WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

 

ИСКАНДАРОВ МАРАТ ИДРИСОВИЧ

 

БРУЦЕЛЛЕЗ ЖИВОТНЫХ В РОССИИ:

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ

06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат

диссертации  на соискание ученой  степени

доктора ветеринарных наук

Москва – 2012

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко Россельхозакадемии (ГНУ ВИЭВ Россельхозакадемии)

Научный консультант:

доктор ветеринарных наук

Альбертян Мкртич Погосович

Официальные оппоненты:

Заслуженный деятель науки РФ,

лауреат Государственной премии СССР,

доктор ветеринарных наук, профессор

Соколов Михаил Николаевич

Заслуженный ветеринарный врач РФ,

лауреат Государственной премии СССР,

доктор биологических наук, профессор

Скичко Николай Данилович

доктор ветеринарных наук, профессор

Белоусов Василий Иванович

Ведущая организация:

ФГОУ ВПО Московская Государственная Академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина

(ФГОУ ВПО МГАВМиБ).

Защита диссертации состоится «____»_____________ 2012 г. в ____ часов на заседании диссертационного совета Д 006.033.01 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко Россельхозакадемии по адресу: 109428, Москва, Рязанский проспект, 24, к.1, ВИЭВ, тел. (495) 970-03-69 

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВИЭВ Россельхозакадемии

Автореферат разослан «____» _______________2012г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

кандидат биологических наук И.Ю. Ездакова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1.

Актуальность темы. Бруцеллез – особо опасная зоонозная болезнь, широко распространенная среди животных и людей. Несмотря на то, что с момента открытия возбудителя прошло уже более 120 лет и это заболевание хорошо изучено отечественными и зарубежными исследователями,  проблема бруцеллеза остается актуальной во многих странах мира.

Значительный вклад в изучение бруцеллеза внесли отечественные ученые: П.Ф. Здродовский (1953), С.Н. Вышелесский (1955), М.К. Юсковец (1960), П.А. Вершилова (1974), Е.С. Орлов (1954), П.С. Уласевич (1966), П.А. Триленко (1976), К.М. Салмаков (1977), К.В. Шумилов (1984), В.А. Ведерников (1985), И.А. Косилов (1987), А.Н. Касьянов (1987), В.А. Ромахов (1992) М.П. Альбертян (1996), М.М. Желудков (2008) и многие другие.

В ряде экономически развитых стран достигнуты определенные успехи в борьбе с бруцеллезом крупного рогатого скота, вызванным Brucella abortus. Результаты борьбы с бруцеллезом мелкого рогатого скота, вызванного Brucella melitensis, более скромные. В некоторых развивающихся странах эпизоотическая ситуация по бруцеллезу мелкого рогатого скота ухудшается. Бруцеллез, вызываемый B. melitensis, является серьезной проблемой и для здравоохранения.

Несмотря на улучшение эпизоотической ситуации бруцеллеза животных в Российской Федерации, проблема оздоровления поголовья скота окончательно не решена. Выявление заболевших животных и неблагополучных пунктов не только не снижается, но и имеет тенденцию к увеличению. Охват поголовья вакцинацией в 2 раза ниже по сравнению с аналогичными показателями 1990 года. Необходимо уточнение причин длительного неблагополучия и причин возникновения новых случаев болезни в благополучных хозяйствах.

Характерной современной особенностью является реструктуризация животноводства, создание фермерских и арендных хозяйств, увеличение поголовья животных в личных хозяйствах граждан. Повысилась опасность заноса возбудителей бруцеллеза в благополучные стада. Во многих хозяйствах имеет место проблема дифференциации антител у больных и вакцинированных животных.

Все вышеизложенное свидетельствует об актуальности дальнейшего совершенствования диагностики, профилактики и мер борьбы с бруцеллезом животных.

1.2. Цель и задачи исследований. Основной целью проведенных исследований являлось изучение эпизоотологических особенностей бруцеллеза сельскохозяйственных животных и совершенствование мер борьбы с этой болезнью в современных экономических условиях.

В число поставленных задач входили:

- анализ особенностей проявления эпизоотического процесса бруцеллеза животных в субъектах Российской Федерации в 1955-2010 гг.;

- анализ влияния специфической профилактики на проявление эпизоотического процесса бруцеллеза сельскохозяйственных животных;

- изучение эффективности малых доз вакцин из штаммов 19 B. abortus и Rev-1 B. melitensis для профилактики бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота;

- разработка и изучение иммуногенной активности слабоагглютиногенной вакцины «САВ»;

- определение основных направлений усовершенствования научно обоснованных мероприятий по профилактике и борьбе с бруцеллезом.

1.3. Научная новизна. Впервые охарактеризованы динамика, закономерности и региональные особенности проявления эпизоотического процесса бруцеллеза сельскохозяйственных животных в Российской Федерации за 1955 – 2010 гг.

Проведено сравнение характера проявления современной эпизоотической обстановки в субъектах Российской Федерации с использованием предложенного комплекса критериев.

Создана электронная база данных эпизоотологических, серологических бактериологических исследований, обеспечивающая возможность ретроспективного анализа и оперативной оценки обстановки по бруцеллезу животных в субъектах РФ.

Показано влияние иммунизации животных вакцинами из разных штаммов бруцелл на проявление эпизоотического процесса бруцеллеза сельскохозяйственных животных в Российской Федерации за 1955 – 2010 гг.

Доказана эпизоотологическая эффективность применения малых доз вакцин из штаммов 19 B. abortus и Rev-1 B. melitensis в комплексе противобруцеллезных мероприятий при подкожном и конъюнктивальном методах введения.

Впервые обоснована возможность применения и установлена противоэпизоотическая эффективность одновременной иммунизации верблюдов против бруцеллеза и сибирской язвы.

Получены патенты: «Цветной антиген для экспресс - диагностики бруцеллеза животных» (Патентное управление министерства экономики и финансов Туркменистана. - Патент № 272, 2002); « Вакцина жидкая живая из штамма Rev-1 B. melitensis для иммунизации сельскохозяйственных животных против бруцеллеза» (Патентное управление министерства экономики и финансов Туркменистана. - Патент № 285, 2002.).

Показано, что кровососущие насекомые и дикие животные пустынной фауны не имеют эпизоотологического значения как источники возбудителя бруцеллеза для сельскохозяйственных животных.

Впервые в условиях аридной зоны центральной части Азии выделена культура B. ovis из головки придатка семенника барана – производителя, что подтверждает возможность вертикального пути заражения животных бруцеллезом.

Установлено, что сенсибилизированные лимфоциты оказывают цитолитическое действие на клетки бруцелл вирулентных и вакцинных штаммов.

Теоретически обоснована разработка и конструирование вакцин на основе стрессорных белков, как фактора патогенности (протективного антигена).

Предложены критерии оценки (очаговость, инцидентность, превалентность и др.) эпизоотической обстановки и эффективности профилактических и оздоровительных мероприятий, определены пути совершенствования комплекса мер борьбы с бруцеллезом животных.

1.4. Теоретическая и практическая значимость. Теоретическая ценность работы заключается в том, что при бруцеллезе установлена зависимость стимуляции иммунокомпетентных клеток от величины раздражителя (дозы вакцины), подтверждена превалирующая роль клеточного звена иммунитета, отсутствие корреляции между титром антител и напряженностью иммунитета, влияние кислотного, оксидативного и теплового стресса на бруцеллы и конструирование вакцин на основе стрессорных белков.

Разработаны и утверждены в установленном порядке:

«Технологический регламент по производству, контролю и применению слабоагглютиногенной вакцины (САВ) из протективного антигена бруцелл против бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота»,

«Методические наставления по применению слабоагглютиногенной вакцины (САВ) из протективного антигена бруцелл для профилактики бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота».

Практическая значимость работы состоит в том, что ретроспективный анализ изменений эпизоотической ситуации по бруцеллезной инфекции позволяет проследить периоды подъема и снижения заболеваемости бруцеллезом и выделить особо неблагополучные регионы на территории РФ. Создание научно-информационной компьютерной базы данных позволяет выяснить современные особенности эпизоотической ситуации по бруцеллезу в разных регионах страны и прогнозировать развитие ситуации в перспективе.

Использование малых доз агглютиногенных вакцин из штаммов 19 B. abortus и Rev-1 B.melitensis при оздоровлении хозяйств от бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота снижает проблему длительной серопозитивности, возникающую при ревакцинации взрослых животных полными дозами вакцин и увеличивает возрастные границы применения вакцин.

Результаты проведенных исследований позволяют оптимизировать систему борьбы с бруцеллезом животных в регионах с разной эпизоотической ситуацией по данному заболеванию.

1.5. Личный вклад соискателя заключается в выделении проблемы, постановке целей и задач исследований, сборе и анализе эпидемиологических и эпизоотологических данных, в организации и проведении опытов по иммунизации и экспериментальному заражению лабораторных животных, крупного и мелкого рогатого скота, самостоятельном выполнении всего объема эпизоотологических, биохимических, серологических, бактериологических, иммунологических, аллергических исследований, анализе и обобщении результатов исследований, в подготовке научных публикаций, разработке нормативно-технической документации. Участие соавторов отражено в совместно изданных научных статьях. Отдельные этапы работы выполнены совместно с профессорами П.С. Уласевичем, А.Н. Касьяновым, В.А. Ромаховым, докторами ветеринарных наук Ч.К. Керимовым, М.П. Альбертяном, доктором биологических наук П.Е. Игнатовым; кандидатом биологических наук А.И. Федоровым; кандидатом сельскохозяйственных наук Р.Г. Ягудиным, за что автор выражает им сердечную благодарность.

1.6. Апробация работы. Материалы данной работы доложены на:

- Московской областной научно-производственной конференции «Актуальные вопросы ветеринарии в промышленном животноводстве», (Москва, 1984);

- научной конференции молодых ученых, посвященной 40-летию победы в Великой Отечественной войне (Москва, 1985);

- Всесоюзной  научно-технической конференции молодых ученых «Актуальные вопросы профилактики и лечения болезней с/х животных» (Москва, 1985);

- Всесоюзной научно-технической конференции «Проблемы экологии в ветеринарной медицине» (г. Воронеж, 1989);

- научно- практической конференции, посвященной 35-летию ГУ Прикаспийского зонального научно- исследовательского ветеринарного института (г. Махачкала, 2003);

- International Research Conference, Including the 58th Brucellosis Research Conference, Merida, Yucatan (Mexico, 2005);

- международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных» (Москва, 2006);

- 6-й межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 85-летию СибНИВИ-ВНИИБТЖ (Омск, 2007);

- международной научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы исследований по инфекционной и протозойной патологии животных, рыб и пчел» (Москва, 2008);

- международном рабочем совещании «Бруцеллез - пограничная инфекция животных и человека, требующая общих усилий разных стран» (г. Серпухов, 2008);

- Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики и профилактики хронических  зооантропонозных инфекций», (г. Омск, 2009);

- заседании Ученого Совета ВИЭВ (1985, 1986, 2003, 2007, 2009, 2010);

Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены на межлабораторном совещании научных сотрудников ГНУ «ВИЭВ» (2011 г.)

1.7. Публикации результатов исследований. Основные результаты исследований отражены в 65 публикациях (из них одна брошюра), в том числе 15 в рецензируемых журналах «Ветеринария», «Ветеринарная патология», «Веткорм», «Животноводство России», «Российский ветеринарный журнал».

1.8. Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- сравнительный анализ проявлений эпизоотического процесса по бруцеллезу сельскохозяйственных животных в СССР и РФ в разные периоды борьбы с данным заболеванием;

- характер современной эпизоотической ситуации в разных регионах страны;

- сравнительный анализ эффективности вакцинопрофилактики в разные периоды борьбы с бруцеллезом животных;

- теоретическое обоснование, экспериментальное и практическое подтверждение эффективности малых доз вакцин из штаммов 19 B. abortus и Rev-1 B. melitensis при подкожном и конъюнктивальном применении против бруцеллеза сельскохозяйственных животных;

- некоторые вопросы патогенеза и природной очаговости бруцеллеза;

- обоснование целесообразности разработок вакцин на основе стрессорных белков как фактора патогенности (протективного антигена);

- основные положения научно обоснованной системы профилактики и борьбы с бруцеллезом в новых экономических условиях.

1.9. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 382 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 29 таблицами, 63 рисунками, включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения и список литературы. Содержание соответствует оглавлению. Библиографический список литературы включает 493 источников, из которых 158 зарубежных авторов.

2.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

       Работа выполнена в секторе хронических инфекций ГНУ «Всероссийский научно – исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко», на опытной базе Вышневолоцкого филиала ВИЭВ (о. «Лисий») в соответствии с утвержденными планами научно-исследовательских работ в период 1982-2010 гг. (03. 05. 04. – Разработать и внедрить в производство научно-обоснованную программу по оздоровлению животноводческих хозяйств страны от бруцеллеза сельскохозяйственных животных с учетом зональных особенностей и специализации животноводства; программа 0.сх.61.- Испытать в производственных условиях малые дозы вакцины из штамма 19 против бруцеллеза КРС; 0.сх.61. – Обобщить итоги производственного испытания малых доз вакцины из штамма Рев-1 против бруцеллеза мелкого рогатого скота; 01.01.04М.; 02.01М.; 02.04.03Д и 02.01.01. – Российская научно-техническая программа фундаментальных и приоритетных прикладных исследований) в субъектах Российской Федерации и животноводческих хозяйствах Казахстана, Узбекистана и Туркменистана. В работе использованы эпизоотологические, серологические, аллергические, бактериологические, иммунологические методы исследований.

Данные об опыте борьбы с бруцеллезом сельскохозяйственных животных и распространенности болезни в зарубежных странах получены из доступных публикаций и материалов Международного эпизоотического бюро и Всемирной организации здравоохранения.

Для анализа динамики проявлений эпизоотического процесса собраны годовые отчетные статистические данные Главветупра Минсельхоза СССР и РСФСР, Департамента ветеринарии Минсельхоза Российской Федерации по бруцеллезу сельскохозяйственных животных в различных регионах страны за 1955-2010 гг.

Дополнительный материал получили при обследовании неблагополучных очагов в субъектах Российской Федерации, Туркменистана, Казахстана.

При изучении проявлений эпизоотического процесса использовали методы, описанные в Рекомендациях по методике эпизоотологического исследования, в Руководстве по общей эпизоотологии (под руководством И.А. Бакулова и А.Д. Третьякова, 1979), в Методических указаниях по эпизоотологическому исследованию (Бакулов И.А., 1979, 1986).

Лабораторные и производственные опыты по испытанию иммунобиологических свойств конструируемых вакцин, а также различных доз и схем применяемых вакцин проводили на мышах, морских свинках и кроликах, а также на сельскохозяйственных животных – крупном и мелком рогатом скоте и верблюдах.

Для экспериментов использовали свыше 500 лабораторных животных (морских свинок и белых мышей), 210 голов мелкого и 100 голов крупного (телят и коров) рогатого скота. В производственных условиях эффективность противобруцеллезных мероприятий изучали на поголовье 275 тыс. голов мелкого рогатого скота, свыше 50 тыс. голов крупного рогатого скота, и 4 тыс. верблюдов в России, Туркменистане и Казахстане.

Реакцию организма животных на введение бруцелл вакцинного штамма определяли по титру специфических антител в РА, РСК и РБП. Иммунный статус организма животных определяли по уровню иммуноглобулинов M- и G- классов в РИД по Манчини, количественной характеристики различных популяций лимфоцитов в разные сроки после вакцинации, ревакцинации и заражения. Для дифференциации иммуноглобулинов класса M- и G- использовали РА с меркаптоэтанолом. Аллергическую перестройку организма определяли путем проведения аллергической пробы (пальпебральный метод) с бруцеллином ВИЭВ.

Напряженность иммунитета определяли методом заражения животных вирулентной культурой бруцелл. Крупный и мелкий рогатый скот заражали методом конъюнктивального введения бруцелл соответствующего штамма в дозах до 50 минимальных ИД100. Лабораторных животных заражали подкожным введением бруцелл в дозах 5-10 ИД100.

Статистическую обработку данных проводили по критерию Х2 с использованием пакета прикладных программ Excel.

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Географическое распространение видов и  биоваров бруцелл

в странах мира и Российской Федерации

Выявление различных видов и биоваров бруцелл зависит от географического региона. Так, бруцеллы вида B. abortus имеют всемирное распространение в скотопромышленных регионах, кроме Японии, Канады, некоторых европейских стран, Австралии, Новой Зеландии и Израиля, где бруцеллез искоренен. В США бруцеллез крупного рогатого скота практически искоренен. B. abortus сохраняется в дикой природе в некоторых областях, в том числе в Greater Yellowstone Area Северной Америки.

B. melitensis распространен преимущественно в Средиземноморье, на Ближнем Востоке и Центральной Азии, вокруг Персидского Залива и в некоторых странах Центральной Америки.

О заболевании, вызванном B. melitensis, имеются сведения из Африки и Индии. Biovar 3 распространен преимущественно в странах Средиземноморья и Ближнего Востока, а biovar 1 преобладает в Центральной Америке. В США имелись случаи заноса B. melitensis, преимущественно с импортированными козами и редко со скотом.

B. ovis распространен в большинстве регионов мира, где развито овцеводство (Австралия, Новая Зеландия, Северная и Южная Америка, Южная Африка и многие страны Европы).

Ранее заболевание, вызванное B. suis, отмечали во всем мире, где имело место развитое свиноводство. В настоящее время, B. suis сохраняется среди диких свиней (кабанов) в некоторых регионах США, Европы и Австралии (Квинсленд). Отмечены спорадические вспышки заболевания среди домашних свиней и людей. B. suis продолжают выявлять среди домашних свиней в некоторых странах Южной и Центральной Америки (в том числе Мексики) и Азии. B. suis biovars 1 и 3 имеет широкое распространение во всем мире, но другие biovars имеют ограниченное географическое распространение. Biovar 2 обнаруживают у диких кабанов во многих регионах Европы. Ареал распространения Biovar 4 ограничивается арктическим регионом Северной Америки и России, в том числе Сибири, Канады и Аляски. Biovar 5 выявляли в СССР.

B. canis распространен в большинстве стран мира.

С начала третьего тысячелетия применение новых технологий привело к быстрому прогрессу в понимании многообразия бруцелл и, после многих лет перерыва, процесс расширения рода Brucella продолжается. В настоящее время признано десять разновидностей в пределах рода Brucella: B. abortus, B. melitensis, B. suis, B. ovis, B. canis, B. neotomae, B. ceti, B. pinnipedialis, B. microti, B. inopinata.

В Российской Федерации обнаружены практически все виды бруцелл, кроме B. neotomae.

2.2.2.Характеристика изменений эпизоотической обстановки по бруцеллезу сельскохозяйственных животных в России.

Первые сведения о бруцеллезе сельскохозяйствен­ных животных в России стали появляться в конце 19-го – начале 20-го веков.

Плановое изучение бруцеллеза сельскохозяйственных животных и людей в нашей стране начали после специального Постановления Совета Народных Комиссаров РСФСР № 658 от 25 июня 1932 года. Бруцеллез животных и человека был включен в группу болезней, подлежащих обязательной регистрации.

Ретроспективный анализ показал, что в эволюции мероприятий по борьбе с бруцеллезом в России необходимо выделить несколько периодов.

Первый из них, организационный - с двадцатых до начала пятидесятых годов ХХ столетия. Борьбу с бруцеллезом начали проводить выбраковкой абортировавших и яловых животных. Проводились работы по изысканию эффективных вакцинных препаратов.

Второй период включает 50-е и 60-е годы ХХ столетия. В системе мероприятий по борьбе с бруцеллезом широко использовали специфическую профилактику животных вакциной из штамма 19 Brucella abortus.

К концу 1965 года снизилось количества неблагополучных пунктов и заболевших животных. Выявлена высокая степень обратной корреляции показателей количества привитых животных по отношению к выявленным неблагополучным пунктам (r - 0,9) и к заболеваемости животных бруцеллезом (r - 0,7), что свидетельствует об эффективности вакцинопрофилактики.

В третьем периоде (1970-1990 гг.) вакцина из штамма 19 B. abortus до 1974 года продолжает оставаться основным средством специфической профилактики бруцеллеза животных. Из-за поствакцинальных титров, с 1970 года прекращают вакцинацию взрослого поголовья. Количество вакцинированного поголовья уменьшилось более чем вдвое. Одновременно увеличились показатели заболеваемости скота, выявления неблагополучных пунктов и количество больного скота, находящегося на передержке.

Для специфической профилактики бруцеллеза КРС с 1974 года широко внедряется слабоагглютиногенная вакцина из штамма 82 B. abortus. Охват поголовья вакцинопрофилактикой уже вдвое превышает  аналогичные показатели второго периода. Происходит увеличение поголовья скота и снижение заболеваемости. Выявлен отрицательный коэффициент корреляции (r - 0,8), что подтверждает эффективность специфической профилактики вакциной из штамма 82 B. abortus.

Начавшийся с 1990 года четвертый период характеризуется резким снижением поголовья всех видов животных, вызванного реструктуризацией агропромышленного комплекса страны. Возникла необходимость пересмотра и совершенствования комплекса мероприятий по профилактике и борьбе с бруцеллезом. Решение этой задачи потребовало изучение изменений эпизоотической ситуации в новых условиях.

В этот период продолжает снижаться показатель заболеваемости. На диаграмме (рис. 1) показатели заболеваемости и процента привитых животных представлены в виде полиномиальных линий тренда с высоким значением достоверности (R2 = 0,93 – процент привитых животных, и R2 = 0,94 – заболеваемость). Выявлена положительная (r +0,7) корреляция динамических рядов заболеваемости и процента привитых животных. С 2005 года линии тренда, характеризующие показатели привитых и заболевших животных, расходятся, демонстрируя необходимость увеличения охвата профилактическими прививками животных.

Рис. 1. Аппроксимированные показатели процента привитых

животных и динамики заболеваемости бруцеллезом КРС

Начиная с 1990 года, снижение заболеваемости бруцеллезом положительно коррелирует с динамикой количества поголовья. Коэффициент прямой корреляции настолько велик (r = 1), что зависимость пары показателей, характеризующих заболевание и количество поголовья, от статистической приближается к функциональной. Это означает, что в данных условиях бруцеллез крупного рогатого скота будет ликвидирован в РФ при снижения поголовья до 6 млн. голов

2.2.3. Классификация субъектов Российской Федерации по степени распространенности бруцеллеза крупного рогатого скота

Между разными субъектами Российской Федерации имеются большие различия по географическому положению, природно-климатическим условиям, ландшафтным и социально - экономическим параметрам. Это сказывается на виде животноводства и проявлению эпизоотического процесса бруцеллеза сельскохозяйственных животных.

При сравнении уровней распространенности бруцеллеза крупного рогатого скота в субъектах Российской Федерации учитывали значение коэффициента очаговости этой болезни (число инфицированных животных, приходящихся на один неблагополучный пункт), данные о числе неблагополучных пунктов, число заболевших животных в расчете на 100000 голов скота, количество вакцинированного и исследованного поголовья скота, показатель превалентности. Применяемые показатели соответствуют особенностям эпизоотологии бруцеллеза.

Рис. 2.  Количество субъектов Федерации, в которых выявлены неблагополучные пункты по бруцеллезу КРС и заболевшие животные

Результаты исследований позволяют сделать вывод, что в1992-2010 гг. практически все показатели имели выраженную тенденцию к снижению, но с 2000 года наметилось увеличение количества вновь выявленных неблагополучных пунктов и количества субъектов федерации, в которых они регистрировались (рис. 2).

Практически мало изменился или проявлял тенденцию роста такой важный показатель как заболеваемость крупного рогатого скота бруцеллезом в Южном Федеральном округе. На 10,3 % ниже этот показатель в Дальневосточном и на 5,5 % - в Сибирском федеральных округах, чем в ЮФО. Только в СЗФО достигнуто практическое благополучие скота по бруцеллезу. В УФО, оздоровленном в 2004 году, бруцеллез вновь начал проявляться в 2009 году.

Установлено, что увеличение числа вновь выявленных неблагополучных пунктов происходит за счет показателей ЮФО, где в Ставропольском крае в 2002 году число вновь выявленных неблагополучных пунктов превысило предыдущий показатель в 10 раз и на следующий год увеличилось до 62. Это самый большой показатель не только в ЮФО, но и в РФ (табл. 1).

Результаты исследования очаговости свидетельствуют о необоснованном увеличении количества неблагополучных пунктов из-за их дробления внутри административно-территориального подразделения (района, хозяйства, отделения) в условиях реструктуризации агропромышленного комплекса.

Таблица 1

Заболеваемость крупного рогатого скота бруцеллезом в федеральных округах РФ (расчет на 100 тыс. поголовья)

Годы

ЦФО

СЗФО

ЮФО

ПФО

УФО

СФО

ДВФО

РФ

2000

0

0,1

122,5

0,8

1

11,5

0

20,9

2001

0

0

129,1

1,3

0

17,1

0

23,8

2002

0

0

161,2

1,3

0

8,9

0

28,0

2003

0,2

0

206,3

1,3

0,8

7,7

3,1

36,6

2004

0

0

182,4

1,2

0

11,4

14,2

33,6

2005

0,1

0,1

163,1

0,8

0

11,5

5,9

31,4

2006

0

0

152,7

1,2

0

4,5

5,3

29,4

2007

0,1

0

144,9

4,5

0

2,7

20,2

31,2

2008

0,4

0,0

154,3

4,8

0,0

6,1

8,9

35,0

2009

7,7

0

159,1

1,1

0,7

6,7

104,4

38,4

2010

17,2

0,0

168,3

3,5

1,3

8,9

4,4

42,67

Итого:

25,7

0,2

1743,9

21,8

3,8

97,0

166,4

351,0

Показано, что статистические данные не в полной мере отражают истинную эпизоотическую обстановку по бруцеллезу крупного рогатого скота. Так, в республике Калмыкия в 2007 году выявили более 2 тыс. голов крупного рогатого скота, положительно реагирующего на бруцеллез, а в ветеринарной отчетности больные животные не отражены. Аналогичная ситуация отмечена в Краснодарском крае, Волгоградской, Саратовской и Челябинской областях.

Установлено, что стационарно неблагополучными по бруцеллезу мелкого рогатого скота являются регионы с преобладанием отгонно-пастбищного содержания животных (Карачаево-Черкесия, Тыва, Бурятия, Алтайский край).

2.2.4. О роли разных видов животных в заболеваемости людей бруцеллезом

Бруцеллез мелкого рогатого скота, вызываемый возбудителем вида B. melitensis, наиболее опасен в эпидемиологическом плане. Бруцеллезом, вызываемым возбудителем вида B. melitensis, люди заболевают преимущественно в тех регионах, где овцеводство широко распространено. Скотоводство, распространено практически повсеместно, и опасность заражения людей бруцеллезом, вызываемым видом B. abortus, возрастает.

Молоко коров и молочные продукты являются причиной инфицирования многих людей, которые профессионально не связаны с животноводством. Возникают затруднения с установлением источника инфекции, так как молоко и молочные продукты широко распространяются от производителя до потребителя. Любые нарушения в технологии термической обработки молока от коров неблагополучного поголовья могут повлечь за собой вспышки бруцеллеза среди людей. Так, в Саратовской области на протяжении многих лет заболеваемость населения бруцеллезом, вызванном B.abortus, превышала среднероссийскую в 2 – 5 раз.

Нами показано, что бруцеллы выживают в верблюжьем молоке и кисломолочных продуктах. От абортированного плода верблюдицы была выделена и идентифицирована культура 3-го биовара B.abortus. Данная культура отличалась высокой вирулентностью и у морских свинок вызывала выраженные патологоанатомические изменения с высоким индексом инфицированности. Считаем, что по эпидемиологической опасности верблюды должны быть приравнены крупному рогатому скоту.

Лошади не играют существенной роли в заражении людей бруцеллезом.

Таким образом, эпидемиологическая опасность животных других видов (лошади, верблюды, яки и др.) зависит от распространения и народнохозяйственного значения этих видов животных в конкретном регионе, вида и вирулентности бруцелл, носителями которых могут являться эти животные.

2.2.5. Эпизоотическая ситуация по бруцеллезу мелкого рогатого скота

При анализе динамики заболеваемости мелкого рогатого скота бруцеллезом в РФ (рис. 3) показано снижение общего уровня заболеваемости, который вновь повышается с 1975 г.

Рис. 3. Динамика заболеваемости мелкого рогатого скота бруцеллезом в РФ.

На диаграмме видны периодические колебания уровня заболеваемости, отражающие на фоне общего снижения интенсивности, стадийность эпизоотического процесса бруцеллеза.

Стационарно неблагополучные пункты по бруцеллезу мелкого рогатого скота регистрируют в Южном федеральном округе и в некоторых субъектах федерации Сибирского федерального округа. Наиболее сложна ситуация по бруцеллезу мелкого рогатого скота в Южном федеральном округе. В Астраханской области, неблагополучие по бруцеллезу мелкого рогатого скота стали выявлять только после 1998 года (12 н/п и 1703 заболевших).

В Ставропольском крае ситуация по бруцеллезу мелкого рогатого скота к концу 90-х годов ХХ столетия несколько улучшилась, но потом вновь наметилось ухудшение (64 н/п и 1445 заболевших).

В Ростовской области общее количество заболевших животных почти в два раза превышает показатели Ставропольского края (2654 голов).

В Республике Калмыкия заболевших животных в два с лишним раза больше, чем в Ростовской области (5821 голов).

В Республике Дагестан самая высокая заболеваемость животных (14169 голов) при меньшем, чем в Ставропольском крае количестве (42) неблагополучных пунктов. В этой республике более 50 % заболевших бруцеллезом людей от общероссийского показателя. Это обусловлено тем, что в Дагестане находится 25% поголовья овец от общероссийского количества, более 30% неблагополучных пунктов и 45% заболевших животных.

В Сибирском федеральном округе бруцеллез мелкого рогатого скота отмечали в Республике Бурятия, (в 2003 году выделен 1 неблагополучный пункт, и 9 больных животных, в 2007 году – 3 неблагополучных пункта, и 157 голов больного мелкого рогатого скота). В Республике Тыва в отдельные годы число животных, реагировавших на бруцеллез, превышало показатели заболевших в 10 и более раз.

В Республике Хакасия в 2007, 2008 и 2009 гг. выявили соответственно 37, 45 и 28 заболевших животных.

В результате бесконтрольного перемещения животных из неблагополучных регионов частными предпринимателями, наблюдали случаи заноса инфекции в Самарскую, Владимирскую, Челябинскую, Свердловскую, Калужскую и Мурманскую области.

2.2.6. Бруцеллез других видов животных

Установлено, что за последние 20 лет бруцеллез у свиней регистрировали в Российской Федерации в 1997 – 2003 гг. За этот период в 5-ти субъектах федерации (Волгоградская, Воронежская, Ростовская, Тамбовская области и Республика Татарстан) выявили 7 неблагополучных пунктов и 408 больных бруцеллезом животных. С 2003 года Россия благополучна по бруцеллезу свиней.

Стационарное неблагополучие по бруцеллезу оленей отмечено в Республике Саха (Якутия), Ямало-Ненецком, Таймырском и Чукотском  автономных округах (ЯНАО, ТАО и ЧАО).

За 1997 – 2009 гг. больше всего заболело животных в Республике Саха (4776 гол.) и ЯНАО (1860 гол.). Количество заболевших животных существенно меньше в ЧАО (340 гол.) и ТАО (443 гол.). В отдельные годы бруцеллез выявляли у оленей в Республике Горный Алтай (1997-1998, 2004-2005 гг.) и в Красноярском крае (2007 г.).

Инфекционный эпидидимит баранов, возбудителем которого является B. ovis, распространен в большинстве регионов, где развито овцеводство.

2.3. Роль диких животных и иксодовых клещей в эпизоотологии бруцеллеза сельскохозяйственных животных

Нами проведены исследования по изучению роли представителей дикой фауны, обитающей на обширной территории Каракумов, в эпизоотологии бруцеллеза сельскохозяйственных животных.

Установлено, что дикие грызуны (суслики, песчанки, тушканчики) через 2-12 лет после оздоровления мелкого рогатого скота от бруцеллеза перестают быть носителями возбудителя этой болезни и, не представляют эпизоотической опасности для сельскохозяйственных животных.

Бактериологическим исследованием с использованием биопробы 780 экземпляров иксодовых клещей не выделили бруцелл из исследуемого материала.

В 8 районах различных областей Туркменистана в течение двух лет (1988-1989 гг.) отстреляли 84 диких животных: заяц-толай, или песчаник - Lepus to1ay (52 экз.), лисица обыкновенная - Vu1pes vu1pes (6), степная, или пятнистая кошка - Felis libiса Forst (13), шакал - Canis aureus  (12), корсак - Vu1pes corsak (1).

Биоматериал от животных исследовали на бруцеллез серологически и бактериологически, а также методом заражения лабораторных животных (морские свинки). В общей сложности провели 427 бактериологических посевов и заразили 20 морских свинок. При серологическом исследовании сывороток крови от диких и биопробных животных не выявили реагирующих на бруцеллез. Бактериологическим, в том числе и биологическим исследованиями, не выделили возбудителей бруцеллеза, что свидетельствует об отсутствии у них бактерионосительства.

Одновременно проводили бактериологическое исследование биоматериала от ягнят, сдаваемых на каракульские смушки (до 5000 гол.), а также крупного и мелкого рогатого скота и верблюдов. От мелкого рогатого скота выделили в общей сложности 48 культур вида B. melitensis. Выявили факт миграции B. melitensis на крупный рогатый скот. От верблюдов выделили культуру B. abortus. Впервые в условиях Туркменистана выделили из придатка семенников барана культуру B. ovis.

В опытах по искусственному заражению диких грызунов, а так же по результатам исследования чабанских собак в отарах овец, неблагополучных по бруцеллезу, установили их заражение бруцеллезом овечьего типа. Таким образом, показано, что дикие животные не имеют эпизоотического значения как источник бруцеллеза для сельскохозяйственных животных. Роль кровососущих насекомых, как фактора трансмиссивной передачи бруцелл не доказана.

2.4. Изучение малых доз вакцин против бруцеллеза

крупного и мелкого рогатого скота

После первичной вакцинации телок 5-6 месячного возраста малой дозой вакцины из штамма B. abortus 19 антителообразование происходит несколько замедленнее, чем после полной дозы. Так, РА в диагностических титрах и РБП у 100 % животных появились на малую дозу к 15-му дню, на полную - к 7-му. Титры агглютининов достигли максимального значения на 15- день, комплемент связывающих – на 15-30 день, которые постепенно снижались.

У телок, вакцинированных разными дозами в возрасте 5 - 6 месяцев, через 3 – 4 месяца серологические реакции в диагностических титрах, в основном, начинали выпадать, однако агглютинирующие антитела, выявляемые в РА в низких титрах появлялись в отдаленные сроки, особенно у телок, привитых полной дозой.

Показано, что выработка агглютининов и комплементсвязывающих антител зависела от возраста телок, дозы вакцины и кратности ее введения.

У телок, привитых разными дозами вакцины в возрасте 16-17 месяцев, серологические реакции в диагностических титрах по фону иммунизации малой дозой начинают исчезать через 2 – 3 месяца, а по фону полной дозы – через 4 – 6 месяцев.

После ревакцинации малой дозой вакцины по фону как полной, так и малой дозы вакцины серологические реакции (РА, РСК, и РБП) появились у всех животных на 7-й день. Реакции в диагностических титрах начинают исчезать через 4 месяца после реиммунизации по фону малой дозы. В низких титрах, у телок реиммунизированных по фону полной дозы, положительные показания  РА и РБП продолжают выявлять в отдаленные сроки в течение года (срок исследования).

При экспериментальном заражении телок мы преследовали цель изучить влияние дозы вакцины и кратности ее введения, а также возраста и физиологического состояния животных на напряженность и длительность иммунитета. Заражение животных проводили в два срока: в период 5-7 месячной стельности и после отела. Результаты изучения иммунитета у животных, зараженных в период 5-7 месячной стельности, приведены в таблице 2.

Таблица 2

Результаты исследования иммунитета у нетелей через 9 месяцев после иммунизации и реиммунизации вакциной из штамма B. abortus 19 (заражение при 5-7 месячной стельности)

Количество животных

Доза вакцины млрд.м.к. при

Количес-тво иммун-ных

Количество выделенных культур

Индекс

инфицированности

Всего

в том числе из

Всего

из них стельных

Имму-низации

Реимму-низации

голов

процент

л. узлов

органов

плодов

5

5

3

0

1

20

8

8

0

0

6,6+4,0

5

5

80

0

4

80

1

0

0

1

0,9+0,9

5

5

3

3

4

80

1

1

0

0

0,8+0,8

5

5

80

3

3

60

6

5

1

0

5,3+4,0

5

4

контроль

0

0

36

32

1

3

32,1+8,0

Наиболее высокий процент иммунных был среди животных, однократно привитых полной дозой и у реиммунизированных после прививки малой дозой вакцины. В этих группах противостояло заражению по 80% животных.

В группе животных, реиммунизированных после прививки полной дозой, заражению противостояло 60%. В группе животных, привитых однократно малой дозой вакцины, иммунных было 20 %, однако индекс инфицированности составил 6,6, а в контрольной группе – 32,1, то есть почти в 5 раз больше. При бактериологическом исследовании только у контрольных животных культура бруцелл заражающего штамма была выделена из плодов и паренхиматозных органов. Приведенные данные указывают на определенную устойчивость всех животных, привитых малой дозой вакцины.

Результаты изучения иммунитета у реиммунизированных животных, инфицированных после отела, приведены в таблице 3.

Показано что, все реиммунизированные животные противостояли искусственному заражению вирулентной культурой бруцелл. Несмотря на то, что для заражения применяли дозу, составляющую 58 ИД100, не было абортов у животных, однократно привитых разными дозами вакцины, а также ревакцинированных животных.

Таблица 3

Результаты исследования иммунитета через 11,5 месяцев после реиммунизации коров малой дозой вакцины из штамма B. abortus 19 (заражение после отела)

Количество

животных

Доза вакцины млрд.м.к. при

Количество иммунных

Количество выделенных культур

Индекс инфици-

рованности

Всего

в том числе из

иммуни-

зации

реимму-

низации

голов 

процент

лимфо-узлов

органов

3

3

3

3

100

0

0

0

0

5

80

3

5

100

0

0

0

0

4

контроль

0

0

22

21

1

29,7+9,0

Таким образом, реиммунизация телок малой дозой вакцины обеспечивала надежную защиту животных в течение 11,5 месяцев (срок наблюдения) от экспериментального заражения массивной дозой бруцелл вирулентного штамма.

В условиях отгонных пастбищ Центральных Каракумов в течение 5 лет изучали возможность ежегодной реиммунизации овец малой дозой вакцины из штамма B. melitensis Rev-1. С положительным результатом вакцинировали и ревакцинировали свыше 200 тыс. голов мелкого рогатого скота. Кроме того, вакцину из штамма B. melitensis Rev-1 с положительным результатом испытывали в течение 5 лет на верблюдах и крупном рогатом скоте.

Для профилактики бруцеллеза мелкого рогатого скота использовали вакцину из штамма Rev-1 B. melitensis. Для ревакцинации прививочную дозу уменьшали в 100 раз. У овец, иммунизированных и реиммунизированных как полной, так и малой дозами вакцины, изучали поствакцинальные серологические реакции. Установлено, что среди однократно привитых животных через 11 месяцев положительно реагировало от 0,5 до 4,5% поголовья.

В отаре плембаранов, исследованной через 22 месяца после прививки, реагирующих животных не было. Однако через 2 и 3 года после прививки появились особи, реагирующие на инфекционный эпидидимит (0,7-1 %). На основании этого мы сделали вывод, что вакцина из штамма Rev-1 B. melitensis предохраняет плембаранов от заражения инфекционным эпидидимитом в течение одного года и более. Среди первоокоток через 12 месяцев после ревакцинации малой дозой вакцины положительно реагирова­ло 0,5% поголовья. Следовательно, после ревакцинации овец малой дозой вакцины, привитых первоначально полной дозой, срок персистенции специфических антител практически тот же, что и у однократно привитых животных.

При исследовании овцематок, неоднократно привитых (2-3 раза) с интервалом 1 год малой дозой вакцины, через 12 месяцев после последней прививки серологически реагировало до 0,4% поголовья.

Таким образом, серопозитивность у овец не только не возрастает в связи с кратностью иммунизации малой дозой вакцины, но и несколько сни­жается.

Для проверки эффективности малой дозы вак­цины из штамма Rev-1 B. melitensis при ревакцинации мелкого рога­того скота мы регулярно обследовали реиммунизированных животных.

Бактериологическому исследованию ежегодно подвергались до 1000 ягнят, убитых на смушки, в том числе абортированных и мертворожденных плодов. Кроме бактериологического исследования регулярно проводили биопробы на морских свинках.

До начала экспериментов с малой дозой вакцины из штамма Rev-1 B. melitensis от абортированных, мертворожденных плодов, из убитых на смушки ягнят и вынужденно убитых взрослых овец, мы выделяли бруцелл вида B. melitensis 3-го биовара. Через 2 года после начала экспериментов по ежегодной ревакцинации, не выделяли культур бруцелл из биоматериала тушек ягнят, сдаваемых на смушки.

В других хозяйствах ревакцинировали свыше 70 тыс. овцематок. После ревакцинации среди овцематок аборты не проявлялись.

Установлено, что применение малой дозы вакцины не снижает напряженности иммунитета. Антитела, исчезают значительно раньше, чем при применении полной дозы вакцины. Возникает возможность проводить диагностические исследования животных на бруцеллез уже через год после реиммуниза­ции.

2.5. Результаты исследований по повышению эффективности серологических исследований

Для определения характера иммунного ответа на повторное введение антигенов после первичной иммунизации полной и малой дозами вакцины мы проводили исследование сывороток крови в РА с 2-меркаптоэтанолом (РАМ). В результате проведенных исследований выявлена достоверная разница титра агглютинирующих антител и антител, устойчивых к 2-меркаптоэтанолу у телок, иммунизированных разными дозами вакцины. У телок привитых в возрасте 16-17 месяцев появление микроглобулиновых (IgG) антител наблюдали в более ранние сроки и в более высоких титрах, по сравнению с аналогичными показаниями телок, привитых в 5-6 месячном возрасте.

По нашим данным, количество иммуноглобулинов класса IgG увеличивается почти в 4 раза, а синтез IgM уменьшается почти в 8 раз по сравнению с величиной, полученной при первичной иммунизации.

Для выявления латентного бруцеллеза у одногорбых верблюдов мы использовали метод провокации. В производственных условиях всех животных исследовали серологически на бруцеллез. Реагирующих животных выбраковывали, остальным вводили бруцеллин подкожно в объеме 5 мл3. Первое исследование проводили через 15 дней и второе - через месяц после введения бруцеллина. Дополнительно выявили в общей сложности до 10% животных, больных латентным бруцеллезом, которые до введения бруцеллина дважды не реагировали на бруцеллез.

Для выявления бруцеллезных антигенов с помощью ИФА мы исследовали патологический материал от телок, убитых спустя месяц после вакцинации полной и малой дозами вакцины из штамма 19 B. abortus; коров, убитых спустя 1,5 месяца после конъюнктивального заражения вирулентной культурой 54 B. abortus, а также от здоровых, невакцинированных телят. В общей сложности исследовали более 100 проб. Для определения максимальной чувствительности ИФА единый бруцеллезный антиген вносили в экстракты из органов здоровых животных в количестве от 1,5х 109 до 3х102 м.т. в 1 мл и проводили ИФА аналогичным образом.

Из патологического материала от вакцинированных телок бактериологическим методом выделили культуру бруцелл вакцинного штамма из 7% исследуемых проб. С помощью ИФА бруцеллезный антиген выделили из 42,5% исследуемых проб.

При исследовании патологического материала от зараженных коров бактериологическим методом бруцеллы выделили в 40% исследуемых проб, а с помощью ИФА – антиген выделили в 77,3%. Совпадение результатов ИФА и бактериологического метода исследования составило 54,5%. В остальных случаях при положительных результатах ИФА, культуру выделить не удалось, то есть методом ИФА дополнительно выявили 45,4% положительных проб.

Показано, что методом ИФА можно обнаружить бруцеллезный антиген в количестве, соответствующем 1,5х104 м.т. в 1 мл.

Таким образом, установлена высокая чувствительность ИФА для выявления бруцеллезного антигена в патологическом материале.

Преимуществами ИФА является специфичность, высокая чувствительность, быстрота постановки реакции и получения результатов, относительная безопасность, так как исследуемый материал обеззараживается прогреванием, пригодность патматериала, непригодного для бактериологического исследования и, возможность автоматической постановки реакции.

2.5.1. Исследование гуморального и клеточного иммунитета

Показано, что динамика продукции IgG совпадает с показателями серологических исследований. Пик продукции IgG приходится на 30 день после иммунизации. Показатели динамики иммуноглобулинов М- и G- классов демонстрируют преимущество ревакцинации по фону малой дозы вакцины (3+3 млрд.м.к.). Ревакцинация по фону полной дозы вакцины (80+3 млрд.м.к.) проведена по высокому остаточному иммунному фону. Выявлено резкое снижение продукции антител (IgМ).

Динамика иммуноглобулинов М- и G- классов в РИД по Манчини совпали с данными серологических исследований. Реиммунизация телок через 11 месяцев после иммунизации малой дозой вакцины является более оптимальным вариантом по сравнению с ревакцинацией через 11 месяцев после иммунизации полной дозой. Обоснованность приведенных выводов подтверждается при исследовании динамики Т- и В- лимфоцитов в разные сроки после вакцинации и ревакцинации телок полной и малой дозой вакцины из штамма 19 B. abortus.

При анализе популяций лимфоцитов, образующих «розетки» с ЕАС маркерами, у животных, привитых малой дозой вакцины уровень антителосинтезирующих В- лимфоцитов несколько выше, чем у телок, привитых полной дозой. Этим, по-видимому, и объясняется более высокий уровень иммуноглобулинов у животных, привитых малой дозой.

Таким образом, изучение клеточного и гуморального звена иммунитета позволяет судить об иммунологической перестройке организма на введение вакцины. Достоверная оценка иммуногенности противобруцеллезных вакцин возможна только при использовании метода прямого заражения.

2.5.2. Изучение бруцеллоцидных свойств компонентов крови

При изучении бруцеллоцидных свойств различных компонентов крови (лимфоцитов, нейтрофилов, плазмы и сыворотки) от иммунных и интактных животных, проведенных in vitro, установлено, что бруцеллы способны сохранять жизнеспособность даже в условиях агглютинации их специфическими иммуноглобулинами.

Кровь от иммунных и интактных животных разделяли на составные фракции методом градиентного центрифугирования. Сыворотку крови и плазму использовали как в нативном, так и в гретом виде. Прогревание плазмы и сыворотки осуществляли при 60 0С в течение полчаса для ингибирования термолабильных бактерицидных факторов крови (лизоцим, система комплемента, иммуноглобулины М- класса).

В пробирки с разными фракциями крови от иммунных и интактных животных вводили суспензию бруцелл из вакцинного штамма Br.abortus 19 до конечной концентрации 1 млрд. м.к. Концентрацию бруцелл в бакмассе определяли по отраслевому стандартному образцу мутности. Необходимую концентрацию микробных клеток получали путем серийных разведений бактериальной массы в стерильном физиологическом растворе. Для контроля концентрации бруцелл из последнего и предпоследнего разведения культуры делали высевы на МППГГА в чашках Петри с последующим подсчетом выросших колоний.

Концентрацию микробных клеток контролировали до инкубации, сразу после введения суспензии бруцелл в различные фракции крови и, через 6-8 часов после инкубирования при 37 0С.

Наибольший бактерицидный эффект проявила популяция лимфоцитов от иммунизированных животных. Количество микробных клеток после инкубации уменьшилось более чем в половину. У интактных животных эти показатели остались практически на первоначальном уровне.

Бактерицидная активность сыворотки крови интактного животного оказалась выше, чем иммунного. Сыворотка крови иммунного животного не только не подавляла, но наоборот, стимулировала рост и размножение бруцелл.

Показаны более выраженные бактерицидные свойства крови от иммунизированного животного по сравнению с показателями крови от интактного животного.

В популяции полиморфноядерных лейкоцитов от интактных и иммунных животных количество бруцелл увеличилось в 4 и более раза. Вместе с тем при микроскопировании мазков, окрашенных по Романовскому-Гимза, фагоцитоз ярко выражен, особенно в иммунной популяции нейтрофилов. Некоторые нейтрофилы настолько переполнены бруцеллами, что создается угроза разрыва мембраны. Что и происходит, по-видимому, периодически, судя по некоторым разбросанным в разных полях зрения конгломератам бруцелл и ядерного вещества полиморфноядерных лейкоцитов без клеточной оболочки. Это совпадает с мнением П.А Вершиловой (1972) о том, что в процессе фагоцитоза при бруцеллезе нейтрофилы погибают.

2.6. Изучение аллергизации организма телок в зависимости от дозы вакцины и кратности ее введения

Определение гиперчувствительности замедленного типа является одним из диагностических тестов при бруцеллезной инфекции.

Гиперчувствительность замедленного типа у телок, иммунизированных против бруцеллеза, мы определяли путем пальпебрального введения бруцеллина ВИЭВ.

Установлено, что полная и малая дозы вакцины вызывают аллергическую перестройку организма вакцинированных телок. Выявлена некоторая зависимость аллергической перестройки от величины иммунизирующей дозы вакцины из штамма 19 B. abortus только после проведенной ревакцинации. После реиммунизации малой дозой на 50-ый день аллергические реакции отмечены у 20% телок, привитых первично малой дозой, и у 60% телок, привитых первично полной дозой вакцины из штамма 19 B. abortus.

При аллергическом исследовании ревакцинированных телок, мы не наблюдали связи между степенью аллергизации организма телок и устойчивостью к последующему заражению.

Наши опыты в производственных условиях показали, что аллергический метод диагностики позволяет отличить вакцинированных животных от больных бруцеллезом. При использовании для вакцинации и ревакцинации овец вакцины из штамма Rev-1 аллергическая реакция практически не появлялась, а если и появлялась, то очень скоро исчезала, тогда как у животных, хронически больных бруцеллезом, она сохранялась даже при выпадении серологических реакций. Следовательно, аллергическая реакция у животных является показателем хронического бруцеллеза.

2.7. Изучение расселения и приживаемости бруцелл вакцинного штамма B. abortus 19 в организме телок в зависимости от дозы вакцины

Расселение и приживаемость культуры бруцелл вакцинного штамма B. abortus 19 изучали в опыте на 12 телках 5-6 месячного возраста. Установили, что расселяемость и приживаемость бруцелл вакцинного штамма в организме животных, привитых разными дозами вакцины, протекала аналогично с некоторой разницей в первый месяц после иммунизации. Так, индекс инфицированности у телок, привитых малой дозой, через 1 месяц после вакцинации равнялся 60+2, а у телок, привитых полной дозой - 74+4. Через 2 месяца после вакцинации индекс инфицированности составлял соответственно 44+2 и 44+4.

Установлено, что в ранние сроки после вакцинации наиболее интенсивно были заселены бруцеллами вакцинного штамма регионарные лимфатические узлы (заглоточные и предлопаточные). Ко второму месяцу после вакцинации регионарные лимфатические узлы начали освобождаться от бруцелл, причем наиболее выражено у телок, привитых малой дозой. Через 2 месяца после прививки отмечено более интенсивное заселение отдаленных от места введения вакцины лимфатических узлов (пароаортальных, паховых и надвымянных), а также паренхиматозных органов.

Показано, что расселяемость и приживаемость бруцелл вакцинного штамма 19 B. abortus в организме телок незначительно зависит от дозы вакцины, что согласуется с данными, полученными нами в опыте на морских свинках. При введении малой дозы бруцеллы вакцинного штамма более интенсивно заселяли и быстрее освобождали регионарные лимфоузлы, по сравнению с результатами, полученными при введении полной дозы вакцины. Через 2 месяца после введения малой дозы вакцины бруцеллы более интенсивно заселяли отдаленные лимфоузлы. Это свидетельствует, о том, что на введение малой дозы вакцины иммунная система организма животных реагирует менее интенсивно, чем на полную дозу и позволяет интенсивно расселяться бруцеллам вакцинного штамма.

Таким образом, бактериологическими методами показана необоснованность применения полной дозы вакцины (80 млрд. м.к.), что уже было продемонстрировано при изучении клеточного и гуморального звена иммунитета.

2.7.2. Изучение эффективности конъюнктивального метода иммунизации

Целесообразность конъюнктивального метода иммунизации обусловлена тем, что проникновение бруцелл в организм животных происходит главным образом через слизистые оболочки.

Изучение динамики показателей гуморального иммунного ответа у телок, иммунизированных конъюнктивальным способом, показало незначительный подъем уровня антител и быстрое их угасание.

Для проверки иммунитета через 12 месяцев после ревакцинации подопытные и контрольные животные, имеющих 8-8,5 мес. стельность, были заражены вирулентной культурой B. abortus  54.

После заражения 60% животных контрольной группы абортировали, а нетели из опытных групп нормально отелились. В группе животных, реиммунизированных после первоначальной вакцинации полной дозой вакцины, все животные противостояли заражению. В другой группе, где животные дважды (в 3-5 месячном возрасте и через год после первичной прививки) иммунизированы конъюнктивально дозой 5 млрд.м.к. вакцины из штамма 19 B. abortus, 85,7 % противостояло искусственному заражению вирулентной культурой бруцелл.

Таким образом, конъюнктивальное введение вакцины превосходит по эффективности подкожную вакцинацию.

Экспериментальные работы по конъюнктивальной вакцинации провели вакцинами из штаммов 19 B. abortus Rev-1 B. melitensis в производственных условиях на крупном и мелком рогатом скоте. 

Для проверки эффективности конъюнктивального метода введения вакцины, в неблагополучном по инфекционному эпидидимиту и бруцеллезу мелкого рогатого скота хозяйстве привили 480 баранов – производителей в дозе по 100 млн. м. к.

Серологическое исследование 333 иммунизированных баранов провели через 5 месяцев и выявили 12 гол. (3,6 %) реагирующих в РСК. Одно животное дало положительные показания в РА, РСК И РБП. Бактериологические посевы биоматериала от них были отрицательными.

Перорально иммунизировали вакциной из штамма Rev-1 B. melitensis 3 тыс. голов мелкого рогатого скота (2 отары) в дозе по 5 млрд.м.к. Через 2 месяца выявили в одной отаре 0,5% реагирующих животных, в другой – 1,6%. В дальнейшем не отмечали подъема титров антител, окоты были без абортов бруцеллезного происхождения.

2.8. Результаты исследований по эффективности вакцинации при бруцеллезе верблюдов

Проведенные исследования являлись составной частью НТП 03.05.04.–«Разработать и внедрить в производство научно-обоснованную программу по оздоровлению животноводческих хозяйств страны от бруцеллеза сельскохозяйственных животных с учетом зональных особенностей и специализации животноводства». Мероприятия против бруцеллеза проводили в верблюдоводческом хозяйстве Туркменистана в 1990-1995 гг., где это заболевание имело стационарный характер. При серологическом исследовании в отдельных гуртах общественного поголовья реагировало на бруцеллез более 10% и среди частного поголовья - до 25% исследованных верблюдов. Наблюдали частые случаи абортов, мертворожденных верблюжат, рождения слабого, нежизнеспособного молодняка.

Для специфической профилактики бруцеллеза верблюдов мы применили 2 вакцины. Половину поголовья верблюдов прививали традиционно вакциной из штамма 19 B. abortus, другую - вакциной из штамма Rev-1 B. melitensis.

Полной дозой вакцины (40 млрд. м.к.) из штамма 19 B. abortus, иммунизировали молодняк годовалого возраста, а взрослых верблюдов ревакцинировали малой (3 млрд. м.к.) дозой вакцины. Вакцину из штамма Rev-1 B. melitensis использовали для первоначальной прививки годовалого молодняка в дозе 3 млрд. м.к., а для ревакцинации взрослых животных – в дозе 0,5 млрд. м.к.

Серологические исследования верблюдов проводили в РА, РСК и РБП. Для постановки серологических реакций использовали биофабричные антигены и антигены собственной разработки. Технология изготовления диагностикума та же, что и для единого бруцеллезного антигена, с той лишь разницей, что в нашей модификации кроме бруцелл из 19-го штамма использовали местные штаммы, выделенные из абортированных плодов коз и верблюдов. Для получения цветного антигена окраску бакмассы бруцелл проводили, используя растительные пигменты местной флоры.

При постановке кольцевой реакции (КР) молоко верблюдов смешивали пополам с молоком коровы. Связано это с тем, что жировые шарики верблюжьего молока структурно отличаются от коровьего меньшими размерами и другими физико-химическими свойствами и делает невозможным постановку КР обычным методом.

После вакцинации у животных неблагополучного гурта прекратились аборты бруцеллезного происхождения и выявление положительно реагирующих животных. Хозяйство оздоровлено от бруцеллеза верблюдов.

В течение 4-х лет проводили испытание эффективности комплексной вакцинации верблюдов против бруцеллеза и сибирской язвы. Для этой цели части поголовья (500 гол.) вводили вакцину против бруцеллеза подкожно в полной дозе. С противоположной стороны вводили вакцину против сибирской язвы в дозировке, согласно наставлению. У вакцинированных животных не наблюдали отклонений от физиологической нормы. У верблюдов, вакцинированных двумя вакцинами, титр агглютинирующих бруцеллезных антител был выше, чем у животных, привитых только бруцеллезной вакциной. Эффективность комплексного введения вакцин определяли по эпизоотологическим показателям. В течение 3-х лет не выявили разницы в показателях благополучия у животных, привитых комплексно двумя вакцинами и моновакциной против бруцеллеза.

2.9. Конструирование вакцин на основе стрессорных белков как фактора патогенности (протективного антигена)

Нами проведено конструирование вакцин, иммунизирующим компонентом которой является фактор вирулентности, выделенный из бруцелл в результате кислотного, оксидативного и теплового стресса.

Полученный нами протективный антиген имеет молекулярную массу не более 30 kda, в чистом виде он не обладает антигенными свойствами, выявляемыми общепринятыми методами диагностики бруцеллеза. Для повышения иммуногенности протективный антиген конъюгировали с полимерными и корпускулярными носителями, а также с иммуномодуляторами различного происхождения. Для стимуляции образования супероксидных и гидроксильных радикалов и фермента – супероксиддисмутазы вводили в состав препарата металлы в ионной и высокодисперсной форме.

Выявили выраженное свойство препарата для «провокации» скрытых форм бруцеллеза, что облегчало проведение диагностических исследований животных.

Протективный антиген, выделенный из вирулентного штамма, превышает иммуногенность антигена, полученного из вакцинного штамма. Показано, что биохимический состав и количество действующего вещества в иммунизирующих препаратах, изготовленных из вирулентных и вакцинных штаммов, примерно одинаково, а иммуногенные их свойства существенно разнятся.

Превышение определенной пороговой дозы протективного антигена не увеличивает иммуногенные свойства, а вызывает состояние «иммунного паралича». У морских свинок, получивших «надпороговую» дозу препарата, искусственное заражение вызывает бурную реакцию на месте введения бруцелл заражающего штамма (феномен Артюса). В паренхиматозных органах и лимфатических узлах отмечены ярко выраженные патологоанатомические изменения. Бруцеллы заражающего штамма выделяли практически из всех органов и лимфатических узлов. Индекс инфицированности в 2-3 раза превышает аналогичные показатели у контрольных животных.

Введение «надпороговой» дозы протективного антигена у белых мышей угнетает синтез антител на введение чужеродного антигена и гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ). При этом угнетение иммунной системы не носит специфический характер.

Таким образом, протективный антиген, проявляет себя как типичный фактор патогенности «эндотоксин». Вакцинный препарат, полученный из этого антигена, обладает выраженной иммуногенностью при оптимальной дозировке действующего вещества.

3. Основные направления усовершенствования комплекса мероприятий по профилактике и борьбе с бруцеллезом животных в современных экономических условиях

В условиях разукрупнения животноводческих хозяйств в связи со сменой форм собственности, возросло значение организационно-хозяйственной деятельности, планирования и организации системы оздоровительных и профилактических мероприятий. Эти мероприятия должны быть направлены на все звенья эпизоотической цепи. Разработке эффективных мероприятий должен предшествовать всесторонний анализ эпизоотической обстановки, санитарного состояния и хозяйственных особенностей, применительно к каждой животноводческой ферме или населенному пункту. Необходимо учитывать специализацию животноводства, размещение животноводческих объектов, состояние мест водопоя скота, летних лагерей, наличие трасс перегона животных. Имеют значение данные об обороте стада, планах производства продукции, технологии выращивания молодняка. Фактически, необходим детальный анализ всех основных показателей, характеризующих состояние животноводства в масштабах хозяйства, района, области. Очень важна объективная оценка эпизоотического статуса каждой фермы, которые классифицируют по степени распространенности болезни. Для каждой из этих категорий хозяйств и ферм определяют конкретные меры профилактики и оздоровления.

Нельзя не учитывать тот факт, что в разных регионах условия, в которых осуществляется борьба с бруцеллезом сельскохозяйственных животных, имеют свои характерные особенности. К ним можно отнести разнообразие экономических, природно-географических, этнографических условий прямо или косвенно влияющих на проявление эпизоотического процесса бруцеллеза. В этой связи при внедрении методов борьбы с бруцеллезом в разных регионах необходим дифференцированный подход. Необходимо учитывать условия и тесноту хозяйственных связей, сходство эпизоотической обстановки, уровень и динамику проявления эпизоотического процесса бруцеллезной инфекции в каждом из субъектов, входящих в состав того или иного региона.

Подтверждением изложенных фактов служит анализ ветеринарной отчетности по субъектам федерации, который показал, что в схожих эпизоотических ситуациях в разных субъектах по-разному диагностируют и выявляют больных животных, объявляют и снимают ограничения с неблагополучных пунктов.

В образовавшейся дилемме - вакцинировать или не вакцинировать, необходим конструктивный подход. Вакцинация с заниженным охватом поголовья не только не улучшает ситуацию, но и способствует появлению проблемы дифференциации поствакцинальных титров антител, мешающих выявлению больных животных.

Негативные последствия поствакцинальных титров, проявляются также и при широком охвате поголовья вакцинацией. Но на фоне высокого эффекта от иммунопрофилактики их негативное значение передвигается на второй план. Другое дело, когда охват вакцинацией не достаточен. Тогда эффект от иммунопрофилактики исчезающе мал, и на первое место выходят проблемы дифференциации поствакцинальных титров.

В сложившейся ситуации возможны следующие варианты действий. Если обходиться без живых вакцин невозможно, как агглютиногенных, так и слабоагглютиногенных, необходимо, существенно увеличить охват поголовья вакцинациями. Анализ ветеринарной отчетности за последние 3-4 года свидетельствует о том, что на местах эту проблему прочувствовали и сделали правильные выводы. Так, в 2006 году охват прививками поголовья крупного рогатого скота увеличился на 11,7% по сравнению с предыдущим годом, по мелкому рогатому скоту охват увеличился на 4,1%.

В 2007 году процент увеличения по крупному рогатому скоту составил 5,3 %, по мелкому рогатому скоту – 189,7 % - за счет широкого внедрения в ЮФО (Дагестан) вакцины из штамма Rev-1 B. melitensis. В 2008 году по крупному рогатому скоту показатели охвата увеличились на 15,7%, по мелкому рогатому скоту – на 7,8 %. Это положительная тенденция, хотя пока явно недостаточная.

Из приведенного материала видно, что вакцинация мелкого рогатого скота против бруцеллеза существенно увеличилась, однако особого эффекта в целом по России не видно. Получается так потому, что увеличился не «охват» поголовья прививками, а «число» привитых животных за счет одного региона – Республики Дагестан. При этом показатели неблагополучия в целом по России увеличиваются за счет других регионов, где охват поголовья вакцинацией недостаточен. При чем, в результате усилившейся миграции животных, по причине бесконтрольной купли-продажи бруцеллез нередко выявляется в регионах, где этого заболевание уже давно не регистрировалось.

При мероприятиях по увеличению охвата поголовья животных вакцинацией необходимо уточнить кратность и, возможно, методы иммунизации и временной интервал между ревакцинациями.

Таким образом, если необходимость применения живых, в той или иной степени агглютиногенных вакцин не дискутируется, тогда нужно уточнить дозировки вакцин. Необходимость уменьшения доз, особенно при регулярных ревакцинациях не должна вызывать сомнения. Особенно следует обратить внимание на конъюнктивальном варианте вакцинации более трудоемким, но выигрышным вариантом в данной ситуации.

В регионах, где усложнена дифференциальная диагностика бруцеллеза, необходимо перейти на слабоагглютиногенные и неагглютиногенные вакцины. Учитывая научный и практический опыт, из живых слабоагглютиногенных вакцин на сегодняшний день наиболее перспективны отечественные вакцины из штаммов B. abortus 82, 75/79-АВ.

4. ВЫВОДЫ

  1. Анализ изменений эпизоотической обстановки по бруцеллезу животных в Российской Федерации позволяет выделить:

- организационный период: борьба с бруцеллезом осуществляется методом выбраковки абортировавших и реагирующих на бруцеллез животных в условиях коллективных хозяйств; разработка средств специфической профилактики (1920-1953 гг.);

- период внедрения специфической профилактики бруцеллеза с применением вакцины из штамма B. abortus 19 (1954-1974 гг.);

- внедрение в практику        вакцин: для профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота - из SR-штамма 82 B. abortus и для профилактики бруцеллеза мелкого рогатого скота – из штамма Rev-1 B. melitensis (1974-1990 гг.);

- период снижения поголовья животных, объема вакцинопрофилактики в условиях реструктуризации агропромышленного комплекса, смены форм собственности и перехода на рыночные отношения (с 1991 г.)

  1. Использование комплекса стандартизированных показателей (инцидентность; уровень передержки инфицированного скота; коэффициент очаговости; показатель превалентности) позволяет характеризовать проявления эпизоотического процесса бруцеллеза животных и эффективность проводимых противоэпизоотических мероприятий.
  2. Поддержанию и интенсификации эпизоотического процесса способствуют передержка инфицированных животных без должной изоляции, низкий уровень применения средств специфической профилактики, снижение устойчивости животных вследствие неполноценного кормления и неудовлетворительных условий содержания. Те же причины обусловливают появление новых неблагополучных пунктов.
  3. Дикие животные (заяц-толай, или пес­чаник - Lepus to1ay, лиси­ца обыкновенная - Vu1pes vu1pes, степная, или пятнистая кошка - Felis libiса, шакал - Canis aureus, корсак - Vu1pes corsak), а также грызуны (суслики, песчанки, тушканчики), не имеют эпизоотологического значения как источник возбудителя бруцеллеза для сельскохозяйственных животных. Не установлена роль кровососущих насекомых (иксодовых клещей), как фактора трансмиссивного переноса бруцелл.
  4. Создание компьютерной базы данных эпизоотологических, серологических и бактериологических исследований, отражающих динамику выявления эпизоотических очагов, реагирующих и больных животных, обеспечивает возможность ретроспективного анализа, оперативной оценки и прогнозирование обстановки по бруцеллезу в субъектах РФ.
  5. Показана вариабельность неблагополучия регионов РФ по бруцеллезу животных, связанная с различием технологии животноводства и уровнем проведения противобруцеллезных мероприятий. В 2000-2010 гг. бруцеллез крупного рогатого скота широко распространен в ЮФО (1029 неблагополучных пунктов), значительно – в СФО (53), ПФО (39) и ДВФО (21), ограниченно – в ЦФО (10), УФО (6) и СЗФО (4). Наибольшее количество неблагополучных пунктов по бруцеллезу мелкого рогатого скота выявлено в ЮФО (118), затем в СФО (66), ЦФО (29), УФО (9), ДВФО (9), СЗФО (4).
  6. Наибольшая заболеваемость людей бруцеллезом в Российской Федерации за период с 2001 по 2010 гг. регистрируется на территории ЮФО (72,9%). Больных людей выявляют практически во всех субъектах округа. На субъекты СФО приходится 17,1% заболеваемости людей бруцеллезом по стране.
  7. Использование малых доз вакцины из штамма 19 B. abortus (в том числе и конъюнктивальное ее введение) для ревакцинации крупного рогатого скота против бруцеллеза способствует решению проблемы поствакцинальных титров антител без заметного снижения иммуногенности препарата.
  8. Установлена эффективность комплексного введения бруцеллезной и сибиреязвенной вакцин верблюдам. Не выявлено разницы в показателях благополучия по бруцеллезу у животных, привитых одновременно двумя вакцинами или каждой вакциной отдельно. Отмечено увеличение титра агглютинирующих бруцеллезных антител у верблюдов, привитых двумя вакцинами по сравнению с животными, иммунизированными только бруцеллезной вакциной.
  9. Протективный антиген, полученный из вирулентного штамма, практически не отличается по количеству белков, полисахаридов, нуклеотидов, но существенно превосходит по иммуногенности антиген, выделенный из вакцинного штамма. На его основе разработана слабоагглютиногенная вакцина (САВ), создающая 100% иммунитет у морских свинок.
  10. Показано, что оптимальным методом профилактики бруцеллеза овец и коз является ежегодная реиммунизация малой дозой вакцины из штамма  Rev-1 B. melitensis по фону полной дозы.
  11. В регионах с напряженной ситуацией по бруцеллезу животных необходимо применять живые вакцины из штаммов Rev-1 B. melitensis на мелком рогатом скоте и 19 B. abortus – на крупном рогатом скоте. После снижения напряженности эпизоотического процесса следует использовать слабоагглютиногенные живые вакцины (шт. 82 B. abortus и 75/79-АВ B. abortus).

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты наших исследований учтены при разработке ряда нормативных и директивных документов: Наставления по применению вакцины живой сухой из штамма 19 B. abortus в малых дозах против бруцеллеза крупного рогатого скота (в порядке производственного испытания) (Утв. ГУВ Госагропрома СССР 21.11.1986 г.); Правил карантина на фермах, хозяйствах, населенных пунктах, районах, неблагополучных по заболеванию сельскохозяйственных животных бруцеллезом и туберкулезом (Утв. ГУВ Госагропрома СССР 30.01.1987 г.); Инструкции о мероприятиях по профилактике и ликвидации бруцеллеза животных (Утв. ГУВ Госагропрома СССР 10.11.1988 г.); Наставления по диагностике бруцеллеза животных (Утв. ГУВ Госагропрома СССР в 1988 г.); Комплексных мероприятий по оздоровлению животноводства страны от бруцеллеза и туберкулеза (НТС Госагропрома СССР, 1988 г.); Наставления по применению вакцины живой сухой из штамма 19 B. abortus против бруцеллеза крупного рогатого скота (Утв. ГУВ Госагропрома СССР 10.11.1988 г.); Программы испытания вакцины из штамма 19 B. abortus в малой дозе против бруцеллеза крупного рогатого скота в экспериментальных и производственных условиях (Одобрена Бюро Отделения ветеринарии ВАСХНИЛ 20.11. 1986 г. и согласована с зам. нач. Госагропрома СССР 20.11. 1986 г.).

Рекомендации по использованию малой дозы вакцины из штамма 19 B. abortus включены в «Комплексные мероприятия по оздоровлению животноводства Целиноградской области от бруцеллеза и туберкулеза на 1986 - 1990 годы» (Утв. Целиноградским областным Советом народных депутатов 10.04. 1986 г.); Разработана «Система профилактических и оздоровительных мероприятий от бруцеллеза и инфекционного эпидидимита баранов с применением вакцины из штамма B. melitensis Rev-1 в хозяйствах Туркменской ССР» (Утв. НТС МСХ ТССР в 1991 г.).

Получены патенты: «Цветной антиген для экспресс - диагностики бруцеллеза животных» (Патентное управление министерства экономики и финансов Туркменистана. - Патент № 272, 2002); « Вакцина жидкая живая из штамма Rev-1 B. melitensis для иммунизации сельскохозяйственных животных против бруцеллеза» (Патентное управление министерства экономики и финансов Туркменистана. - Патент № 285, 2002.).

Результаты наших исследований использованы при разработке: Инструкции по применению вакцины против бруцеллеза овец и коз и инфекционного эпидидимита баранов из штамма Brucella melitensis Rev-1 живой сухой (Утв. Россельхознадзором Минсельхоза РФ 06.06.2008 г.); проекта Правил по борьбе с бруцеллезом животных (направлен в Россельхознадзор (письмо от 06.06. 2008 г. № 941/10) для рассмотрения и утверждения); рекомендации «Система профилактических и оздоровительных мероприятий по бруцеллезу верблюдов и крупного рогатого скота в хозяйствах Туркменистана с применением биологических противобруцеллезных препаратов по результатам НИР на тему: «Усовершенствовать и внедрить более эффективные мероприятия по профилактике и ликвидации бруцеллеза сельскохозяйственных животных с учетом краевых особенностей» (рассмотрено и одобрено на Ученом Совете Туркменского Научно-исследовательского института животноводства и ветеринарии, протокол №5 от 17.02.1996 г.); краткого наставления по постановке и учету «Антигена единого бруцеллезного для РА, РСК и РДСК» (Утв. Генеральным директором объединения по ветеринарному обслуживанию сельскохозяйственных животных и птиц, Главгосветинспектором Туркменистана № 2 от 11.03.1999 г.); Временного наставления по применению вакцины живой жидкой из штамма 19 бруцелла абортус для иммунизации крупного и мелкого рогатого скота и верблюдов против бруцеллеза (Утв. Генеральным директором объединения по ветеринарному обслуживанию сельскохозяйственных животных и птиц, Главгосветинспектором Туркменистана № 5 от 29.05.2000 г.); Временного наставления по применению вакцины живой жидкой из штамма Рев-1 бруцелла мелитензис для иммунизации мелкого рогатого скота и верблюдов против бруцеллеза (Утв. Генеральным директором объединения по ветеринарному обслуживанию сельскохозяйственных животных и птиц, Главгосветинспектором Туркменистана № 6 от 29.05.2000 г.); Наставления по применению цветного антигена для серологической экспресс-диагностики бруцеллеза (Утв. Генеральным директором объединения по ветеринарному обслуживанию сельскохозяйственных животных и птиц, Главгосветинспектором Туркменистана № 1 от 17.02.2001 г.); Временного наставления по применению вакцины живой жидкой из штамма Рев-1 бруцелла мелитензис для иммунизации мелкого рогатого скота и верблюдов против бруцеллеза, также для иммунизации баранов против инфекционного эпидидимита (Утв. Генеральным директором объединения по ветеринарному обслуживанию сельскохозяйственных животных и птиц, Главгосветинспектором Туркменистана № 1 от 23.05.2005 г.).

Разработаны и утверждены в установленном порядке:

«Технологический регламент по производству, контролю и применению слабоагглютиногенной вакцины (САВ) из протективного антигена бруцелл против бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота»,

«Методические наставления по применению слабоагглютиногенной вакцины (САВ) из протективного антигена бруцелл для профилактики бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота».

Принимая во внимание сложившуюся сложную эпизоотическую и эпидемиологическую обстановку по бруцеллезу в отдельных Федеральных округах и их субъектах существует острая необходимость развертывания органами ветеринарной службы и Роспотребнадзора как в местных так и субъектовых средствах массовой информации широкую, активную пропаганду по борьбе с бруцеллезом сельскохозяйственных животных и защите сельского и городского населения от заражения. Кроме этого, следует улучшить диспансеризацию сельского населения, работающего в животноводческом производстве в государственном и частном секторе.

Использование малых доз агглютиногенных вакцин из штаммов 19  B. abortus и Rev-1 B.melitensis при оздоровлении хозяйств от бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота позволит уменьшить проблему длительной серопозитивности, возникающую при ревакцинации взрослых животных полными дозами вакцин и увеличит возрастные границы применения вакцин.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ

ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в периодических научных изданиях, рекомендованных ВАК РФ для опубликования основных научных результатов диссертации на соискание ученой степени доктора наук

  1. Альбертян, М.П. Вакцины против бруцеллеза: прошлое, настоящее и будущее / Альбертян М.П., Искандаров М.И., Федоров А.И. // Российский ветеринарный журнал. – М.: КолосС, 2006. - № 4. - С. 8-11
  2. Альбертян, М.П. Иммунобиологические свойства бруцеллезного антиген-полимерного конъюгата / Альбертян М.П., Искандаров М.И., Федоров А.И. //  Ветеринарная патология. – 2006. - № 3 (18). - С. 122-128
  3. Альбертян, М.П. Свойства протективного антигена из разных штаммов бруцелл / Альбертян М.П., Искандаров М.И., Федоров А.И. // Ветеринария. – 2006. - № 10. – С. 30-31
  4. Анализ эпизоотической ситуации по бруцеллезу крупного рогатого скота в России / Искандаров М.И., Федоров А.И., Альбертян М.П., Найманов А.Х., Овдиенко Н.П. // Российский ветеринарный журнал. –М.: КолосС, 2006. - № 4. - С. 4-5
  5. Игнатов, П.Е. Сравнительное изучение иммуностимуляторов различного происхождения / Игнатов П.Е., Блинов Н.И., Кирш Ю.Э., Искандаров М.И. // Ветеринария. - № 9. – 1983. С. 30-31.
  6. Изучение антигена, провоцирующего скрытые формы бруцеллезной инфекции / Федоров А.И., Искандаров М.И., Альбертян М.П. //  Ветеринария. -2007 г., № 6. - С. 23-26
  7. Искандаров, М.И. Диагностика бруцеллеза / Искандаров М.И., Федоров А.И., Альбертян М.П. // Животноводство России. – 2007. - № 5. - С. 59-60
  8. Искандаров М.И. Иммуногенная эффективность слабоагглютино-генных вакцин против бруцеллеза сельскохозяйственных животных / М.И. Искандаров // Веткорм.- 2011.- № 1.- С. 18-19
  9. Искандаров М.И. Профилактика бруцеллеза мелкого рогатого скота / Искандаров М.И., Альбертян М.П., Федоров А.И.// Веткорм.- 2011.- № 2.- С. 20-21
  10. Маматова, З.Б. Иммуноферментный анализ для выявления бруцеллезных антигенов / Маматова З.Б., Искандаров М.И.// Ветеринария. – 1987. - № 4. – С. 26-27
  11. Федоров, А.И. Изучение иммуногенности экстрацеллюлярных антигенов из разных штаммов бруцелл / Федоров А.И., Искандаров М.И., Альбертян М.П. // Веткорм.- 2011.- № 2.- С. 18-19
  12. Федоров, А.И. Изучение свойств бруцеллезного полисахаридного антигена/ Федоров А.И., Искандаров М.И., Альбертян М.П. // Веткорм.- 2011.- № 4.- С. 16-17
  13. Эффективность вакцинопрофилактики бруцеллеза животных в России / Гулюкин М.И., Альбертян М.П., Искандаров М.И., Федоров А.И., Боровой В.Н., Коломыцев С.А. //  Ветеринария. – 2008. - № 9. - С. 7-12
  14. Эффективная схема вакцинации животных против бруцеллеза / Устаев В.М., Альбертян М.П., Искандаров М.И., Федоров А.И. // Веткорм. – 2008. - № 6. - С. 22-23
  15. Эпизоотическая ситуация по инфекционному эпидидимиту баранов в России /Нестреляев С.С., Альбертян М.П., Искандаров М.И., Федоров А.И. //Ветеринария.- 2011.- №8.- С. 25-28

Статьи в других периодических изданиях, в материалах конференций и сборниках научных трудов

  1. Альбертян, М.П. Проблемы профилактики бруцеллеза / Альбертян М.П., Искандаров М.И., Федоров А.И. // Ветеринарный консультант. – 2006. -№ 4 (119) февраль - С. 6-8.
  2. Альбертян, М.П. Проблемы бруцеллеза животных, итоги и перспективы борьбы / Альбертян М.П., Искандаров М.И., Федоров А.И. // Труды ВИЭВ. – М., 2008. – Т. 74. – С. 84-90
  3. Анализ эпизоотической ситуации по инфекционому эпидидимиту баранов в Российской Федерации за 1976-2007 гг. /Нестреляев С.С., Искандаров М.И., Альбертян М.П., Федоров А.И. // Труды ВИЭВ. – 2009. - Т. 75. -С. 490-495
  4. Бруцеллез верблюдов /Искандаров М.И., Альбертян М.П., Федоров А.И., Аразов Ч.//Труды ВИЭВ. – 2010. - Т. 76. -С. 57-61
  5. Бруцеллоцидные свойства сыворотки крови: Биотехнологические и иммунные препараты / Игнатов П.Е., Федоров А.И., Мирзаева М.А., Искандаров М.И. - Ташкент, 1989. - С. 78-82
  6. Вакцина жидкая живая из штамма Rev-1 Br. melitensis для иммунизации сельскохозяйственных животных против бруцеллеза / Искандаров М.И., Керимов Ч., Казимова Н.А., Сопыев Б., Карадурдыев Р.А., Искандарова С.С. // Патентное управление министерства экономики и финансов Туркменистана. - Патент № 285. - 2002
  7. Влияние бруцеллезной антиген-полимерной вакцины на функциональное состояние печени и почек /Федоров А.И., Искандаров М.И., Альбертян М.П., Имомалиев У.Н. //Актуальн. пробл. инф. патол. и иммунол. ж. - х: Материалы международ. науч.-практ. конф. - М., 2006.- С. 397-399
  8. Влияние двукратного введения бруцеллезной антиген-полимерной вакцины на некоторые показатели иммунологической перестройки организма: Основные проблемы ветеринарной медицины и стратегия борьбы с заболеваниями сельскохозяйственных животных в современных условиях / Искандаров М.И., Федоров А.И., Нестреляев С.С., Альбертян М.П.,Имомалиев У.Н., Юсупов О.Ю. // Сб. науч. трудов ГНУ Прикаспийский зональный НИВИ. - Махачкала, 2007. - С. 36- 38
  9. Значение гуморального и клеточного иммунитета при бруцеллезе / Федоров А.И., Искандаров М.И., Игнатов П.Е., Альбертян М.П., Нестреляев С.С., Некрасов А.В.Хаитов Р.М., Петров Р.В. // Ж. Физиология и патология иммунной системы.- М., 2006. -Т. 10. - № 8. - С.3-7.
  10. Изучение вирулентных свойств культуры из штамма Br. ovis 8406 на морских свинках и баранчиках  /Альбертян М.П., Искандаров М.И., Федоров А.И., Павлова А.В. // Актуальн. пробл. инф. патол. и иммунол. ж. - х: Материалы международ. науч.-практ. конф. - М., 2006. С. 145-147.
  11. Изучение свойств антиген-полимерных конъюгатов на лабораторных животных / Альбертян М.П., Искандаров М.И., Федоров А.И., Имомалиев У.Н. // Актуальн. пробл. инф. патол. и иммунол. ж. - х: Материалы международ. науч.-практ. конф. - М., 2006.- С. 240-242
  12. Изучение иммунобиологических свойств антиген-полимерной вакцины против бруцеллеза / Петров Р.В.,  Хаитов Р.М., Некрасов А.В. , Пучкова Н.Г., Иванова А.С., Федоров А.И., Искандаров М.И., Альбертян М.П. // Ж. Физиология и патология иммунной системы. - М., 2006. - Т. 10. - № 9. – С. 9-13.
  13. Искандаров, М.И. Состояние Т- и В- системы иммунитета у КРС при иммунизации различными дозами вакцины из штамма 19 / Искандаров М.И. // Методы и средства диагностики, терапии и профилактики инфекционных болезней: Труды ВИЭВ. - М., 1985. – Т. 63. – С. 11-21
  14. Искандаров, М.И. Иммунобиологическая реактивность крупного рогатого скота при использовании малых доз вакцины из штамма B. abortus 19: Автореф. дисс. ... канд. вет. наук: 06.02.02./М.И Искандаров; ВИЭВ. – М.,  1986. - 24 с.
  15. Искандаров, М.И Цветной антиген для экспресс-диагностики бруцеллеза животных / Искандаров М.И., Карадурдыев Р.А., Искандарова С.С., Сопыев Б.С. // Патентное управление министерства экономики и финансов Туркменистана. Патент № 272, 2002
  16. Искандаров М.И. Некоторые механизмы противобруцеллезного иммунитета: Патология сельскохозяйственных животных и пути ее профилактики /Искандаров М.И., Федоров А.И., Альбертян М.П. и др.// Матер. 6-й межрегиональной науч.-практ. конф. - СибНИВИ-ВНИИБТЖ. - Омск, 2007. – Вып. 2. С.84-90
  17. Искандаров, М.И. Изучение свойств различных вариантов противобруцеллезных корпускулярных вакцин в экспериментальных условиях / Искандаров М.И., Альбертян М.П., Федоров А.И. // Материалы междунар. науч.-практич. конф.: Современное состояние и перспективы исследований по инфекционной и протозойной патологии животных, рыб и пчел. – М., 2008. – С. 132-137
  18. Искандаров, М.И. Вакцина из штамма Rev-1 для профилактики бруцеллеза мелкого рогатого скота / Искандаров М.И., Альбертян М.П., Федоров А.И. // Труды ВИЭВ. – 2009. - Т. 75. -С. 294-300
  19. Искандаров, М.И. Природная очаговость бруцеллеза и пути передачи инфекции / Искандаров М.И., Альбертян М.П., Федоров А.И.// Труды ВИЭВ. – 2009. - Т. 75. -С. 300-307
  20. Искандаров, М.И. Бруцеллез крупного рогатого скота в южном федеральном округе / Искандаров М.И. // Современные проблемы диагностики и профилактики хронических зооантропонозных инфекций. Материалы Всеросс. науч. практ. конф., посвящен. памяти засл. деят. науки РФ, д.в.н., проф. И.А. Косилова. –Омск, 2009. -С. 58-62.
  21. Касьянов, А.Н. Течение вакцинного процесса у телок, иммунизированных малыми дозами вакцины из штамма 19 / Касьянов А.Н., Ягудин Р.Г., Искандаров М.И. // Пути ликвидации инфекционных и  инвазионных болезней с/х животных: Сборник научных трудов. - Новосибирск, 1985. - С. 23-25
  22. Касьянов, А.Н. Реактивность крупного рогатого скота при иммунизации против бруцеллеза малой дозой вакцины из штамма 19 / Касьянов А.Н., Ягудин Р.Г., Искандаров М.И., Ромахов В.А. //  Бюлл. ВИЭВ. – М., 1987. - Вып. 64. - С. 59-65
  23. Керимов Ч. Бруцеллез кеселли доварларда  дрейн згериш /Керимов Ч., Ханов О., Исгендеров М.И. //Туркменистаны агросенагат комплекси.- Ашгабат, 1989.- № 11.- Х. 32-33
  24. Керимов, Ч. Реакции у овец при бру­целлезе / Керимов Ч., Искандаров М.И., Ханов О. // Агропромышленный комплекс Туркменистана. -  Ашхабад, 1989. - № 1. - С. 22-23
  25. Керимов, Ч. Диагностика бруцеллеза / Керимов Ч., Искандаров М.И. // Ж. «Агропромышленный комплекс Туркменистана». - Ашхабад, 1989. - № 11. - С. 30-31
  26. Керимов, Ч. Исследование диких жи­вотных на бруцеллез / Керимов Ч., Искандаров М.И. // Проблемы экологии в ветеринарной медицине: Тезисы докладов Всесоюзной научно-технической конференции 25-27 октября, 1989 г. г. Воронеж. – М., 1989. - С. 169-170
  27. Керимов, Ч. Инфекционный эпиди­димит мелкого рогатого скота в Туркменистане / Керимов Ч., Искандаров М.И. // Известия Академии Наук Туркменской ССР (серия биологических наук). – Ашхабад: Изд. «Ылым», 1990. - № 6. - С. 66-67
  28. Керимов, Ч. Малая доза вакцины при бруцеллезе / Керимов Ч., Искандаров М.И. // Агропромышленный комплекс Туркменистана. - Ашхабад, 1991. - № 1.- С. 28
  29. Керимов, Ч. Бруцеллез кесели ве она гаршы гореш чорелери (Заболевание бруцелле­зом и борьба с ним): Брошюра / Керимов Ч., Искандаров М.И. // Туркменистан НИИНТИ. - Ашхабад, 1991. - 19 стр.
  30. Керимов, Ч. Дезинфекция при бруцеллезе и туберкулезе / Керимов Ч., Искандаров М.И. // Сельское хозяйство Туркменистана. - Ашхабад, 1991. - № 5. - С. 29
  31. Керимов, Ч. О природной очаговости бруцеллеза в Туркмении / Керимов Ч., Искандаров М.И. // Известия Академии Наук Туркменской ССР (серия биологических наук). – Ашхабад: Изд. «Ылым», 1991. - № 6. - С. 71-72
  32. Керимов, Ч. Инфекционный эпидидимит мелкого рогатого скота и меры его диагностики и профилактики / Керимов Ч., Искандаров М.И. // Вопросы селекции, кормления и содержания животных, профилактики и лечения их болезней в Туркменистане: Сборник. – Ашгабат: Изд. «Ылым», 1993. - С. 91-98
  33. Керимов, Ч. Выживаемость бруцелл в верблюжьем чале, молоке и агаране /Керимов Ч., Искандаров М.И.// Здравоохранение Туркменистана, 1994. - № 5. - С. 27-29
  34. Керимов, Ч. Профилактика и оздоровление верблюдов и крупного рогатого скота от бруцеллеза / Керимов Ч., Искандаров М.И. // Развитию животноводства научное обеспечение: Сб. науч. тр. - Ашгабат, 1999. - С. 36-37.
  35. Конструирование слабоагглютиногенных вакцин против бруцеллеза / Гулюкин М.И., Альбертян М.П., Искандаров М.И., Федоров А.И. // Междунар. рабоч. Совещание: Бруцеллез - пограничная инфекция ж-ных и ч-ка, требующая общих усилий разных стран. - Серпухов, 2008. – С. 15-16.
  36. Лим, А.А. Динамика иммуноглобулинов М и G в зависимости от метода введения противобруцеллезной вакцины / Лим А.А., Касьянов А.Н., Искандаров М.И. // Сб. тр. ВИЭВ. – Москва, 1987. - №64. – С.74-78.
  37. Некоторые механизмы противобруцеллезного иммунитета / Федоров А.И., Искандаров М.И., Альбертян М.П., Нестреляев С.С., Игнатов П.Е. // Патология с.–х. ж-х и пути ее профилактики: Материалы 6-й межрегион. науч.-практ. конф. посвящ. 85-летию СибНИВИ-ВНИИБТЖ. – Омск. – 2007. – Вып. -  2. - С. 84-90
  38. Нестреляев, С.С. Изучение иммунобиологических свойств культуры штамма B. ovis 10/2 / Нестреляев С.С., Искандаров М.И., Альбертян М.П. // Труды ВИЭВ. – 2009. - Т. 75. -С. 483-490
  39. Определение оптимальной прививочной дозы бруцеллезной антиген-полимерной вакцины (экспериментальные исследования) / Имомалиев У.Н., Федоров А.И., Альбертян М.П. // Актуальн. пробл. инф. патол. и иммунол. животных: Материалы международ. науч.-практ. конф. - М., 2006.- С. 233-235.
  40. Основные биологические свойства усовершенствованной инактивированной адъювант-вакцины «ЭВАК» /Альбертян М.П., Искандаров М.И., Федоров А.И., Павлова А.В. // Актуальн. пробл. инф. патол. и иммунол. ж. - х: Материалы международ. науч.-практ. конф. - М., 2006. С. 148-150.
  41. Оптимальные параметры иммунизации лабораторных животных бруцеллезной антиген-полимерной вакциной: Основные проблемы ветеринарной медицины и стратегия борьбы с заболеваниями сельскохозяйственных животных в современных условиях /Федоров А.И., Искандаров М.И., Альбертян М.П., Нестреляев С.С., Юсупов О.Ю.// Сб. науч. трудов ГНУ Прикаспийский зональный НИВИ. - Махачкала, 2007. - С.38-41.
  42. Оценка безвредности и иммуногенной активности бруцеллезной антиген-полимерной вакцины / Имомалиев У.Н., Искандаров М.И., Федоров А.И., А.В., Альбертян М.П. // Актуальн. пробл. инф. патол. и иммунол. ж. - х: Материалы международ. науч.-практ. конф. - М., 2006. С. 236-239.
  43. Получение и изучение свойств протективного антигена выделенного из вирулентных штаммов бруцелл: Проблемы ветеринарной медицины в  науч.- практич. конф. посвященной 35-летию ГУ Прикаспийск. зональн. науч.- исслед. вет. ин-та. - г. Махачкала. – 2003. - С. 35-36
  44. Практика оздоровления хозяйств Волгоградской области от бруцеллеза крупного рогатого скота / Искандаров М.И., Федоров А.И., Альбертян М.П., Филипов Н.В., Дубинин В.С. // Труды ВИЭВ. – 2009. - Т. 75. -С. 307-312
  45. Протективный антиген бруцелл как фактор патогенности /Федоров А.И.,Искандаров М.И., Альбертян М.П., Нестреляев С.С.// Труды ВИЭВ. – 2009. - Т. 75. -С. 644-648
  46. Федоров, А.И. Изучение вакцинального процесса и иммунитета у морских свинок, привитых пониженными дозами вакцины из штамма B. abortus 104-M / Федоров А.И., Искандаров М.И. // Актуальные вопросы профилактики и лечения болезней с/х животных : Тезисы Всесоюзной научно-технической конференции молодых ученых 21-23 мая 1985 г. -Москва, 1985. - С. 253-254.
  47. Федоров, А.И. Анализ эпизоотической ситуации по бруцеллезу крупного рогатого скота в Волгоградской области / Федоров А.И., Искандаров М.И., Альбертян М.П. // Современные проблемы диагностики и профилактики хронических зооантропонозных инфекций. Материалы Всеросс. науч. практ. конф., посвящен. памяти засл. деят. науки РФ, д.в.н., проф. И.А. Косилова. – Омск, 2009. -С. 90-93.
  48. Эпизоотологическая и эпидемиологическая роль бруцеллеза мелкого рогатого скота и других видов животных в Российской Федерации / Искандаров М.И., Федоров А.И., Нестреляев С.С., Альбертян М.П. // Труды ВИЭВ. – 2009. - Т. 75. -С. 312-318
  49. Ignatov P. Provocation as a pathway for eradication of brucellosis: Brucellosis 2005, Inter­national Research Con­ference / Ignatov P., Fedorov A., Filippov N., Iscandarov M., Sochev V. // Including the 58th Brucellosis Research Conference,Merida, Yucatan, Mexico October 15th to 19th. – 2005. -P.83
  50. Iscandarov M. Maldarcylyk we weterinariya institutynda oba hojalyk mallaryn brucelles keseline garsy yerli seresdelerden tayyarlanan preparatlar / Iscandarov M., Sopyyew B., Garadurdyyew R., Iskandarova S., Haydarov K.// Turkmenistanyn tebigy onumlerinden derman serisdelerini doretmegin geljegi, Ylmy konferensiyasy (28 iun 2000 y.). - Asgabat, 2000. - H. 5-6
 






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.