оценивали также биохимическую активность выделенных бактерий по способности к разжижению желатины, коагуляции молока, утилизации маннита, лактозы, сахарозы, выделению аммиака и сероводорода.

Микроскопические грибы родов Candida, Aspergilus, Peniilium выделяли посевом исследуемого материала на среды Чапека и Сабуро.

Рассчитывали качественное и количественное содержание бактерий и грибов в исследуемых пробах, результаты переводили в десятичные логарифмы и определяли относительное соотношение различных групп микроорганизмов в микробиоценозе кишечника животных.

Иммунологические методы. Активность комплемента в сыворотке крови поросят устанавливали титрованием в гемолитической системе РСК, по 100%-му гемолизу эритроцитов. Бактерицидную активность сыворотки крови определяли по П.А. Емельяненко (1980); лизоцимную – по В.Г. Дорофейчуку (1977); фагоцитарную – по общепринятой методике (Методы иммунологических исследований, 2001).

Лимфоциты выделяли из крови хвостовой вены (забор крови осуществляли в утренние часы до кормления животных с добавление в пробирки гепарина из расчёта 25 ЕД на 1 мл крови) в градиенте плотности фиколл–верографин (?= 1‚007 г/мл). Определение Т- и В-лимфоцитов и их субпопуляций проводили методами идентификации поверхностных дифференцировочных антигенов по общепринятым методикам (Бейум, 1980). Идентификацию Т-лимфоцитов проводили по наличию поверхностного дифференцировочного антигена – LFA-3 (Ройт и др., 2002). Далее по тексту будет использоваться термин «CD2-рецептор» как маркер Т-клеток. В-лимфоциты тестировали по наличию рецептора CR1 к С3-компоненту комплемента (Методы иммунологических исследований, 1981). Концентрацию иммуноглобулинов устанавливали методом радиальной иммунодиффузии в геле по G.Mancini (1981). Площадь тимусзависимых и независимых зон в лимфоидных органах определяли гистохимически, учет проводили микроскопически с помощью окуляр-сетки по Г.Г. Автандилову (1973). Мазки из пунктата костного мозга фиксировали по Паппенгейму, Мая-Грюнвальду (1976) и устанавливали процентное соотношение клеточных элементов в миелограмме.

Биохимические методы. Биохимические исследования сывороток крови поросят проводили на полуавтоматическом биохимическом анализаторе BS 3000 P. Для оценки углеводного, белкового и липидного обмена у экспериментальных животных определяли в сыворотке крови содержание глюкозы, общего белка, альбуминов, глобулинов, мочевины и креатинина, общего холестерина и его фракций, общих триглицеридов, а также активность основных ключевых ферментов аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ), щелочной фосфатазы (ЩФ), кислой фосфатазы (КФ), ?-амилазы и липазы по общепринятым методикам (Камышников, 2000).

Оценка роста и развития. Проводили взвешивание, измерения животных (длина туловища, обхват груди за лопатками, высота в холке, глубина и ширина груди), определяли индексы телосложения по результатам проведенных измерений промеров.

Оценка качества и безопасности. Ветеринарно-санитарную экспертизумяса проводили в соответствии с ГОСТ 7269-79 и ГОСТ 23392-78.

Полученные данные были подвергнуты статистической обработке методами вариационной статистики с проверкой достоверности результатов с помощью критерия Стьюдента и уровня значимости (Р) с применением пакета прикладных программ Statistica 6.0 (for Windows; «Stat Soft Inc.», США), Statgraph (Version 2.6; Cоulter), Microsoft Еxcel 2007 (for Windows XP).

  СКАЧАТЬ ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТА  
Страницы: | 1 | 2 | 3 |
 





© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.