WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

АСРУТДИНОВА РЕЗИЛЯ АХМЕТОВНА

фармако-токсикологические свойства и применение гала-вета   для повышения неспецифической резистентности сельскохозяйственных животных

06.02.03– ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора ветеринарных наук

Казань – 2010

Работа выполнена в Государственном научном учреждении «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии» Россельхозакадемии 

Научный консультант :  доктор биологических наук, профессор

Дорожкин Василий Иванович

  Официальные оппоненты :  доктор биологических наук, доцент

  Гасанов Ализаде  Солтан  оглы

доктор ветеринарных  наук, профессор

Мартынов Геннадий Николаевич

доктор ветеринарных  наук, профессор

Яковлева Елена Григорьевна

 

  Ведущая организация : Федеральное государственное учреждение «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ»)

  Защита состоится  «22»  октября  2010 г. в  _____ часов на заседании диссертационного совета  Д. 220.034.02 при  ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана» по адресу : 420074 г. Казань, улица Сибирский тракт, 35.

  С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана».

  Автореферат разослан « » ___________  2010 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, 

доктор биологических наук  Н.Н.Мухаметгалиев

  1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ



Актуальность темы. В настоящее время проблема иммунной недостаточности у сельскохозяйственных животных  выходит на первое место, особенно при переводе хозяйств на промышленную основу и создания комплексов с большой концентрацией поголовья животных на небольшой территории. Это приводит к снижению естественной резистентности организма и появлению различных заболеваний, особенно у молодняка  в первые месяцы жизни. Эти обстоятельства настоятельно требуют применения эффективных средств, направленных на устранение иммунодефицитных состояний и повышения резистентности организма животных.

Наиболее актуальной в настоящее время является проблема возрастных иммунодефицитов, которые развиваются у животных особенно в неонатальный и молочный периоды.

Ослабление естественной резистентности и иммунологической реактивности организма  является одной из главных причин распространения и неблагоприятного течения болезней различной этиологии. Недостаточность иммунной системы, связанная с морфологическими и функциональными особенностями развития новорожденных, углубляет тяжесть течения заболеваний, способствует частым рецидивам и обуславливает слабую эффективность специфических методов лечения, провоцирует патогенность банальной микрофлоры (Лысикова М., 2004; Горбатенко С.К., 2006).

Поэтому, диагностика иммунодефицитных состояний животных, а также поиск и разработка препаратов, действующих на функциональную активность отдельных звеньев иммунной системы, является в настоящий момент одной из главных задач современной науки (Дорожкин В.И.,1997; Пинегин Б.В.,2000; Семенова Н.Н.,2006; Шахов А.Г.,2006; Goldfarb R.H.,1981; Peterman G.M.,1984; Йотова И.,1989).

К таким препаратам, на наш взгляд принадлежит гала-вет, являющийся производным фталгидразида. Гала-вет в химическом отношении представляет собой  5-амино-2,3-дигидрофталазин -1,4-дион натрия. Эмпирическая формула : С8Н6N3O2Na. Содержание действующего вещества – 93 - 100 % (в расчёте на сухое вещество).

Препарат представляет собой мелкокристаллический порошок, белого или бледно-желтого цвета, легко растворим в воде, физиологическом растворе и спирте.

Цель и задачи исследований. Цель данной  работы состояла в изучении токсических свойств и фармакологического действия гала-вета, с тем, чтобы предложить препарат для использования в ветеринарии в качестве эффективного иммунотропного средства для повышения неспецифической резистентности и коррекции иммунного статуса животных.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1.Определить токсикологические свойства гала-вета при применении на лабораторных и продуктивных животных (параметры и класс токсичности, хроническую токсичность, раздражающие, аллергенные, эмбриотоксические, кумулятивные и тератогенные свойства, субхроническую токсичность и переносимость);

2. Разработать оптимальные схемы применения и выявить физиологически и экономически обоснованные дозы  препарата, при которых достигается наиболее высокая сохранность и продуктивность животных;

3. Изучить влияние различных доз гала-вета на некоторые клинико-биохимические показатели и естественную резистентность   поросят, телят и птицы;

4. Оценить эффективность применения  иммунотропных препаратов при пониженной резистентности животных;

6. Провести ветеринарно-санитарную и физико-химическую оценку мяса  животных (птицы),  получаемого после применения препарата.

Научная новизна работы. Изучены фармакологические и токсикологические свойства гала-вета. Фармакодинамика гала-вета обусловлена положительным действием на сохранность, продуктивность и показатели неспецифической резистентности организма животных. Установлено, что гала-вет в рекомендуемых дозах и сроках применения повышает показатели  лейкопоэза, бактерицидную активность сыворотки крови,  фагоцитарную активность нейтрофилов, увеличивает содержание Т- и В лимфоцитов в крови, стимулирует обменные процессы.

Установлено, LD50 гала-вета для крыс при внутрибрюшинном введении составляет 1630 мг/кг, при внутримышечном введении –  2410 мг/кг;  для мышей – 1270 мг/кг и 1690 мг/кг, что позволяет отнести его к малотоксичным препаратам. Гала-вет не обладает местнораздражающим, аллергенным, кумулятивным и эмбриотропным действием, что гарантирует безопасность его применения животным.

Определены показания к применению, оптимальные дозы и схемы рационального использования гала-вета в ветеринарной практике. При ветеринарно-санитарной экспертизе установлено, что применение гала-вета не оказывает отрицательного влияния на санитарно-гигиенические  показатели мяса животных.

  Практическая значимость работы. На основании результатов исследований  предложен препарат для повышения неспецифической  резистентности организма поросят, телят и птицы.

Материалы исследований включены в наставление по применению гала-вета, утвержденное Департаментом ветеринарии МСХ РФ 19 июня 2001 года (протокол №3) и в методические рекомендации «Принципы рационального применения иммунокорригирующих средств в ветеринарной медицине», утвержденные отделением ветеринарной медицины РАСХН в 2009 году.

Препарат выпускает ЗАО  ЦСМ «Медикор» (г. Москва).

Теоретические разработки диссертации используются в учебном процессе на факультете ветеринарной медицины  ФГОУ ВПО КГАВМ и ФГОУ ВПО БГАУ.

Апробация работы. Результаты экспериментальных и клинических исследований доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях Ученых Советов ВНИВИ (г. Казань) 1990-1994 гг., Казанской государственной академии ветеринарной медицины (1995-2008), на международных научно-практических конференциях: посвященных 135-летию КГАВМ «Современные подходы развития АПК» (Казань, 2008); 35-летию  ФГОУ ВПО «Смоленская ГСХА» (Смоленск, 2009); 55-летию зооинженерного факультета Ижевской ГСХА (Ижевск, 2009);  всероссийских и республиканских научно-производственных конференциях по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 1995, 1996, 1997, 1999); научной конференции, посвященной 70-летию НИИ микробиологии МО РФ (Киров, 1998); республиканской научно-производственной конференции по актуальным вопросам профилактики и лечения сельскохозяйственных и домашних животных (Калининград, 1998), Всероссийской научно-методической конференции по зоогигиене, посвященной 70-летию Санкт-Петербургской академии ветеринарной медицины и памяти проф. И.М.Голосова (Санкт-Петербург, 2002); на семинаре RSAVA Гильдии практикующих ветеринарных врачей Республики Татарстан (Казань, 2009);  на межлабораторном заседании ГНУ ВНИИВСГЭ (Москва, 2010).

Основные положения, выносимые на защиту :

  • гала-вет является перспективным препаратом, позволяющим восстанавливать неспецифическую резистентность организма у ослабленного молодняка сельскохозяйственных животных;
  • гала-вет является малотоксичным  соединением, не обладает местнораздражающим, кумулятивным, эмбриотоксическим и тератогенным свойствами;
  • гала-вет в рекомендуемых дозах и сроках благоприятно влияет на морфо- биохимический состав крови, повышает естественную резистентность молодняка сельскохозяйственных животных;
  • применение гала-вета способствует увеличению сохранности молодняка, повышению их среднесуточных приростов, не оказывает отрицательного влияния на вкусовые и технологические свойства мяса животных;
  • гала-вет по своей эффективности превосходит миелопид и натрия нуклеинат. Его применение в ветеринарии  экономически выгодно.

  Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 28 научных работ в сборниках всероссийских и междунардных конференций, центральных журналах и отдельных изданиях (из них 8 в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК Минобразования РФ).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 295 страницах стандартного компьютерного набора и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений и приложения. Библиографический список включает 444 источника, в том числе 102 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 61 таблицами и 13 рисунками.

  1. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

       Работа выполнялась в течение 1993-2009 гг.  в условиях лаборатории токсикологии и санитарии кормов ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии» Россельхозакадемии,  лаборатории ветеринарной дезинфекции и микробиологии Всесоюзного научно-исследовательского ветеринарного института (г. Казань), кафедры зоогигиены ФГОУ ВПО « Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана».

Производственные опыты проводились в «Агрофирме «ВАМИН Марджани», Агрофирме «Гигант» Арского района, ООО АФ «Бор» Кукморского района, ООО «имени Тимирязева» Балтасинского района, СПК «Победа», СПК «Тан» Агрызского района, СХПК «Ташчишма» Атнинского района, ООО «Булгар» Сабинского района Республики Татарстан, ООО «Возрождение» Красногвардейского района, колхозе им. Фрунзе Белгородского района Белгородской области, СХПК колхоза «Зерновой» Кировской областив условиях птицефабрик Татарстана (ОАО «Ак Барс-Пестрецы», ОАО СХП «Юбилейное»).

Экспериментальные и научно-производственные опыты проведены в соответствии с установленными требованиями к эксперименту по подбору аналогов, постановке контроля, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания животных в период работы и учета результатов. При постановке опытов были использованы токсикологические, фармакологические, клинические, биохимические, морфологические, иммунологические, физиологические, зоогигиенические и другие методы исследований.

В  лабораторных, научно-хозяйственных и широких производственных опытах использовано 998 белых беспородных крыс и мышей, 110 морских свинок, 87 кроликов,  650 поросят, 360  телят, 2540 цыплят.

Общетоксические свойства гала-вета оценивали путем определения острой, субхронической и хронической токсичности, местно-раздражающего и аллергенного действия. Определение острой токсичности проводили на мышах, белых крысах при трех способах введения по методу Г.Кербера (1931).  Препарат готовили ex tempora на физиологическом растворе и вводили в дозах 3100, 2800, 2500, 2200, 1900, 1600, 1300, 1000, 700 и 400 мг/кг. Каждую дозу испытывали на 10 животных при разных способах введения. Для контрольных животных использовали физиологический раствор в тех же объёмах. Среднюю смертельную дозу (LD50) определяли по Керберу (Беленький М.Л., 1963).

               Субхроническую токсичность гала-вета определяли при инъекционном его введении общепринятым методом. В опытах использовали поросят-сосунов 20-суточного возраста обоего пола, телят профилакторного возраста  и цыплят 15-суточного возраста. Первая группа у каждого вида животных была контрольной. Второй, третьей и четвёртой опытным группам внутримышечно вводили препарат из расчёта 81,5, 163,0 и 326,0 мг/кг массы животных, равной 1/20, 1/10 и 1/5 ЛД50.  Препарат применяли в течение 20 суток.

               На основании результатов изучения острой и хронической токсичности гала-вета определяли коэффициент кумуляции (Ккум.) по Ю.С.Каган, В.В.Станкевич (1968).

О токсичности препарата судили по клинической картине, количеству погибших животных и по результатам патологоанатомического вскрытия.

Переносимость гала-вета изучали на поросятах, телятах и птице-цыплятах. Испытуемый препарат применяли внутримышечно ежедневно в течение 20 суток  в условно-терапевтической дозе и  в дозах, в 3 и 5 раз превышающих условно-терапевтическую.  По окончании эксперимента проводили биохимические исследования сыворотки крови.

В период проведения экспериментов у животных определяли морфологический и биохимический состав крови, выводили лейкограмму.

Исследование токсичности остаточного количества гала-вета в мясе животных проведены на 60 белых крысятах, мышах (самцах) – 3 опытных и 3 контрольных группах (по 10 в каждой группе)- на каждый срок исследования. Проваренное в течение 2 часов мясо поросят, полученное через 3, 15 и 30 суток после последней курсовой обработки гала-ветом скармливали мышам и крысятам ежедневно в течение 30 суток из расчета 50 г/кг массы тела в день. 

Выявление кожно-резорбтивного действия изучаемого препарата проводили по методике И.В.Саноцкого (1970).  Местнораздражающее действие проверяли на кроликах коньюнктивальной пробой (Хмельницкий Г.А.,1987). Аллергизирующее действие выявляли на  морских свинках методом накожных аппликаций препарата в нативном виде и в разных разведениях и методом оценки тяжёлой пищевой анафилаксии. До сенсибилизации (исходные данные), перед введением разрешающей дозы и после неё учитывали массу тела, ректальную температуру, количество лейкоцитов, реакцию специфической агломерации лейкоцитов (РСАЛ). Положительной считали пробу, в которой агломерация (склеивание) лейкоцитов превышала контрольные данные не менее чем на 30%. Опыт проводили по методу О.Г.Алексеевой и др.(1974).

Эмбриотоксическое и тератогенное действие препарата изучали на 7-суточных куриных эмбрионах и крысах-самках. Куриным эмбрионам препарат вводили в желточный мешок в  разных дозах: 0,5, 0,1 и 0,01 ЛД50 для эмбрионов, установленных ранее при изучении острой токсичности. На каждую дозу препарата брали по 30 эмбрионов. В контроле 30 эмбрионов оставались интактными, другим 30 вводили в желточный мешок изотонический раствор натрия хлорида. Инкубировали яйца по общепринятому режиму. На 19 сутки инкубации от каждой группы отбирали по 20 яиц и убивали эмбрионы, помещая яйца на 30 минут в морозильную камеру холодильника. Затем эмбрионы извлекали, осматривали и взвешивали, измеряли их краниокаудальный размер, размеры грудных и тазовых конечностей.

        Влияние препарата на детоксицирующую функцию печени изучали на модели гексеналового сна. Гексенал вводили внутрибрюшинно крысам в дозе 80  мг/кг массы  тела в форме 1%-ного раствора, при этом регистрировали продолжительность гексеналового сна, которую в контрольной группе принимали за 100%.

Наряду с этим были проведены патоморфологические исследования органов и тканей животных, использованных в опыте по изучению хронической токсичности. В качестве объекта для изучения служили внутренние органы белых нелинейных крыс: печень, селезенка, почки, легкие и сердце, а также внутренние органы поросят 4-месячного возраста  крупной белой породы: желудок, тонкий и толстый кишечник, печень, почки, селезенка, сердце, мезентериальные лимфоузлы и кусочки поперечно-полосатой мышечной ткани из различных участков туши. Убой был проведен с полным извлечением и описанием внутренних органов.

О фармакодинамике гала-вета  судили по клиническим показателям, изменениям белкового, углеводного, минерального и витаминного обмена, общей неспецифической резистентности организма, интенсивности роста и продуктивности животных. При этом оценивали общее состояние животных, у молодняка определяли  среднесуточные приросты и сохранность. Фармакологическую эффективность гала-вета изучали по показателям белкового и  минерального обмена, уровню эритро- и лейкопоэза,  неспецифической резистентности организма.

Заключение о положительном действии препарата делали на основании результатов комплексных клинических, биохимических, гематологических, иммунологических методов исследования.

При гематологических исследованиях определяли количество эритроцитов и лейкоцитов в 1 мм3 в камере Горяева, содержание гемоглобина – гемоглобинцианидным методом, при выведении лейкограммы пользовались указаниями по гематологическим исследованиям (Кудрявцев А. А. с соавт.,  1974  и Симонян Г. А. с соавт., 1995).

Общий белок определяли с помощью рефрактометра RL-3, белковые фракции нефелометрически  (Карпуть И. М., 1993). Общий кальций и неорганический фосфор определяли унифицированным колориметрическим методом с помощью набора реагентов «Ольвекс диагностикум»,  активность трансаминаз (АлАТ – аланинаминотрансфераза и АсАТ – аспартатаминотрансфераза) – унифицированным методом Райтмана Френкеля, витамин А – спектрофотометрически.

Для определения  факторов неспецифической резистентности использовали тест бактериального фагоцитоза нейтрофилов с учетом степени его завершенности по отношению к бактериям Staphylococcus aureus по  Ю.Н.Одинцову (1970). Активность лизоцима определяли нефелометрическим методом по В.Г.Дорофейчуку (1968). Бактерицидную активность сыворотки крови определяли нефелометрическим методом в модификации О.В.Бухарина и А.Б.Чемного.

Идентификацию Т- и В-лимфоцитов проводили методами Е- и ЕАС- розеткообразования. Иммуноглобулины определяли цинксульфатным тестом.

О качестве мяса после применения препаратов судили по результатам ветеринарно-санитарной экспертизы, включающей в себя органолептическую, дегустационную оценку и его биохимические показатели.  Химический состав мяса с учётом его влагоёмкости определяли экспресс-методом по Грау и Хамму, жир – по обезжиренному остатку методом С. В. Рушковского, влагу – высушиванием вещества до постоянной массы, золу – взвешиванием после сухого озоления, триптофан – по Снайзу и Чемберзу в модификации Геллера, оксипролин – по Ньюмену и Логану с применением кислого гидролиза мяса по Вербицкому, белковый показатель качества – по отношению триптофана к оксипролину, калорийность в кДж – по данным химического анализа.

Изучали влияние указанного мяса на воспроизводительную функцию животных. Для этого использовали 40 беспородных белых мышей и крысят, разделенных на опытную и контрольную группы по 20 в каждой. В рацион опытныхживотных было включено мясо поросят, которым вводили гала-вет, в рационе контрольных животных мясо отсутствовало. Критерием оценки биологического действия испытуемого образца мяса на воспроизводительную функцию мышей служило:количество новорожденных мышат на 1 самку за 1 роды, количество мертворожденных, уродов, неоплодотворенных самок в опытных и контрольной группах, а также жизнеспособность полученного от них потомства.

Экономическая эффективность применения гала-вета  для повышения неспецифической резистентности, обменных процессов рассчитана с использованием  «Методики определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» (Шатохин Ю.Е. с соав., 1997).

Результаты исследований подвергали математической обработке на ПК с использованием программного комплекса Microsoft Excel 2000, с вычислением средних арифметических (М), их среднестатистических ошибок (m) и критерия достоверности (р); цифровые данные оценивали с применением критерия Фишера-Стьюдента.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Токсикологическая характеристика гала-вета

       Острую токсичность препарата определяли при внутрижелудочном, внутрибрюшинном, внутримышечном его введениях на крысах и мышах в диапазоне доз от 400 до 3100 мг/кг массы тела.  Изучение токсикологических свойств гала-вета при внутрижелудочном введении не позволило установить его основные характеристики: средне-смертельную дозу (LD50) и дозу, вызывающую появление клинической картины токсикоза. В течение периода наблюдения препарат не вызывал гибели и острой интоксикации животных и птиц, не влиял на их общее состояние и поведение. Рефлексы оставались сохраненными. Нарушения функциональной активности органов пищеварения и мочеотделения не наблюдали.





LD50 гала-вета для белых крыс при внутрибрюшинном введении  составила  1630 мг/кг, при внутримышечном введении – 2410 мг/кг;  LD50 гала-вета для мышей при внутрибрюшинном и внутримышечном введении составила  1270 мг/кг и 1690 мг/кг соответственно.

Таким образом, гала-вет относится к 4-му классу опасности (незначительно опасные вещества).

Изучение хронической токсичности на крысах показало хорошую переносимость гала-вета. На протяжении всего срока эксперимента гибели животных не наблюдалось, крысы были клинически здоровы, с хорошо выраженным аппетитом. Визуальное наблюдение не выявило каких-либо изменений в поведении опытных животных в сравнении с контролем. Морфологические исследования крови опытных крыс также не выявили токсического влияния гала-вета.

Результаты исследований показали, что гала-вет при длительном назначении не только не оказывает токсического действия на печень, но и способствует активизации в ней процессов биологического синтеза.

Исследованиями токсичности при нанесении на кожу установлено, что применение гала-вета в виде 25% водного раствора оказало незначительное раздражающее действие на кожу. В течение первых 2 часов после нанесения препарата у животных наблюдали бледно-розовую кожу по всему участку. За период исследований функциональных и морфологических нарушений кожи не отмечено. Реакция животных при пальпации очага поражения была спокойной, безболезненной. Наблюдали поверхностный дерматит без образования корок и трещин. Это свидетельствует о слабом местном действии препарата. После введения 1% -ного водного раствора на коньюнктиву глаза кроликов отмечали незначительное слезотечение, которое прекращалось через 15 минут после введения препарата. Следовательно, гала-вет не обладает местнораздражающим действием.

Изучение аллергизирующего действия гала-вета не выявило его негативного влияния, как в месте нанесения, так и на общую ответную реакцию организма. При аппликации разрешающих доз (16,3мг/кг и 65,2мг/кг массы животных) не наблюдалось таких проявлений аллергии, как почесывание, чихание, заметное беспокойство, отсутствовала эритема, инфильтрация, изъязвление, некроз ткани  на месте нанесения.  Это характеризует его как препарат, не оказывающий местного аллергизирующего действия на организм животных.

Кумулятивные свойства гала-вета проведены в течение 32 дней на 20 белых крысах обоего пола. Гала-вет вводили ежедневно внутрь при помощи зонда в дозах, начиная от 0,1 LD50 (163,0 мг/кг) острой токсичности и увеличивая ее каждые 4 дня в 1,5 раза.  Коэффициент кумуляции составляет 4,26, то это позволяет сделать вывод об отсутствии кумулятивных свойств гала-вета.

При оценке эмбриотоксического и тератогенного действия установлено, что назначение гала-вета беременным животным не оказывает негативного влияния на течение беременности и роды. Потомство, рожденное от крыс, получавших гала-вет во время беременности, не отличалось от крысят контрольных животных.  Многократное введение водного раствора гала-вета самцам в дозе 1/10 части от однократной LD50 на протяжении 60 дней и последующего спаривания с интактными самками не оказывает влияния на воспроизводительную функцию самцов.  Масса и размер плодов в опытных и контрольных группах на 10 и 20 дни внутриутробного развития и после рождения были одинаковыми. Потомство всех групп развивалось без видимых изменений и сохранность приплода в течение 20 дней была 100%.

Таким образом, изучаемый нами препарат не обладает эмбриотоксическим действием и не оказывает тератогенного влияния.

Изучение переносимости гала-вета на продуктивных животных  показало, что длительное (в течение 20 суток)  внутримышечное введение поросятам-молочникам гала-вета в дозе 5,0 и 10,0 мг/кг живой массы, телятам и цыплятам – 3 и 5 мг/кг массы тела способствовало увеличению среднесуточных приростов  животных  и снижению затрат корма на единицу продукции. При патоморфологическом и гистологическом исследовании органов и тканей экспериментальных животных отклонений выявлено не было. Установлено, что  длительное применение гала-вета не оказывает отрицательного влияния на функции органов пищеварения и мочеотделения, что было подтверждено аналогичными физико-химическими показателями мочи и фекалий животных опытных и контрольной групп.

На основе проведённых исследований можно заключить, что 20-суточное применение поросятам, телятам и цыплятам  гала-вета  не оказывает отрицательного влияния на физиологическое состояние организма,  биохимические показатели крови и не вызывает макроскопических изменений  во внутренних органах.

Субхроническую токсичность гала-вета изучали на поросятах, телятах и цыплятах в дозах 81,5, 163,0 и 326,0 мг/кг  массы животных, равной 1/20, 1/10 и 1/5 ЛД50. Длительное применение (в течение 20 суток)  препарата не оказало токсического действия на органы и ткани, при этом  гистологическая структура и функция жизненно важных органов и систем организма животных осталась без изменений. 

При изучении возможной токсичности мяса животных после обработки их гала-ветом, установлено, что длительное скармливание мышам и крысятам проваренного мяса поросят, полученного через 3, 15 и 30 суток после последней курсовой обработки гала-ветом, не оказывает отрицательного действия на организм лабораторных животных и на их воспроизводительные функции. В течение опыта от каждой самки мышей, получавших мясо подопытных поросят, за трое родов появилось от 16,8 до 19,4 здоровых мышат.

3.2 Фармакологические свойства гала-вета

3.2.1 Влияние гала-вета на организм поросят-сосунов и выявление оптимальных доз препарата

Для проведения опыта  по принципу аналогов было сформировано четыре группы поросят-сосунов 15-суточного возраста по 10 голов в каждой. Животные находились в одинаковых условиях кормления и содержания в станках вместе со свиноматками.

Первая группа была контрольной, второй, третьей и четвёртой опытным группам внутримышечно вводили гала-вет из расчёта 3, 5 и 10 мг/кг массы тела. Препарат применяли в течение 5 суток  ежедневно.

В результате проведённых исследований  установлено, что наиболее благоприятное воздействие на организм животных оказал гала-вет, применяемый в дозе 5,0 мг/кг массы тела. После внутримышечного введения препарата в указанной дозе отмечались максимальные  среднесуточные приросты поросят и высокая сохранность.

В группах, где гала-вет применяли в дозе 5,0 и 10,0 мг/кг живой массы, среднесуточные приросты превышали контрольные показатели на 13,9 и 11,2% соответственно (р<0,02). Самый маленький прирост был у животных после введения минимальной дозы гала-вета.

Как показали результаты гематологических исследований, использование гала-вета в дозе 5,0  мг/кг живой массы способствовало увеличению лейкоцитов в крови животных на 23,53% ( р<0,02). У всех поросят в начале эксперимента уровень лимфоцитов  был ниже физиологической нормы. В конце исследований этот показатель у поросят опытных групп достоверно повысился на 22,32-24,43% и достиг физиологической нормы, характерной для животных данной возрастной группы. 

Содержание общего белка в сыворотке крови всех животных в исходном состоянии колебалось в пределах по отношению к контролю  на 0,1-1,3 г/л, или 0,22-2,68%  при р>0,05.  За время применения препаратов отмечались следующие изменения: в контрольной группе содержание общего белка несколько  повысилось, хотя и было ниже физиологических значений, что касается опытных групп, то увеличение белка в сыворотке крови животных было более существенным и особенно  в группах, получавших гала-вет (на  14,14-17,31% при  р < 0,01). 

          В целом же проведённые исследования показали, что внутримышечное введение поросятам-сосунам гала-вета  оказывает положительное влияние на обменные процессы. При этом более высоким  ростостимулирующим влиянием обладает гала-вет, применяемый поросятам в дозе 5,0 и 10,0 мг/кг живой массы. 

При изучении естественной резистентности поросят (рис.1 и 2) в конце экспериментального периода установлено  повышение некоторых её показателей : фагоцитарная активность лейкоцитов крови возросла от применения доз 5,0 и 10,0 мг/кг массы тела на 25,83% 22,68и %, уровень иммуноглобулинов  повысился на  16,94% и 16,38% соответственно  по сравнению с контролем (р<0,01-0,05).

Рис.1 Показатели естественной резистентности поросят-сосунов до применения препарата

Рис.2- Показатели естественной резистентности поросят-сосунов после применения препарата

Что касается бактерицидной активности сыворотки крови, то её повышение в опытных группах было менее значительным  (на 6,09 -11,97 %)  и недостоверным.

Таким образом, по влиянию на факторы естественной резистентности наиболее эффективным оказался гала-вет, применяемый поросятам в дозах 5,0 и 10,0 мг/кг живой массы.  Он существенно и в наибольшей мере повышал фагоцитарную активность  и уровень иммуноглобулинов в крови.

Таким образом, по фармакологической эффективности  изучаемый нами препарат может использоваться как средство, стимулирующее рост и развитие поросят, повышающее их жизнеспособность. При этом наиболее оптимальной дозой  применения гала-вета для поросят-сосунов является  5,0 мг/кг живой массы. Более высокая доза экономически не оправдана, более низкая – менее эффективна по всем изучаемым показателям.

3.2.2 Сравнительная фармакологическая эффективность действия

иммунокорректоров на организм поросят-отъёмышей

при пониженной естественной резистентности

В свинокомплексе СПК «Победа» Агрызского района Республики Татарстан был проведен производственный опыт на поросятах-отьемышах. Из поголовья были отобраны поросята, имеющие сниженный иммунный статус. Было сформировано 4 группы поросят-отъёмышей по 20 голов в каждой.  Препараты применяли в течение трех суток двукратно. Схема опыта представлена в таблице 1.

Таблица 1– Схема опыта на поросятах-отъемышах

Группы

Препарат

Доза препарата

контрольная

-

-

1-опытная

миелопид

0,5 мг/кг

2-опытная

натрия нуклеинат

5 мг/кг

3-опытная

гала-вет

5 мг/кг

       Введение препаратов способствовало повышению среднесуточных приростов массы тела животных в  первой опытной группе на 37,6 г, во второй– на 29,5г, в третьей-  47,2 г по сравнению с контрольными животными  (Р< 0,01), наблюдалось повышение сохранности поросят опытных групп на 14,41%, на 9,6%, на 17,6% соответственно.

         Применение натрия нуклеината сопровождалось увеличением  эритроцитов на 24,91% по сравнению с контролем.  Гала-вет более активно стимулировал образование лейкоцитов (Р< 0,01).  В силу этого, у подопытных животных 3 группы отмечали значительно большее количество лимфоцитов, чем у контрольных. Установлено, что общее число лейкоцитов после введения  иммуномодуляторов повысилось (на 23,89%) у поросят 3 группы при р<0,02. В этот же срок увеличение лейкоцитов отмечалось и в остальных опытных группах, но не в достоверных значениях. Увеличение лимфоцитов на 7 день иммуномодуляции отмечалось во всех группах, а достоверное  увеличение их количества зарегистрировано только в 3 группе животных от применения гала-вета..

После применения иммуномодуляторов установлено повышение  общего белка во всех группах по сравнению с  контрольными показателями. После инъекции гала-вета это повышение было достоверным и превышало контроль на 9,59%.

Исследования альбуминовой фракции белка сыворотки крови поросят показали, что после  введения иммуномодуляторов ее уровень у животных под влиянием натрия нуклеината и гала-вета (р<0,05) снизился, но к 21 дню исследований у них отмечено повышение этого показателя.

Рис.3 Влияние иммуномодуляторов на альбуминовую фракцию белка сыворотки крови поросят

В эти же дни отмечалось увеличение уровня глобулиновой фракции сыворотки крови. Альфа- и бета-глобулины  вначале имели тенденцию к увеличению в сыворотках крови  всех групп животных (рис.4 ).

.

Рис.4 Влияние иммуномодуляторов на глобулиновую фракцию белка сыворотки крови поросят

Однако, к 21 дню после  введения препаратов достоверное их увеличение наблюдалось только в группах, где в качестве иммуномодуляторов применяли  гала-вет и миелопид. А в контрольной группе наметилась тенденция к их снижению.

Как видно из рисунка 4, уже на 7-й день после  введения иммуномодуляторов уровень  гамма-глобулинов белка повышался в сыворотке крови всех опытных поросят. Через 21 день  отмечалось некоторое повышение содержания гамма-глобулинов белка  в сыворотке крови поросят, получавших натрия нуклеинат, но изменения эти не укладываются в пределы достоверности. Однако оно достоверно увеличилось на 24,3% (p<0,05) в сыворотке крови после введения гала-вета. Это выраженное увеличение глобулиновой фракции еще раз подтверждает иммунокоррегирующую роль гала-вета.

При изучении естественной резистентности поросят-отъёмышей, в начале экспериментального периода установлено снижение почти всех изучаемых показателей, что говорит об иммунодефицитных состояниях животных. 

  Рис.5 Показатели лизоцимной активности сыворотки крови поросят

Применение иммунокорректоров способствовало увеличению лизоцимной активности сыворотки крови. На 7 день после введения иммуномодуляторов достоверных изменений обнаружить не удалось Её уровень через 21 день возрос по сравнению с исходным состоянием после введения миелопида до  6,73±0,98% против 3,77±0,56% (р<0,05) , после применения натрия нуклеината –5,83±0,92 против3,4±0,48 (р<0,01). 

  Рис.6 Показатели бактерицидной активности сыворотки крови 

  Рис.7 Показатели фагоцитарной активности крови поросят

Введение иммуномодуляторов способствовало незначительному увеличению и бактерицидной активности сыворотки крови (рис.6).

У животных, подвергнутых иммунокоррекции гала-ветом, на седьмой день опытов она превысила фоновый показатель на 14,77%.

После введения иммуномодуляторов на 7 сутки начинает восстанавливаться и фагоцитарная активность лейкоцитов (рис.7). В группе, где использовали гала-вет - увеличение было достоверным и к 21 дню исследований составило 46,62%

При исследовании иммунологического статуса животных перед введением препаратов установлено  значительное его снижение, что также указывает на снижение естественной резистентности.  После введения изучаемых препаратов в крови поросят наблюдалось увеличение процентного содержания Т- и В- лимфоцитов (табл. 2). Введение препарата  миелопида и  нуклеината натрия дало сравнительно одинаковый эффект по увеличению в крови процентного содержания исследуемых показателей.

Таблица 2 - Влияние препаратов на иммунокомпетентные клетки

Группы

Т-лимфоциты, %

В-лимфоциты, %

Дни исследований

фон

7

21

фон

7

21

к

37,66±2,7

37,5±3,53

38,0±4,01

22,33±2,08

23,36±1,08

23,2±1,48

1

40,5±3,19

46,33±3,55

48,8±2,69

20,13±0,22

28,33±2,34

24,0±1,87

2

36,66±3,34

42,0±3,37

44,5±1,75*

18,56±0,98

22,0±3,08

23,5±2,37

3

37,0±3,71

43,66±1,08

49,65±3,59*

23,06±2,52

27,0±2,72

29,5±2,46*

*р<0,05

Значительное повышение содержания Т- лимфоцитов отмечали в крови  поросят после иммунокоррекции нуклеинатом натрия и гала-ветом на 17,62 и  25,48% соответственно (р<0,05). Более значительно, по сравнению с другими препаратами, стимулировало функциональную активность В-лимфоцитов применение гала-вета. После его применения максимальную концентрацию В-лимфоцитов наблюдали на 21 день- 29,5±2,46% (р<0,05).

В научно-практическом аспекте представляет интерес действия иммунокорректоров, введенных в организм с субиммунизирующими дозами вакцины. С целью изучения этой проблемы у свиней при вакцинации против классической чумы свиней субиммунизирующими дозами вакцины в сочетании с иммунокорректорами (гала-ветом и нуклеинатом натрия) было сформировано 7 групп поросят, по 4 головы в каждой.  Гала-вет иньецировали внутримышечно поросятам 1 и 2 групп в дозе 5 мг/кг живой массы, а натрия нуклеинат был применен животным 3 и 4 групп в виде аэрозоля. Ингалированная доза его составляла 200 мг/гол. Седьмая группа служила контролем. Поросят 1, 3 и 5 групп вакцинировали 0,5 прививочной дозой, 2, 4 и 6 групп 0,1 прививочной дозой. Гематологические, биохимические и некоторые иммунологические исследования животных проводили до опытов, в динамике на 3, 9, 15 сутки после введения вакцины и иммуностимуляторов.

Максимальные титры антител в сыворотке крови поросят I-4 групп отмечены на 3 день вакцинации. Причем в группах животных, где 0,5 прививочная доза вакцины вводилась в сочетании с нуклеинатом натрия, гала-ветом, они составили соответственно log2 3,4 и log2 3, что 1,7 и 1,5 раза выше, чем у животных, привитых одной вакциной; в группах, где поросят иммунизировали 0,1 прививочной дозой вакцины  при сочетанном введении этих препаратов - титр специфических антител тоже был выше 1,04-1,11 раза чем у животных не получавших иммунокорректоры. По результатам клинических исследований установлен стимулирующий эффект данных препаратов при использовании для иммунизации субоптимальных доз антигена.

Таким образом, применение иммуномодуляторов способствует улучшению показателей крови, более быстрому созреванию иммунной системы и повышению ее функциональной активности, что положительно сказывается на продуктивные качества поросят при их выращивании, доращивании в условиях промышленной технологии.

      1. Влияние гала-вета на организм телят

и выявление оптимальных доз препарата

       Обьектом исследований были телята молочного периода от холмогор-

ских  коров.  Для проведения опыта по принципу аналогов было сформировано 4 группы  телят профилакторного возраста согласно схеме (таб.3). Опытным животным гала-вет вводили внутримышечно в течение 5 суток. За животными вели постоянное наблюдение в течение  одного месяца.

Таблица 3– Схема опыта по определению оптимальной дозы гала-вета

для телят

Группы животных

Количество голов

Препарат

Доза, мг/кг

Контрольная

5

-

-

1-опытная

5

гала-вет

3,0

2-опытная

5

гала-вет

5,0

3-опытная

5

гала-вет

7,0

Таблица 4 - Влияние гала-вета на гематологические показатели телят

Показатели


Гала-вет, мг/кг

Контрольная

3

5

7

Исходные данные

Гемоглобин, г/л

108,8±5,53

106,4±3,49

104,22±3,3

104,6±4,3

Эритроциты, 1012/л

8,98±0,56

8,82±0,46

6,12±0,28

5,64 ±0,09

Лейкоциты, 109/л

10,68±0,70

12,22±1,24

8,34±0, 08

9,17±0, 62

Лейкограмма,% :

базофилы

-

-

0,2±0,01

-

эозинофилы

2,6±0,13

2,6±0,22

2,4±0,18

2,5±0,20

палочкоядерные нейтрофилы

3,6±0,22

3,6±0,38

4,6±0,16

3,3±0,28

сегментоядерные нейтрофилы

28,4±3,56

28,8±0,66

27,2±0,86

30,8±1,82

лимфоциты

59,6±4,26

59,8±2,69

59,4±3,64

58,8±3,49

моноциты

3,8±0,4

3,0±0,12

2,2±0,14

3,2±0,26

После применения препарата

Гемоглобин, г/л

109,2±3,64

110,6±3,69

115,8±4,60

112,4±1,48

Эритроциты, 1012/л

8,52±0,56

8,66±0,37

8,66±0, 82

7,26 ±0, 54*

Лейкоциты, 109/л

10,04±0,32

10,78±0,72

10,63±0, 28**

10,68±0, 42

Лейкограмма,% :

базофилы

0,5±0,12

0,4±0,08

0,2±0,02

0,2±0,02

эозинофилы

2,4±0,08

2,7±0,14

2,4±0,16

2,5±0,12

палочкоядерные нейтрофилы

3,5±0,24

3,6±0,44

3,4±0,50

3,1±0,16

сегментоядерные нейтрофилы

28,6±2,26

29,4±1,06

30,2±0,62

31,2±2,28

лимфоциты

60,6±3,24

61,2±2,48

61,4±2,16

60,2±1,98

моноциты

2,64±0,26

2,6±0,32

2,4±0,32

2,8±0,32

*р<0,05; **р<0,01

Проведенные исследования показали, что введение гала-вета  положительно  влияет на  рост  и сохранность телят.  Среднесуточные приросты опытных телят после применения препарата в дозах 3,0 и 5,0 мг/кг живой массы превышали контрольные показатели  на 7,28 - 9,66%   (р<0,05 - р<0,01).

Достоверное увеличение гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов в крови животных опытных групп (табл. 4) положительно коррелирует с увеличением среднесуточных приростов животных. Это можно рассматривать как косвенный факт более интенсивных окислительно-восстановительных процессов в органах и тканях, и как следствие этого повышение уровня обмена веществ в организме.

Из представленных в  таблице 4 данных видно, что после введения гала-вета в дозе 7мг/кг количество эритроцитов превышало фоновые показатели на 22,32%. Применение гала-вета в дозе 5 мг/кг вызывало увеличение количества лейкоцитов – на  21,55 % (р<0,01).  Процент зрелых клеток миелоидного ряда тоже повысился. Все эти изменения можно объяснить активацией гемо-лейкопоэза применением гала-вета.

Рис.8-Количество общего белка в сыворотке крови телят

Назначение гала-вета телятам оказало положительное влияние на количество общего белка в сыворотке крови. Как видно из рисунка 8, после применения гала-вета в дозе  5,0 мг/кг в сыворотке крови телят повысился уровень общего белка на 10,9% (р<0,05), от других доз препарата различия  были не значительны и не подтверждались статистически.

Применение гала-вета телятам оказало позитивное влияние на обмен кальция и фосфора– элементов, участвующих во многих физиологических процессах. Содержание общего кальция в сыворотке крови животных опытных групп составило 2,72±0,26 - 2,86±0,19 ммоль/л, неорганического фосфора 2,08±0,24 - 2,20±0,12 ммоль/л при соотношении 1:1,3, а в контрольной группе соответственно 2,66±0,34 и 2,14±0,24 ммоль/л и 1:1,24.

Влияние гала-вета на естественную резистентность организма  телят  представлено в табл. 5.

Таблица 5-Влияние гала-вета на показатели естественной резистентности телят

Показатели

Контроль-

ная

Гала-вет, мг/кг

3,0

5,0

7,0

Исходные данные

Бактерицидная активность, %

29,22±2,71

32, 48±1,60

28,24±1,61

29,24±1,42

Фагоцитарная активность, %

2 7,66±1,25

29,40±1,64

30,60±1,52

30,40±1,93

Лизоцимная активность, %

6,26±0,52

7,42±1,86

6,82±0,81

6,66±0,54

Иммуноглобулины, мг/л

23,46±0,64

22,24±0,48

22,68±1,48

23,40±1,57

После применения препарата

Бактерицидная активность, %

35,56±1,82

42,60±1,96**

40,40±1,16**

39,60±1,14*

Фагоцитарная активность, %

34,72±3,31

41,94±1,74**

40,24±1,41**

40,08±2,82

Лизоцимная активность, %

10,34±2,78

10,82±1,16

11,12±1,58

11,60±1,41**

Иммуноглобулины, мг/л

21,42±1,80

26,60±1,32**

27,64±1,56*

26,86±1,07

*р<0,05; **р<0,01

Бактерицидная активность сыворотки крови повышалась от всех изучаемых доз препарата (на 23,76 – 30,1 %), при р<0,05-0,01. Фагоцитарная активность лейкоцитов и количество иммуноглобулинов в крови возросли от минимальной и средней дозы  на 29,9 и 23,96%  и  на 16,4 и 17,95%,  лизоцимная активность сыворотки крови – от максимальной дозы гала-вета на 42,5%.

Таким образом,  проведенные исследования свидетельствуют о преимуществе  применения  гала-вета  в дозах 3,0 и 5,0 мг/кг живой массы,  которые не только вызывают увеличение продуктивности, но и в большей степени повышают естественную резистентность организма телят.

3.2.4 Сравнительная фармакологическая эффективность  иммунокорректоров при пониженной естественной резистентности  телят

В условиях фермы КРС «Агрофирмы «ВАМИН Марджани» Арского района Республики Татарстан  в стойловый период содержания изучили состояние естественной резистентности телят.

Результаты проведенных морфо-биохимических исследований крови свидетельствовали о нарушении белкового и минерального обмена, при этом установлено значительное снижение относительного количества Т-лимфоцитов до 29,32±1,22% - 30,6±1,52%, количества В-лимфоцитов на 22,4% - 27,1% (Р< 0,05) против контрольной.  В крови телят содержание эритроцитов,  гемоглобина находилось на  нижних границах физиологических показателей,  уменьшено количества лейкоцитов и их фагоцитарная активность, уменьшена также лизоцимная и бактерицидная активность сыворотки  крови, снижено количество иммуноглобулинов, что позволило сделать вывод о снижении у животных естественной резистентности.

Для  повышения неспецифической резистентности телятам  назначали  иммунокорректоры : гала-вет, натрия нуклеинат внутримышечно, миелопид-подкожно согласно схеме опыта, представленного в табл. 6.

Таблица 6– Схема опыта на телятах

Группы

животных

Количество голов

Вводимое вещество

Доза препарата, мг/кг

Контрольная

6

-

-

1-опытная

6

гала-вет

5 мг/кг

2-опытная

6

натрия нуклеинат

5 мг/кг

3-опытная

6

миелопид

0,5 мг/кг

  Применение препаратов  способствовало увеличению лейкоцитов, их постоянное нарастание отмечали до конца исследования. Анализ лейкограммы указывает на восстановление функции гемоцитопоэза и адаптационных механизмов гомеостаза.  Уровень лимфоцитов достиг физиологической нормы лишь к концу опыта.

       При изучении белкового обмена установлено (табл. 7), что после применения гала-вета  во второй опытной группе уровень общего белка в сыворотке крови к концу  исследований составил 67,4±1,31г/л, что на 16,65% выше уровня интактных животных (р<0,01), после натрия нуклеината - 66,9±1,12 г/л, что выше на 15,46%  (р<0,05). 

За период проведения опыта, изменения лизоцимной активности сыворотки крови контрольной и опытных групп различались незначительно.        Наиболее существенные изменения отмечались по бактерицидной активности сыворотки крови и фагоцитарной активности нейтрофилов у телят, получавших гала-вет (на 38,49 и 20,98% соответственно).

Существенное нарастание относительного количества Е-РОК в крови (на 11,62%, при р<0,05), отмечали в группе животных, получавших гала-вет. К концу опыта уровень Т-лимфоцитов в крови телят первой группы после введения гала-вета повысился  и составил 59,14±1,4%, что в  1,13 раза (Р<0,01) выше исходных значений.

Таблица 7- Влияние препаратов на иммунобиологические показатели телят

Показатели

Группы

контроль-ная

1

опытная

2

опытная

3

опытная

Исходные данные

Общий белок, г/л

55,62±2,56

56,18±1,62

56,56±2,06

55,92±2,82

Бактерицидная активность, %

22,8± 3,42

23,5±2,60

22,8±3,72

23,19±2,19

Лизоцимная активность,%

14,4± 0,96

16,6± 1,88

13,6± 0,92

16,6± 0,16

Фагоцитарная активность,%

27,3±1,50

27,5±2,62

28,6±3,74

28,76±1,62

Иммуноглобу-лины,мг/мл

13,81±2,62

14,27±2,42

14,65±3,29

13,96±1,24

Т-лимфоциты,%

53,6±3,74

52,27±1,02

53,6±1,44

51,7±3,96

В-лимфоциты,%

25,8±1,93

25,6±2,04

26,2±0,76

25,2±2,44

После  применения препаратов

Общий белок, г/л

59,3±0,13

67,4±1,31**

66,9±1,12*

67,1±4,95

Бактерицидная активность, %

27,6±2,32

38, 2±2,84**

36,42±4,8*

35,04±1,66*

Лизоцимная активность,%

16,8± 0,18

19,2± 0,66

18,4± 0,19**

18,2± 0, 34

Фагоцитарная активность,%

30,4±1,44

34,8±1,25*

33,1±1,62

34,2±2,27

Иммуноглобу-лины,мг/мл

19,37±2,82

25,02±2,7*

23,82±2,9*

23,54±3,56*

Т-лимфоциты,%

56,21±1,82

59,14±1,4*

58,43±2,5

58,34±1,8

В-лимфоциты,%

26,17±0,92

29,84±2,54

29,26±1,76

28,32±1,54*

* р<0,05; **р<0,01

Дифференцировка В-лимфоцитов и переход гуморального ответа в продуктивную фазу усиливается интенсивностью синтеза иммуноглобулинов, наиболее высокий процент нарастания отмечали у телят, получавших гала-вет, который составил 42,97% (р<0,05).

         Количественный рост ЕАС-РОК отмечали в группах с применением  иммунокорректоров, при этом относительное содержание в крови В-лимфоцитов достигало 28,32±1,54 - 29,84±2,54%, против 26,17±0,92% в контрольной группе. 

       Таким образом, в условиях производства отмечено  снижение неспецифической  резистентности телят. Однако, применение животным иммунокорректоров, особенно гала-вета способствует повышению, резистентности, иммунного статуса животных, увеличению приростов и сохранности поголовья.

3.2.5. Сравнительная фармакологическая эффективность действия

гала-вета и натрия нуклеината  на организм цыплят-бройлеров

Для проведения опыта по принципу аналогов было сформировано 4 группы цыплят-бройлеров 20-суточного возраста по 40 голов в каждой. Первая группа – контрольная, вторая, третья и четвертая – опытные. Опытным группам вводили гала-вет согласно схеме опыта, представленной в табл. 8. Препараты применяли внутримышечно  в течение 5 суток.

Таблица 8– Схема опыта на цыплятах

Группы

Вводимое вещество

Доза препарата

Контрольная

-

-

1-опытная

гала-вет

3 мг/кг

2-опытная

гала-вет

5 мг/кг

3-опытная

натрия нуклеинат

5 мг/кг

Оптимальные дозы были подобраны в предыдущих опытах на  цыплятах – аналогах.

Самые высокие среднесуточные приросты цыплят  были во второй опытной группе, где инъецировали гала-вет из расчёта 5,0 мг/кг массы тела (на 12,1% выше контроля). Что касается первой и третьей опытных групп, где применяли минимальную дозу гала-вета и  натрия  нуклеинат приросты были менее выражены (на 9,1 и 9,3% выше контроля  соответственно), сохранность  при этом составила 95,0-97,5%.

Содержание белка в сыворотке крови цыплят всех опытных групп  увеличилось (на 3,9-6,3%), содержание фосфора снизилось (на 1,4-7,1%) по сравнению с исходными показателями (табл. 9), однако эти изменения не имели статистического подтверждения с контролем. 

Таблица 9 -Влияние иммунокорректоров  на биохимические показатели крови цыплят-бройлеров

Показатели

Контроль

Гала-вет, мг/кг

Натрия нуклеинат, мг/кг

3

5

5

Исходные данные

Общий белок, г/л

24,4±1, 46

23,9±1,28

24,7±1, 62

24,2±0,24

Неорганический

фосфор, ммоль/л

2,44±0,24

2,30±0,22

2,34±0,18

2,54±0,11

Кальций общий, ммоль/л

3,56±0,14

3,48±0,16

3,52±0,20

3,24±0,016

АсАТ,ммоль/(л-ч)

0,54±0,024

0,56±0,018

0,49±0,032

0,50±0,022

АлАТ,ммоль/(л-ч)

0,33±0,015

0,34±0,012

0,32±0,016

0,36±0,022

После применения препарата

Общий белок, г/л

23,9±0,74

25,4±0,70

25,7±0,66

25,8±0,52

Неорганический

фосфор, ммоль/л

2,42±0,32

2,27±0,25

2,25±0,24

2,36±0,26

Кальций общий, ммоль/л

3,72±0,31

4,18±0,25

4,02±0,29

3,57±0,036

АсАТ,ммоль/(л-ч)

0,58±0,050

0,79±0,046*

0,73±0,048

0,62±0,012

АлАТ,ммоль/(л-ч)

0,38±0,020

0,46±0,016*

0,49±0,024*

0,42±0,012

*р<0,05

В опытных группах после применения гала-вета  наблюдалась активация ферментов переаминирования на достоверную по сравнению с исходными показателями величину: АлАТ – на 26,1 и 34,7% соответственно и АсАТ  – на  29,2% во второй группе ( во всех случаях р< 0,05). 

При изучении естественной резистентности организма цыплят отмечено повышение некоторых её факторов (табл. 10) .

Таблица 10 – Влияние иммунокорректоров

на естественную резистентность цыплят-бройлеров

Показатели

Группы

контрольная

опытные

1

2

3

5

Исходные данные

Бактерицидная активность, %

25,42±1,18

27,26±1,64

26,78±1,34

25,46±1,72

Фагоцитарная активность, %

40,22±2,44

39,48±2,74

41,18±2,82

40,64±2,18

Лизоцимная активность, %

  9,26±0,76

9,42±0,92

9,24±0,64

9,46±0,72

Иммуноглобулины, ед.

  3,22±0,08

3,66±0,12

3,64±0,06

3,72±0,12

После применения препаратов

Бактерицидная активность, %

35,42±1,76

35,84±1,64

37,64±1,82

34,78±1,69

Фагоцитарная активность, %

37,16±2,14

41,38±2,26

47,64±2,52*

46,26±2,48*

Лизоцимная активность, %

11,82±0,72

11,62±0,81

11,72±0,42

12,40±0,76

Иммуноглобулины, ед.

4,52±0,16

4,18±0,18

4,64±0,22

5,36±0,24

*р<0,05

При этом  достоверно увеличилась (на 22,0%)  фагоцитарная активность псевдоэозинофилов крови  от гала-вета, применяемого в дозе 5,0 мг/кг живой массы и от  натрия нуклеината (на 19,68%) по сравнению с контролем. 

Таким образом, на основе проведённых исследований  установлено, что  применение цыплятам изучаемых препаратов не оказывает отрицательного влияния на физиологическое состояние организма птицы, биохимические показатели крови.  Гала-вет, кроме того, обладает иммунокорригирующими свойствами. Его основные фармакологические эффекты обусловлены способностью воздействовать на функционально-метаболическую активность макрофагов.

Как известно, препарат обратимо ингибирует избыточный синтез гиперактивированными макрофагами фактора некроза опухолей, интерлейкина-1, активных форм кислорода и других противовоспалительных цитокинов, определяющих степень и цикличность воспалительных реакций, а также выраженность интоксикации. В то же время при иммунной недостаточности препарат стимулирует микробицидную функцию нейтрофильных гранулоцитов, усиливая фагоцитоз и повышая неспецифическую резистентность организма к заболеваниям.  Что касается натрия нуклеината, то применение данного препарата менее эффективно.

      1. Аэрозольное применение гала-вета цыплятам-бройлерам

Для проведения исследований по принципу аналогов было отобрано 3 птичника цыплят-бройлеров 4-суточного возраста. Первый птичник – контрольный, второй и третий – опытные. Первый птичник обрабатывали антимикробными препаратами по принятой в хозяйстве схеме противоэпизоотических мероприятий. Опытной птице гала-вет применяли аэрозольно из расчёта 0,5 и 1,0 мг на кг  массы тела. Обработку проводили в течение 2 суток. Наблюдение за цыплятами проводили в течение 14 суток.

В результате проведённых испытаний установлено, что самая высокая сохранность птицы была во второй опытной группе (98,8%), где гала-вет применяли в дозе 0,5 мг/кг живой массы. В третьей опытной группе, после применения препарата в дозе 1,0 мг/кг, сохранность составила 98,6%, в то время как в контроле, после обработки принятыми антимикробными  препаратами, она была 98,2%. 

Среднесуточные приросты цыплят второй и третьей опытных групп  превышают контрольную на 2,8 и  1,5% соответственно.

Таким образом, учитывая проведённые исследования, оптимальной дозой гала-вета при аэрозольной обработке птицы, следует считать 0,5 мг/кг живой массы. В этой дозе препарат можно использовать вместо антимикробных препаратов, используемых в хозяйстве для профилактики инфекционных заболеваний.

После аэрозольного  применения гала-вета ни в одной из опытных групп не произошло существенных изменений морфологических и биохимических показателей крови подопытных цыплят. Так, уровень белка, кальция и фосфора в сыворотке крови  во всех опытных группах практически не отличался от контрольных показателей. Что касается ферментов переаминирования, то их активность повышалась незначительно  и не имела статистического подтверждения с контролем.

В конце экспериментального периода, после применения препаратов, проведено изучение естественной резистентности  организма цыплят-бройлеров (табл.11).

Таблица 11 – Показатели естественной резистентности цыплят

Показатели

Группы

контрольная

Опытные

1

2

3

Бактерицидная активность, %

35,24±1,32

36,90±1,76

36,93±1,83

Фагоцитарная активность, %

37,07±1,63

45,46±2,10**

46,58±1,84**

Лизоцимная активность, %

10,24±0,92

10,68±0,96

11,83±0,87

Иммуноглобулины, ед.

3,76±0,27

4,64±0,30

4,48±0,25

* р<0,05

После аэрозольного  применения гала-вета повысились некоторые показатели естественной резистентности птицы. Бактерицидная активность сыворотки крови по сравнению с контролем в опытных группах возросла на 4,5  и 4,58% (р>0,05). Увеличение фагоцитарной активности псевдоэозинофилов крови  более существенно и достоверно,  и составило 18,46 и 20,42%, при (р<0,01).

       На основании проведённых исследований можно заключить, что аэрозольное применение гала-вета повышает естественную резистентность цыплят-бройлеров. Для повышения резистентности и профилактики заболеваний цыплят-бройлеров с первых дней жизни следует обрабатывать их аэрозольно гала-ветом из расчёта 0,5 мг/кг живой массы в течение 2 суток, заменяя антибактериальный препарат, применяемый в хозяйстве в профилактических целях.

      1. Ветеринарно-санитарная и товарная оценка мяса

сельскохозяйственных животных

после применения препарата

Во всех случаях после применения гала-вета  получаемая продукция не имела каких-либо отклонений от принятых норм. Товарный вид тушек сохранялся. В них не выявлялись патологические изменения, связанные с токсикозами или развитием недостаточности элементов питания. Состав мяса не ухудшался. Органолептические исследования туш поросят и птицы, убитых через 72 часа курсового введения гала-вета было удовлетворительным. Туши хорошо обескровлены, запах и консистенция не отличались от таковых контрольных животных. Органолептические показатели бульона, полученного после 30 минут проваривания мяса также были аналогичными таковым в контроле: мясной бульон был прозрачным, с ароматным запахом. Жир на поверхности бульона плавал крупными каплями.

При исследовании физико-химических показателей мяса  не было установлено существенных различий между контрольной и опытными группами, pH мышечной ткани находился в пределах допустимых величин (5,6-6,2), свойственных доброкачественному продукту.

Что касается реакции с реактивом Несслера, то во всех группах она была отрицательной, а с бензидином – положительной, что также свидетельствует о доброкачественности мяса. Количество амино-аммиачного азота в мышечной ткани животных опытных групп существенно не отличалось от контрольных показателей.

Таким образом, мы не получили каких-либо доказательств, дающих основание об ограничении применения поросятам и цыплятам  гала-вета  по причине ухудшения ими качества мяса.

Применение гала-вета не вызывает изменений в химическом составе мяса и печени животных, не влияет на биологическую ценность мяса. Крысята, свободно питавшиеся мясом поросят, получавших гала-вет, хорошо прибавляли в весе, морфологический состав крови изменялся по законам физиологических норм.

Таким образом, иммунокоррекция с помощью гала-вета в современных условиях ведения животноводства представляется перспективной и позволит повысить эффективность профилактических и лечебных мероприятий, снизить ущерб от заболеваемости сельскохозяйственных животных, обеспечить стойкое ветеринарное благополучие и значительно повысить неспецифическую резистентность организма животных.

Использование гала-вета в рекомендуемых нами дозах обеспечивает экономический эффект на  1 рубль затрат 1,95 рубля.

ВЫВОДЫ

       1. Гала-вет малотоксичен для лабораторных животных. Его пероральное применение в максимально допустимых дозах не вызывает гибели лабораторных животных и видимых патологических изменений в органах и тканях. LD50 гала-вета для крыс при внутрибрюшинном введении составляет 1630 мг/кг, при внутримышечном введении –  2410 мг/кг;  для мышей – 1270 мг/кг и 1690 мг/кг соответственно, что позволяет отнести его к 4-му классу опасности (незначительно опасные вещества), препарат не обладает аллергизирующим, эмбриотоксическим и кумулятивным  действием.

       2.Ежедневное в течение 30 суток скармливание мяса поросят, получавших гала-вет, не вызывает изменения в общем состоянии крысят и мышей, не оказывает отрицательного действия на воспроизводительные функции животных и на их потомство.

       3. При изучении субхронической токсичности и переносимости гала-вета на продуктивных животных установлено, что длительное применение препарата не оказывает отрицательного влияния на физиологическое состояние животных, биохимический состав крови и не вызывает макроскопических изменений внутренних органов.

       4. Гала-вет обладает выраженной фармакологической активностью, оказывает благоприятное влияние на морфологические, биохимические и иммунологические показатели крови, стимулирует лейкопоэз, резистентность организма, увеличивая при этом бактерицидную активность сыворотки крови, концентрацию иммуноглобулинов.

       5.  Экспериментальными исследованиями установлено, что оптимальной дозой гала-вета для поросят и цыплят при внутримышечном его введении является 5,0 мг/кг массы тела, для телят – 3,0 мг/кг.

       6.  Внутримышечное введение поросятам-сосунам гала-вета в дозе 5,0 и 10,0 мг/кг массы тела вызывает увеличение среднесуточных приростов на 13,9 и 11,2%, увеличение количества лейкоцитов на 22,76 и 23,44%, повышение фагоцитарной активности лейкоцитов на 10,93 и 9,21%.

       7.  Применение гала-вета телятам в дозе 3,0 и 5,0 мг/кг массы тела вызывает увеличение среднесуточных приростов  (на 7,84 и 10,68%,) и снижение затрат корма на единицу продукции (на 14,7 и 11,4%), увеличение белка в сыворотке крови (на 10,9%), повышение бактерицидной активности сыворотки крови (на 23,76-30,1%), иммуноглобулинов (на 23,96-29,9%).

       8.   Ежедневное внутримышечное введение цыплятам 7-20 суточного возраста гала-вета в дозе 5,0 мг/кг массы тела вызывает увеличение  фагоцитарной активности псевдоэозинофилов (на 22,0%), активности ферментов переаминирования (АсАТ – на 29,2% и АлАТ – на 34,7%) по сравнению с контролем.

       9. Применение гала-вета в течение трех суток телятам с пониженной естетственной резистентностью  способствует повышению среднесуточных приростов массы тела (на 29,77г по сравнению с контролем), оптимизации лейкограммы крови до физиологической нормы, увеличению общего белка и бактерицидной активности сыворотки крови соответственно на 16,65% и 38,49%, фагоцитарной активности лейкоцитов на 20,98%, количества иммуноглобулинов на 42,97%, относительного количества Т-лимфоцитов в 1,13 раза.

       10. Гала-вет оказывает иммунокорригирующее действие на организм поросят с пониженной резистентностью, направленное на активацию Т- и В-системы иммунитета (соответственно на 25,48 и 21,84 %). Он нормализует показатели естественной резистентности.

       11.Под действием гала-вета и аэрозоля нуклеината натрия стимулируется иммунный ответ организма поросят при их последующей вакцинации субиммунизирующими дозами против классической чумы.

       12.  Производственными испытаниями подтверждена высокая экономическая эффективность применения гала-вета в животноводстве и ветеринарии, которая складывается из оптимизации биохимического, физиологического, иммунологического статуса организма, увеличения продуктивности и сохранности животных. Экономический эффект от его использования составляет  1,95 рубля на 1 рубль затрат.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

    1. В комплексах, на молочно-товарных фермах, в свиноводческих и птицеводческих хозяйствах для восстановления неспецифической резистентности молодняка гала-вет следует применять: 
  • Поросятам-сосунам, поросятам-отьемышам внутримышечно в дозе  5мг/кг массы тела в течение 2-5 суток;
  • Телятам - 3 мг/кг массы тела в течение 3-5 суток;
  • Цыплятам-бройлерам в виде аэрозоля из расчёта 0,5 мг/кг массы тела в течение 2 суток.
    1. С целью иммунокоррекции животных гала-ветом предлагается использовать разработанное наставление по применению гала-вета, которое одобрено Ветфармбиосоветом и утверждено Департаментом ветеринарии МСХ РФ 19 июня 2001 года (протокол №3), методические рекомендации «Принципы рационального применения иммунокорригирующих средств в ветеринарной медицине», утвержденные  отделением ветеринарной медицины Российской академиии сельскохозяйственных наук в 2009 году.
    2. Результаты исследований могут быть использованы при создании новых средств, повышающих неспецифическую резистентность животных, при составлении научной, общеобразовательной и информационной литературы и в учебном процессе в профильных учебных заведениях.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ  ДИССЕРТАЦИИ

       1. Асрутдинова Р.А. Стимуляция поствакцинального иммунитета против классической чумы свиней /Р.А.Асрутдинова // Материалы республиканской

научно-производственной конференции "Животноводству-комплексную программу развития", Казань, 1990, С.8.

         2. Асрутдинова Р.А. Стимуляция иммунологической реактивности у поросят-отьемышей /Р.А.Асрутдинова // Материалы республиканской научно-производственной конференции «Достижения Казанской ветеринарной школы -  в практику животноводства», Казань, 1991, С. 54.

        3. Асрутдинова Р.А. Способ повышения поствакцинального иммунитета при аэрозольной вакцинации свиней против классической чумы /Р.А.Асрутдинова// Удостоверение на рац. предложение № 6, Казань, 1991.

4. Асрутдинова Р.А.  Гигиеническая оценка условий содержания поросят на откорме /Р.А.Асрутдинова, Ф.К.Ахметзянова // Материалы республиканской научно-производственной конференции по проблемам ветеринарии и животноводства, Казань, 1995, С.298.

       5. Асрутдинова Р.А. Зоогигиеническая оценка условий содержания и эксплуатации свиней /Р.А.Асрутдинова, Ф.К.Ахметзянова, Л.П.Ким // Материалы республиканской научно- производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии, Казань, 1996, С.207.

       6. Асрутдинова Р.А. Стимулирующий эффект нуклеината натрия и миелопида при иммунизации субоптимальными дозами антигена чумы свиней /Р.А.Асрутдинова,Ч.Г.Хасанов, Х.Н.Макаев, Р.Р.Муллахметова // Материалы республиканской научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии, Казань, 1996, С.7

  7. Асрутдинова Р.А. Влияние параметров микроклимата на неспецифическую резистентность свиней /Р.А.Асрутдинова, Ф.К.Ахметзянова // Материалы республиканской научно-производственной конференции  по актуальным проблемам ветеринарии и животноводства, Казань, 1997, С. 231.

  8. Макаев Х.Н. Изучение иммуностимулирующих свойств ксимедона при инфекционных заболеваниях животных /Х.Н.Макаев, Р.А.Асрутдинова, А.З.Равилов, А.М.Фомин // Материалы юбилейной научной конференции, посвященной 70-летию НИИ микробиологии МО РФ, Киров,1998, С. 147-148.

  9. Макаев Х.Н. Средства для повышения эффективности вакцинных и лечебных препаратов при инфекционных заболеваниях /Х.Н.Макаев, Р.А.Асрутдинова, А.З.Равилов, В.С.Угрюмова, А.М.Алимов, Г.Х.Муртазина //  Материалы республиканской научно-производственной конференции по актуальным вопросам профилактики и лечения с-х и домашних животных, Калининград, 1998, С. 85.

        10. Асрутдинова Р.А. Изучение адсорбционных и дезодорирующих свойств цеолитов./Р.А.Асрутдинова, Г.Г.Зарипов // Материалы республиканской научно-производ-ственной конференции по актуальным проблемам животноводства и ветеринарии, Казань, 1999, С.203.

       11. Асрутдинова Р.А. Зоогигиеническая экспертиза родильных отделений в хозяйствах Лениногорского района РТ /Р.А.Асрутдинова, С.А.Ларцева, Софронов В.Г.// Материалы Всероссийской научно-методической конференции по зоогигиене, посвященной 70-летию Санкт-Петербургской академии ветеринарной медицины и памяти проф. И.М.Голосова (ноябрь 2002 г.).С.24-25.-

       12. Макаев Х.Н. Иммуностимуляция при вакцинации животных против некробактериоза / Х.Н.Макаев,Р.А.Асрутдинова, Е.К.Акимов, А.В.Иванов, А.Н.Ширшов,Э.Г.Зиатдинов //  Мiжвiдомчий тематичний науковий збiрник.№ 85,том 1 Ветеринарна медицина – 2005:сучасний стан та актуальнi проблеми забезпечення ветеринарного благополуччя тваринництва.Харкiв, 2005, С.718-721.

       13. Асрутдинова Р.А. Влияние условий содержания на естественную резистентность телят /Р.А.Асрутдинова // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана, т.189. Казань, 2006, С.3-7.

       14. Асрутдинова Р.А. Иммунокоррекция при выращивании поросят /Р.А.Асрутдинова, Х.Н.Макаев // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана,т.189.Казань,2006,С7-12.

       15. Макаев Х.Н. Иммуномодулирующие средства при вакцинации животных против инфекционных болезней /Х.Н.Макаев, Р.А.Асрутдинова,  Д.А.Хузин, А.Г.Андреева, Э.Г.Зиатдинов // Ветеринарный врач, 2007,  спецвыпуск, С.23-26.

       16. Асрутдинова Р.А. Сезонные особенности неспецифической резистентности коров /Р.А.Асрутдинова // Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 135-летию академии «Современные подходы развития АПК» Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана, т.189. Казань, 2008, С.26-29.

       17. Асрутдинова Р.А. Резистентность и интенсивность роста телят  под  влиянием иммуностимулятора /Р.А.Асрутдинова, Х.Н.Макаев // Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 135-летию академии «Современные подходы развития АПК» Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана,т.189. Казань, 2008, С.29-31.

       18. Асрутдинова Р.А. Влияние иммунокорректоров на естественную резистентность поросят /Р.А.Асрутдинова, Л.В.Резниченко // Достижения науки и техники АПК.-2008.-№11 .-С.48-50.

         19. Асрутдинова Р.А. Иммунодефициты у свиней /Р.А.Асрутдинова // Материалы Международной научно-практической конференции,  посвященной 55-летию зооинженерного факультета Ижевской ГСХА, Ижевск, 2009, С.11-14.

  20. Асрутдинова Р.А. Оценка иммунного статуса поросят в условиях

свиноводческих комплексов /Р.А.Асрутдинова, Л.В.Резниченко // Достижения

науки и техники АПК.-2009.-№ 5.-С.51-52.

         21. Асрутдинова Р.А. Сравнительная оценка влияния иммуномодуляторов на естественную резистентность цыплят /Р.А.Асрутдинова // Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 35-летию  ФГОУ ВПО «Смоленская ГСХА» «Научное обеспечение аграрного производства в современных условиях» Смоленск, 2009, С.305-307.

       22. Асрутдинова Р.А. Влияние иммуномодуляторов на факторы неспецифической защиты поросят /Р.А.Асрутдинова, В. И. Дорожкин // Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 35-летию  ФГОУ ВПО «Смоленская ГСХА» «Научное обеспечение аграрного производства в современных условиях»  Смоленск, 2009, С.308-310.

       23. Дорожкин В.И. Некоторые биохимические показатели цыплят под влиянием иммуномодуляторов /В.И.Дорожкин, Р.А.Асрутдинова // Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 35-летию  ФГОУ ВПО «Смоленская ГСХА» «Научное обеспечение аграрного производства в современных условиях»  Смоленск, 2009, С.321-323.

24. Асрутдинова Р.А.  Коррекция иммунодефицитного состояния телят/  Р.А.Асрутдинова.-Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана, т.196. Казань, 2009, С.22-28.

25. Асрутдинова Р.А. Действие иммуностимуляторов на резистентность поросят / Р.А.Асрутдинова.-Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана, т.196. Казань, 2009, С.28-32.

       26. Асрутдинова Р.А. Поиск новых эффективных средств для повышения естественной резистентности телят /Р.А.Асрутдинова //  Ветеринарная медицина домашних животных. Сборник статей, выпуск 6.- Казань, 2009,С.25-29.

       27. Асрутдинова Р.А. Влияние стресс-факторов на резистентность организма телят /Р.А.Асрутдинова // Ветеринарная медицина домашних животных.

Сборник статей, выпуск 6.-Казань, 2009, С.29-32.

       28. Асрутдинова Р.А. Сравнительная эффективность иммунотропных препаратов  / Р.А.Асрутдинова.-Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана, т.202. Казань, 2010, С.12-16.

 





© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.