WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

 

На правах рукописи

Максарова Дарима Дамбаевна

МОРФОфункциональная характеристика

повреждений желудка, печени белых крыс

и кроликов и их коррекция модифицированным фитобактериальным средством

06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных,

патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора биологических наук

Благовещенск – 2012

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Бурятский государственный университет»

Научный консультант:                доктор биологических наук,

профессор

Тармакова Светлана Степановна

Официальные оппоненты:                доктор биологических наук,

профессор

Овчаренко Нина Дмитриевна

доктор биологических наук,

профессор

Абидуева Елена Юрьевна

доктор ветеринарных наук,

старший научный сотрудник

Гамидов Микаил Гамид оглы

Ведущая организация:                ФГБОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет»

Защита состоится ____________2012 года в _____ часов на заседании диссертационного совета Д 220.027.02 в  ФГБОУ ВПО «Дальневосточный государственный аграрный университет» по адресу: 675005, Амурская область, г. Благовещенск, ул. Политехническая, 86, факс: (4162)526280.

E-mail: dalgau@tsl.ru.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФБГОУ ВПО «Дальневосточный государственный аграрный университет».

Автореферат разослан «___» _____________________ 2012г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

кандидат биологических наук  Самусенко О.Л.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одной из важнейших проблем медицинской науки и практики здравоохранения, ветеринарной медицины является профилактика и лечение заболеваний органов пищеварительной системы, имеющих большой удельный вес среди заболеваний внутренних органов. Язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки встречается у 3-13 % лиц с заболеваниями органов пищеварения и поражает людей наиболее активного трудоспособного возраста, обусловливая временную, а иногда и стойкую утрату трудоспособности. Язвенная болезнь характеризуется образованием язвы желудка или двенадцатиперстной кишки вследствие расстройства общих и местных механизмов нервной и гуморальной регуляции основных функций гастродуоденальной системы (Баранская Е.К., 2000; Лапина Т.Л. и др., 2001; Ивашкин В.Т. и др., 2002; Титов С.Е., 2011).

В настоящее время определены основные и предрасполагающие факторы заболевания. К основным факторам относятся: 1) нарушения гуморальных и нейрогуморальных механизмов, регулирующих пищеварение и регенерацию тканей; 2) расстройства механизмов пищеварения; 3) изменения структуры слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки.

Несмотря на значительные успехи в изучении патогенеза язвенной болезни желудка, разработки новых лекарственных средств для ее профилактики и лечения, уровень заболеваемости среди населения остается достаточно высоким.

По данным ВОЗ заболевания печени также занимают существенное место в мире среди причин нетрудоспособности и смертности населения. Так, гепатит В является самой распространенной вирусной инфекцией, в мире около 2000 млн. инфицированных и 350 млн. хронических носителей. Многообразными стали токсические и аллергические повреждения органов гепатобилиарной системы,  как результат попадания с пищей и водой различных ксенобиотиков, включая фармакологические препараты. Это обусловливает большое социальное и медицинское значение создания и применения новых лекарственных средств для профилактики и лечения заболеваний органов пищеварительной системы, среди которых особого внимания заслуживают лекарственные средства природного происхождения, обладающие антиульцерогенным и гепатозащитным действием (Амосова Е.Н. и др., 1998; Жаркова М.С. и др., 2010).

Известно, что в терапии заболеваний органов пищеварительной системы определенное место занимают лекарственные средства растительного происхождения, холосас, сок подорожника, легалон, силибор, карсил, которые являются биогенетически сложившимися комплексами и обладают большим сродством к живым системам, но при их использовании не учитывается состояние микробиоценоза кишечника, которое также претерпевает патологические изменения.

Дисбиотические состояния, связанные с микроэкологическими изменениями кишечника, в настоящее время стали интересовать практически всех клиницистов, а пробиотические препараты, корригирующие нарушенную нормальную микрофлору, широко используются при комплексной терапии как энтеральных, так и парентеральных инфекционных процессов (Бондаренко В.М. и др., 2005). Дисбактериозы кишечника различной этиологии остаются важной медикосоциальной и экологической проблемой и выявляются практически у всех больных с гастроэнтерологической патологией. Так, 90% россиян страдают заболеваниями органов системы пищеварения, которые характеризуются хроническим и рецидивирующим течением. Известно, что желудочно-кишечная экосистема человека и животных рассматривается как одна из важных систем защиты организма. В физиологических условиях микрофлора, главным образом, анаэробные представители индигенной микрофлоры, обеспечивают колонизационную резистентность  пищеварительного тракта, антитоксическое действие, поддержание оптимального уровня метаболических и ферментативных процессов, иммунный статус, антимутагенную и антиканцерогенную активности (Шендеров, 1998). Природные, техногенные и другие экстремальные факторы негативно воздействуют на организм, его микрофлору и приводят к синдрому нарушений микроэкологии пищеварительного тракта – дисбактериозам, что ведет к иммунодепрессии, изменению проницаемости кишечной стенки и избыточному бактериальному росту, что в конечном итоге приводит к бактериальной транслокации – пассажу микроорганизмов и их продуктов из кишечника во внекишечные среды (Folwaczny C., 2000; Cirera I. et al., 2001; Воробьев А.А., 2004; Bellot P. et al., 2007).

Таким образом, актуальным является создание комплексного средства, которое положительно влияло бы на функциональное состояние органов пищеварительной системы, а также нормализовало нарушения микробиоценоза кишечника, что позволит расширить ассортимент средств.

Цель исследования. Обосновать новые подходы к коррекции морфофункциональных повреждений желудка, печени белых крыс и кроликов различной этиологии и оценить терапевтическую эффективность сконструированного модифицированного фитобактериального средства, включающего экстракт плодов шиповника, чистую культуру бифидобактерий на молочной основе и природный цеолит Холинского месторождения, при лечении заболеваний желудка и печени, и использование его в целях профилактики.

В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи:

  1. Изучить действие модифицированного фитобактериального средства при морфофункциональных повреждениях стенки желудка белых крыс и кроликов на различных экспериментальных повреждениях желудка;
  2. Исследовать влияние модифицированного фитобактериального средства на биоэлектрическую активность желудка кроликов на модели желчного гастрита;
  3. Оценить действие модифицированного фитобактериального средства при морфофункциональных повреждениях печени белых крыс на моделях острого  и хронического токсических гепатитов;
  4. Изучить влияние комплексного действия модифированного фитобактериального средства на микроэкологические нарушения в толстом отделе кишечника при токсических поражениях печени белых крыс.

Научная новизна.  Экспериментально обоснован новый подход к терапии язвенных повреждений желудка и токсических гепатитов. Дана оценка морфофункционального состояния желудка белых крыс и кроликов при его повреждении на фоне стимуляции восстановления модифицированным фитобактериальным средством. Установлено, что испытуемое модифицированное фитобактериальное средство способствует более ускоренному, по сравнению с контролем, восстановлению морфофункционального состояния желудка крыс и кроликов.

Наряду с этим, в работе выявлено, что патологический процесс в стенке желудка у кроликов (при желчном гастрите) сопровождается угнетением биоэлектрической активности желудка. Введение подопытным животным модифицированного фитобактериального средства  оказывало стимулирующее влияние на восстановление электрической активности желудка в процессе заживления язвенного дефекта в стенке органа.

У испытуемых животных установлена способность модифицированного фитобактериального средства ингибировать свободнорадикальное окисление липидов и стабилизировать биологические мембраны, благодаря чему обеспечивается ускоренное восстановление структуры и функций желудка.

При остром и хроническом токсическом повреждениях печени гепатотропным ядом установлена способность модифицированного фитобактериального средства улучшать морфофункциональное состояние печени, которое характеризуется торможением перекисного окисления липидов в биологических мембранах гепатоцитов, снижением проявлений синдромов воспаления печени. Выявлены особенности механизма действия исследуемого средства при токсических повреждениях печени.

Показана эффективность применения  модифицированного фитобактериального средства в клинической практике с целью профилактики расстройств пищеварения  у телят крупного рогатого скота до 1-месячного возраста.

Теоретическая и практическая ценность работы. Выполненная работа представляет значительный интерес в теоретическом и практическом аспектах. В частности, выраженная терапевтическая эффективность модифицированного фитобактериального средства на моделях язвенных повреждений стенки желудка и при токсических повреждениях печени, предотвращает выраженные деструктивные изменения клеток, тканей и органов, в целом, за счет ингибирующего влияния модифицированного фитобактериального средства на перекисное окисление липидов мембран и стабилизацию последних. Это обусловило активацию нуклеинового обмена, полиплоидизацию, ускорение митоза, т.е. активацию клеточной и внутриклеточной регенерации. На основе молекулярно-биологического механизма представляется возможным объяснить стимуляцию регенераторных процессов при повреждениях желудка и печени, выявить некоторые аспекты противовоспалительного и стимулирующего регенерацию эффектов при воздействии модифицированным фитобактериальным средством.

Вышеперечисленные эффекты позволяют рекомендовать его для дальнейшего внедрения в медицинскую и ветеринарную практику.

В целом, полученные данные могут быть использованы и учтены не только в научно-исследовательской работе, гуманитарной и ветеринарной практике, но и в учебном процессе на лекциях и практических занятиях, при написании учебных и справочных пособий.

Внедрение результатов научных исследований.

На основании результатов научных исследований разработаны рекомендации в целях профилактики расстройств пищеварения телят до 1-месячного возраста и молодняка крупного рогатого скота, которые внедрены в животноводческих хозяйствах Республики Бурятия.

После представления материалов экспериментальных исследований модифицированного фитобактериального средства в Фармокопейный и Фармакологический комитеты МЗ России, а также в Ветеринарный биологический фармакологический совет Департамента ветеринарии МСХиП РФ, испытуемое средство может быть рекомендовано для доклинических и клинических испытаний с целью получения готового лекарственного препарата.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Модифицированное фитибактериальное средство эффективно при морфофункциональных повреждениях желудка лабораторных животных (белых крыс и кроликов).

2. Модифицированное фитобактериальное средство эффективно при структурно-функциональных повреждениях печени белых крыс при остром и хроническом токсических гепатитах.

3. Введение модифицированного фитобактериального средства при остром токсическом повреждении печени, инициированном CCl4, улучшает микроэкологическое состояние толстого отдела кишечника белых крыс, которое проявляется в увеличении титра бифидо- и лактобактерий, снижении пула условно-патогенных микроорганизмов.

4.  Модифицированное фитобактериальное средство эффективно в профилактических целях при расстройствах пищеварения у молодняка крупного рогатого скота.

Апробация работы. Основные материалы экспериментальных исследований доложены, обсуждены и одобрены на: IV Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1997); Международной научно-практической конференции "Природные мине­ралы на службе у человека" (Новосибирск, 1997); научно-практической конференции факультета ветеринарной медицины БГСХА им. В.Р. Филиппова (Улан-Удэ, 1997); Международной конференции ветеринарных морфологов «Актуальные вопросы видовой и возрастной морфологии животных и пути совершенствования преподавания морфологических дисциплин» (Улан-Удэ, 1998); Всероссийской конференции "Экологическая патология: вопросы био­химии, фармакологии, клиники" (Чита, 1997); научно-практической конференции (Казань, 1997); научно-практической конференции (Барнаул, 1998); научно-практической конференции БНЦ СО РАН (Улан-Удэ. 1998); научно-практической конференции ВСГТУ (Улан-Удэ, 1998); V Международной научно-практической конференции «Проблемы охраны окружающей среды и рационального природопользования Прикаспия и сопредельных регионов» (Элиста, 2006); Международной научно-практической конференции «Роль физиологии в современном естествознании» (Чита, 2007); Международной научной конференции «Нейрогуморальные механизмы регуляции органов пищеварительной системы в норме и при патологии» (Томск, 2007); Международной научной конференции, посвященной 15-летию БГУ «Актуальные исследования Байкальской Азии» (Улан-Удэ, 2010); IX Международной научно-практической конференции «Проблемы охраны окружающей среды и рационального природопользования Прикаспия и сопредельных регионов» (Элиста, 2010);  XI;  XII Международных научно-практических конференциях  «Фундаментальные и прикладные исследования, разработка и применение высоких технологий в промышленности» (Санкт-Петербург, 2011); II;  III Международных научно-практических конференциях «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине» (Санкт-Петербург, 2011; 2012).

Публикации по теме диссертации. По теме диссертации опубликовано 35 печатных работ. Из них 1 монография, 18 статей в журналах и материалах Международных конференций, рекомендуемых ВАК для публикаций материалов докторских диссертаций.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследования, списка использованной литературы и приложений. Работа изложена на 275 страницах компьютерного текста и иллюстрирована 35 таблицами, 45 микрофотографиями и 7 рисунками. Список литературы включает 446 источников, из них иностранных 123.

Материал и методы исследований

Экспериментальные исследования с целью изучения влияния модифицированного фитобактериального средства на морфофункциональные повреждения желудка, печени белых крыс и кроликов и оценка их терапевтической эффективности при лечении заболеваний желудка и печени проведены в научных лабораториях Бурятского государственного университета, Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова, лаборатории биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН в период с 1995 по 2011 гг.

Экспериментальные исследования проводились на: половозрелых 60 белых мышах обоего пола, полученных из питомника РАМН «Столбовая»; 650 белых беспородных крысах обоего пола массой 180-220 г, полученных из питомника филиала №5 ГНЦ «Институт биофизики федерального управления «Медбиоэкстрем» при Минздраве России г. Ангарск; 50 беспородных кроликах обоего пола массой 3-4 кг; 8 собаках. Животные находились в стандартных условиях содержания вивария на обычном рационе кормления. Экспериментальные исследования осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приказ МЗ СССР №755 от 12.08.77 г.).

Штаммы бифидобактерий Bifidobacterium Bifidum 1 и Bifidobacterium longum В 379 M получены из МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского (Москва).

Эксперименты по активизации и культивированию бифидобактерий проводили на основе обезжиренного коровьего молока.

Сухой экстракт плодов шиповника Rosa (ГФ XI, ст. 38) получен водным экстрагированием с последующим высушиванием. Экстракт представлял собой легкорастворимый аморфный порошок коричневого цвета.

Цеолитсодержащая порода Холинского месторождения Бурятии по ТУ 2163-002-12763074-97 представляла собой порошок серого цвета с размерами частиц 0,1-1,0 мм и содержанием клиноптилолита в среднем 55%.

Морфологию микроорганизмов содержимого толстого отдела кишечника и чистой культуры бифидобактерий B.Bifidum 1 и B. longum В 379 M изучали с помощью фазово-контрастной микроскопии. Препараты для световой микроскопии готовили по стандартной методике, окрашивали по Граму и микрофотографировали.

Клинические исследования проведены на базе ФГУП учхоза «Байкал» (Иволгинский район Республики Бурятия).

Для оценки морфофункционального состояния желудка и определения терапевтической эффективности модифицированного фитобактериального средства при повреждениях желудка были использованы общепринятые экспериментальные модели: аспиринового  повреждения СОЖ (300 мг/100 г массы per os в течение 7 дней 1 раз в сутки); атофанового – (300 мг/кг в 5 % растворе диметилсульфоксида (ДМСО), внутрибрюшинно, однократно); бутадионового – (300 мг/кг внутримышечно в виде 15 % взвеси на ацетоне, однократно); резерпинового – (10 мг/кг в 5 % растворе ДМСО per os, однократно) (Барнаулов О.Д. и др., 1982); острой язвы по Shay (Shay Н. et al.,1945).  Также применяли экспериментальную модель хронического повреждения желудка – гипосекреторный «рефлюкс-гастрит», вызванный интрагастральным введением медицинской желчи в объеме 10 мл/кг массы животного, 1 раз в сутки в течение 14 дней (Аруин  Л.И. и  др., 1976; Федотовских Н.Н. и др., 1987) и модель ацетатной язвы желудка по Okabe (Okabe S. et al., 1971).

Использование широкого набора экспериментальных моделей повреждений слизистой оболочки желудка (СОЖ) различными ульцерогенными агентами и факторами является обоснованным, поскольку позволяет более объективно оценить антиульцерогенную активность и очертить диапазон применения из­учаемого модифицированного фитобактериального средства с учетом патогенетического варианта язвенной болезни гастродуоденальной зоны.

При аспириновом, атофановом, бутадионовом, резерпиновом повреждениях СОЖ производили морфометрию деструкций СОЖ и рассчитывали индекс Паулса.

Модифицированное фитобактериальное средство вводили per os в дозе 1 мл/100 мг массы крысы. В качестве препарата сравнения использовали кверцетин в изоэффективной дозе 50 мг/кг массы 1 раз в сутки. Контрольная группа животных получала дистиллированную воду в эквиобъемном количестве.

При аспириновом повреждении СОЖ, рефлюкс-гастрите, острой язве по Shay и хронической язве по Окабэ определяли темп желудочной секреции, общую кислотность желудочного сока, содержание свободной соляной кислоты по методу Михаэлиса, исследовали ферментообразующую функцию желудка по В. Т. Туголукову (Меньшиков и соавт., 1987).

Перекисное окисление липидов определяли по содержанию малонового диальдегида в гомогенате стенки желудка крыс по методу И.Д. Стальной (1977).

В условиях эксперимента «рефлюкс-гастрит» вызывали введением кроликам медицинской желчи с помощью зонда в объеме 5 мл/кг массы 1 раз в сутки до кормления животных в течение 24 дней. Модифицированное фитобактериальное средство в дозе и препарат сравнения кверцетин вводили с помощью зонда в желудок кроликов спустя 2 часа после введения желчи. По аналогичной схеме животным контрольной группы вводили дистиллированную воду. Исследования проводили на 10 и 20 сутки от начала эксперимента. В гомогенате ткани желудка опре­деляли содержание конечного продукта перекисного окисления липидов (ПОЛ) – малонового диальдегида (МДА).

Для оценки параметров желудочной секреции накладывали лигатуру на привратник желудка под наркозом (гексенал 1% в объеме 1 мл/кг массы) за 5 часов до сбора желудочного сока. В желудочном соке определяли общую кислотность и свободную соляную кислоту общепринятым титрационным методом. После забора желудочного сока производили морфометрию деструкции слизистой оболочки желудка. Для каждого вида повреждений слизистой оболочки желудка рассчитывали "язвенный индекс" Паулса.

Кроме того, у кроликов с желчным гастритом дана электрофизиологическая оценка влияния модифицированного фитобактериального средства путем регистрации электрических потенциалов желудка. Биоэлектрические сигналы с исследуемого органа изучали на 7, 14 и 21 сутки с момента начала введения медицинской желчи и начала экспериментальной терапии. При анализе полученных ЭГГ определяли общий уровень биоэлектрической активности – ОУБА (усл.ед), частоту импульсов в минуту – ЧИ, среднюю величину амплитуды – СВА (мВ) по С.М. Лисовской (1958).

Гистологическому исследованию подвергали материал, полученный из краев и дна язвы, переульцерозной зоны. Отобранный материал фиксировали в 10%-ом водном растворе нейтрального формалина. Приготовление гистопрепаратов осуществляли по общепринятой методике (Волкова О.В. и др., 1982), путем заливки материала в парафин. Полученные гистологические срезы окрашивали по ван Гизон, Нахласу, гемотоксилином и эозином. Микрофотографирование гистологических препаратов проводили с использованием микроскопа «Carl Zeiss».

Опыты по моделированию острого токсического гепатита проводили на белых беспородных крысах введением 50%-ного масляного раствора тетрахлорметана (CCl4) (чда, ГОСТ 20288-86) в объеме 0,4 мл/100 г массы крысы ежедневно в течение четырех дней (Левшин Б.И., 1973), который разводили ex tempore в стерильном оливковом масле в соотношении 1:1.

Хронический токсический гепатит у белых крыс моделировали подкожным введением 50%-ного масляного раствора CCl4 в объеме 0,2 мл/100 г массы животного два раза в неделю в течение 2-х месяцев.

Испытуемое модифицированное фитобактериальное средство вводили животным интрагастрально с 61 дня в объеме 1мл/100 г массы животного один раз в сутки. Материал для исследований отбирали сразу после начала введения CCl4, а также через 28 дней от начала введения модифицированного фитобактериального средства. Контрольная группа животных получала дистиллированную воду в эквиобъемном количестве.

Для оценки морфофункционального состояния печени при ее токсических повреждениях CCl4 были выбраны следующие методы исследования: определение интенсивности процессов перекисного окисления липидов  – МДА в гомогенате ткани печени; сукцинатдегидрогеназы (СДГ) – в свежезамороженных срезах печени; патоморфологическое исследование печени.

Определение состава микрофлоры кишечника крыс, патоморфологические исследования печени проводили на 7, 14, 21-е сутки при моделировании острого токсического гепатита. Микробиологические исследования содержимого толстого отдела кишечника белых крыс проводили методом предельных разведений посевом на элективные питательные среды: бифидобактерии выявляли на среде Блаурокк, лактобактерии на среде МРС-4, клостридии на среде Вильсон-Блера, кишечную палочку на среде Эндо, Плоскирева, Левина, стафилококки на желточно-солевом агаре, грибы рода Candida на среде Сабуро, энтерококки на среде Калины с последующим изучением биохимических свойств и морфологической характеристики выделенных микроорганизмов.

Оценка безопасности природного цеолита проведена на беспородных лабораторных животных: мышах, крысах, собаках.

Острую токсичность природного цеолита оценивали в соответствии с ру­ководящим нормативным документом РД-64-126-91 по общепринятой методике Кербера. Класс токсичности природного цеолита определяли по классификации К.К. Сидорова (1973). Острую токсичность природного цеолита изучали путем внутрибрюшинного введения, а также путем введения природного цеолита внутрижелудочно в водном растворе. Объем вводимой жидкости мышам не превышал 0,5 мл, для крыс – 2 мл.

При оценке LD50 цеолита были проведены серии опытов на 60 мышах с массой 18-20 г и 60 белых крысах с массой 160-180 г. Основные параметры острой токсичности препарата вычисляли при помощи статистического метода по Керберу.

Токсическое действие природного цеолита при длительном его введении было проверено согласно Правилам доклинической оценки безопасности фармакологических средств на 60 мышах с массой 18-25 г, 60 крысах с массой 160-210 г, 8 собаках с исходной массой 3-9 кг. Разным группам каждого вида животных препарат вводили в установленных трех дозах: 1/10, 1/8 и 1/6 LD50.

Животным природный цеолит давали с кормом в дозе 1800, 2300 и 3000 мг/кг массы в течение 6 месяцев. Через 1, 3 и 6 месяцев с начала опыта исследо­вали весовые показатели внутренних органов, биохимические и морфологиче­ские показатели крови.

Изучение возможных эмбриотоксического и тератогенного свойств  природного цеолита проводили на 20-дневных плодах, полученных от половозрелых самок белых крыс. Критериями повреждающего действия природного цеолита во время беременности служили: гибель эмбрионов, аномалии развития плодов. Самок вскрывали на 20-й день беременности, плоды взвешивали, измеряли их кранио-каудальные размеры по методике А.П. Дыбана (1974).

Статистическая обработка полученных экспериментальных и клинических данных проводилась методами вариационной статистики с использованием критериев Стьюдента (В.К. Кузнецов, 1978). Различия между средними величинами считали статистически значимыми при Р0,05. Компьютерную обработку экспериментальных данных проводили с использованием программ «Microsoft Office Excel 7.0».

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Характеристика модифицированного фитобактериального средства

Модифицированное фитобактериальное средство готовили на стерильном обезжиренном коровьем молоке с использованием активизированной чистой культуры бифидобактерий шт. B. longum B 379 M, сухого экстракта плодов шиповника Rosa (ГФ XI, ст.38) (в экстракте из плодов шиповника аскорбиновой кислоты не менее 0,2%) и природного цеолита Холинского месторождения (клиноптилолит) фракцией 0,1-1,0 мм (ТУ 2163-002-12763074-97). Содержание клеток бифидобактерий в готовом средстве 8-9 lg КОЕ/см3.

При исследовании возможности культивирования бифидобактерий на молочной основе с экстрактом плодов шиповника и природным цеолитом выявлено ускорение роста бифидобактерий с повышением их кислотообразующей способности.

Морфология клеток бифидобактерий в модифицированном фитобактериальном средстве сохраняла характерную для них бифуркацию (рис. 1.).

Рис.1 – Бифидобактерии шт. В. longum B 379 M, выращенные на среде  Blaurock. Окраска по Граму. Увел. 7 х 90.

Характерная для бифидобактерий штамма B. longum B 379M микроскопическая картина опытных образцов свидетельствует о том, что условия культивирования, состав питательной среды отвечают требованиям для роста бифидобактерий в молоке.

В процессе приготовления бифидосодержащих средств на молочной основе самым важным свойством бактерий считаются их быстрый рост и способность сквашивать молоко.

Известно, что бифидобактерии (облигатные анаэробы) почти не растут в молоке, в отличие от молочнокислых бактерий. Развитие бифидобактерий может зависеть от особых веществ, так называемых бифидус факторов, которые практически отсутствуют в коровьем молоке. Химические исследования показали, что бифидус-факторы представляют собой смесь близких по составу олигосахаридов.

В настоящее время существует несколько направлений для получения олигосахаридов промоторов (стимуляторов роста) для бифидобактерий. Одним из них является выделение олигосахаридов из растительного сырья.

Стимулирующее действие олигосахаридов объясняется тем, что они играют важную роль в синтезе пептидогликана клеточных стенок бифидибактерий.

Оценка гастропротективного влияния модифицированного фитобактериального средства в опытах на белых крысах

Влияние модифицированного фитобактериального средства

на течение бутадионового повреждения слизистой оболочки желудка

белых крыс

После индуцирования бутадионового повреждения СОЖ белых крыс на фоне введения модифицированного фитобактериального средства и препарата сравнения кверцетина, на основе данных макроскопии СОЖ – качественной и количественной оценки деструкций, подсчитан индекс Паулса. На основании данных морфофункционального состояния СОЖ белых крыс дана оценка гастропротективного эффекта испытуемого средства.

Результаты эксперимента представлены в таблице 1.

Таблица 1 –Влияние модифицированного фитобактериального средства

и препарата сравнения кверцетина на бутадионовое повреждение стенки желудка белых крыс (М ±m; n=8)

Показатели, характеризую­щие состояние

Группы животных

п/п

слизистой оболочки желуд­ка

контрольная

пр. сравнения

(кверцетин)

опытная (МФС)

1.

Гиперемия  СОЖ в  услов­ных ед. (от 0 до 4)

3,67

2,53

2,05

2.

Сглаженность рельефа СОЖ

Резко сглаж.

Сглажен

Норма

3.

Пылевидные кровоизлия­ния, в %

71,4

57,1

42,9

4.

Индекс Паулса для точеч­ных кровоизлияний

26,67

12,67

13,00

5.

Соотношение индексов Паулса контрольной

и опытной групп для точеч­ных кровоизлияний

_

2,10

2,05

6.

Индекс Паулса для эрозий

4,50

4,33

3,38

7.

Соотношение индексов Паулса контрольной и опытной групп для эрозий

0,44

1,03

8.

Индекс Паулса для полосовидных язв

5,06

3,08

3,75

9.

Соотношение индексов Паулса контрольной

и опытной групп для полосовидных язв

_

1,64

1,35

Как видно из данных таблицы 1, на модели бутадионового повреждения слизистой оболочки желудка ис­следуемое лекарственное средство оказало выраженный  гастропротективный эффект. Так, индекс Паулса для точечных кровоизлияний в группах под влиянием кверцетина и модифицированного фитобактериального средства  по сравнению с контрольной группой животных уменьшился соответственно в 2,1 и 2,05 раза, для эрозий – при введении кверцетина увеличился более чем в 2 раза, а при использовании модифицированного фитобактериального средства остался на уровне контроля. Индекс Паулса для полосовидных язв при применении кверцетина уменьшился в 1,64 раза, а при применении модифицированного фитобатериального средства индекс Паулса уменьшился в 1,35 раза.

При гистологическом исследовании выявлено, что при повреждении желудка белых крыс бутадионом через 24 часа в собственно слизистой оболочке желудка и подслизистой основе обнаруживается инфильтрация клеточных элементов в мышечный слой (рис. 2).

Рис. 2 – Повреждение желудка белых крыс бутадионом, контрольная группа. Инфильтрация собственно слизистой желудка (А) и подслизистой основы (Б) клеточными элементами с проникновением их в мышечный слой. Окраска гематоксилином и эозином. Увел.10х20.

Фармакотерапевтический эффект пре­парата сравнения кверцетина, реализовался преимущественно в плане ограничения генеза полосовидных язв.

Модифицированное фитобактериальное средство по выраженности гастропротективного эффекта превосходило пре­парат сравнения кверцетин в ограничении образования эрозий. Согласно кри­териям гастропротективного действия фармакологических агентов (Барнаулов О.Д. и др., 1982) при интерпретации данной серии экспериментов можно сделать вывод, что модифицированное фитобактериальное средство обладает отчетливым антиульцерогенным действием.

Исследование терапевтической эффективности модифицированного фитобактериального средства показало, что курсовое введение в экспериментально-терапевтических дозах на фоне язвенного дефекта слизистой оболочки желудка белых крыс различной этиологии (аспириновое, атофановое, бутадионовое, резерпиновое повреждения) оказывало антиульцерогенное действие, которое характеризовалось нормализацией структурно-функционального состояния слизистой оболочки желудка на более ранних стадиях патологического процесса.

Влияние модифицированного фитобактериального средства на течение хронической ацетатной язвы желудка по Оkabe у белых крыс

Для оценки влияния модифицированного фитобактериального средства на функциональное  состояние слизистой оболочки желудка белых крыс были выбраны показатели, характеризующие процессы перекисного окисления липидов, темп желудочной секреции, кислотность желудочного содержимого, а также деструктивные изменения СОЖ (табл. 2).

Таблица 2 – Влияние модифицированного фитобактериального средства на функциональное состояние слизистой оболочки желудка у белых крыс при язве желудка по Okabe, (М±m, n=9)

Показатели

Группы животных

Интактная

Контрольная

Препарат сравнения

(кверцетин)

Опытная

(МФС)

1

2

3

4

5

7-е сутки

МДА в гомогенате ткани желудка, ммоль/г

0,013±0,003

0,069±0,009*

0,057±0,008

0,044±0,004**

Темп желудочной секреции, мл/100

0,65±0,04

0,23±0,01*

0,29±0,02**

0,38±0,02**

Общая кислотность,

ед. титра

140,3±3,58

40,1±2,67*

50,28±2,73**

65,5±3,31**

Свободная соляная кислота, ед. титра

47,62±2,63

14,35±0,95*

19,21±1,31**

23,46±1,49**

Дебит-час соляной кислоты, мкг/100г

80,3±6,39

33,1±1,42*

41,83±2,12**

46,53±2,07**

% животных

с точечными

кровоизлияниями

100

70

60

Индекс Паулса

для точечных

кровоизлияний

3,38±0,13

2,97±0,12

2,85±0,11

% животных с эрозиями

80

60

50

Индекс Паулса для эрозий

4,36±0,17

3,83±0,16

3,42±0,15

14-е сутки

МДА в гомогенате ткани желудка, ммоль/г

0,013±0,003

0,058±0,008*

0,039±0,004**

0,035±0,009**

Темп желудочной секреции, мл/100

0,65±0,04

0,28±0,02*

0,34±0,03**

0,42±0,02**

Общая кислотность, ед.титра

140,3±3,58

46,1±1,62*

63,6±1,81**

78,7±2,03**

Свободная соляная кислота, ед.титра

47,62±2,63

20,35±0,91*

29,76±1,49**

32,74±1,44**

Дебит-час соляной кислоты, мкг/100г

80,3±6,39

40,2±1,51*

48,8±2,12**

53,8±2,47**

% животных с точечными

кровоизлияниями

80

60

60

Индекс Паулса

для точечных

кровоизлияний

3,04±0,11

2,25±0,20

2,17±0,14

% животных с эрозиями

70

50

40

Индекс Паулса для эрозий

3,74±0,15

2,42±0,24

2,15±0,21

Продолжение таблицы 2

1

2

3

4

5

21-е сутки

МДА в гомогенате ткани желудка, ммоль/г

0,013±0,003

0,049±0,007*

0,024±0,004**

0,021±0,005**

Темп желудочной секреции, мл/100

0,65±0,04

0,31±0,01*

0,37±0,013**

0,44±0,020**

Общая кислотность, ед.титра

140,3±3,58

50,5±1,77*

98,1±2,52**

113,2±2,65**

Свободная соляная кислота, ед.титра

47,62±2,63

25,43±0,89*

33,38±1,51**

41,84±1,42**

Дебит-час соляной кислоты, мкг/100г

80,3±6,39

46,6±1,65*

56,2±2,43**

67,2±2,56**

% животных

с точечными

кровоизлияниями

70

30

20

Индекс Паулса

для точечных

кровоизлияний

2,72±0,21

1,16±0,14

0,83±0,15

% животных с эрозиями

50

20

Индекс Паулса для эрозий

3,08±0,15

1,32±0,18

Примечание: *  – различия достоверны относительно интактной группы при Р0,05;

  ** – данные достоверны относительно контрольной группы при Р0,05.

Как следует из данных таблицы 2, в контрольной группе животных через 2-3-е суток после индуцирования ацетатной язвы и в последующие сроки у животных отмечалась заторможенность, гиподинамия, потеря массы тела в среднем на 8 %, вялое заживление операционного шва, гибель животных составила 30 %. На 7-е сутки исследования после индуцирования язвы желудка в 100 % случаев на слизистой оболочке желудка белых крыс отмечали точечные кровоизлияния, эрозии наблюдали у 80 % животных.

Развитие деструктивных процессов в слизистой оболочке желудка сопровождалось интенсификацией процессов перекисного окисления липидов в тканях желудка. Содержание МДА в гомогенате желудка контрольных  животных увеличивалось в 5,31 раз по сравнению с интактной группой животных. При курсовом введении модифицированного фитобактериального средства содержание МДА на 7 сутки эксперимента снижалось в 1,57 раз до 0,044±0,004 ммоль/г по сравнению с контрольной группой животных (0,069±0,009 ммоль/г) и к концу эксперимента содержание малонового диальдегида в гомогенате желудка белых крыс составляло 0,021±0,005 ммоль/г.

У животных контрольной группы достоверно резко снизился темп желудочной секреции – в 2,83 раза, с одновременным снижением общей кислотности с 140,3±3,58 до 40,1±2,67 ед. титра, а также уменьшилось содержание свободной соляной кислоты с 47,62±2,63 до 14,35±0,95 ед. титра и снизился дебит-час соляной кислоты в 2,43 раз.

Снизился процент животных с точечными кровоизлияниями до 60 % и 70% в группе животных, получавших модифицированное фитобактериальное средство и кверцетин, соответственно.  Процент животных с эрозиями в группе животных, получавших модифицированное фитобактериальное средство, уменьшился до 50 %, а в группе животных, получавших кверцетин, до 60 % по сравнению с контрольной группой животных. Соответственно снизился и индекс Паулса для точечных кровоизлияний с 3,38±0,13 в контрольной группе и до 2,85±0,11 и 2,97±0,12 в опытной группе, и индекс Паулса для эрозий с 4,36±0,17 до 3,42±0,15 и 3,83±0,16. Положительная динамика сохранялась и на 14-е сутки. К 21-м суткам  процент животных с точечными кровоизлияниями в группе животных, получавших модифицированное фитобактериальное средство, составлял 20 %, а в группе сравнения – 30%. В контрольной группе животных процент животных с точечными кровоизлияниями составил  70 %.

Темп желудочной секреции у животных, получавших модифицированное фитобактериальное средство, повысился в 1,63 раз по сравнению с контрольной группой животных с одновременным увеличением количества свободной соляной кислоты в желудочном соке до 23,46±1,49 ед. титра. Общая кислотность содержимого желудка у животных, получавших модифицированное фитобактериальное средство, повысилась на 25,4±2,99 ед. титра.

На 14-е сутки уменьшился процент животных с точечными кровоизлияниями до 60 % в группе животных, получавших модифицированное фитобактериальное средство и кверцетин, а процент животных с эрозиями в первой группе уменьшился до 40 %, во второй до 50 % по сравнению с контрольной группой животных. Соответственно снизился и индекс Паулса для точечных кровоизлияний с 3,04±0,11 в контрольной группе и до 2,17±0,14 и 2,25±0,20 в опытных группах соответственно и индекс Паулса для эрозий с 3,74±0,15 до 2,15±0,21 и 2,42±0,24.

На 21-е сутки эксперимента процент животных с точечными кровоизлияниями, получавших модифицированное фитобактериальное средство и кверцетин, составлял соответственно 20 % и 30 %, а в группе животных, получавших модифицированное фитобактериальное средство, животных с эрозиями не выявлено; в группе животных, получавших кверцетин, процент животных с эрозиями составил 20 %.

На 7-е сутки исследования площадь язвенных дефектов желудка у экспериментальных животных достоверно уменьшалась со 105,38±2,42 мм2 до 19,37±1,54 мм2.

На 14-е сутки наблюдения как следует из данных таблицы 4, в контрольной группе животных площадь язвенных дефектов составила 55,41±1,53 мм2. У животных, получавших модифицированное фитобактериальное средство, на 14-е сутки исследований площадь язвенных дефектов уменьшилась до 8,14±0,02 мм2. Подобная динамика наблюдалась и в группе животных, получавших кверцетин, но площадь язвенных дефектов была больше во все сроки наблюдения, чем в группе животных, получавших модифицированное фитобактериальное средство (табл. 4).

Таблица 4 – Влияние модифицированного фитобактериального средства на течение язвы желудка по Okabe у белых крыс

Группы

животных

Сроки

исследования, сут.

Площадь язвенных дефектов, мм2

Контрольная

7

105,38±2,42

14

55,41±1,53

21

32,16±1,27

Опытная (МФС)

7

19,37±1,54*

14

8,14±0,020*

21

Группа сравнения (кверцетин)

7

28,87±1,23*

14

17,31±0,76*

21

3,49±0,08*

Примечание: * – данные достоверны соответственно срокам исследования относительно контрольной группы животных при Р0,05.

В группе животных, получавших модифицированное фитобактериальное средство, на 21-е сутки наблюдения язв уже не наблюдалось, а в группе контрольных животных площадь язвенных дефектов составляла 32,16±1,27 мм2.

В группе животных, получавших препарат сравнения кверцетин, площадь язвенных дефектов достоверно уменьшалась с 32,16±1,27 мм2 до 3,49±0,08 мм2 .

На поверхности дна язвенного дефекта наблюдали толстый слой фиброзной некротизированной ткани. На дне язвенного дефекта выявляли разрушение мышечного слоя, мышечные волокна расщеплены на отдельные фрагменты. В тканях дна язвы наблюдалась интенсивная клеточная инфильтрация. На краях язвенного повреждения отмечали циркуляторные расстройства в форме расширения кровеносных сосудов и стазов. Наблюдали деструктивные изменения в покровно-ямочном эпителии и железистом аппарате слизистой оболочки желудка. Просветы желез были резко расширенными, часть париетальных, а также добавочных клеток были деформированы. Поверхностный слой язвы был образован бесструктурными некротическими массами, слизью, фибрином, десквамированным эпителием, отмечали инфильтрацию слизистой оболочки клеточными элементами (рис. 3). Выраженность зоны деструкции рассматривали как показатель активности язвенного процесса.

Рис. 3 – Язва желудка белых крыс по Оkabe. 7-е сутки. Опытная группа с введением МФС. Диффузная лейкоцитарная инфильтрация эпителия. Окраска гематоксилином и эозином. Увел. 10 х 20.

Выявлено «нависание» слизистой оболочки над язвенным дефектом. Противоположный край пологий, террасовидный.

При проведении гистоморфологических исследований обнаружили, что в желудке животных, получавших модифицированное фитобактериальное средство с экстрактом плодов шиповника и природного цеолита, в отличие от контроля, слабее выражены гемодинамические нарушения и клеточная инфильтрация (рис. 4).

Рис. 4 – Язва желудка белых крыс по Оkabe. 7-е сутки. Опытная группа с введением МФС. Увеличение количества клеточных элементов в грануляционной ткани. Окраска гематоксилином и эозином. Увел. 7 х 40.

Результаты биохимических исследований сыворотки крови белых крыс,  показывают, что у животных контрольной группы  отмечено достоверное снижение  уровня белка с 78,3±1,82 г/л до 60,6±1,47 г/л; железа – в 1,67 раз, мочевой кислоты – в 1,75 раз, что свидетельствует о нарушении функции желудочно-кишечного тракта, вызванном повреждениями СОЖ и сопутствующим воспалительным процессом (табл. 3).

Таблица 3 – Влияние модифицированного фитобактериального средства на биохимические показатели крови белых крыс при язве желудка  по Okabe

(М±m, n=9)

Показатели

Группы животных

Интактная

Контроль

Опытная (МФС)

Препарат сравнения

7-е сутки

Общий белок, г/л

78,3±1,82

60,6±1,47*

66,6±1,63**

61,5±1,36

Общий билирубин, мкмоль/л

7,8±0,20

12,6±0,32*

10,6±0,28**

11,5±0,26

Холестерин, ммоль/л

1,4±0,12

1,8±0,13*

1,6±0,04

1,7±0,05

Железо, мкмоль/л

44,1±0,88

26,4±0,56*

31,3±0,63**

28,3±0,49**

Триглицериды, ммоль/л

0,7±0,05

0,4±0,03*

0,5±0,04

0,5±0,03

Мочевая кислота, мкмоль/л

184,1±12,36

105,1±8,34*

148,0±6,73**

135,6±5,51**

Нуклеиновые кислоты, мг/100 мл

6,34±0,31

6,20±0,29

6,23±0,25

6,20±0,27

МДА, нмоль/л

0,047±0,0016

0,073±0,0017*

0,064±0,0016**

0,069±0,0017

14-е сутки

Общий белок, г/л

78,3±1,82

62,3±1,21*

67,3±1,74**

63,8±1,42

Общий билирубин, мкмоль/л

7,8±0,20

11,7±0,29*

9,8±0,29**

10,9±0,30**

Холестерин, ммоль/л

1,4±0,12

1,7±0,11*

1,5±0,12

1,6±0,11

Железо, мкмоль/л

44,1±0,88

29,5±0,53*

37,6±0,61**

33,8±0,57**

Триглицериды, ммоль/л

0,7±0,05

0,4±0,03*

0,5±0,02**

0,5±0,01**

Мочевая кислота, мкмоль/л

184,1±12,36

124,3±9,22*

157,3±10,87**

148,4±9,74**

Нуклеиновые кислоты, мг/100 мл

6,34±0,31

6,20±0,29

6,30±0,24

6,20±0,25

МДА, нмоль/л

0,047±0,0016

0,070±0,0017*

0,061±0,0016**

0,067±0,0017**

21-е сутки

Общий белок, г/л

78,3±1,82

65,9±1,62*

73,2±1,84**

69,8±1,79**

Общий билирубин, мкмоль/л

7,8±0,20

10,5±0,31*

9,1±0,20**

10,1±0,27**

Холестерин, ммоль/л

1,4±0,12

1,7±0,13*

1,6±0,12

1,6±0,14

Железо, мкмоль/л

44,1±0,88

30,3±0,61*

40,7±0,74**

39,4±0,68**

Триглицериды, ммоль/л

0,7±0,05

0,5±0,03*

0,6±0,02

0,5±0,03

Мочевая кислота, мкмоль/л

184,1±12,36

130,7±6,23*

170,8±10,36**

162,3±9,19**

Нуклеиновые кислоты, мг/100 мл

6,34±0,31

6,20±0,29

6,37±0,30

6,28±0,26

МДА, нмоль/л

0,047±0,0016

0,068±0,0015*

0,053±0,0016**

0,061±0,0018**

Примечание: * – различия достоверны относительно интактной группы при Р0,05;

** – данные достоверны относительно контрольной группы при Р0,05.

Отмечено достоверное повышение уровня холестерина и малонового диальдегида до 1,8±0,13 ммоль/л и 0,073±0,0017 нмоль/л соответственно.

При курсовом введении модифицированного фитобактериального средства на 7-е сутки отмечено статистически достоверное повышение содержания общего белка до 66,6±1,63 г/л, мочевой кислоты до 148,0±6,73 мкмоль/л, железа до 31,3±0,63 мкмоль/л и достоверное снижение общего билирубина и МДА у животных, получавших модифицированное фитобактериальное средство, по сравнению с контрольной группой животных. Подобную динамику наблюдали и в остальные сроки исследования.

Флавоноидные соединения и аскорбиновая кислота, входящие в состав модифицированного фитобактериального средства, оказывают антиоксидантное действие, выражающееся в способности ингибировать процессы перекисного окисления липидов и стабилизировать биологические мембраны клеток стенки желудка.

Природный цеолит в желудочно-кишечном тракте не всасывается, а проходит транзитом, взаимодействуя только на уровне селективного ионного обмена и избирательной сорбции при контакте с кровеносными и лимфатическими сосудами кишечной стенки, отдавая или забирая микро-, макроэлементы, катализируя биохимические реакции.

Результаты проведенных исследований при различных повреждениях слизистой оболочки желудка показали, что модифицированное фитобактериальное средство обладает терапевтическим действием. Показано, что у белых крыс с ацетатной язвой желудка в меньшей степени проявляются признаки воспаления: отечность и гиперемия стромы. Менее выражены стаз форменных элементов, дистрофия и десквамация покровного эпителия, а также нарушение рельефа слизистой оболочки желудка.

Морфофункциональная и электрофизиологическая оценка

влияния модифицированного фитобактериального средства

на течение желчного гастрита у кроликов

При терапии желчного гастрита животных модифицированным фитобактериальным средством отмечали его позитивное влияние на активность секреторного аппарата СОЖ. Так, темп желудочной секреции на 49,0% был выше такового в контроле. Уровень общей кислотности превышал таковой в контроле на 67,2%. Ферментативная активность была значительно выше нормы во всех группах на 10- и 20-е сутки исследований.

При морфометрических исследованиях деструкции СОЖ определяли степень защиты испытуемым средством в ответ на повреждающее воздействие желчи. Индекс Паулса при повреждениях слизистой оболочки желудка эрозиями в опытной группе был в 26,8 раз меньше, чем в контроле; в 2 раза ниже у животных опытной группы, чем у животных в группе сравнения при повреждениях СОЖ полосовидными язвами; в 6,8 раза превышая данные контроля при повреждениях точечными кровоизлияниями (табл.5).

Таблица 5 – Влияние модифицированного фитобактериального средства на течение повреждения слизистой оболочки желудка у кроликов, вызванного введением медицинской желчи  (М±m; n=8)

№  п/п

п

Показатели состояния

Группы животных

СОЖ

Контрольная

Препарат сравнения (кверцетин)

Опытная (МФС)

1

Гиперемия,усл. ед. (от 0 до 4)

3,0

2,25

2,0

22

Среднее число точечных кровоизлияний на 1 животное

11 ±1,45

11,5 ±1,8

3,25 ±1,26*

33

Индекс Паулса для точечных кровоизлияний

11

11,5

1,62

4

Среднее число эрозий на 1 жив.

4,3 ±0,12

1,25+0,06*

0,25 ± 0,04*

5

Индекс Паулса для эрозий

4,3

1,25

0,16

66

Среднее число полосовидных язв

На 1 животное

14,3 ±0,11

6,2 ±0,04*

4,1 ±0,02*

77

Индекс Паулса для полосовидных язв

14,3

6

3

Примечание:  * - различия достоверны по сравнению с контролем при Р0,05.

У животных, получавших модифицированное фитобактериальное средство, дно язвенного дефекта, по сравнению с контролем, было очищено от некротических масс или покрыто тонким слоем детрита в виде скоплений слизи с примесью распадающихся лейкоцитов, эритроцитов и слущенных клеток. Края язвы характеризовались уменьшением периульцерозного воспалительного вала. Вокруг язвы была значительно уменьшена зона гиперемии и отека. В отличие от контроля в более ранние сроки со дна язвы наблюдалось отторжение струпа, пропитанного фибринозным налетом, под которым обнаруживалась нежная, рыхлая грануляционная ткань с большим количеством вновь образованных капилляров.

К концу эксперимента регенераторные процессы в стенке желудка у части животных проявлялись в виде эпителиально-соединительнотканных разрастаний, наползающих на язвенную поверхность. В некоторых случаях обнаруживался полиморфизм покровного эпителия.

Кроме того, у кроликов с желчным гастритом дана электрофизиологическая оценка влияния МФС путем регистрации биоэлектрических потенциалов желудка. Установлено, что язвенное повреждение стенки желудка кро­ликов сопровождается угнетением биоэлектрической активности этого органа.

Биоэлектрические сигналы с исследуемого органа изучали на 7, 10 и 20-е сутки с момента начала введения медицинской желчи и начала экспериментальной терапии.

Введение животным модифицированного фитобактериального средства оказывало стимулирующее влияние на восстановление электрической активности желудка в процессе заживления язвенного дефекта в стенке органа. В контрольной группе кроликов, получавших только медицинскую желчь, выявлено угнетение биоэлектрической активности желудка, что подтверждается достоверным по сравнению с интактным контролем снижением величин ОУБА и СВА во все изучаемые сроки. Показатели электрогастрограмм у кроликов с «рефлюкс-гастритом», получавших модифицированное фитобактериальное средство, были достоверно выше, чем таковые у контрольных животных (табл. 6).

Таблица 6 – Показатели электрической активности желудка у кроликов с «рефлюкс-гастритом» (М±m; n = 8)

Сроки, сут.

Группа животных

Показатели электрогастрограмм

ОУБА (усл. ед.)

ЧИ в мин.

СВА (мВ)

––

Интактная

114,70±3,80

2,10±0,05

1,00±0,04

7

Контрольная

74,50±3,90

1,43±0,02

0,98±0,05

Опытная (МФС)

84,80±3,40*

1,70±0,03*

1,01 ±0,04

10

Контрольная

39,80±3,80

1,26±0,03

0,70±0,03

Опытная (МФС)

82,44±2,83*

1,84±0,07*

0,90±0,04*

20

Контрольная

63,20±3,60

1,44±0,01

0,92±0,05

Опытная (МФС)

123,30±3,45*

1,35±0,02

1,57±0,04*

Примечание: * - достоверность по сравнению с контролем по срокам, Р 0,05.        

При анализе данных таблицы 6 в группе контрольных животных, получавших только медицин­скую желчь, выявлено угнетение биоэлектрической активности желудка, что подтверждается достоверным, по сравнению с интактным контролем, снижением величин ОБА и СВА во все изучаемые сроки. Введение животным МФС оказывало стимулирующее влияние на восстановление элек­трической активности желудка в процессе заживления язвенного дефекта в стенке органа.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют об антиульцерогенном действии модифицированного фитобактериального средства. Эффективное восстановление биоэлектрической активности и морфофункционального состояния желудка непосредственно связано с ионообменными, адсорбционными, биокаталитическими, антиоксидантными, антирадикальными свойствами модифицированного фитобактериального средства, которые реализуются в условиях желудка.

Гепатопротекторное действие модифицированного

фитобактериального средства

Фармакотерапевтическая эффективность модифицированного фитобактериального средства при остром токсическом гепатите

Гепатопротекторное действие МФС показано на экспериментальных моделях в условиях острого токсического поражения печени CCl4.

По патогистологических исследованиях на 7-е сутки с момента введения четыреххлористого углерода в печени животных выявлены резкие структурные изменения, которые сводятся к значительным гемодинамическим нарушениям в виде полнокровия междольковых сосудов, расширения просвета центральных вен, утолщения их стенок с миграцией элементов крови в паренхиму органа, периваскулярного отека и расширения периваскулярного пространства, а также к выраженным изменениям гепатоцитов в форме жировой дистрофии.

В ранние сроки исследования в центре и вокруг некротических очагов отмечено снижение активности сукцинатдегидрогеназы (рис. 5).



Рис. 5 – Острый токсический гепатит, 7-е сутки. Печень белой крысы. Снижение активности сукцинатдегидрогеназы (А) по сравнению с интактом (Б). Окраска по Нахласу. 10 х 10.

В паренхиме органа наблюдается в различной степени выраженная клеточная инфильтрация. Острый процесс повреждения печени тетрахлорметаном протекает с участием пролиферативно-инфильтрационных реакций с образованием инфильтратов в портальных и перипортальных зонах по ходу кровеносных сосудов  и внутри долек.

В печени животных на 7-е сутки (контрольная группа животных) выявлены резкие структурные изменения в виде периваскулярного отека с очагами некроза. Повреждения носят характер жировой и клеточной инфильтрации. Наблюдается мелко- и среднекапельная жировая инфильтрация. Характерны гемодинамические нарушения.

На 14-е сутки все отмеченные нарушения продолжают сохраняться. Также выявлена деструкция стенок кровеносных сосудов, краевое стояние лейкоцитов у стенки сосуда с миграцией клеточных элементов в паренхиму органа. Гепатоциты с боковым или центральным расположением ядра, увеличены в размерах. Выражена клеточная инфильтрация внутри долек по ходу сосудов (рис. 6).

Рис. 6 – Острый токсический гепатит, 14-е сутки. Контрольная группа. Печень белой крысы. Выраженная клеточная инфильтрация внутри долек по ходу сосудов (А) и желчному протоку (Б). Окраска гематоксилином и эозином. Увел. 10 х 20.

В паренхиме печени обнаруживались очаги некроза, локализованные чаще в центролобулярных зонах.

На фоне введения МФС в печени слабее выражены признаки токсического гепатита, в частности, зернистая и клеточная инфильтрация, гемодинамические нарушения. На 7-е сутки введения модифицированного фитобактериального средства в паренхиме органа выявлены гипертрофированные и двуядерные гепатоциты и клетки Купфера. В большинстве случаев отсутствовали выраженные альтеративные изменения, отмечалась сохранность структуры долек и балок.

У  животных, получавших МФС, на 14-е сутки опытов гемодинамические нарушения и изменения в печени были выражены в гораздо меньшей степени, чем у контрольных животных. Центролобулярные очаги некроза исчезли, хотя гепатоциты, заполнившие их, еще не приближались к норме. Об активности регенераторных процессов судили по выявлению крупных темноокрашенных клеток с гипохромными ядрами, по частоте митозов и увеличению числа двуядерных гепатоцитов.

Клеточная инфильтрация внутри долек и по ходу сосудов не выражена. В инфильтратах преобладали гистиолимфоцитарные и макрофагальные элементы.

У животных, получавших МФС, быстрее проходили гемодинамические нарушения, отечный процесс, гораздо раньше по сравнению с контролем происходило замещение некротических очагов в центре долек вновь образованными гепатоцитами и за счет гипертрофии печеночных клеток, не подвергавшихся альтеративным изменениям, быстрее исчезали клеточные инфильтраты.

Во все сроки исследования вышеописанные признаки регенерации выявляли в печени животных, получавших модифицированное фитобактериальное средство гораздо чаще, чем у животных контрольной группы.

В экспериментальных исследованиях на модели острого гепатита выявлена способность модифицированного фитобактериального средства подавлять процессы цитолиза, нормализовать активность ферментов и метаболизм в клетках печени. Гепатопротекторное действие модифицированного фитобактериального средства сочетается с гиполипидемическим эффектом, тем самым предупреждая развитие дегенеративных процессов, перерождение клеток печени и возникновение фиброза.

Курсовое назначение исследуемого средства привело к торможению свободнорадикальных реакций в биологических мембранах гепатоцитов. Скорость накопления малонового диальдегида к 7 суткам развития токсического гепатита снижалась под действием модифицированного фитобактериального средства в 2,4 раза. Регуляция интенсивности ПОЛ данным средством уменьшала проницаемость и стабилизировала клеточные мембраны гепатоцитов, о чем свидетельствовало снижение активности АлАТ под действием модифицированного фитобактериального средства на 61%. Активность щелочной фосфатазы в сыворотке крови при введении модифицированного фитобактериального средства снижалась почти в 2 раза, содержание общего билирубина также в значительной степени снижалось.

К 14 суткам развития острого токсического гепатита у крыс исследуемое средство также оказывало благоприятное воздействие. Активность щелочной фосфатазы в сыворотке крови при введении модифицированного фитобактериального средства снижалась на 38%. Концентрация гликогена возрастала, по сравнению с показателями в контроле, в 1,5 раза.

К 21 суткам эксперимента при введении МФС у животных с экспериментальным гепатитом в значительной степени тормозился процесс перекисного окисления липидов: содержание МДА в печени снижалось под действием модифицированного фитобактериального средства в 1,8 раза. Также стимулировались процессы синтеза гликогена в ткани печени.

При микробиологическом исследовании толстого отдела кишечника отмечалась, что модифицированное фитобактериальное средство с экстрактом плодов шиповника и природным цеолитом оказывало положительное действие на состав микрофлоры толстого отдела кишечника (табл. 7).

Так, повышался титр бифидобактерий и лактобацилл, снижалось количество энтерококков, стафилококков, клостридий, грибов рода Кандида, возрастало по сравнению с данными у животных контрольной группы количество полноценной формы кишечной палочки и, соответственно, снижалось число бактерий с ослабленными свойствами.

Таблица 7 – Влияние модифицированного фитобактериального средства на состав микрофлоры кишечника белых крыс при остром токсическом гепатите (М±m, n=6) lgKOE/см3

Группы бактерий

Интактная группа (Н2О)

Контрольная группа

Опытные группы, получавшие МФС

7 сутки

14 сутки

21 сутки

Bifidobacterium sp.

7,26±0,39

4,71±0,32*

5,84 ±0,22

6,08 ±0,31**

6,63 ±0,26**

Lactobacillus sp.

6,07±0,29

4,30±0,18*

4,39 ±0,26

4,92 ±0,17

5,53 ±0,24**

Clostridium sp.

1,48±0,13

3,62±0,19*

2,83 ±0,20**

2,53 ±0,14**

2,00 ±0,16**

E.coli

5,31±0,23

5,58±0,26

5,44 ±0,16

5,53 ±0,18

5,64 ±0,14

Enterococcus sp.

4,35±0,20

6,63±0,25*

6,21 ±0,23

4,93 ±0,22**

4,09 ±0,21**

Staphylococcus

3,16±0,15

5,00±0,18*

4,77 ±0,21

4,58 ±0,17

4,31 ±0,18 **

Candida sp.

1,29±0,10

3,64±0,18*

3,23 ±0,14

3,08 ±0,22

2,63 ±0,18**

Примечание:  * - данные достоверны по сравнению с интактной группой при Р 0,05;

** - данные достоверны по сравнению с контрольной группой при Р 0,05.

Положительный эффект модифицированного фитобактериального средства на организм проявляется через нормализацию микробной экологии кишечника за счет стимуляции роста представителей индигенной микрофлоры, в результате синтеза витаминов и других ростстимулирующих факторов, нормализации рН, нейтрализации токсинов, изменения микробного метаболизма.

Модифицированное фитобактериальное средство реализует свое положительное влияние на физиологическую функцию и биохимические реакции либо непосредственно вмешиваясь в метаболическую активность клеток соответствующих органов и тканей, либо опосредовано через регуляцию функционирования биопленок на слизистых организма.

Таким образом, можно предположить, что под действием исследуемого средства происходит коррекция морфофункционального состояния печени и восстановление микрофлоры толстого отдела кишечника при остром токсическом гепатите. Возникшие морфофункциональные изменения обратимы, а коррекция их возможна при помощи модифицированного фитобактериального средства.

Фармакотерапевтическая эффективность модифицированного фитобактериального средства при хроническом токсическом гепатите

Изучение влияния МФС на биохимические и морфофункциональные показатели, характеризующие состояние печени белых крыс проводили по тем же критериям, что и при остром повреждении печени. МФС вводили внутрижелудочно в объеме 1 мл/100 г массы крысы, начиная с 61-го дня опытов в течение 30 дней. Исследования проводили на 30, 60 и 90-е сутки наблюдения.

По данным результатов исследования, интоксикация четыреххлористым углеродом сопровождается активацией свободнорадикального окисления липидов печени – уровень МДА в сыворотке крови повышается в 2 раза, причем максимальные значения отмечаются на 60-е сутки исследования. Одновременно в сыворотке крови повышаются уровни активности АлАТ и АсАТ, характеризующих синдром цитолиза. Комплексная оценка активности щелочной фосфатазы и содержания -липопротеидов свидетельствует о развитии синдрома холестаза, который более выражен в поздние сроки развития гепатита (60, 90-е сутки). Наблюдается нарушение пигментного обмена – повышено содержание общего билирубина. На этом фоне развиваются признаки диспротеинемии. Так, степень помутнения сыворотки крови превышает показатели интактных животных в 2 раза.

Курсовое введение МФС способствует более ускоренному восстановлению функции печени по сравнению с животными контрольной группы. Характерно, что позитивным изменениям подвержены все биохимические показатели функционального состояния печени. Фармакотерапия МФС препятствовала накоплению МДА в сыворотке крови на 43%. Снижалась активность АлАТ и АсАТ при введении МФС. Применение модифицированного фитобактериального средства способствует более быстрому устранению холестаза при снижении активности щелочной фосфатазы на 35%, -липопротеидов – на 28%.

Таким образом, применение модифицированного фитобактериального средства при хроническом токсическом гепатите оказывает положительное гепатопротекторное действие, нормализуя основные патогенетические линии ее повреждения.

Профилактическая эффективность модифицированного фитобактериального средства при расстройствах пищеварения

у телят до 1-месячного возраста

Одной из основных задач ветеринарной практики должна стать про­филактика незаразных болезней. Профилактика позволяет значительно умень­шить экономический ущерб, причиняемый снижением продуктивности, выбраковкой и гибелью больных животных.

Следовательно, профилактика болезней яв­ляется важным средством повышения устойчивости организма молод­няка крупного рогатого скота к различного рода заболеваниям.

Нами были проведены опыты по определению эффективности модифицированного фитобактериального средства, применяемого с целью профилактики расстройств пищеварения телят до 1-ме­сячного возраста во ВГУП учхоз «Байкал» ФГБОУ «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р. Филиппова».

В опытах было задействовано 20 клинически здоровых телят сим­ментальской породы, разбитых на 2 равные группы (по 10 голов в каж­дой). Животным первой (опытной) группы в течение 21 дня задавали МФС в дозе 250 мл с молозивом или молоком. Телятам второй (контрольной) группы МФС не задавали. Профилактическую эффективность модифицированного фитобактериального средства оценивали на осно­вании клинических наблюдений и морфологических ис­следований крови в начале и по окончании опыта.

Телята опытной и контрольной групп находились в аналогичных условиях кормления и содержания.

Данные показателей крови телят пред­ставлены в таблице 8.

Таблица  8 – Показатели крови телят (М ± m; n = 10)

Показатели

Начало опыта

Окончание опыта

Контрольная гр.

Опытная гр.

Контрольная гр.

Опытная гр.

Гемоглобин, г/100 мл

10,24 ±0,35

10,46 ±0,64

10,34 ±0,54

11,10 ±0,25

Лейкоциты, тыс/мкл

7,25 + 0,66

7,32 ± 0,34

7,48+0,45

7,92 ±0,68

Общий белок, г%

6,12 + 0,69

5,85 ±0,21

5,92 ±0,26

5,75+0,24

В результате проведенных исследований было установлено, что телята, получавшие МФС, хорошо развивались, были более активными, хорошо поедали корм, были менее подвержены, по сравнению с контрольной группой животных, различного рода заболеваниям, в частности расстройствам пищеварения. Полученные результаты мы склонны объяснять тем, что модифицированное фитобактериальное средство является эффективным профилактическим средством при желудочно-кишеч­ных заболеваниях телят.


Заключение

При введении модифицированного фитобактериального средства на острых моделях различных повреждений стенки желуд­ка у белых крыс установлено следующее: в меньшей степени были выражены гиперемия, отечность, сглаженность рельефа СОЖ. Деструктивные изменения СОЖ (эрозии, полосовидные язвы) выявлялись реже, чем в контроле, и дости­гали меньших размеров. Точечные и пылевидные кровоизлияния также прояв­лялись в меньшей степени по сравнению с контролем.

На модели хронической ацетатной язвы желудка по Окабэ у крыс было выявлено, что введение модифицированного фитобактериального средства приводило к уменьшению размеров язвенных дефектов в стенке желудка. Кроме того, было отмечено, что при лечении МФС язвенных повреждений стенки желудка угнетение кислото- и ферментообразующей функций его менее выражено, чем в контроле. Восстановление биохимических показателей желудочного сока на фоне фармакотерапии живот­ных МФС было более выраженным по сравнению с контролем.

На модели эксперимен­тального «рефлюкс-гастрита» у кроликов выявлено, что применение модифицированного фитобактериального средства  способствова­ло меньшему повреждению СОЖ и более активному ее восстановлению.

Желчные кислоты, особенно таурохолевая, растворяют слизь, повреждают липопротеидные мембраны поверхностного эпителия, нарушают обратную диффузию водородных ионов, что вызывает снижение кислотности желудочного сока, способствует развитию воспалительных и эрозивных процессов в слизистой оболочке дистальных отделов желудка. Желчь способна вызывать цитолиз клеток слизистой оболочки желудка, инициировать выход гистамина, который, в свою очередь, вызывает гиперемию, отек, вазодилятацию и, в конечном счете, развитие острых эрозий слизистой оболочки желудка. Нарушение целостности поверхностного эпителия СОЖ желчными кислотами проявляется набуханием клеток, увеличением межклеточных пространств. Предполагается, что одним из механизмов деструктивного влияния желчных кислот в отношении СОЖ является их способность повышать активность лизосомальных гидролаз, обусловливая одновременно их выход в цитоплазму, разрушение ими клеточных структур и гибель или метаплазию клеток.

У кроликов с «рефлюкс-гастритом» установлено, что язвенное повреждение стенки желудка кроликов сопровожда­лось угнетением биоэлектрической активности этого органа. Введение живот­ным модифицированного фитобактериального средства оказывало стимулирующее влияние на восстановление электрической активности желудка в процессе заживлений язвенных дефектов в стенке органа.

Проведенные патоморфологические исследования свидетельствовали о значительном фармакотерапевтическом эффекте МФС при экспериментальной язве желудка у белых крыс. На фоне введения этого средства наблюдали активацию регенераторных процессов, ускорение инволюции грубых деструкции и раннее восстановление морфофункционального состояния желудка.

Гастропротективное действие МФС следует объяснить его активными биологическими свойствами: активацией энергетического обмена в живых организмах, выра­жающейся в повышении скорости гликолиза и гликогенолиза в тканях; стиму­ляцией окислительных процессов в тканях, индукцией синтеза митохондриальных белков; влиянием как адсорбента-транспортера, иммобилизирующего и депонирующего пролонгаторы действия ферментов, желч­ных кислот и антиоксидантов; адсорбированием природным цеолитом токсинов; активизацией иммунных сил организма; привносом широкого спектра микроэлементов и селективным удалением эндогенных продуктов метаболизма.

Положительное влияние модифицированного фитобактериального средства на течение восстановитель­ных процессов в пищеварительной системе при язвенной болезни желудка в наших опытах, очевидно, связано с нормализацией моторно-эвакуаторной функции желудка и кишечника. Восстановление уровней биоэлектрической ак­тивности желудка, как показателя его двигательной деятельности, непосред­ственно обязано высоким адсорбционным, ионообменным и биокаталитиче­ским свойствам природных цеолитов, которые активно реализуются в условиях желудка и кишечника. Как известно, вследствие непрерывной секреции соля­ной кислоты при различных патологических состояниях происходит угнетение моторной деятельности желудка. Следует предположить, что при попадании природного цеолита, обладающего отрицательным зарядом каркаса происходят активные ионообменные процессы, которые выглядят как реакции замещения обменных катионов на протоны. Благодаря этому, значения рН среды желудка в присутствии при­родного цеолита в составе МФС могут повышаться за счет связыва­ния определенного количества водородных ионов. Таким образом, частицы цеолита в желудочном содержимом модифицируются в так назы­ваемые водородные формы (Н+-формы). В первую очередь, происходит активизация моторики желудка благода­ря существующей зависимости между моторикой желудка и кислот­ностью его среды. Кроме того, усиление биоэлектрической активности гладких мышц желудка может происходить вследствие повышения концентрации и вса­сывания ионов свободного кальция.  Протонированные формы (Н+-формы) частиц цеолита с желудочным содержимым попадают в двенадцатиперстную кишку, где подкисливающее действие их мо­жет быть значительным (до нескольких единиц рН), что оказывает существен­ное влияние на ферментативный катализ в полости кишечника.

На основании полученных данных можно предположить, что нормализа­ция угнетенной биоэлектрической активности желудка у животных с повреждением СОЖ, посредством введения МФС, вносит определенный вклад в ускорение темпов репаративного восста­новления структуры и функции поврежденного желудка.

Основным механизмом повреждения слизистой оболочки желудка яв­ляется дестабилизация клеточных мембран, которая происходит в результате перекисного окисления липидов. Большинство патологических состояний со­провождается изменением в свободнорадикальном перекисном окислении ли­пидов, уровень которого определяется соотношением систем, активи­рующих ПОЛ, и систем, осуществляющих антирадикальную защиту. Установлено, что появление в мембранах продуктов окисления липидов, осо­бенно перекисей, приводит к разобщению окислительного фосфорилирования, меняет структуру мембран и такие их свойства, как проницаемость и устойчи­вость липидбелковых компонентов, вызывает инактивацию ферментов, раз­рушение белков и, следовательно, вызывает изменения функциональной актив­ности мембран.

Механизм повреждающего действия CCl4 на гепатоциты заключается в том, что под воздействием микросомальных оксидаз в клетках образуются продукты его распада – свободные радикалы СС13+ и Сl+ (Britton, Bacon 1994). Наиболее вероятный ход развития повреждений печени заключается в способности образовавшихся свободных радикалов отнимать водород и инициировать процессы перекисного окисления полиненасыщенных жирных кислот в присутствии кислорода.

Исследование фармакотерапевтической эффективности модифицированного фитобактериального средства с использованием чистых культур бифидобактерий B. longum B 379 M и сухого водорастворимого экстракта из плодов шиповника с природным цеолитом показало, что курсовое введение на фоне токсического повреждения печени оказывало выраженное гепатопротекторное действие, характеризующееся нормализацией морфофункционального состояния печени на более ранних стадиях патологического процесса. В частности, на фоне введения модифицированного фитобактериального средства в печени наблюдалось усиление регенерации в паренхиме, увеличение СДГ, гликогена.

На фоне применения модифицированного фитобактериального средства ингибируются процессы перекисного окисления липидов и стабилизируются био­логические мембраны клеток печени. Это было установлено в экспериментах по изучению модифицированного фитобактериального средства на образование МДА в ткани печени и сыворотке крови у животных с токсическим гепатитом. Модифицированное фитобактериальное средство способствуют снижению накопления одного из ко­нечных продуктов ПОЛ – малонового диальдегида. Ингибирование гиперлипопереокисления в мембранных структурах гепатоцитов обусловлено высоким содержанием в модифицированном фитобактериальном средстве биологически активных веществ фенольной природы, являющихся природными антиоксидантами. Взаимодействуя со свободными радикалами, они замедляют интенсивность радикальных реакций с уменьшением активности и концентрации образующихся токсичных перекисных продуктов. В процессе ингибирования сво­боднорадикальных реакций фенолами, как правило, образуются семихинонные радикалы, ответственные за антиоксидантный эффект (Барабой В.А.,1984). Мож­но полагать, что флавоноидные соединения, входящие в состав испытуемого средства, оказывают также опосредованное антиоксидантное действие, выражаю­щееся в способности защищать от окислительной деструкции важнейшие эндо­генные антиоксиданты: адреналин, тиоловые соединения, аскорбиновую кислоту, способствуя тем самым усилению и пролонгированию их эффектов. Бифидосодержащий компонент модифицированного фитобактериального средства также может опосредовано ингибировать свободнорадикальные процессы. Известно, что в па­тогенезе повреждений печени определенную роль играют липополисахариды грамотрицательных бактерий, количество которых значительно увеличивается при дисбиотических изменениях в кишечнике. При ней­трализации эндотоксинов грамотрицательных микроорганизмов за счет антагони­стического действия бифидобактерий характер повреждений печени значительно модифицируется, протекает легче. Не исключено, что это связано с усилением захвата и нейтрализации токсинов синусоидальными клетками печени, либо тор­можением ПОЛ в мембранах гепатоцитов, которое наблюдается при стимуляции клеток Купфера (Маянский Д.Н., 1988; Сибиряк С.В., 1998).

Модифицированное фитобактериальное средство оказывает выраженное мембраностабилизирующее действие на ранних этапах развития хронического токсического гепатита. При этом оно препятствует выходу в кровь мембраносвязанных ферментов. Следовательно, под влиянием курсового введения модифицированного фитобактериального средства животным с экспериментальным гепатитом происходит снижение проницаемости мембран печеночных клеток, которое сопровождается снижением активности органоспецифических ферментов в сыворотке крови.

На основании проведенных исследований нами получены данные о количе­ственном и качественном составе содержимого толстого отдела кишечника у крыс с острым токсическим повреждением печени. Оказалось, что у животных, наряду с клиническими проявлениями, патоморфологическими, биохимическими измене­ниями в печени, наблюдался глубокий дисбаланс микрофлоры в толстом отделе кишечни­ка, свидетельствующий о том, что токсические повреждения печени сопровождаются заметным снижением колонизационной резистентности кишечного тракта. Это проявлялось в увеличении пула условно-патогенных грамотрицательных аэробных бактерий, грибов, клостридий, уменьшении числа лакто- и бифидобактерий.

Изучение влияния модифицированного фитобактериального средства на со­став микробной экологии толстого кишечника белых крыс при остром токсическом по­вреждении печени свидетельствует о благоприятном влиянии  МФС на кишечную микрофлору. Интоксикация CCl4 сопровождается дисбиотическими изменениями в микроэкологии толстого отдела кишечника. Курсовое введение МФС улучшает состав кишечной микрофлоры крыс с токсическим гепати­том. Так, значительно повышается титр бифидобактерий во все сроки наблюдения при повышении количества лактобактерий, что свидетельствует о повышении колонизационной резистентности кишечника. При этом снижается количество условно-патогенных бактерий, грибов рода Кандида, преобладает ферментативно полноценная кишечная палочка, что уменьшает нагрузку на печень в условиях ее повреждения. Положительный эффект бифидобактерий на организм также проявляется через нормализацию микробной экологии кишечника за счет стимуляции роста представителей индигенной микрофлоры в результате продукции витаминов и других ростстимулирующих факторов, нормализации рН, нейтрализации токси­нов, изменения микробного метаболизма.

Следует отметить, что улучшение микробной экологии толстого кишечника белых крыс при токсическом повреждении печени коррелирует с нормализацией функционального состояния печени животных, и в целом всей пищеварительной системы. Проведенные исследования опре­деляют целесообразность включения средств, нормализующих микробную эколо­гию, в комплексную фармакотерапию токсических повреждений печени и желудка.

В ходе проведенных экспериментальных исследований установлено по-ложительное влияние модифицированного фитобактериального средства на течение экспериментальных повреждений желудка и печени.

Синергизм действия компонентов модифицированного фитобактериального средства в комплексе обеспечивает его высокую фармакотерапевтическую эффективность.

Сочетанное применение пробиотика, как одного из доминантных  представителей нормальной микрофлоры кишечника, – бифидобактерий, с растительным экстрактом плодов шиповника и минеральной добавкой – природным цеолитом, позволит потенцировать эффективность каждого компонента воздействием на различные звенья патологического процесса.

Механизм фармакотерапевтической эффективности основан на способности МФС ингибировать свободнорадикальное окисление липидов и стабилизировать клеточные мембраны, благодаря содержанию биологически активных веществ фенольной природы в экстрактах плодов шиповника, метаболической активности бифидобактерий и адсорбционным и биокаталитическим свойствам природного цеолита (рис. 7).


Рис. 7. Механизм действия модифицированного фитобактериального средства

Полученные результаты исследований аргументируют целесообразность применения  модифицированного фитобактериального средства в комплексном лечении и при профилактике заболеваний желудка и печени.

Модифицированное фитобактериальное средство успешно применялось в клинической практике. Результаты клинических исследований показывают профилактическую эффективность модифицированного фитобактериального средства при расстройствах пищеварения у телят крупного рогатого скота до 1-месячного возраста.

Значимость проведенных исследований во многом определяется перспективами, которые они открывают. Целесообразно дальнейшее расширение сферы применения модифицированного фитобактериального средства при заболеваниях желудка и печени,  при оперативных вмешательствах на различных отделах желудочно-кишечного тракта, в экстремальных условиях, при длительной лучевой, химио- и антибактериальной терапии и т.п.

ВЫВОДЫ

  1. Модифицированное фитобактериальное средство в дозе 1 мл/100 г массы животного при экспериментальных язвах желудка у крыс: острой язве по Shay и хронической  – по Окабэ, способствовало активации регенераторных процессов, ускорению инволюции грубых деструкций и раннему восстановлению морфофункционального состояния желудка.
  2. Модифицированное фитобактериальное средство оказывало выраженное противоязвенное действие при повреждениях (аспириновом, атофановом, бутадионовом, резерпиновом) слизистой оболочки желудка белых крыс и желчном гастрите у кроликов, которое характеризовалось снижением индекса Паулса для точечных кровоизлияний, эрозий и полосовидных язв.
  3. При курсовом введении модифицированного фитобактериального средства при экспериментальных язвах содержание малонового диальдегида в гомогенате ткани желудка достоверно снижалось с 3,6±0,12 нмоль/г до 2,0 нмоль/г по сравнению с контролем. При повреждениях слизистой оболочки желудка различной этиологии МДА достоверно снижался по сравнению с контролем, что свидетельствовало об ингибирующем влиянии модифицированного фитобатериального средства на перекисное окисление липидов и о его мембраностабилизирующем эффекте.
  4. При желчном гастрите, вызванном медицинской желчью у кроликов, введение модифицированного фитобактериального средства в дозе  1 мл/100 г массы животного обеспечивало более ускоренное, чем в контроле, восстановление показателей электрогастрограмм и восстановление секреторной функции желудка.
  5. Введение модифицированного фитобактериального средства крысам с острым и хроническим токсическим гепатитом, вызванным CCl4, сопровождалось выраженной гепатопротекторной эффективностью, которая проявлялась торможением процессов перекисного окисления липидов, снижением концентрации АлАТ и АсАТ, щелочной фосфатазы, усилением синтеза нуклеиновых кислот, что предохраняло структурную и функциональную организацию печени при ее токсических повреждениях.
  6. Репаративные процессы в поврежденной CCl4 печени белых крыс, получавших модифицированное фитобактериальное средство, осуществлялись, в основном, за счет деления гепатоцитов путем митоза и гипертрофии клеток печени, которые отражали активацию регенерации ткани печени за счет образования новых клеток и полиплоидизации гепатоцитов.
  7. Введение животным с экспериментальным гепатитом модифицированного фитобактериального средства способствовало повышению в печени, по сравнению с контролем, содержания гликогена и повышению активности сукцинат- и лактатдегидрогеназ, а также снижению степени жировой инфильтрации.
  8. Введение модифицированного фитобактериального средства белым крысам с токсическим гепатитом, вызванным четыреххлористым углеродом, значительно улучшало показатели состава микрофлоры толстого отдела кишечника, которые характеризовались повышением количества бифидо- и лактобактерий, нормальной кишечной палочки, снижением содержания стафиллококков, энтерококков, клостридий, грибов рода Кандида. Нормализация кишечной микрофлоры коррелирует с улучшением структурно-функциональной организации печени, что указывает на обоснованность терапии модифицированным фитобактериальным средством при токсических повреждениях печени.
  9. Основным и общим механизмом действия модифицированного фитобактериального средства при различных патологических состояниях (повреждениях желудка и печени различной этиологии), очевидно, является способность указанного средства подавлять перекисное окисление липидов, стабилизировать биологические мембраны, активизировать митоз клеток, нормализовать синтез нуклеиновых кислот, ускорять инволюцию деструкций желудка и печени.
  10. Сочетанное применение пробиотика, одного из доминантных представителей нормальной микрофлоры кишечника, – бифидобактерий, с сухим растительным экстрактом плодов шиповника и минеральной добавкой – природным цеолитом, позволяет потенцировать эффективность каждого компонента воздействием на различные звенья патологического процесса.
  11. В клинических испытаниях показана эффективность применения модифицированного фитобактериального средства для профилактики  расстройств пищеварения у телят крупного рогатого скота до 1-месячного возраста.

Рекомендации для практического применения

  1. Природные лекарственные средства: экстракт плодов шиповника, бифидобактерии шт. В. longum B 379M, природный цеолит могут быть использованы при профилактике расстройств пищеварения у телят, при отравлении сельскохозяйственных животных недоброкачественными кормами.
  2. Модифицированное фитобактериальное средство является перспективным гепатопротекторным, антиульцерогенным комплексным средством, нормализующим микрофлору кишечника. Может быть рекомендовано для использования в ветеринарной практике для профилактики и регенерационной терапии желудка, печени, дисбиозов кишечника, что позволит обеспечить клинические учреждения безвредным эффективным средством и позволит снизить экономические затраты, связанные с закупкой импортных лекарственных препаратов.
  3. Полученные данные о динамике изменений электрогастрографических показателей при оценке биоэлектрической активности органов при фармакотерапии модифицированным фитобактериальным средством могут быть использованы при чтении лекций студентам - бакалаврам, магистрам, при проведении практических занятий на ветеринарных и биологических отделениях вузов, при написании учебных пособий, руководств по терапии, физиологии, патологии сельскохозяйственных животных.
  4.   Результаты исследований могут быть использованы в научно-исследовательской и практической работе аспирантов, ветеринарных врачей, специалистов-биологов, при написании монографий и учебно-методических и научных изданий.

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации

Монографии

  1. Максарова Д.Д. Морфофункциональные повреждения желудка животных и их коррекция средствами природного происхождения: Монография / Д.Д. Максарова. Улан-Удэ: Изд-во Бурятского гос. ун-та, 2011. 112 с.

Статьи в рецензируемых научных журналах и изданиях

  1. Максарова Д.Д. Оценка эффективности действия цеолита на течение аспиринового повреждения слизистой оболочки желудка у крыс / Вестник БГУ (секция: биология, география). 2009. Вып. 4. С.83-85.
  2. Максарова Д.Д., Балданов Б.Б. Морфофункциональные изменения печени крыс при остром токсическом отравлении и их коррекция цеолитбифидосодержащим и фитобактериальным средствами / Вестник БГУ (секция: биология, география) 2010.  Вып. 4. С.184-186.
  3. Максарова Д.Д., Тармакова С.С. Оценка морфофункциональных изменений печени крыс при остром токсическом отравлении и их коррекция комплексными природными средствами / Ветеринарный врач. 2010. № 3. С. 151-155.
  4. Максарова Д.Д. Оценка морфофункционального действия комплексного средства  растительного происхождения на течение индометацинового повреждения слизистой оболочки желудка белых крыс / Вестник БГСХА им. В.Р. Филиппова. 2011.  №2 (23). С. 120-123.
  5. Максарова Д.Д. Влияние пробиотиков на структурно-функциональное состояние печени крыс в условиях экспериментального острого токсического гепатита / Вестник БГСХА им. В.Р. Филиппова. 2011. №3 (24). С. 20-24.
  6. Максарова Д.Д. Влияние пробиотиков на регенерацию печени крыс в условиях экспериментального острого токсического гепатита / Вестник БГУ (секция: биология, география). 2011. Вып.4, Ч.1. С.178-181.
  7. Тармакова С.С., Цыбикова Л.А., Максарова Д.Д. Фармакотерапевтическая эффективность фитобактериального средства, обладающего гастрозащитной активностью / Вестник БГУ (секция: биология, география). 2011. Вып.4А. С. 293-301.
  8. Максарова Д.Д. Оценка гастропротективного влияния цеолита на модели повреждения слизистой оболочки желудка у белых крыс по Shay / Материалы II Международной научно-практической конференции «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине». СПб, 2011. С. 393-395.
  9. Тармакова С.С., Цыбикова Л.А., Максарова Д.Д. Фитобактериальное средство с гастрозащитным действием / Материалы XI Международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования, разработка и применение высоких технологий в промышленности. СПб. 2011. Т.2. С.233-234.
  10. Максарова Д.Д. Природные лекарственные средства при токсико-дистрофическом повреждении желудка / Материалы II Международной научно-практической конференции «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине». СПб, 2011. С. 389-395.
  11. Максарова Д.Д. Оценка влияния модифицированного фитобактериального средства на состав микрофлоры толстого кишечника белых крыс //Материалы XII Международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования, разработка и применение высоких технологий в промышленности». 8-10 декабря 2011. Санкт-Петербург, Россия / под ред. А.П. Кудинова. СПб.: Изд-во Политехн. ун-та, 2011. Т.3. Ч.2. С. 156-158.
  12. Максарова Д.Д. Терапия структурно-функциональных повреждений печени модифицированным фитобактериальным средством/ Вестник БГУ, (секция: биология, география). 2011. Вып. 14А. С. 279-283.
  13. Максарова Д.Д. Гепатопротекторное действие средства природного происхождения / Материалы XII Международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования, разработка и применение высоких технологий в промышленности» 8-10 декабря 2011. Санкт-Петербург, Россия / под ред. А.П. Кудинова. СПб.: Изд-во Политехн. ун-та, 2011. Т.2. СПб, 2011. С. 269-270.
  14. Максарова Д.Д. Тармакова С.С. Профилактическая эффективность модифицированного фитобактериального средства при расстройствах пищеварения у телят до 1-месячного возраста/ Вестник БГУ, (секция: биология, география). 2011. Вып.4А. С. 283-285.
  15. Максарова Д.Д.  Влияние модифицированного фитобактериального средства на течение аспиринового повреждения слизистой оболочки желудка белых крыс // Вестник БГСХА им. В.Р. Филиппова. №2. 2012. C. 25-28.
  16. Максарова Д.Д., Тармакова С.С. Биохимические показатели функционального состояния печени белых крыс под воздействием модифицированного фитобактериального средства при остром токсическом гепатите // Вестник БГУ. Вып.4. 2012. C. 215-221.
  17. Максарова Д.Д. Морфофункциональная оценка действия модифицированного фитобактериального средства на течение хронической ацетатной язвы желудка по Окабэ у белых крыс / Материалы III Международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования, разработка и применение высоких технологий в промышленности». СПб, 2012. С. 383-389.
  18. Максарова Д.Д. Оценка гастропротекторного действия фитобактериального средства на модели резерпинового повреждения СОЖ белых крыс // Вестник БГУ. Вып.4. 2012. С. 205-210.

Статьи в других научных изданиях

  1. Максарова Д.Д. Антиульцерогенное влияние цеолита Холинского месторождения (Бурятия) в опытах на крысах / Материалы IV Всеросс. Национального конгресса «Человек и лекарство». М., 1997. С.41
  2. Максарова Д.Д. Исследование безопасности цеолитсодержащей породы Холинского месторождения Бурятии/  Материалы IV Всеросс. национального конгресса «Человек и лекарство». М., 1997. С. 137.
  3. Максарова Д.Д. Безопасность цеолита Холинского месторождения (Бурятия) и оценка влияния его при язве желудка у белых крыс / Материалы Международной научно-практической конференции «Природные минералы на службе человека» (Минеральная среда и жизнь). Новосибирск, 1997. С.72-74.
  4. Максарова Д.Д. Характеристика безопасности цеолитсодержащей породы Холинского месторождения Бурятии / Труды Бурятской ГСХА. Ветеринария. Улан-Удэ, 1997. С.111-112.
  5. Максарова Д.Д. Эндемический зоб сельскохозяйственных животных Восточной Сибири и меры борьбы с ним / Тез. докл. Всеросс. научно-практической конференции «Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники». Чита, 1997. С.149-150.
  6. Максарова Д.Д. Влияние  цеолита на течение «рефлюкс-гастрита» у кроликов / Сборник научных трудов ВСГТУ. Серия: «Химия биологически активных веществ». Улан-Удэ, 1998. С.121-122.
  7. Максарова Д.Д. Оценка влияния цеолита Холинского месторождения на содержание малонового диальдегида в гомогенате ткани желудка при аспириновом повреждении СОЖ и морфологическая оценка влияния цеолита на модели хронической язвы желудка у кроликов по Окабэ / Тез. докл. Всеросс. научно-практической конференции. Барнаул, 1998. С.158-159.
  8. Максарова Д.Д. О возможности заживления ран кожи средствами природного происхождения / Материалы Международной конференции ветеринарных морфологов «Актуальные вопросы видовой и возрастной морфологии животных и пути совершенствования преподавания морфологических дисциплин». Улан-Удэ, 1998. С.252-254.
  9. Максарова Д.Д. Фармакотерапия язвы желудка у кроликов цеолитом Холинского месторождения / Материалы Международной конференции ветеринарных морфологов «Актуальные вопросы видовой и возрастной морфологии животных и пути совершенствования преподавания морфологических дисциплин». Улан-Удэ, 1998. С.165-166.
  10. Максарова Д.Д. Оценка влияния цеолитовых туфов Холинского месторождения (Бурятия) при токсическом повреждении печени и раневых повреждения кожи животных / Материалы Международной конференции ветеринарных морфологов «Актуальные вопросы видовой и возрастной морфологии животных и пути совершенствования преподавания морфологических дисциплин». Улан-Удэ, 1998. С.150-151.
  11. Максарова Д.Д. Модифицированные цеолиты – стимуляторы регенерации тканей / Материалы V Международной научно-практической конференции «Проблемы охраны окружающей среды и рационального природопользования Прикаспия и сопредельных регионов». Элиста, 2006. С.150.
  12. Максарова Д.Д. Оценка гастропротективного действия средства растительного происхождения при лекарственных повреждениях слизистой оболочки желудка крыс / Материалы Международной научно-практической конференции «Роль физиологии в современном естествознании». Чита, 2007. С.38-39.
  13. Максарова Д.Д. Гастропротективное действие средства минерального происхождения – цеолита Холинского месторождения / Материалы Международной научной конференции «Нейрогуморальные механизмы регуляции органов пищеварительной системы в норме и при патологии». Томск, 2007. С. 85-87.
  14. Максарова Д.Д. Оценка и коррекция комплексными природными средствами морфофункциональных изменений печени крыс при остром токсическом отравлении / Материалы Международная научная конференция, посвященная 15-летию Бурятского государственного университета «Актуальные исследования Байкальской Азии». Улан-Удэ, 2010. С.125-127.
  15. Максарова Д.Д. Коррекция структурно-функциональных нарушений печени белых крыс при остром токсическом гепатите с помощью бифидосодержащих средств / Материалы IX Международной научно-практической конференции «Проблемы охраны окружающей среды и рационального природопользования Прикаспия и сопредельных регионов». Элиста, 2010. С.125-130.
  16. Максарова Д.Д. Микроэкологические нарушения печени крыс при остром токсическом гепатите / Материалы IX Международной научно-практической конференции «Проблемы охраны окружающей среды и рационального природопользования Прикаспия и сопредельных регионов». Элиста, 2010. С.133-136.



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.