WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

Шульга Николай Николаевич

РАЗРАБОТКА И ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ

ПРЕПАРАТОВ ИЗ КРОВИ ЖИВОТНЫХ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ

РЕЗИСТЕНТНОСТИ НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ

16.00.03 – ветеринарная микробиология, вирусология,

эпизоотология,  микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора ветеринарных наук

Екатеринбург –  2009

Работа выполнена в Дальневосточном зональном научно-исследовательском ветеринарном институте Российской академии сельскохозяйственных наук

Научный консультант:        доктор биологических наук 

Горковенко Наталья Евгеньевна

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Ощепков Владимир Григорьевич

доктор ветеринарных наук, профессор

Шкиль Николай Алексеевич

доктор ветеринарных наук, профессор

Шушарин Александр Данилович

Ведущая организация:                ГНУ Научно-исследовательский ветеринарный

  институт Нечерноземной Зоны РФ РАСХН

Защита состоится « 26 » ноября 2009 г. в « 9-00 » часов на заседании диссертационного совета Д 006.099.01 при Уральском научно-исследовательском ветеринарном институте РАСХН по адресу:

620142 г. Екатеринбург, ул. Белинского, 112а, тел./факс (343) 257-82-63.

Адрес сайта института: http://www.urnivi.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Уральского научно-исследовательского ветеринарного института РАСХН

Автореферат разослан «___» ________________ 2009 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

кандидат ветеринарных наук Печура Е.В.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.  Получение и выращивание молодняка, особенно в условиях крупных ферм требует соблюдения определенных технологических условий, основными из которых являются – сбалансированное полноценное кормление, защита от болезней, искусственная регуляция численности. Однако практика ведения продуктивного животноводства показывает, что даже при строгом соблюдении всех условий регистрируется стабильно высокая заболеваемость молодняка желудочно-кишечными и респираторными инфекциями. При этом ведущее значение в настоящее время имеют не классические, а факторные инфекции, вызываемые широко распространенными в природе условно патогенными бактериями (УПБ).  В числе выделяемых УПБ ведущее место занимают  многочисленные представители семейства Enterobacteriaceae,  неферментирующие бактерии  рода Pseudomonas и Acinetobacter, грамположительная кокковая микрофлора и их ассоциации (Джупина С.И., 2001; Шахов А.Г., 2002; Бедоева З.М. и др. 2006; Золотухин С.Н., Пульчеровская Л.П., Каврук Л.С., 2006; Красиков А.П., 2007; Макаров Ю.А., Горковенко Н.Е., 2008; Олейник А.В.,  2009).

Чтобы противостоять многим этиологическим агентам, новорожденные поросята и телята должны обладать достаточным потенциалом резистентности, который реализуется в высоком уровне иммунного статуса. Рост и развитие новорожденных поросят и телят осложнен тем, что они практически лишены собственной гуморальной иммунной защиты. Поэтому вся нагрузка ложится на неспецифические факторы и колостральный иммунитет. От уровня иммунной защиты зависит их реакция на стрессовые факторы и тяжесть проявления желудочно-кишечных и респираторных болезней (Костына М.А., 1999; Храмцов В.В. и др. 2006; Федоров Ю.Н. и др., 2006; Карпуть И.М. и др., 2006; Ануфриев П.А., 2006; Паршин П.А. и Паршина В.И. 2006; Мотова Е.Н., 2008; Петрянкин Ф.П., 2008).

         Проблеме желудочно-кишечной патологии новорожденных телят и поросят посвящены работы отечественных авторов (Шахов А.Г., 2002; Гаффаров Х.З. и др. 2002; Овод А.С., 2002; Терехов В.Н., 2002; Хусаинов В.Р., 2005; Ануфриев А.И., и др. 2006; Ануфриев П.А., 2006; Красочко П.А., Ляман А.М., 2006; Мусаева М.Н., 2008; Макаров Ю.А., Горковенко Н.Е.и др. 2008). Однако многие вопросы борьбы с этими заболеваниями не решены в полной мере и проводимые мероприятия по профилактике не достигают еще необходимого положительного эффекта

Успех борьбы с заболеваниями молодняка во многом определяется эффективностью применяемых химиотерапевтических средств. Однако  в последнее время традиционно применяемые антибактериальные препараты  часто оказываются неэффективными, поскольку возбудители проявляют к ним резистентность, массовое их применение способствует селекционированию устойчивых штаммов, распространению полирезистентности у микроорганизмов, негативно влияет на иммунный статус животных. Это диктует необходимость разработки альтернативных экологически безопасных препаратов, обладающих не только высокой лечебной эффективностью, но и выраженным профилактическим действием.

Все выше перечисленное явилось основанием для создания новых сывороточных препаратов и обоснования их применения для профилактики и лечения иммунодефицитов  и связанных с ними заболеваний новорожденных телят и поросят.

Цель и задачи исследования.  Цель  исследований состояла в разработке препаратов из крови животных и научно обоснованных схем их применения для коррекции иммунного статуса и профилактики массовых болезней новорожденных животных, вызываемых условно патогенной микрофлорой. 

Для достижения намеченной цели были определены следующие задачи:

теоретически обосновать  и разработать новые сывороточные препараты с последующей экспериментальной и клинической оценкой их фармакологических свойств  и эффективности для профилактики иммунодефицитов и массовых желудочно-кишечных расстройств у новорожденных телят и поросят, вызываемых условно патогенной микрофлорой;

изучить особенности динамики иммунных белков в сыворотках крови и молозиве коров и свиноматок в зависимости от их физиологического состояния;

– изучить особенности динамики иммуноглобулинов в сыворотках крови новорожденных телят и поросят и на этой основе разработать простой и доступный способ оценки иммунного статуса новорожденных поросят и телят в условиях производства;

изучить влияние разработанных препаратов из крови свиней и крупного рогатого скота на неспецифическую резистентность новорожденных поросят и телят,

– оценить в производственном эксперименте их лечебную и профилактическую эффективность.

       Научная новизна работы. Разработан  новый сывороточный препарат – концентрированная сыворотка крови (КСК), получаемый методом медленного замораживания и размораживания, превосходящий по содержанию иммуноглобулинов другие аналогичные препараты в 2-3 раза и содержащий в своем составе антитела к условно патогенным бактериям, вызывающим массовые желудочно-кишечные заболевания у молодняка крупного рогатого скота и свиней.

       Научно обоснована и экспериментально доказана перспективность перорального применения концентрированной сыворотки крови новорожденным поросятам и телятам с учетом естественного механизма абсорбции иммунных белков.

Разработана методика выявления гипоиммуноглобулинемии у новорожденных телят и поросят по показателю общего белка в сыворотке крови, на основе использования прямой зависимости уровней иммуноглобулинов в сыворотках крови новорожденных животных от количества общего белка в них.

       Уточнена динамика иммуноглобулинов в сыворотках крови стельных коров и супоросных свиноматок до и после отела и опороса.

Прослежена динамика иммунных белков в сыворотке крови коров в течение всего периода стельности.

       Установлена этиологическая структура массовых желудочно-кишечных заболеваний у молодняка крупного рогатого скота и свиней бактериального происхождения.        

Новизна выполненных исследований подтверждена тремя патентами на изобретения: «Способ оценки уровня естественной резистентности организма животных в ранний постнатальный период» (патент на изобретение Российской Федерации № 2260185); «Способ получения концентрированной сыворотки крови» (патент на изобретение Российской Федерации № 2125454); «Способ повышения резистентности организма новорожденных поросят» (патент на изобретение Российской Федерации № 2142805).

       Теоретическая и практическая значимость работы. Выявленные в результате исследований закономерности изменения содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови беременных животных  и рожденного от них приплода расширяют научные представления по ряду вопросов физиологии и биохимии.  С учетом выявленных закономерностей предложен способ оценки уровня естественной резистентности организма животных в ранний постнатальный период.

В результате проведенных исследований животноводству предложена концентрированная сыворотка крови (КСК), обладающая выраженной лечебной и профилактической эффективностью, прошедшая широкое производственное испытание и предназначенная для коррекции иммунного статуса, профилактики и лечения острых кишечных расстройств у новорожденных телят и поросят.

       Разработан стандарт ДальЗНИВИ «Сыворотка крови концентрированная (КСК)», регламентирующий технологический процесс производства, показатели качества и методы их контроля. Разработаны методические рекомендации, «Изготовление и применение концентрированной сыворотки крови животных», которые утверждены Ученым советом ДальЗНИВИ (протокол № 2 от 25.03.05).        Разработаны и утверждены Ученым советом ДальЗНИВИ (протокол № 3 от 03.07.2008) рекомендации «Смешанные кишечные инфекции новорожденных телят». Разработаны и утверждены Ученым советом ДальЗНИВИ (протокол № 3 от 06.03.2009) методические рекомендации «Руководство по изготовлению и применению концентрированной сыворотки крови крупного рогатого скота», и  одобрены решением подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 1 от 30 марта 2009). Разработаны и утверждены Ученым советом ДальЗНИВИ (протокол № 3 от 06.03.2009) методические рекомендации «Методические рекомендации по изготовлению и применению препарата из крови свиней», и  одобрены решением подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 1 от 30 марта 2009).

  Основные положения, выносимые на защиту:

  данные по динамике иммуноглобулинов в сыворотках крови и молозива животных в разные периоды беременности, до и после рождения приплода;

        характеристика белкового состава сывороток крови поросят и телят в ранний постнатальный период;

  этиология массовых желудочно-кишечных заболеваний, вызываемых условно патогенными бактериями;

  результаты экспериментальных исследований по профилактике иммунодефицитов и желудочно-кишечных заболеваний, вызываемых условно патогенной микрофлорой, у новорожденных поросят и телят концентрированными сыворотками крови (КСК).

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на  краевом совещании ветеринарных врачей (г. Хабаровск, 1994);  областном совещании ветеринарных врачей (г. Благовещенск, 1995);  областном совещании свиноводов (г. Благовещенск, 1995);  научной сессии Дальневосточного отделения РАСХН, посвященной 60-летию Дальневосточного зонального научно-исследовательского ветеринарного института (г. Благовещенск, 1995);  научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарии» (г. Новосибирск, 1997);  научно-практической конференции «Актуальные вопросы профилактики и лечения заболеваний сельскохозяйственных животных», посвященной 50-летию Калининградской научно-исследовательской ветеринарной станции (г. Калининград, 1998);  международной научной конференции «Болезни животных Дальнего Востока», ДальГАУ (г. Благовещенск, 1999);  совещании сотрудников ДальЗНИВИ и работников Госветслужбы по проблемам диагностики и лечения (г. Благовещенск, 2005);  международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях» посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ (г. Краснодар, 2006); международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных», посвященной 100-летию академика ВАСХНИЛ Я.Р. Коваленко (г. Москва, 2006); межведомственной научно-практической конференции «Современные проблемы исследований в биологии», (Благовещенск, 2009).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 30 научных работ, в том числе 10 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ (журналы Вестник РАСХН – 3, Молочное и мясное скотоводство – 2, Доклады РАСХН. – 1, Свиноводство. 2, Ветеринария – 2), и три патента РФ на изобретение.

  Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 255 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и их анализа, заключения, выводов, практических предложений и списка использованной литературы, включающего 288 наименований отечественных и 212 иностранных авторов. Работа содержит 19 таблиц и 4 рисунка. В приложении представлены документы внедрения результатов исследования.

Автор выражает искреннюю признательность и благодарность академику РАСХН, доктору ветеринарных наук, профессору Ю.А. Макарову за всестороннюю помощь и поддержку в работе, а также коллективу ДальЗНИВИ за методическую и практическую помощь в проведении  исследований.

  1. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
    1. Материалы и методы

2.1.1 Общий объем проведенной работы. Работа выполнена в Дальневосточном зональном научно-исследовательском ветеринарном институте Российской академии сельскохозяйственных наук в течение 1993-2007, гг.. Исследования проводили в лаборатории иммунологии Дальневосточного зонального научно-исследовательского ветеринарного института и на базе животноводческих хозяйств Дальневосточного региона (Амурской области, Хабаровского и Приморского краев) в рамках государственных НТП «Ветеринарная медицина» 1991-1995 гг., 2001-2005 гг., 2006-2010 гг. (№ гос.рег. 019.10.050208, 01.2.003.06839, 01.2.007.00089).

В опытах использовали биологический материал от 1428 новорожденных поросят, 80 свиноматок, 345 телят и 80 коров. Всего исследовано 880 проб сывороток крови свиноматок  и 1000 проб сывороток крови коров, 320 проб сывороток молозива коров и 320 проб сывороток молозива свиноматок.

Производственные испытания концентрированной сыворотки крови проведены в трех хозяйствах Амурской области и Приморского края. В производственных испытаниях КСК использовано 600 новорожденных поросят и 205 новорожденных телят.

2.1.2 Материалы исследования. Материалом для гематологического, биохимического и иммунологического исследований служила кровь и её сыворотка, а так же сыворотка молозива.

  От поросят и телят с диарейным синдромом для бактериологического исследования отбирали пробы фекалий непосредственно из прямой кишки стерильной ректальной петлей, помещали в транспортную среду и немедленно доставляли для исследования в лабораторию.

       Состав и свойства разработанных сывороточных препаратов. Концентрированная сыворотка крови животных (КСК), является биопрепаратом, получаемым по криотехнологии, содержащим антитела в повышенной концентрации (в сравнении с АИС концентрация в КСК выше в 2,5-3 раза). КСК содержит иммунные компоненты против всех патогенов, персистирующих в популяции животных конкретных ферм, кроме того, КСК содержит все биологически активные вещества, присутствующие в нормальной сыворотке крови взрослых здоровых животных.

КСК получают из крови взрослых здоровых животных, предварительно проверенных на инфекционные и кровопаразитарные болезни в зависимости от эпизоотической ситуации в хозяйстве.

Дозировка перорально: - поросятам 5 мл два раза в сутки в течение 2-х первых суток жизни; телятам 50 мл два раза в сутки в течение 2-х первых суток жизни.

2.1.3 Методы исследования. Выполнены следующие исследования:

Гематологические исследования. В пробах крови поросят и телят подсчитывали общее количество эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, выводили лейкоцитарную формулу по общепринятым методикам.

Биохимические исследования сыворотки крови включали определение общего белка рефрактометрически, иммуноглобулинов с помощью цинк-сульфатного теста (Блинов Н.И., 1982), белковых фракций (включая глобулины α1, α2, β, γ1, γ2) электрофорезом в геле агарозы (В.М. Чекишев, 1977).

Биохимические исследования сыворотки молозива включали определение общего белка рефрактометрическим методом и белковых фракций, включая иммуноглобулины основных классов с помощью электрофореза в геле агарозы.

Иммунологические исследования сыворотки крови включали определение фагоцитарной активности нейтрофилов и бактерицидной активность сыворотки крови (Смирнов П.Н. с соавт.,1989), циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) по методике П.М. Барановского и В.С. Данилишиной (1983).

Бактериологические исследования. Выделение бактерий из биологического материала и изучение их культурально-морфологических и биохимических свойств проводили общепринятыми методами бактериологического исследования. Посев исследуемого материала проводили из разведений  на плотные питательные среды (Эндо, Плоскирева, висмут-сульфит агар, энтерококк агар, солевой агар, агар с сорбитолом, иерсиниозная среда). Идентификацию выделенных микроорганизмов до вида проводили с использованием 23 биохимических тестов и «Определителя бактерий Берджи» (М.,2001), «Определителя зоопатогенных микроорганизмов» (М.А. Сидоров с соавт., 1995). Изучение патогенности выделенных культур бактерий проводили с помощью биологической пробы на белых беспородных мышах. Для определения чувствительности выделенных культур к антибиотикам использовали метод диффузии в агар (МУК 4.2.1890-04) .

Для изучения динамики иммуноглобулинов в сыворотках крови свиноматок исследования проводили ежедневно за неделю до опороса, через 40 мин. после опороса и через каждые 24 часа в течение недели после него.

Для изучения динамики иммуноглобулинов в сыворотках крови коров, исследования проводили по месяцам, в течение всего периода стельности, по неделям в последний месяц стельности, по суткам в последнюю неделю стельности, в первые минуты после отела и по суткам в течение недели после отела.

Параллельно исследовали динамику иммуноглобулинов в сыворотке молозива. Для получения сыворотки молозиво нагревали до 38оС в водяной бане и добавляли равный объем 0,1 Н раствора соляной кислоты и 1 каплю насыщенного раствора пепсина на 5 мл смеси. После центрифугирования в сыворотке молозива определяли содержание общего белка, белковых фракций, иммуноглобулинов основных классов.

       Научно-производственные эксперименты для изучения белкового состава сывороток крови новорожденных поросят до и после приема молозива и у поросят с признаками желудочно-кишечных расстройств были сформированы три группы животных, первая группа – 10, вторая группа – 50, третья группа – 250 поросят. В сыворотках крови 2-3-суточных поросят определяли содержание белка и белковых фракций.  Наблюдение за животными велось в течение 35 суток (до отъема). В течение этого периода учитывались все случаи заболевания и гибели поросят. У животных этих групп изучали зависимость уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови от уровня общего белка, а также зависимость сохранности поросят от уровня общего белка и иммуноглобулинов.

Научно-производственный эксперимент по изучению белкового состава сыворотки крови телят до и после приема молозива и у телят с признаками расстройства деятельности желудочно-кишечного тракта, по принципу аналогов были сформированы три группы телят по 40 животных в каждой. Первая – новорожденных животных, не получавших молозива матерей при рождении. Вторая – новорожденных телят получавших молозиво матерей с признаками расстройства пищеварения. Третья – клинически здоровых новорожденных животных получавших молозиво матерей. В крови телят определяли содержание гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, выводили лейкоформулу, в сыворотке крови определяли количество общего белка и белковых фракций.

       Для изучения влияния на организм новорожденных поросят иммунных препаратов, полученных из крови взрослых клинически здоровых животных, были сформированы по принципу аналогов 6 групп по 100 новорожденных поросят в каждой. В первые двое суток жизни поросятам 1 группы применяли концентрированную сыворотку крови свиней перорально в дозе 5 мл два раза в сутки; 2 и 3 групп аллогенную иммунную сыворотку крови перорально и внутримышечно в дозе 5 мл два раза в сутки; 4 и 5 групп неспецифический гамма-глобулин, в дозе 1 мл два раза в сутки перорально и внутримышечно. Шестой группе поросят указанные выше препараты не применялись, она служила контролем. Через две недели в 16-суточном возрасте у поросят всех шести групп исследовали сыворотку крови на содержание общего белка и белковых фракций, определяли фагоцитарную активность нейтрофилов и бактерицидную активность сыворотки крови.

Для изучения влияния концентрированной сыворотки крови (КСК) на организм новорожденных телят, было сформировано по принципу аналогов 7 групп по 15 животных в каждой. Одна группа телят служила контролем, остальным животным сразу после рождения применяли КСК перорально в дозах 20, 50, 100 мл в смеси с молозивом и самостоятельно 2 раза в сутки в течение 2-х суток подряд. Через две недели после применение КСК у телят всех групп (включая контрольную) брали кровь и определяли содержание в ней эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов и лейкоформулу. В сыворотке крови определяли общий белок, белковые фракции, фагоцитарную активность нейтрофилов и бактерицидную активность сыворотки крови.

Наблюдение за животными контрольной и опытных групп вели в течение 2-х месяцев, учитывали все случаи заболевания, характер течения болезни, продолжительность лечения и исход.

Антитела в концентрированных сыворотках крови к бактериальным антигенам выявляли с помощью РА на стекле, к вирусным антигенам с помощью РТГА и РНГА. Согласно наставлений к наборам диагностикумов.

Математическая обработка цифровых данных включала определение средней арифметической (М), ошибки средней арифметической (m). Проверку принятой гипотезы осуществляли через степень различия между изучаемыми объектами с помощью критерия Стьюдента (t). Взаимное влияние различных факторов определяли через коэффициенты корреляции.

    1. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1 Изучение белкового состава сывороток крови и молозива свиноматок до и после опороса

В результате проведенных исследований установлено, что за неделю до опороса уровень иммуноглобулинов составил 28,2±0,9 % от общего количества белка и, постепенно уменьшаясь, достигал минимума через 40 мин. после опороса (22,4±1,1 %). Снижение уровня иммуноглобулинов в течение 6 суток перед опоросом составило 20,1 %. Восстановление количественных показателей уровня иммуноглобулинов началось сразу же после опороса.

Параллельно с изучением содержания Ig в сыворотке крови супоросных свиноматок, исследовали молозиво. Установлено, что наибольшее количество иммуноглобулинов в молозиве содержится в период опороса. Содержание иммуноглобулинов в молозиве в период опороса в процентном отношении к уровню общего белка в сыворотке молозива составило 59,4±2,0 %. Через 24 часа после опороса уровень иммуноглобулинов составлял 49,7±1,3 %, а через 48 часов – 41,0±1,0 %. Начиная с 48 часов после опороса и до 168 часов уровень иммуноглобулинов в сыворотке молозива практически не изменялся.

       Проведенные экспериментальные исследования на группе супоросных свиноматок позволили в динамике установить закономерность снижения уровня иммуноглобулинов в крови супоросных животных и их переход в молозиво. При этом установлено, что минимальный уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови свиноматок по времени соответствует их максимальному уровню в сыворотке молозива. Установлена обратная корреляционная зависимость (r = - 0,97) уровней иммунных белков в сыворотках крови и молозива. Содержание иммуноглобулинов в сыворотке молозива зависит от концентрации иммуноглобулинов в сыворотке крови свиноматок, что полностью соответствует современным представлениям о происхождении иммуноглобулинов молозива (Попович Д., 1972; Рахманкулова Л.Д., 1975; Пивовар Л.М., 1986; Холод В.М., Князева Л.А., 1989; Урбан В.П., Рудаков В.В., Карпенко Л.Ю., 1990; Nordbing F., Olson B., 1958; Halliday R., 1965; Szоhy A., 1979). Вышеуказанная зависимость графически отражена на рисунке 1.

       

Рисунок 1 Динамика уровней иммуноглобулинов в крови и молозиве свиноматок до и после опороса  в % от содержания общего белка. Примечание о. – опорос.

       Рассматривая механизм передачи иммуноглобулинов матери потомству, как единый генетически обусловленный процесс, мы предполагаем, что начало периода относительной стабилизации количества иммуноглобулинов в сыворотке крови свиноматок во времени соответствуют прекращению процесса абсорбции белков тонким отделом кишечника новорожденных поросят.

       Данное предположение подтверждается динамикой уровня иммуноглобулинов в молозиве свиноматок и периодом стабилизации количества иммуноглобулинов в молозиве, который определяется в пределах 48 часов после опороса. Учитывая временной период абсорбции иммуноглобулинов кишечником новорожденных поросят, пероральное применение иммунных средств с целью коррекции уровня колострального иммунитета целесообразно проводить в первые двое суток жизни животных.

2.2.2 Изучение белкового состава сывороток крови и молозива коров до и после отела

Динамика иммунных белков в сыворотке крови коров изучалась с первого по девятый месяцы стельности. В последний месяц - каждую неделю и в последнюю неделю по суткам, затем в первые минуты после отела и по суткам в течение недели после него.

Содержание иммуноглобулинов в сыворотках крови стельных коров подвержено колебанию по месяцам (рис. 2). Наиболее существенное снижение уровня иммуноглобулинов в крови коров наблюдалось за двое суток до отела на 20,6 % и первые минуты после него – 32,1 %, в сравнении с уровнем иммунных белков в крови за 4 недели до отела. В целом снижение уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови стельных коров от начала стельности до отела составило 33,4 %.

  Самый низкий уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови коров наблюдался в первые минуты после отела, затем уровень постепенно повышался и к третьим суткам стабилизировался. Рост содержания иммунных белков к третьим суткам составил 36,7 %. В дальнейшем до 7 суток уровень иммуноглобулинов в крови отелившихся коров существенно (достоверно) не изменялся и соответствовал среднему уровню антител в крови коров в среднем по ферме.

Рисунок 2 – Динамика иммуноглобулинов в сыворотках крови и молозива коров до и после отела в % от уровня общего белка.

  Максимальное количество иммуноглобулинов в сыворотке молозива содержалось в молозиве первого удоя, общее количество гамма-глобулинов превышало половину всех белков сыворотки молозива. Затем постепенно содержание иммуноглобулинов в сыворотке молозива понижалось и стабилизировалось к третьим суткам после отела. Общее снижение уровня иммунных белков в сыворотке молозива к третьим суткам составило 33,2 % (рис. 2).

       В результате проведенных исследований установлена обратная зависимость с высокой степенью корреляции (r= - 0,92) уровня содержания иммуноглобулинов в сыворотке молозива от уровня иммунных белков в сыворотке крови коров.

       Минимальное содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови соответствовало максимальному их содержанию в сыворотке молозива.

       Установлено временное соответствие периодов стабилизации иммуноглобулинов в сыворотках крови и молозива к третьим суткам после отела, что соответствует по времени прекращению абсорбции иммуноглобулинов тонким отделом кишечника новорожденных телят и косвенно подтверждает мнение многих исследователей о завершении действия уникального механизма абсорбции иммуноглобулинов из молозива матерей к первым 48-72 часам жизни новорожденных телят.

       2.2.3 Белковый состав сывороток крови новорожденных поросят 

       Изучение белкового состава сыворотки крови у новорожденных поросят мы провели до и после приема молозива, а также у поросят с признаками диареи. С этой целью были сформированы три группы животных: первая – 10 новорожденных поросят, не получавших молозива матери при рождении; вторая – 50 новорожденных с признаками диареи, получавших молозиво; третья – 250 клинически здоровых новорожденных поросят после приема молозива матери.

  В сыворотке крови новорожденных поросят, не получавших молозиво матерей при рождении, иммуноглобулины не обнаружены (табл. 1).В группе клинически здоровых поросят, получавших молозиво матери в первые часы жизни, содержание иммуноглобулинов G в сыворотке крови через 48 часов составило 23,9±0,3 г/л, что значительно превышало уровень IgG у поросят во второй группе с признаками диареи – 4,5±0,1 г/л (табл. 1).

       

Таблица 1 – Содержание общего белка и белковых фракций в сыворотке крови новорожденных поросят

Показатели

1 группа

2 группа

3 группа

Количество животных

10

50

250

Общий белок, г/л

35,8±1,3**

40,9±1,0**

65,4±1,2

Альбумины, г/л

10,1±0,1

16,8±0,9

20,9±0,9

Глобулины, г/л

α1

8,6±0,2

6,6±0,1

6,8±0,7

α2

8,7±0,1*

6,8±0,2

7,2±0,1

β

8,4±0,3*

6,2±0,4

7,2±0,5

γ1(G1)

-

3,7±0,1**

17,0±0,3

γ2(G2)

-

0,8±0,1**

6,9±0,2

Σ γ1+γ2

-

4,5±0,1**

23,9±0,3

% Σ γ1+γ2

-

11,0±0,2**

36,5±0,2

       Примечания: ** - разница с 3-й группой достоверна (p<0,001);

* - разница с 3-й группой достоверна (p<0,05).

       

       Резкое различие в содержании иммуноглобулинов в сыворотке крови больных и клинически здоровых поросят можно объяснить нарушением абсорбции поступивших с молозивом антител. Новорожденные поросята, в сыворотке крови которых наблюдается сниженный уровень иммуноглобулинов (до 4,5±0,1 г/л), чаще заболевали  различными заболеваниями и в первую очередь гастроэнтеритами.

       

Таблица 2 – Зависимость содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови новорожденных поросят от уровня общего белка в ней

Показатели

1 группа

2 группа

3 группа

4 группа

5 группа

Количество животных

10

24

125

194

125

Общий белок, г/л

30-40

40-50

50-60

60-70

70-80

Альбумины, г/л

12,8±0,7

16,8±0,5*

19,5±0,3***

22,6±0,2***

27,5±0,3***

Глобулины, г/л

α1

2,6±0,3

3,9±0,3**

4,3±0,2***

4,7±0,2***

4,3±

0,3***

α2

3,9±0,7

4,7±0,4

5,3±0,4

5,8±0,3*

6,4±

0,3***

β

3,5±0,6

4,2±0,3**

5,6±0,2***

6,1±0,2***

6,9±

0,3***

γ1 (G1)

9,3±0,7

12,6±0,5***

16,8±0,4***

20,4±0,3***

23,7±0,5***

γ2 (G2)

3,2±0,3

3,6±0,5

4,3±0,3**

5,3±0,2***

6,3±

0,3***

Σ γ1+γ2

12,5±0,6

16,2±0,5***

21,1±0,4***

25,7±0,3***

30,0±0,4***

% Σ γ1+γ2

31,3±0,4

32,4±0,4

35,2±0,3***

36,7±0,3***

37,5±0,4***

Примечания: *** - разница с 1-й группой достоверна (р<0,001); ** - разница с 1-й группой достоверна (р<0,01); * - разница с 1-й группой достоверна (р<0,05).

                       

       С целью выявления зависимости количества иммуноглобулинов в сыворотке крови от общего белка в ней нами был проведен опыт на 478 новорожденных поросятах. Для этого поросята были разделены на пять групп по содержанию общего белка в сыворотках крови.

       В результате опыта установлено, что уровень β - и γ - глобулинов в сыворотке крови находится в прямой зависимости от содержания общего белка в ней, при коэффициенте корреляции r=0,97.

       Так, животные, в сыворотках крови которых уровень общего белка не превышал 40 г/л, имели минимальное количество иммуноглобулинов (IgG1 – 9,3±0,7 г/л и IgG2 – 3,5±0,5 г/л) (табл. 2).        Максимальное количество иммуноглобулинов в сыворотках крови было у новорожденных поросят с уровнем общего белка до 80 г/л (IgG1 – 23,7±0,5 г/л и IgG2 – 6,3±0,3 г/л).

       У абсолютного большинства поросят содержание общего белка в сыворотках крови находилось в пределах 50-80 г/л. Уровень общего белка в сыворотках крови новорожденных поросят от 60 до 70 г/л мы определили как средний и приняли за точку отсчета при оценке напряженности колострального иммунитета.        Содержание общего белка в сыворотке крови новорожденных поросят от 30 до 40 г/л соответствует состоянию гипогаммаглобулинемии тяжелой степени, от 40 до 50 г/л – гипогаммаглобулинемии средней степени, от 50 до 60 г/л – гипогаммаглобулинемии слабо выраженной и содержание общего белка от 60 до 80 г/л – нормогаммаглобулинемии. От общего числа исследованных поросят 33 % имели иммунодефицит различной степени тяжести.

Таблица 3 – Зависимость сохранности новорожденных поросят от содержания в сыворотке крови общего белка и иммуноглобулинов

Показатели

1 группа

2 группа

3 группа

4 группа

5 группа

Количество животных

10

24

125

194

125

Сохранность, %

50

60

73

74

77

Общий белок, г/л

30-40

40-50

50-60

60-70

70-80

Глобулин γ1 (G1),г/л

9,3±0,7

12,6±0,5**

16,8±0,4***

20,4±0,3***

23,7±0,5***

Глобулин γ2 (G2), г/л

3,2±0,3

3,6±0,5*

4,3±0,3**

5,3±0,2***

6,3±0,3***

Σ γ1+γ2

12,5±0,6

16,2±0,5***

21,1±0,4***

25,7±0,3***

30,0±0,4***

% Σ γ1+γ2

31,3±0,4

32,4±0,4*

35,2±0,3***

36,7±0,3***

37,5±0,4***

Примечания: *** - разница с 1-й группой достоверна (р<0,001);  ** - разница с 1-й группой достоверна (р<0,01); * - разница с 1-й группой достоверна (р<0,05).        

               В параллельно проведенных исследованиях нами также установлена прямая зависимость сохранности новорожденных поросят от уровня общего белка и иммуноглобулинов в сыворотке крови (табл. 3).

       Животные с низким уровнем общего белка (30-40 г/л) и иммуноглобулинов G1 и G2 (9,3±0,7 г/л и 3,2±0,3 г/л соответственно), имели самую низкую сохранность до отъема –  50 %. Наилучшую сохранность до отъема (77 %) имели поросята с содержанием общего белка в сыворотке крови 70-80 г/л и иммуноглобулинов G1 и G2 – 2,3±0,3 г/л и 6,3±0,3 г/л соответственно (табл. 3).

       Нами установлено, что сохранность новорожденных поросят находится в прямой корреляционной зависимости от содержания общего белка в сыворотке крови (r=0,92) и иммуноглобулинов в ней (r=0,93).

       С повышением уровня общего белка в сыворотках крови новорожденных поросят, происходит статистически достоверное повышение содержания всех белковых фракций, но наиболее выраженное β - и γ - глобулинов, в которых концентрируется основная масса антител. Высокое содержание пассивно приобретенных с молозивом антител с относительно одинаковыми показателями клеточных факторов защиты, которые генетически предопределены, обеспечивает адекватную резистентность новорожденных животных в ранний постнатальный период. Поэтому уровень общего белка в сыворотке крови может служить показателем уровня колострального иммунитета, позволяющего прогнозировать целесообразность применения животным иммунных средств.

       2.2.4 Белковый состав сывороток крови новорожденных телят

       С целью изучения белкового состава сывороток крови новорожденных телят были сформированы три группы новорожденных животных по принципу аналогов: первая – 40 новорожденных телят, не получавших молозива матерей при рождении; вторая – 40 новорожденных телят с признаками диареи, получавших молозиво матерей; третья – 40 клинически здоровых новорожденных телят, получавших молозиво матерей.

       В сыворотке крови новорожденных телят, не получавших молозиво матерей при рождении, иммуноглобулины в крови не обнаружены (табл. 4). В группе клинически здоровых телят, получавших молозиво матерей в первые часы жизни, содержание иммуноглобулинов группы G в сыворотке крови через 48 часов составило 21,2 г/л (32,9±0,4 %).Что значительно превышает уровень IgG у телят второй группы с признаками диареи 14,3±0,3 (25,8±0,8 %).

       

Таблица 4 – Содержание общего белка и белковых фракций в сыворотке крови новорожденных телят

Показатели

1 группа

2 группа

3 группа

Общий белок, г/л

36,1±0,8***

54,5±0,7***

69,3±1,0

Альбумины, г/л

15,4±0,8

17,2±0,5

24,5±0,7

Глобулины, г/л

α1

6,8±0,5***

7,7±0,7*

8,2±0,2

α2

6,7±0,6***

6,9±0,6***

7,4±0,6

β

7,2±0,6***

7,6±0,8**

8,0±0,8

γ1 (G1)

-

10,1±0,2***

15,0±0,7

γ2 (G2)

-

4,2±0,6**

6,2±0,8

Σ γ1+γ2

-

14,3±0,3***

21,2±0,6

% Σ γ1+γ2

-

25,8±0,8***

32,9±0,4

               Примечания: *** - разница с 3-й группой достоверна (р<0,001);

                        ** - разница с 3-й группой достоверна (р<0,01);

                        * - разница с 3-й группой достоверна (р<0,05).

       Значительные различия в содержании иммуноглобулинов в сыворотках крови больных и клинически здоровых телят можно объяснить нарушением абсорбции иммуноглобулинов молозива в кишечнике новорожденных животных.

       Новорожденные телята, в сыворотке крови которых уровень иммуноглобулинов 14,3±0,3 г/л и ниже чаще заболевали различными заболеваниями и в первую очередь расстройством деятельности желудочно-кишечного тракта.

       С целью выявления зависимости количества иммуноглобулинов в сыворотке крови от общего белка в ней был проведен опыт на 120 новорожденных телятах. Для этого телята были разделены на четыре группы в зависимости от содержания общего белка в сыворотке крови.

       В результате эксперимента было установлено, что уровень β и γ-глобулинов в сыворотке крови новорожденных телят находится в прямой зависимости от содержания общего белка в ней (r=0,97). Телята, в сыворотке крови которых уровень общего белка 50 г/л и менее, имели минимальное количество иммуноглобулинов 14,3±0,2 (табл. 5). Максимальное количество иммунных белков в сыворотке крови было у телят с уровнем общего белка до 80 г/л.

       Содержание общего белка в сыворотке крови новорожденных телят от 40-50 г/л соответствует состоянию гипогаммаглобулинемия выраженной, от 50 до 60 г/л гипогаммаглобулинемии слабо выраженной и содержание общего белка от 60 до 80 г/л – нормогаммаглобулинемии. В результате исследования у 50 % новорожденных телят наблюдался иммунодефицит различной степени тяжести.

Таблица 5 – Зависимость содержания иммуноглобулинов в крови новорожденных телят от уровня общего белка в ней (M±m)

Показатели

1 группа

2 группа

3 группа

4 группа

Общий белок, г/л

40-50

50-60

60-70

70-80

Альбумины, г/л

14,2±0,5

18,0±0,6

19,9±0,3

22,5±0,7

Глобулины, г/л

α1

6,7±0,7

7,5±0,5

7,5±0,8

8,2±0,2

α2

6,9±0,6

7,7±0,6

7,3±0,2

8,4±0,6

β

6,1±0,8

7,2±0,6**

8,9±0,2**

9,0±0,8***

γ1 (G1)

10,1±0,2

11,3±0,3**

12,1±0,6**

15,0±0,7***

γ2 (G2)

4,2±0,2

5,0±0,5

5,1±0,1**

6,2±0,3**

Σ γ1+γ2

14,3±0,2

16,3±0,4**

17,2±0,6**

21,2±0,6***

% Σ γ1+γ2

25,8±0,7

27,4±0,8

28,4±0,3**

32,9±0,4***

       Примечания: *** разница с 1-й группой достоверна (p<0,001);

                        ** разница с 1-й группой достоверна (p<0,01).

       

       В параллельно проведенных исследованиях нами также установлена прямая зависимость сохранности новорожденных телят от уровня общего белка и иммуноглобулинов в сыворотке крови (табл. 6). Телята с содержанием общего белка в крови 40-50 г/л и иммуноглобулинов 14,3±0,2 г/л имели самую низкую сохранность до двухмесячного возраста (60 %).

       Лучшую сохранность до 60 суток имели телята с содержанием общего белка в сыворотке крови от 60 до 80 г/л и иммуноглобулинов от 17,2±0,6 г/л до 21,2±0,6 г/л.  Установлено, что сохранность новорожденных телят коррелирует с уровнем содержания общего белка (r=0,93) и иммуноглобулинов (r=0,92) в сыворотке крови.

Таблица 6 – Сохранности новорожденных телят в зависимости от содержания в сыворотке крови общего белка и иммуноглобулинов.

Показатели

1 группа

2 группа

3 группа

4 группа

Общий белок, г/л

40-50

50-60

60-70

70-80

Глобулины

γ1 (G1), г/л

10,1±0,2

11,3±0,3**

12,1±0,6**

15,0±0,7***

Глобулины

γ2 (G2), г/л

4,2±0,2

5,0±0,5

5,1±0,1**

6,2±0,3**

Σ γ1+γ2

14,3±0,2

16,3±0,4**

17,2±0,6**

21,2±0,6***

% Σ γ1+γ2

25,8±0,7

27,4±0,8

28,4±0,3**

32,9±0,4***

Сохранность, %

60

80

100

100

Примечания: *** разница с 1-й группой достоверна (p<0,001); ** разница с 1-й группой достоверна (p<0,01).

                       

       Исследование сыворотки крови новорожденных телят показало, что содержание белковых фракций находится в прямой зависимости от содержания общего белка в ней. С повышением уровня общего белка в сыворотке крови новорожденных телят, происходит статистически достоверное повышение уровня всех белковых фракций, но наиболее выраженное β - и γ - глобулинов, в которых концентрируется основная масса антител.

       Высокое содержание пассивно приобретенных антител при относительно одинаковых показателях клеточных факторов защиты, которые генетически предопределены, обеспечивает адекватную резистентность животных в ранний постнатальный период их жизни. Поэтому уровень общего белка в сыворотках крови новорожденных телят может служить показателем уровня колострального иммунитета, позволяющего прогнозировать заболеваемость животных и целесообразность применения иммунных средств.

       2.2.5 Спектр бактериальных патогенов, выделенных от больных животных

Бактериологические исследования фекалий от телят и поросят с диарейным синдромом проводились нами в периоды наибольшей заболеваемости и гибели новорожденных телят и поросят – весной, зимой и осенью. Проведенными исследованиями установлено, что расстройства  пищеварительной системы бактериального происхождения имеют сложную этиологическую структуру.

В основном из фекалий больных телят и поросят выделяли грамотрицательные бактерии семейства Enterobacteriaceae. Из них чаще всего выделяли Escherichia coli – 78,3 % исследованных проб. 43,1 % выделенных  Е.coli  принадлежали к энтеропатогенным серотипам – О2, О4, О8, О26, О35,О55, О101, О117, О139, О142. На втором месте по частоте выделения стоят  бактерии рода  Citrobacter (37,4 %) и Proteus (36,2 %); на третьем – бактерии рода  Enterobacter (18,1 %) и Klebsiella (14,4 %). Представители родов Edwardsiella, Hafnia, Yersinia, Serratia выделены из 7,1 % проб, бактерии рода Morganella – из 1,2 % проб.

Грампозитивная факультативно анаэробная микрофлора энтеробиоценоза больных телят представлена следующими видами бактерий. Более чем из половины исследованных проб фекалий выделены бактерии рода Streptococcus (21,9 %), Staphiloccocus (27,4 %) и  Enterococcus (25,7 %). Анаэробные бактерии рода Clostridium выделены из 25 % проб.

  В большинстве случаев (62,6 %) от больных телят и поросят выделялись ассоциации энтеробактерий и бактерий других семейств, включающих от 2 до 5 видов. В монокультуре в 37,4 % случаев выделяли энтеробактерии.

       Чаще всего (53,3 %) из фекалий больных телят и поросят выделялись ассоциации из двух видов энтеробактерий, несколько реже из трех и четырех видов (24,4 и 20,1 % соответственно). В одном случае (2,2 %) была выделена ассоциация из пяти видов энтеробактерий.

       Результаты проведенных исследований подтверждают полиэтиологичность желудочно-кишечных инфекций телят и поросят, что играет существенную роль при выборе средств и методов их лечения.

       2.2.6 Технология изготовления концентрированных сывороточных препаратов

       В основе технологии изготовления КСК лежит принцип максимального приближения её к производственным условиям, а именно запатентованная технология включает в себя использование морозильных камер с программированным снижением температуры, что в условиях фермы сделать крайне затруднительно. Поэтому нами разработана технология замораживания сывороток в бытовых холодильных камерах. Холодильные камеры необходимо настраивать таким образом, чтобы постоянная температура в них была в пределах -4 – -6оС. В таких условиях сыворотки охлаждаются и замерзают в пределах 18-24 часов. При этом растворитель (вода) замерзает в виде крупных кристаллов, а сывороточные компоненты находятся между ними незакристаллизированными и легко отделяются при концентрировании от кристаллов воды. 

2.2.7 Специфические антитела, содержащиеся в концентрированной сыворотке крови (КСК)

       Принцип получения концентрированных сывороток основан на том, что КСК изготавливается из крови доноров отдельно взятой фермы и предназначается для использования молодняку этой же фермы.

При изучении бактериальных антигенов в сыворотках крови (КСК) обнаружены антитела к  Esherichia coli в титре 1:32 трех вариантов изолированных от животных ферм, поставлявших кровь для изготовления концентрированных сывороток. Обнаружены антитела к  Salmonella enteritidis в титре 1:16, что свидетельствует о наличии патогенных сальмонелл в хозяйствах. Обнаружены антитела к Proteus vulgaris в титре 1:32 и Proteus mirabilis в титре 1:32, а  также  к  Citrobacter diversus в титре 1:32 и Klebsiella  pneumoniae в титре 1:16.

       Выявление антител в КСК к группе бактерий, относящихся к условно патогенным, свидетельствует об этиологической роли микрофлоры, окружающей новорожденный организм. УПБ являются мощным стимулятором иммунной системы, однако у новорожденных животных с иммунодефицитами развиваются патологические изменения в организме, а возможно и длительное бактерионосительство, что подтверждается наличием специфических антител у взрослых доноров крови.

       2.2.8 Профилактика иммунодефицитов новорожденных поросят концентрированной сывороткой крови свиней (КСК)

       Для проведения экспериментальных исследований с концентрированной сывороткой крови свиней (КСК) было сформировано шесть групп новорожденных поросят по 100 животных в каждой по принципу аналогов, одна из которых являлась контрольной.

       Первой группе новорожденных поросят перорально применялась КСК, второй – АИСС перорально, третьей – АИСС внутримышечно, четвертой группе поросят – неспецифический гамма-глобулин перорально, пятой – неспецифический гамма-глобулин внутримышечно, шестая группа поросят служила контролем, ей вышеперечисленные препараты не применялись.

       По истечении 2 недель после применения КСК, АИСС и неспецифического гамма-глобулина у животных всех шести групп была взята кровь и проведено её исследование по следующим показателям: бактерицидная активность сыворотки крови; фагоцитарная активность нейтрофилов; общий белок и белковые фракции, включая иммуноглобулины. За поросятами велось наблюдение до 35-суточного возраста (до отъема), в этот период фиксировались все случаи заболеваний и гибели животных.

       В результате исследования установлено, что новорожденные поросята, получавшие препараты крови, имели более высокие показатели естественной резистентности организма по сравнению с контрольными животными (табл. 7). Животные, которым перорально применяли КСК, имели самый высокий показатель уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови и, как следствие, наилучшую сохранность до отъема. Суммарное количество иммуноглобулинов в сыворотке крови у поросят первой группы составило – 38,4±0,7 г/л, второй – 36,1±0,9 г/л (p<0,05), третьей – 31,5±1,2 г/л (p<0,001), четвертой – 33,6±0,9 г/л (p<0,001), пятой – 26,8±0,8 г/л (p<0,001). Наименьший уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови оказался у животных контрольной группы – 25,9±0,6 г/л (p<0,001). Разница в содержании иммуноглобулинов между первой и шестой – 12,5±0,1 г/л, между второй и шестой 10,2±0,1 г/л, между третьей и шестой – 5,6±0,3 г/л, между четвертой и шестой – 7,7±0,1 г/л и между пятой и шестой – 0,9±0,1 г/л (табл. 7).

       Приведенное выше суммарное количество иммуноглобулинов в сыворотках крови у поросят опытных и контрольной групп свидетельствует о том, что применение препаратов крови новорожденным поросятам приводит к увеличению уровня иммуноглобулинов в крови животных. Особенно значительный их рост отмечается при пероральном применении (табл. 7).

       У поросят после применения КСК содержание общего белка было на 19,2 г/л больше, чем у поросят контрольной группы, на 14,8 г/л больше по сравнению с поросятами пятой группы, на 6,0 г/л – с поросятами четвертой группы, на 9,0 г/л – с третьей и на 2,2 г/л – со второй группой животных (табл. 7).

       Под действием КСК повышалась бактерицидная активность сыворотки крови. Так, у новорожденных поросят первой группы она составила 31,6 %, что на 11,1 % выше, чем у поросят контрольной группы (p<0,001). При сравнении этого  показателя у животных с пероральным и парентеральным применением АИСС, - КСК также оказалась более эффективной. Так, бактерицидная активность сыворотки крови поросят третьей группы была на 7,2 % , а второй на 4,2 % ниже, чем у поросят первой группы (p<0,01) (табл. 7).

       КСК также способствовала активации клеточных факторов иммунитета у новорожденных поросят, после применения которой фагоцитарная активность нейтрофилов оказалась наиболее высокой (60,4 %), что на 9,6 % больше, чем у поросят контрольной группы (p<0,001).

       В результате перорального применения АИСС фагоцитарная активность нейтрофилов составляла 56,7 %, что на  3,7 % меньше, чем у поросят первой группы, а при внутримышечном применении  - на 7,1 %. В результате перорального применения неспецифического гамма-глобулина фагоцитарная активность нейтрофилов составляла 54,2 %, что на 6,2 % меньше, чем у поросят первой группы, а при внутримышечном применении – на 8,3 % (p<0,01) (табл. 7).

       Применение концентрированной сыворотки крови активирует как гуморальные, так и клеточные факторы иммунитета, оказывает как местное, так и общее воздействие на организм, блокирует развитие условно-патогенной микрофлоры, начиная с просвета кишечника новорожденных животных. Это, по-видимому, является основным фактором снижения заболеваемости поросят гастроэнтеритами в постнатальный период развития организма и увеличения сохранности животных до отъема по сравнению с контролем.

       Применение АИСС и неспецифического гамма-глобулина также способствовало увеличению уровня естественной резистентности организма и повышению сохранности животных, особенно при пероральном способе введения препаратов. Так, пероральное применение АИСС способствовало увеличению сохранности поросят на 15 % по сравнению с контрольной группой, а пероральное применение неспецифического гамма-глобулина – на 10 %.

       Хотя применение АИСС и неспецифического гамма-глобулина способствовало увеличению естественной резистентности организма поросят, все же их эффективность была ниже, чем у КСК. Поэтому именно концентрированная сыворотка крови свиней из всех препаратов крови была принята для внедрения в производство.

Таблица 7 – Сравнительная эффективность применения иммунных препаратов новорожденным поросятам

Изучаемые показатели

Препараты

Контроль

КСК

АИСС

Неспец. γ-глобулин

перорально

перорально

внутримышечно

перорально

внутримышечно

  Г р у п п ы  п о р о с я т


1

2

3

4

5

6

Сохранность, %

80

75

68

70

63

60

Бактерицидная активность сыворотки крови, %

31,6±

0,7

27,4±

0,5***

24,4±

0,6***

25,1±

0,8***

23,3±

0,6***

20,5±

0,4***

Фагоцитарная активность нейтрофилов, %

60,4±

0,1

56,7±

0,2***

53,3±

0,1***

54,2±

0,4***

52,1±

0,1***

50,8±

0,9***

Общий белок сыворотки крови, г/л

81,6±

0,1

79,4±

0,6***

72,6±

0,1***

75,6±

0,2***

66,8±

0,6***

62,4±

0,9***

Альбумины, г/л

28,2±

0,2

28,1±

0,2***

25,3±

0,8***

26,6±

0,3***

26,4±

0,1***

25,2±

0,6***

Глобулины, г/л

α1

9,0±0,9

9,1±0,8

9,4±0,2

9,6±0,7

8,6±0,4

7,1±0,1

*

α2

8,0±0,7

8,1±0,6

7,4±0,2

7,5±0,4

6,0±0,9

6,2±0,6

*

β

9,1±0,8

9,3±0,7

7,7±0,9

**

7,9±0,7

*

6,4±0,3

***

5,3±0,1

***

γ1(G1)

18,7±

0,7

17,1±

0,7

16,4±

0,8*

16,8±

0,6*

14,4±

0,8***

13,3±

0,1***

γ2(G2)

8,6±0,2

7,7±0,7

6,4±0,9

*

6,9±0,7

*

5,0±0,2

***

5,3±0,6

***

γ1+γ2

27,3±

0,7

24,8±

0,7**

22,8±

0,8***

23,7±

0,6***

19,4±

0,2***

18,8±

0,1***

γ1+γ2+β

38,4±

0,7

36,1±

0,9*

31,5±

1,2***

33,6±

0,9***

26,8±

0,8***

25,9±

0,6***

Примечания: *** - разница с 1 группой достоверна (p<0,001); ** - разница с 1 группой достоверна (p<0,01); * - разница с 1 группой достоверна (p<0,05).

                       

                       

       При этом в условиях свинокомплекса «Краснополянский» Амурской области, КСК способствовала увеличению сохранности поросят не менее чем на 20 %.

       Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о том, что пероральное применение концентрированной сыворотки крови свиней, способствует повышению уровня пассивного иммунитета, снижению заболеваемости и повышению сохранности животных.

       2.2.9 Профилактика иммунодефицитов новорожденных телят концентрированной сывороткой крови крупного рогатого скота (КСК)

При изучении влияния КСК на организм новорожденных поросят в сравнении с другими иммунными препаратами она показала наилучший результат, поэтому мы провели эксперименты по изучению влияния КСК на организм новорожденных телят.

Эксперимент проведен на семи группах новорожденных телят (n=15), сформированных по принципу аналогов. Телятам выпаивали КСК в смеси с молозивом и  без него 2 раза в сутки в течение 2 первых суток жизни животных в дозах 20, 50 и 100 мл.

Первая группа новорожденных телят служила контролем. Второй группе выпаивали КСК в смеси с молозивом в дозе 20 мл. Третьей группе новорожденных животных выпаивали КСК в дозе 20 мл без молозива. Четвертой группе выпаивали КСК в смеси с молозивом в дозе 50 мл. Пятой группе выпаивали КСК в дозе 50 мл без молозива. Шестой группе новорожденных телят выпаивали 100 мл КСК в смеси с молозивом. Седьмой группе животных выпаивали 100 мл КСК без молозива.

В результате проведенных исследований по применению КСК в смеси с молозивом или самостоятельно не зарегистрировано существенных различий в воздействии препарата на иммунный статус телят. Поэтому КСК с одинаковым результатом можно применять в смеси с молозивом или самостоятельно, выпаивая дозу препарата перед кормлением телят молозивом (табл. 8). Существенные различия в данных получены при использовании КСК в зависимости от дозы, а именно 20,-50,-100 мл, при этом все полученные данные сравнивались с контролем и между собой (табл. 8).

Таблица 8 – Содержание белка и белковых фракций в сыворотке крови новорожденных телят в зависимости от дозы КСК

Группа телят

Общий белок, г/л

Альбу-мины, г/л

Глобулины, г/л

Σγ1+γ2

% Σγ1+γ2

α1

α2

β

γ1

γ2

1 Контроль

51,4±0,9

17,8±0,5

7,5±0,4

7,9±0,7

7,5±0,8

7,2±0,4

3,4±0,1

10,6±0,6

20,6±0,5

2 КСК(20 мл, с/м)

52,0±0,7

18,5±0,6

6,1±0,4

6,6±0,2

6,9±0,2

9,9±0,3

4,0±0,1

13,9±0,3**

26,7±0,7***

3 КСК (20 мл, б/м)

51,6±0,6

18,6±0,4

6,3±0,2

6,1±0,5

7,4±0,4

9,7±0,3

3,5±0,1

13,2±0,7**

25,6±0,5***

4 КСК (50 мл, с/м)

52,5±0,8

18,0±0,6

6,8±0,2

6,3±0,3

6,7±0,6

9,9±0,1

4,8±0,2

14,7±0,4***

28,0±0,6***

5 КСК (50 мл, б/м)

54,1±0,6

19,7±0,5

6,4±0,1

6,4±0,2

6,4±0,3

12,3±0,4

2,9±0,1

15,2±0,2***

28,1±0,7***

6 КСК (100 мл, с/м)

55,2±0,4

19,4±0,7

6,1±0,4

6,7±0,2

6,3±0,1

12,2±0,4

4,5±0,1

16,7±0,2***

30,3±0,7***

7 КСК 100 мл, б/м)

56,9±0,3

21,9±0,8

6,5±0,3

6,3±0,2

6,5±0,4

12,9±0,5

4,8±0,3

17,7±0,6***

30,1±0,4***

Примечания: *** - различия с 1 группой достоверны (p<0,001); ** - различия с 1 группой достоверны (p<0,01); с/м – с молозивом;  б/м – без молозива.

               

                       

Установлено, что с повышением дозы КСК количество иммуноглобулинов в сыворотке крови новорожденных телят увеличивается, при этом статистически достоверный рост показателей наблюдается при дозе КСК  20 мл и выше. Наиболее высокое содержание иммуноглобулинов в сыворотках крови новорожденных телят наблюдалось при выпаивании животным КСК в дозе 100 мл. Так общее количество гамма-глобулинов в контрольной группе телят на 7,1 г/л (9,5 %) меньше чем у телят 7 группы, разница составила 67 % от соответствующего показателя контрольной группы, а с телятами пятой группы 43,4 %, телятами второй группы 31,1 %.

Под влиянием КСК изменилась  клиническая картина крови и показатели, характеризующие иммунный статус новорожденных телят (табл. 9).

Так, количество эритроцитов и гемоглобина в крови новорожденных телят возрастало с дозы КСК в 20 мл, а лейкоцитов с 50 мл. Бактерицидная активность сыворотки крови возросла под действием КСК с дозы 50 мл, а фагоцитарная активность нейтрофилов с 20 мл.

Таблица 9 – Клинические показатели крови и иммунной реактивности телят в зависимости от дозы КСК

Группа телят

Эритроциты,

10 /л

Лейкоциты, 10 9/л

Гемоглобин, г/л

БАСК, %

ФА, %

ЦИК, усл. ед.

1 Контроль

5,5±0,02

7,1±0,03

90,0±0,02

24,1±1,1

39,5±0,4

0,7±0,1

2 КСК 20 мл, с/м

5,7±0,01***

7,1±0,01

90,0±0,02

26,5±0,8

45,9±0,4***

0,9±0,1

3 КСК 20 мл, б/м

5,7±0,02***

7,0±0,03

95,0±0,06***

25,3±1,2

45,3±0,5***

1,0±0,1*

4 КСК 50 мл, с/м

6,5±0,03***

7,3±0,04***

104,0±0,02***

29,2±1,1**

51,1±0,6***

3,7±0,6***

5 КСК 50 мл, б/м

6,4±0,06***

7,4±0,05***

104,0±0,04***

29,6±1,3**

50,5±0,3***

3,2±0,4***

6 КСК 100 мл, с/м

6,6±0,04***

7,5±0,03***

105,0±0,04***

31,5±0,7***

51,7±0,5***

3,2±0,3***

7 КСК 100 мл, б/м

6,7±0,05***

7,7±0,04***

107,0±0,05***

32,6±1,2***

52,4±0,6***

3,8±0,7***

Примечания: *** - разница с 1 группой достоверна (p<0,001); ** - разница с 1 группой достоверна (p<0,01); * - разница с 1 группой достоверна (p<0,5).

                       

Разница показателей между 1 и 4 группой телят в бактерицидной активности сыворотки крови составила 5,1 %, рост составил 21 %.Фагоцитарная активность нейтрофилов увеличилась на 11,6 %, рост составил 29 %. На фоне общего низкого количества циркулирующих иммунных комплексов в сыворотках новорожденных телят, рост показателей начался с дозы КСК в 20 мл препарата.

  1. ВЫВОДЫ
  1. Теоретически обоснованы и разработаны препараты из крови животных и способы их применения для профилактики иммунодефицитов и массовых желудочно-кишечных расстройств у новорожденных телят и поросят, вызываемых условно патогенной микрофлорой – концентрированная сыворотка крови (КСК) крупного рогатого скота и КСК свиней.
  2. Уровень иммунных белков в сыворотках крови коров и свиноматок  достоверно снижается за неделю до отела и опороса, что обусловлено селективным их переносом в молочную железу. Наименьшая концентрация иммуноглобулинов в сыворотках крови коров и свиноматок наблюдается в первые часы после родов (22,1±0,6 %; 22,4±1,1 %) и восстанавливается до исходного значения через 48 часов после них (34,9±0,8 %; 28,2±0,9 %).
  3. Уровень иммунных белков в сыворотках молозива коров и свиноматок максимален в первые часы после родов (54,2±2,2 %; 59,4±2,0 %). Затем концентрация иммуноглобулинов в молозиве снижается и стабилизируется к 48 часам после отела и опороса (36,2±1,2 %; 41,0±1,0 %).
  4. Установлена обратная зависимость концентрации иммунных белков в сыворотках молозива от концентрации иммуноглобулинов в сыворотках крови коров и свиноматок.
  5. У 33 % новорожденных поросят и 50 % новорожденных телят наблюдаются вторичные иммунодефициты различной степени тяжести, выражающиеся в гипоглобулинемии.
  6. Причиной массовых желудочно-кишечных заболеваний новорожденных телят и поросят в 62,6 % случаев являются ассоциации условно патогенных бактерий.
  7. Установлена прямая зависимость уровней иммуноглобулинов от содержания общего белка в сыворотках крови новорожденных животных. Используя выявленную закономерность можно диагностировать иммунодефициты у новорожденных животных по содержанию общего белка в сыворотках крови.
  8. Новорожденные телята и поросята с содержанием общего белка в сыворотках крови 50 г/л и менее имеют в крови количество иммуноглобулинов равное 12,5±0,6 г/л и 16,2±0,5 г/л соответственно, что ниже нормы, необходимой для поддержания нормального уровня резистентности. У таких животных чаще регистрируют желудочно-кишечные заболевания, вызываемые ассоциациями условно патогенных бактерий. 
  9. Концентрированная сыворотка крови свиней (КСК) обладает профилактической и лечебной эффективностью, позволяет увеличить сохранность новорожденных поросят на 20 %. Пероральный способ введения сывороточных препаратов новорожденным поросятам в первые 48 часов жизни обеспечивает локальную и системную защиту и является наиболее эффективным.
  10. Концентрированная сыворотка крови крупного рогатого скота (КСК) обладает профилактической и лечебной эффективностью в дозе 50 мл перорально два раза в сутки в течение 2 первых суток жизни телят. Применение КСК способствует повышению резистентности организма, снижению заболеваемости и 100 % сохранности новорожденных телят.
  11. Концентрированная сыворотка крови животных содержит иммунные компоненты против патогенных и условно патогенных бактерий, персистирующих в популяции животных конкретных ферм, являющихся причиной желудочно-кишечных заболеваний новорожденных телят и поросят.

  

4  ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

       Научные разработки и положения диссертационной работы использованы для разработки  10 методических рекомендаций:

  1. Рекомендации по ранней диагностике иммунодефицитов новорожденных поросят (Ученый совет ДальЗНИВИ, 1996 г.);
  2. Схема применения КСК для профилактики и лечения иммунодефицитов новорожденных поросят (Ученый совет ДальЗНИВИ, 1996 г.);
  3. Изготовление и применение концентрированной сыворотки крови животных (Ученый совет ДальЗНИВИ, 2005 г.);
  4. Методические рекомендации по оценке и коррекции неспецифической резистентности животных (Секция «Патология, фармакология и терапия» Отделения ветеринарной медицины РАСХН, 2005)
  5. Методические рекомендации по оценке и коррекции иммунного статуса животных (Секция «Патология, фармакология и терапия» Отделения ветеринарной медицины РАСХН, 2005)
  6. Методика повышения уровня естественной резистентности молодняка крупного рогатого скота  (Ученый совет ДальЗНИВИ, 2005 г.);
  7. Стандарт ГУ «ДальЗНИВИ» СТО ДальЗНИВИ 06684427-2007 Сыворотка крови концентрированная «КСК». Правила изготовления, контроля качества и применения (Ученый совет ДальЗНИВИ, 2007 г.);
  8. Смешанные кишечные инфекции новорожденных телят (Ученый совет ДальЗНИВИ, 2008 г.);
  9. Методические рекомендации по изготовлению и применению препарата из крови свиней (Подсекция «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» Отделения ветеринарной медицины РАСХН, 2009 г.);
  10. Руководство по изготовлению и применению концентрированной сыворотки крови крупного рогатого скота (Подсекция «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» Отделения ветеринарной медицины РАСХН, 2009 г.).

5. СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

  Патенты:

  1. Способ получения концентрированной сыворотки крови : пат. 2125454 Рос. Федерация : МПК 6 А 61 К 35/16, 39/00 / соавт. Т.В. Евсеенко ; заявитель и патентообладатель Дальневост. зон. науч.-исслед. ветеринар. ин-т ; № 96120788/13 ; заявл. 18.10.96 ; опубл. 27.01.99, Бюл. № 3. – 4 с.
  2. Способ повышения резистентности новорожденных поросят : пат. 2142805 Рос. Федерация, МПК 6 А 61 К 35/14 / соавт. Т.В. Евсеенко ; заявитель и патентообладатель Дальневост. зон. науч.-исслед. ветеринар. ин-т ; № 98116395/13; заявл. 31.08.98 ; опубл. 20.12.99, Бюл. № 35 – 5 с.
  3. Способ оценки уровня естественной резистентности организма животных в ранний постнатальный период : пат. 2260185 Рос. Федерация :  МПК 7 G 01 № 33/48 / Н.Н. Шульга ;  заявитель и патентообладатель Дальневост. зон. науч.-исслед. ветеринар. ин-т ; № 2004101581/15 ; заявл. 19.01.2004 ; опубл. 10.09.2005, Бюл. № 25. – 3 с.

Статьи в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК Минобразования РФ для публикации основных результатов диссертации

  1. Динамика иммуноглобулинов в крови стельных коров / соавт. Т.А. Сокольникова, В.Н. Шульга // Вестник РАСХН. – 2004. № 5. – С. 4849.
  2. Динамика иммуноглобулинов в крови и молозиве коров после отела / соавт. Т.А. Сокольникова, В.Н. Шульга // Молочное и мясное скотоводство. – 2005. № 1. – С. 24.
  3. Динамика иммуноглобулинов в крови и молозиве свиноматок / соавт. Т.А. Сокольникова // Вестник РАСХН. – 2005. № 4. – С. 5859.
  4. Влияние уровня колострального иммунитета на сохранность новорожденных телят // Доклады РАСХН. – 2005. № 4. – С. 4143.
  5. Сохранность новорожденных поросят // Свиноводство. – 2005. № 3. – С. 2829.
  6. Динамика иммуноглобулинов в сыворотках крови и молозива коров // Ветеринария. – 2006. № 1. – С. 4547.
  7. Повышение иммунного статуса телят // Молочное и мясное скотоводство. – 2006. № 3. – С. 2324.
  8. Ситуация по колибактериозу телят в Амурской области // соавт. Н.В. Яковлева // Ветеринария. – 2006. № 7. – С. 21-23.
  9. Сывороточный препарат нового поколения КСК // Вестник РАСХН. – 2007. № 1. – С. 8586.
  10. Выживаемость новорожденных поросят // Свиноводство. – 2009. № 1. – С. 2527.

Статьи в бюллетенях научных исследований и сборниках научных трудов

  1. Некоторые факторы, влияющие на уровень колострального иммунитета новорожденных поросят // Науч.-техн. бюл. / РАСХН, Дальневост. отд-ние, ДальЗНИВИ. – Новосибирск,  1992. – Вып. 1 : Инфекционная патология сельскохозяйственных животных и пчел на Дальнем Востоке, лечение и профилактика. – С. 1823.
  2. Профилактика желудочно-кишечных заболеваний поросят с использованием концентрированной сыворотки крови свиней и пробиотиков / соавт. А.Ю. Бекетова // Проблемы ветеринарного обеспечения животноводства Дальнего Востока : тез. докл. науч. сес. / РАСХН, Дальневост. отд-ние, ДальЗНИВИ. – Благовещенск, 1995. – С. 42–43.
  3. Содержание иммуноглобулинов в крови и молозиве свиноматок до и после опороса // Проблемы ветеринарного обеспечения животноводства : тез. докл. науч. сес. / РАСХН, Дальневост. отд-ние, ДальЗНИВИ. – Благовещенск, 1995. – С. 4344.
  4. Повышение резистентности поросят в ранний постнатальный период : дис.... канд. ветеринар. наук : 16.00.03 / Шульга Николай Николаевич ; [ЯГСХА]. Якутск, 1997. 17 с.
  5. Применение аллогенной сыворотки крови в мясном скотоводстве : информ. листок № 12-2000 / соавт.: Н.М. Городович, П.Я. Диких, Н.В. Яковлева, А.И. Калинин ; Амур. ЦНТИ. – Благовещенск, 2000. – 2 с.
  6. Факторы выживаемости новорожденных поросят / соавт. М.А. Петрухин // Болезни сельскохозяйственных животных и меры борьбы с ними на Дальнем Востоке и Забайкалье : сб. науч. тр. / ДальГАУ. – Благовещенск, 1996. – С. 114119.
  7. Концентрированная сыворотка крови – резерв повышения сохранности телят и поросят // Сборник научных трудов, посвященный 70-летию ДальЗНИВИ. – Благовещенск, 2005. – С. 111113. 
  8. Оценка напряженности колострального иммунитета у новорожденных телят и поросят // Сборник научных трудов, посвященный 70-летию ДальЗНИВИ. – Благовещенск, 2005. – С. 113115.
  9. Коррекция иммунного статуса новорожденных поросят концентрированной сывороткой крови свиней (КСК) // Научные основы профилактики и лечения болезней животных : сб. науч. тр. ведущих ученых России, СНГ и др. стран / Мин-во сел. хоз-ва РФ [и др.]. – Екатеринбург, 2005. – С. 582589. 
  10. Профилактика болезней молодняка препаратами из сыворотки крови / соавт. Н.В. Яковлева // Практик. – 2006. № 3. – С. 5051.
  11. Метод оздоровления // Ветеринарная жизнь. – 2007. № 2. – С.  15.
  12. Формирование колострального иммунитета у новорожденных поросят // Бюл. науч. исслед. / РАСХН, ДальЗНИВИ. – Благовещенск, 2008. – Вып. 14. : Болезни животных и пчел на Дальнем Востоке, лечение и профилактика. – С. 1319.
  13. Кишечные инфекции новорожденных телят бактериальной этиологии / соавт.: Ю.А. Макаров, Н.Е. Горковенко, В.А. Серебрякова, А.М. Кузьменко // Бюл. науч. исслед. / РАСХН, ДальЗНИВИ.   Благовещенск, 2008. – Вып. 14. : Болезни животных и пчел на Дальнем Востоке, лечение и профилактика. – С. 312.

Работы, опубликованные в материалах региональных, общероссийских и международных научных конференциях

  1. Эффективность применения пробиотических препаратов для лечения желудочно-кишечных заболеваний свиней / соавт.: Н.С. Кухаренко, Т.И. Тимофеева, Л.Х. Сирабидзе // Достижения науки - в сельскохозяйственное производство : материалы науч-практ. конф. / УНПК ДальГАУ. – Благовещенск - Ивановка, 1994. – С. 48.
  2. Выживаемость новорожденных поросят в условиях комплекса / соавт. М.А. Петрухин // Актуальные вопросы ветеринарии : тез. докл. 1-й науч.-практ. конф. фак. ветеринар. медицины НГАУ. Новосибирск, 1997. – С. 5758.
  3. Применение концентрированной сыворотки крови свиней для профилактики иммунодефицитов новорожденных поросят // Актуальные вопросы профилактики и лечения заболеваний сельскохозяйственных и домашних животных : материалы науч.-произв. конф., посвящ. 50-летию Калинингр. НИВС. – Калининград, 1998. – С. 212213.
  4. Применение концентрированной сыворотки крови свиней для профилактики иммунодефицитов новорожденных поросят // Болезни животных Дальнего Востока : материалы междунар. науч. конф. / ДальГАУ. – Благовещенск, 1999. – С. 127129.
  5. Влияние концентрированной сыворотки крови крупного рогатого скота на уровень резистентности телят // Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных : материалы междунар. науч.-практ. конф. / РАСХН, ВИЭВ. – М., 2006. – С. 419422.
  6. Повышение резистентности телят // Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях : материалы междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 60-летию ГНУ Краснодар. НИВИ. – Краснодар, 2006. – С. 434436.
  7. Становление колострального иммунитета у животных в раннем постнатальном периоде // Современные проблемы исследований в биологии : материалы межведомственной научно-практической конференции / РАСХН, ДНМУ. – Благовещенск, 2009. – С.

На правах рукописи

Шульга Николай Николаевич

РАЗРАБОТКА И ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ

ПРЕПАРАТОВ ИЗ КРОВИ ЖИВОТНЫХ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ

РЕЗИСТЕНТНОСТИ НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ

16.00.03 – ветеринарная микробиология, вирусология,

эпизоотология,  микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора ветеринарных наук







© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.