WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

Пупыкина Кира Александровна

Исследования по разработке и стандартизации

лекарственных растительных средств для

профилактики и комплексного лечения

заболеваний органов пищеварения

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора фармацевтических наук

Москва - 2008

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Росздрава»

Научный консультант:

доктор фармацевтических наук,

профессор  Лиходед Виталий Алексеевич

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук,

профессор  Даргаева Тамара Дарижаповна 

доктор фармацевтических наук,

профессор  Нестерова Ольга Владимировна

доктор химических наук,

профессор  Скачилова Софья Яковлевна

Ведущая организация: Курский государственный медицинский 

  университет

Защита состоится 13 октября 2008 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 006.070.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН по адресу: 117216, Москва, Грина, 7.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЛАР по адресу: 117216, Москва, Грина, 7.

Автореферат разослан 

Ученый секретарь

диссертационного совета

Д 006.070.01

д.фарм.н.  А.И. Громакова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

В настоящее время ассортимент лекарственных средств растительного происхождения, применяемых в практическом здравоохранении, составляет более 40%. Расширение исследований по изысканию источников для получения новых эффективных и безопасных лекарственных препаратов растительного происхождения, в том числе применяемых в гастроэнтерологической практике, является актуальной задачей медицины. Одним из путей увеличения количества лекарственных растительных препаратов является широкое изучение действия уже известных фармакопейных лекарственных растений, часто используемых по ограниченному числу показаний, хотя многие из них могут найти более широкое применение. Кроме того, целесообразно составление рациональных многокомпонентных растительных композиций (сборов), содержащих биологически активные вещества с разносторонним фармакологическим действием для коррекции многих, связанных между собою систем организма.

В последние годы во многих странах отмечается неуклонный рост гастроэнтерологических заболеваний, связанный с неблагоприятной экологической обстановкой, неправильным и нерациональным питанием. В России заболеваниями данной группы страдает каждый десятый житель. К числу наиболее распространенных относится хронический панкреатит (8-35%),  язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки (8-10%), заболевания гепатобилиарной системы, в том числе гепатит (18-22%). Изучение структуры заболеваний органов пищеварения по Республике Башкортостан показало, что они сопоставимы с данными по России и первое место среди них также занимает хронический панкреатит (38,6%), затем язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки (23,5%), заболевания гепатобилиарной системы (15,2%), хронический гепатит (6,9%) и др. Эти заболевания осложняются развитием дисбактериоза, который выявляется более чем у 90% больных, с острыми и хроническими гастроэнтерологическими заболеваниями и практически у всех пациентов с острыми кишечными инфекциями. При этом нарушается баланс между различными видами микроорганизмов кишечника, выявляется патогенная и условно патогенная флора, развиваются общие метаболические расстройства и нейрогуморальные нарушения. Кроме того, отмечается увеличение числа больных с тяжелым течением заболеваний пищеварительной системы, развитием осложнений, увеличением процента злокачественных новообразований желудка, поджелудочной железы, что ведет к повышению летальности и потере трудоспособности населения. В связи с этим проблема восстановления функциональной активности органов пищеварения, профилактика сезонных обострений является актуальной и достаточно сложной.

В терапии заболеваний желудочно-кишечного тракта широко используются разнообразные синтетические лекарственные средства. Однако, при их выраженном терапевтическом эффекте они не лишены побочного действия, имеют противопоказания и ограничения к применению, не всегда предотвращают развитие рецидива заболевания после их отмены.

В настоящее время патология органов пищеварения имеет не только хронический, но и сочетанный характер, что определяет необходимость разработки комплексных подходов к их лечению, в том числе с применением лекарственных растительных средств, которые имеют широкий спектр лечебного и профилактического действия, обладают низкой токсичностью, мягкостью действия, способны быстро устранять симптомы обострения, предупреждать рецидивы и способствовать восстановлению нарушенных функций желудочно-кишечного тракта.  Возможности профилактики и комплексного лечения с применением растительных средств таких заболеваний, как хронический панкреатит, гепатит, язвенная болезнь желудка и дисбактериоз, часто осложняющий их, еще недостаточно изучены в клинической практике. Ассортимент официнальных многокомпонентных растительных сборов, рекомендуемых в терапии заболеваний пищеварительной системы включает только 11 наименований, причем среди них нет тех, которые рекомендовались бы для лечения и профилактики хронического панкреатита, дисбактериоза, а предлагаемые для лечения гепатита, язвенной болезни желудка учитывают не все особенности патогенеза этих заболеваний. Однако, при рациональном сочетании лекарственных растений между собой и с синтетическими препаратами расширяются их терапевтические возможности, снижается  частота побочных явлений медикаментозной терапии. Все это требует более глубокого изучения принципов комбинирования лекарственного растительного сырья в сборах для обеспечения необходимого фармакологического эффекта.

Перспективность развития исследований по разработке новых растительных сборов, рекомендуемых при лечении заболеваний пищеварительной системы, подтверждается и тем, что в Уральском регионе, в частности Башкортостане, имеются достаточные сырьевые растительные ресурсы, которые позволяют организовать промышленное производство лекарственных растительных средств. Это имеет большое значение в оздоровлении населения республики и обеспечении его доступными лекарственными препаратами.

Таким образом, поиск и разработка новых эффективных и безопасных  лекарственных растительных средств для профилактики и комплексного лечения некоторых заболеваний пищеварительной системы представляет актуальную задачу фармацевтической науки.

Целью настоящих исследований является разработка теоретически обоснованных подходов к подбору компонентов сборов для профилактики и комплексного лечения заболеваний органов пищеварения, их комплексное исследование, стандартизация и разработка рациональных лекарственных форм на их основе.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следую­щие задачи:

- разработать научно-методологический подход к созданию многокомпонентных растительных сборов для профилактики и комплексного лечения некоторых заболеваний органов пищеварения;

- теоретически и экспериментально обосновать оптималь­ный состав новых многокомпонентных растительных сборов;

- изучить ресурсную обеспеченность основных растительных компонентов пред­ложенных сборов в Республике Башкортостан и возможность интродукции пряно-ароматических, эфирномасличных расте­ний для расширения сырьевой базы и ассортимента профилактических средств;

- провести комплексные фармакогностические исследования многокомпонентных растительных сборов, интродуцированных растений, определить критерии подлинности сборов, разработать методики количественного определения основных групп биологически активных веществ и нормы их содержания;

- изучить влияние основных факторов экстракции на выход биологически активных веществ из сборов для разработки рациональной схемы получения сухих экстрактов на их основе и определить показатели качества;

- разработать состав соотношения и способ получения лекарственных форм на основе масляного растительного экстракта;

- провести фармакологические исследования, подтверждающие эффективность предложенных растительных средств;

- разработать нормативную документацию: фармакопейные статьи на сборы и технические условия на чайные напитки и экстракты.

Научная новизна

Выявлены закономерности, позволяющие обосновать научно-методологический подход к созданию новых многокомпонентных растительных сборов, рекомендуемых для профилактики и комплексного лечения некоторых заболеваний пищеварительной системы с учетом многофакторного механизма их развития и принципов фармакологической регуляции функциональной деятельности системы пищеварения.

Теоретически и экспериментально, с помощью фармакологического скрининга, обоснованы составы четырех новых сборов: для профилактики и комплексного лечения в стадии обострения и ремиссии хронического панкреатита и гепатита - «Гепапанкреафит - О», «Гепапанкреафит - Р»; язвенной болезни желудка - «Ульцерофит»; дисбактериоза - «Дисбакфит».

Изучена обеспеченность в Республике Башкортостан сырьевой базы по основным компонентам растительных сборов и с целью ее расширения возможность интродукции в лесостепную зону Южного Предуралья пряно-ароматических и эфиромасличных растений. На основе проведенных исследований установлено, что перспективными для введения в культуру являются 13 видов, для которых изучен химический состав и выявлены растения, накапливающие максимальное количество биологически активных веществ и проявляющие более выраженную антиоксидантную активность.

В ходе фармакогностических исследований разработаны «Определители» морфологических групп растительных компонентов сборов, выявлены диагностически значимые признаки лекарственного растительного сырья и сборов для установления их подлинности и стандартности. С использованием современных методов анализа (УФ- и ИК-спектроскопия, высокоэффективная жидкостная хроматография, хромато-масс- и атомно-абсорбционная спектрометрия) в сборах и интродуцированных растениях установлено содержание основных групп биологически активных веществ флавоноидной природы, фенолкарбоновых кислот, кумаринов, антраценпроизводных, сапонинов, полисахаридов, эфирных масел, органических кислот, витаминов, аминокислот, макро- и микроэлементов.

В ходе технологических исследований разработана схема получения сухих экстрактов из сборов, установлена зависимость выхода биологически активных веществ от различных режимов экстрагирования, изучен их химический состав и предложены критерии подлинности. Обоснованы состав, технология и целесообразность применения вспомогательных веществ для получения новых лекарственных форм (гель и карандаш) на основе масляного экстракта из разработанного и изученного ранее сбора «Экзофит». Разработан новый способ определения твердости карандаша.

С учетом значимости отдельных групп биологически активных веществ сборов и лекарственных форм на их основе в обеспечении лечебных эффектов, разработаны методики их количественной оценки и предложены показатели качества, необходимые для стандартизации. В сборах «Гепапанкреафит-О» и «Дисбакфит» - определение содержания суммы флавоноидов и дубильных веществ; в сборах «Гепапанкреафит–Р» и «Ульцерофит» - суммы флавоноидов и  полисахаридов; в лекарственных формах на основе масляного экстракта «Экзофит» - каротиноидов.

Методами фармакологических исследований доказана рациональность составов и эффективность применения предложенных растительных средств. Разработан способ одновременного моделирования хронического панкреатита и гепатита на животных.

Приоритет и новизна проведенных исследований защищены 7 патентами РФ: № 2271041; № 2223777; № 2178304; № 2193411; № 2232591; № 2310438; № 2315279; тремя положительными решениями на выдачу патента - № 2007123053/15(025101), № 2007123054/15(025102) и № 2007123051/ 14 (025099);  поданы 3 заявки на изобретение: приоритетные справки № 2007130459/14; №2007130461/14;  №2007130460/14.

Практическая значимость

По результатам исследований разработаны и внедрены:

  проекты ФС на сборы:  Species «Hepapancreаphytum – O» - для комплексного лечения хронического панкреатита и гепатита в стадии обострения; Species «Hepapancreаphytum – R» - для профилактики и комплексного лечения хронического панкреатита и гепатита в стадии ремиссии; Species «Ulcerophytum» - для профилактики и комплексного лечения язвенной болезни желудка; Species «Disbacphytum» - для профилактики и комплексного лечения дисбактериоза, которые приняты к рассмотрению Фармакопейным комитетом (вход. № 20099 - 20102 от 08.04.08г.);

в работу ООО «Травы Башкирии»: технические условия «Напитки чайные «Гепапанкреафит-О», «Гепапанкреафит-Р», «Ульцерофит», «Дисбакфит»» для профилактики заболеваний пищеварительной системы (ТУ 9191-004-26795008-2002, утвержденные 25.10.02г.); технические условия «Экстракты из растительного сырья» (ТУ 9168-007-26795008-2003, утвержденные 28.12.03г.); инструктивные письма по приготовлению и использованию настоев из сборов;

в работу ГУП «Башфармация» материалы ресурсного обследования флоры Башкортостана (акт внедрения от 10.11.2007г.) на основе которых разработаны и внедрены в учебный процесс кафедры фармакогнозии Башкирского государственного медицинского университета (БГМУ) учебные пособия «Ресурсоведение лекарственных растений», «Учебная практика по фармакогнозии», которые получили гриф Учебно-методического объединения по медицинскому и фармацевтическому образованию вузов России (УМО-39 от 27.01.05; УМО-703 от 15.11.05) и рекомендованы для студентов фармацевтических вузов и факультетов;

результаты изучения макро- и микроскопических признаков лекарственного растительного сырья использовались при разработке учебного пособия «Основы гистологии, анатомии, физиологии и морфологии растений», которое внедрено в учебный процесс кафедры фармакогнозии БГМУ, получило гриф УМО-39 от 27.01.05г. и рекомендовано для студентов фармацевтических факультетов и вузов России;

результаты изучения сборов для профилактики и комплексного лечения заболеваний органов пищеварения использовались при разработке монографии «Лекарственные растения в гастроэнтерологии»;

материалы по фитохимическому изучению и определению антиоксидантоной активности интродуцированных в лесостепную зону Южного Предуралья пряно-ароматических и эфирномасличных расте­ний, вошли в монографию «Проблемы экологии и принципы их решения на примере Южного Урала»; 

материалы диссертации апробированы в Республиканском центре контроля качества и сертификации лекарственных средств Республики Башкортостан и внедрены в учебный процесс кафедр БГМУ: фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии, фармацевтической химии с курсами аналитической и токсикологической химии, фармацевтической технологии с курсом биотехнологии, поликлинической терапии, поликлинической медицины ИПО, инфекционных болезней ИПО (акты внедрения).

Связь задач исследований с проблемным планом

Работа выполнена в соответствии с планом научных исследований Башкирского государственного медицинского университета по проблеме «Фармакология и фармация». Номер госрегистрации 01200507996.

Апробация работы

Основные результаты исследований доложены и обсуждены на региональных, российских, международных форумах, конгрессах, съездах, научно-практических конференциях: Москва – 1996, 1998, 2001, 2004, 2006, 2007; Санкт-Петербург - 2001; Чебоксары – 1996;  Томск - 2002, 2006; Новосибирск – 2004, 2005; Архангельск – 2004; Красноярск – 2004; Запорожье – 2007; Пущино – 2007; Пермь – 2007;  Уфа – 1996-2008.

Публикации

Основное содержание работы отражено в 70 научных работах, из них в журналах рецензируемых ВАК – 16; 3 учебных пособия с грифом УМО; 1 монография; 7 патентов, 3 положительных решения на выдачу патента и 3 заявки на изобретение.

Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты анализа современного состояния номенклатуры лекарственных средств растительного происхождения в Республике Башкортостан, применяемых при заболеваниях органов пищеварения;

- результаты теоретических, экспериментальных исследований по разработке и обоснованию составов новых сборов;

- результаты фармакогностических исследований сборов, определения характеристик подлинности, показателей качества и изучения химического состава интродуцированных в лесостепную зону Южного Предуралья пряно-ароматических и эфирномасличных расте­ний;

- результаты технологических исследований по разработке сухих экстрактов из сборов, лекарственных форм на основе масляного экстракта и определения показателей их качества;

- результаты фармакологических исследований по оценке эффективности действия разработанных сборов, лекарственных форм на их основе;

- результаты разработки нормативной документации на сборы и экстракты.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа изложена на 304 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, 4 глав собственных исследований, выводов и списка используемой литературы, включающего 370 источников, из которых 37 иностранных авторов, приложений. Работа иллюстрирована 39 рисунками и 98 таблицами.

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цели и задачи исследования, представлены научная новизна и практическая значимость работы.

В первой главе,  на основании обзора литературных данных, изложено  современное состояние вопроса профилактики и комплексного лечения заболеваний органов пищеварения с использованием лекарственных растительных средств. Проанализированы и обобщены сведения о лекарственных препаратах растительного происхождения, биологически активных добавках к пище, применяемых при заболеваниях указанного профиля, состояние и перспективы стандартизации лекарственного растительного сырья, возможностях использования пряно-ароматических и эфирномасличных растений в профилактике заболеваний органов пищеварения.

Во второй главе приведены сведения об объектах исследования,  характеристике используемых при выполнении работы приборов и методов.

Третья глава посвящена изучению спроса, потребности и обоснованию необходимости создания лекарственных растительных средств, применяемых для профилактики и комплексного лечения заболеваний пищеварительной системы в Республике Башкортостан, теоретическому и экспериментальному обоснованию компонентного состава сборов для профилактики и комплексного лечения заболеваний органов пищеварения, обеспеченности сырьевой базы лекарственных растений, входящих в состав сборов.

В четвертой главе приведены результаты экспериментальных исследований по фармакогностическому и фитохимическому изучению сборов, интродуцированных пряно-ароматических, эфирномасличных растений, выделению и идентификации биологически активных веществ из сборов, определению характеристик подлинности, разработке методик количественного определения основных групп действующих веществ. Описаны условия получения водных извлечений из сборов с учетом соотношения сырья и экстрагента, измельченности, времени нагревания и настаивания, коэффициента водопоглощения. Предложены критерии подлинности и нормы содержания биологически активных веществ, включенные в нормативную документацию на сборы (проекты фармакопейных статей и технические условия).

Пятая глава включает технологические исследования по разработке рациональных лекарственных форм на основе сборов: сухих экстрактов и лекарственных форм (гель и карандаш) на основе масляного экстракта, а также определению показателей их качества, включенных в технические условия на экстракты.

В шестой главе описаны результаты фармакологических исследований разработанных растительных средств, включающие определение их безопасности, эксперментальное моделирование хронического панкреатита, гепатита, язвенной болезни желудка и дисбактериоза на животных и определение их профилактического и лечебного действия.

В приложении внесены основные документы, подтверждающие внедрение результатов диссертационной работы и некоторые иллюстрационные материалы.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты и методы исследования

Объектами исследования служило стандартное лекарственное растительное сырье (ЛРС) различных морфологических групп, разрешенное для применения в медицинской практике на территории РФ, из которых были составлены рациональные прописи пяти многокомпонентных растительных сборов. Партии сырья были получены с аптечного склада Государственного унитарного предприятия (ГУП) «Башфармация» и от Общества с ограниченной ответственностью (ООО) «Травы Башкирии».

На основе четырех сборов были разработаны сухие экстракты, а из пятого получен масляный экстракт для приготовления новых лекарственных форм (геля и карандаша). В качестве вспомогательных веществ при разработке лекарственных форм использовали: подсолнечное масло; сополимер стирола с малеиновым ангидридом (ССМА);  масло какао; эмульгатор Т-2;  эмульсионный воск;  пентол; эмульгатор №1; кoллидон CL-M.

Отбор проб для анализа, изучение характеристик подлинности и показателей качества сборов осуществляли, руководствуясь общими статьями ГФ-ХI издания.

В работе использовали реактивы, растворители, стандарты, отвечающие требованиям соответствующей нормативной документации.

Макроскопический анализ отдельных видов сырья и сборов проводили в соответствии с указаниями статей ГФ-ХI, вып.1: «Листья» (с. 252), «Травы» (с. 256), «Цветки» (с. 257), «Плоды» (с. 258), «Кора» (с. 261), «Корни, корневища, луковицы, клубни, клубнелуковицы» (с. 263) и «Сборы» (с. 266).

Микроскопический анализ растительных компонентов и сборов осуществляли в соответствии с указаниями статьи «Техника микроскопического и микрохимического исследования лекарственного растительного сырья» (ГФ XI, вып. 1, с. 277). Определяли диагностически значимые признаки лекарственного растительного сырья и сборов.

Обнаружение и идентификацию биологически активных веществ (БАВ)  (полисахаридов, витаминов, флавоноидов, дубильных веществ, фенолкарбоновых и оксикоричных кислот, кумаринов, тритерпеновых сапонинов и др.) проводили с помощью качественных реакций и хроматографических методов исследования: одномерная и двумерная хроматография на бумаге (БХ) (Санкт-Петербургской фабрики № 2 марки «С» и «Filtrak № 11»), в тонком слое сорбента (ТСХ) («Silufol UV-254»), на колонке, высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). В эксперименте использовали следующие системы растворителей: для БХ – 2% и 15% раствор уксусной кислоты; н-бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:2); муравьиная кислота - уксусная кислота - вода (4:1:3). Для ТСХ - гексан - диэтиловый эфир (80:20); бензол - петролейный эфир (1:1); этилацетат - уксусная кислота (80:20); н-бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:5); этилацетат - уксусная кислота - вода (5:1:1); хлороформ – метанол - вода (62:32:7); этилацетат - бензол (1:2); хлороформ - петролейный эфир (1:2).

Электронные спектры выделенных веществ, исследуемых растворов в УФ и видимой областях регистрировали на приборах «Specord-400», «Hitachi» в кюветах с толщиной слоя 10 мм при аналитически значимых интервалах длин волн: для флавоноидов - 240-270 нм и 320-380 нм; для оксикоричных кислот - 310-340 нм. Вещества идентифицировали по спектрам их поглощения в ультрафиолетовой области и в инфракрасной области, характерным сдвигам максимумов поглощения при использовании соответствующих диагностических добавок. 

Для хроматографического анализа и разработки методик количественного определения основных групп биологически активных веществ использовали хроматографически чистые вещества и стандарты.

Выокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) анализ фенольных соединений и глицирризиной кислоты проводили  на хроматографе «Стайер» (Аквилон, Россия) с УФ-детектором при длине волны 360 нм (для фенольных соединений) и 254 нм (для глицирризиновой кислоты), последующей обработкой результатов исследования с помощью программы МультиХром для «Windows». В качестве неподвижной фазы использовали обращено-фазную металлическую колонку Luna C18 длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненную адсорбентом Phenomenex (США) с диаметром частиц 5 мкм. Анализ проводили методом градиентного элюирования при комнатной температуре. Градиентная подача ацетонитрила проходила с 0 до 70% в 0,2% водном растворе трифторуксусной кислоты за 30 минут с объемной скоростью 1 мл/мин (для фенольных соединений) или ацетонитрила (растворитель Б) и воды бидистиллированной (растворитель А) - для глицирризиновой кислоты. Ввод пробы осуществлялся с помощью инжектора с дозирующей петлей 20 мкл. Идентификацию проводили путем сопоставления времен удерживания компонентов смеси и растворов сравнения. Расчет количественного содержания глицирризиновой кислоты производили методом абсолютной калибровки с помощью компьютерной программы и по формуле.

Качественный состав эфирного масла анализировался хромато-масс-спектрометрическим методом. Масло растворяли в гексане и раствор с помощью микрошприца дозировали в газовый хроматограф НР 6890 с масс-селективным детектором НР 5973. Разделение компонентов осуществляли на кварцевой капиллярной колонке (30 м х 0,25 мм х 0,25 м) на метилфенилсиликоне. Скорость газа носителя (гелия) 1 мл/мин. Температура инжектора 2800С, температура интерфейса 2900С, температура масс-селективного детектора 2300С. Температурная программа: начальная температура колонки 700С (выдержка 4,5 мин); подъем температуры в диапазоне 70 – 1700С со скоростью 300С в мин; в диапазоне 170-2800С со скоростью 100С в мин. Время выдержки при конечной температуре 10 мин; объем вводимой пробы с помощью автосамплера 1 мкл. Сброс отсутствует. Давление в инжекторе программируется с 8,8 psi до 22,0 psi. Диапазон масс 39 – 350 а.е.м.

Количественное определение содержания основных групп биологически активных веществ проводили с использованием современных физико-химических методов: титриметрических, спектрофотометрических,  хроматоспектрофотомет-рических, ВЭЖХ, атомно-адсорбционной спектрометрии. 

Для сборов определялась микробиологическая и радиологическая чистота.

Для сухих экстрактов из сборов определяли следующие технологические показатели:  влажность, растворимость, насыпную массу, угол естественного откоса,  сыпучесть, объемную плотность, содержание тяжелых металлов, количественное содержание действующих веществ: флавоноидов, полисахаридов, дубильных веществ.

Для гелевых композиций с растительным масляным экстрактом определяли агрегативную и кинетическую устойчивость, намазываемость основ, структурно-механические свойства, осмотическую активность, высыхаемость.  Для фитокарандашей с масляным растительным экстрактом определяли: значения биодоступности; твердости пластических масс, показатели гелеобразования. В геле и фитокарандашах определяли количественное содержание каротиноидов.

Скрининговые биологические и фармакологическите исследования включали изучение антимикробной, антиоксидантной, противовоспалительной активности, острой токсичности и других видов специфической активности промежуточных и конечных продуктов.

Статистическую обработку экспериментальных данных (Р = 95%) фитохимических и технологических исследований проводили в соответствии с требованиями ГФ-ХI (вып. 1, с. 199) «Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических испытаний», с использованием критерия Стьюдента, обработку результатов медико-биологических исследований проводили, кроме того, по методу Литчфильда и Уилкоксона, критерию χ по В.С. Генесу. 

Разработка подходов к составлению рецептур сборов для

профилактики и комплексного лечения некоторых заболеваний органов пищеварения и обеспеченность сырьевой базы

Сложность этиологии и патогенеза заболеваний пищеварительной системы, тяжесть их течения, возможные осложнения объясняют необходимость комплексной терапии с применением эффективных и безопасных растительных средств с достаточной сырьевой базой для их производства. Руководствуясь запросами практикующих врачей, работающих в стационарных и амбулаторных учреждениях, нами проведены исследования по разработке новых сборов и лекарственных форм на их основе для профилактики и комплексного лечения некоторых заболеваний органов пищеварения.

Маркетинговые исследования потребителей рынка лекарственных препаратов, применяемых для лечения заболеваний органов пищеварения, показали, что фармацевтический рынок Республики Башкортостан (РБ) не обеспечен должным ассортиментом препаратов растительного происхождения и врачебные предпочтения в большей мере склоняются к назначению синтетических препаратов. Это связано с недостаточной информированностью врачей о возможности применения лекарственных препаратов растительного происхождения и их преимуществах перед синтетическими средствами. Однако, изучение спроса населения о препаратах растительного происхождения показало, что потребность в них является достаточно высокой и предпочтение отдается индивидуальным видам лекарственного растительного сырья и сборам. Это объясняет целесообразность разработки новых лекарственных растительных средств с высоким показателем их эффективности и качества.

Основной задачей на данном этапе явилось теоретическое научно-методологическое обоснование и создание алгоритма действий по разработке составов сборов для профилактики и комплексного лечения некоторых заболеваний органов пищеварения с учетом многофакторного механизма их развития (рис.1). При этом использовали репрезентативную выборку патологических состояний с учетом дифференциации признаков различных форм заболеваний в пределах нозологической группы. Главными составляющими при подборе лекарственного растительного сырья для формирования сборов при желудочно-кишечной патологии, являлись следующие: сведения об этиологии и патогенезе заболевания, составе биологически активных веществ растений, опыте их использования в научной и народной медицине. Немаловажным также было знание противопоказаний и предостережений при применении лекарственных растений.

При составлении сборов для лечения хронического панкреатита учитывали особенности его течения в различные фазы заболевания, развитие экзокринной, а затем эндокринной недостаточности поджелудочной железы, поражения печени, наличие возможных осложнений. Это определяло направленность действия сборов и, следовательно, необходимые виды фармакологической активности растительных компонентов. В подострой стадии заболевания недопустимо введение в сбор растений, обладающих желчегоным действием, поскольку усиление желчеобразования в условиях спазма сфинктера Одди может привести к холепанкреатическому рефлюксу, внутрипротоковой гипертензии и спровоцировать обострение заболевания.

При составлении сбора для профилактики и комплексного лечения хронического панкреатита в стадии ремиссии учитывали, что в этой фазе воспалительный процесс в поджелудочной железе еще не завершен, а в условиях нарушенной микроциркуляции репарация ацинарной ткани происходит  медленно. Поэтому  на  месте  воспаления  формируется  фиброзная

Рис. 1.  Алгоритм действий по разработке рецептур сборов

ткань, что приводит к недостаточности функции поджелудочной железы. В фазе ремиссии показаны растения со слабым желчегонным действием (календула, девясил). При этом отдается предпочтение холекинетическому действию, особенно при дискинезиях желчевыводящих путей, так как желчь способствует перевариванию жиров за счет активации липазы, что улучшает внешнесекреторную функцию поджелудочной железы.

Эффективно в состав сборов, кроме растений специфического действия вводить компоненты антитоксического действия (горец птичий, пустырник, крапива), антигипоксического (сушеница, календула, шиповник, крапива и др.) и корректирующие метаболические нарушения.

Течение и обострение хронического панкреатита (ХП) характеризуется сложными функциональными нарушениями в печени, изменениями биохимических показателей, что подтвердилось в результате экспериментального моделирования хронического панкреатита на животных. Поэтому область применения сборов не ограничивается терапией и профилактикой хронического панкреатита в стадии обострения и ремиссии, их можно применять и при лечении заболеваний печени, а именно хронического гепатита в разных фазах заболевания.

При составлении композиции сбора для лечения язвенной болезни желудка выбор растительных компонентов осуществляли с учетом основных направлений патогенетической терапии и способности растений активно усиливать продукцию защитной слизи, восстанавливать структуру слизистой оболочки желудка, активизировать регенерацию клеток эпителия слизистой и соответственно стимулировать защитные факторы. В состав сбора при лечении язвенной болезни желудка вводили компоненты улучшающие обмен веществ: тканевой, жировой, углеводный, белковый, водно-солевой (девясил, крапива, пустырник, подорожник большой, солодка), антитоксические (пустырник, горец птичий, крапива), антигипоксические (рябина обыкновенная, сушеница, ромашка).

При составлении сбора для лечения дисбактериоза кишечника учитывали, что фитотерапия может быть эффективно использована для санации от условно патогенной микрофлоры, так как лекарственные растения в большинстве своем являются кишечными эубиотиками, уничтожающими патогенную, сохраняющими и стимулирующими сапрофитную микрофлору. Биологически активные вещества растений взаимодействуют с воспаленной слизистой кишечника, способствуют восстановлению и регенерации слизистого слоя, вызывают уплотнение протоплазмы, за счет денатурации белков, находящихся в слизи и тканевом экссудате и образование плотной пленки, защищающей нормальную и поврежденную слизистую оболочку от раздражения и внедрения патогенных бактерий. При дисбактериозах кишечника страдают процессы кишечного переваривания, поэтому оправдано включение в сбор растений, корректирующих эти процессы и растений противоположного действия: вяжущего (зверобой, лапчатка, шалфей) или слабительного (крушина), что дает возможность  регулировать деятельность кишечника в зависимости от склонности к диарее или запорам. Учитывая патогенетические подходы к составлению сбора для комплексного лечения дисбактериоза кишечника, мы предположили, что он может оказаться эффективным и в комплексном лечении острых кишечных инфекций.

В состав разрабатываемых композиций вводили и дублирующие по действию растительные компоненты, исходя из того, что усложнение комплекса биологически активных веществ, приводит к потенцированию фармакологических эффектов за счет того, что компоненты одноименного действия имеют различные точки воздействия и повышают надежность ожидаемого лечебного эффекта. При этом обеспечивается поливалентность действия и снижается возможность побочных эффектов. Введение же компонентов с антитоксическим, седативным и тонизирующим эффектами приводит к созданию «круговой обороны» организма в целом. Таким образом, для дальнейших исследований нами было отобрано 28 видов лекарственного растительного сырья. Из отобранных отдельных видов растительного сырья составляли различные комбинации сборов (сбор №1 (125 вариантов), №2 (113 вариантов), сбор №3 (132 варианта), сбор №4 (123 варианта)), включающие от 2 до 15 компонентов, из них готовили водные извлечения (1:10) в разных режимах и проверяли активность.

Обоснование оптимальных составов сборов подтверждали экспериментально путем скрининга биологической и фармакологической активности. Поскольку в патогенезе хронического панкреатита и гепатита ведущая роль принадлежит развитию воспалительного процесса в поджелудочной железе (ПЖ) и печени, а также снижению ферментативной активности ПЖ, для скрининговых исследований было выбрано определение противовоспалительной и амилолитической активности. При разработке сбора для комплексного лечения язвенной болезни желудка изучали антиоксидантную и противоязвенную активность. При разработке сбора для комплексного лечения дисбактериоза была изучена антимикробная и антигрибковая активность.

Процентное соотношение компонентов в сборах обосновывали теоретически с учетом вклада каждого компонента в оказание конечного лечебного эффекта и экспериментально, оценивая активность растительных компонентов. При этом учитывалось явление взаимодействия растительных компонентов между собой (интерференции), так как наблюдалось, что некоторые виды растительного сырья, проявляющие более выраженную активность в отдельности, в смеси изменяли ее, или потенцируя или снижая действие совместно присутствующих компонентов.

Проведенный анализ литературных данных о химическом составе выбранных лекарственных растений, их активности, позволил обосновать рациональность отбора растительных компонентов для составления сборов. Таким образом, по результатам исследований были разработаны оптимальные прописи четырех сборов для профилактики и комплексного лечения хронического панкреатита и гепатита в стадии обострения - сбор №1 «Гепапанкреафит – О»: кора дуба, трава донника, корни лопуха, корни солодки, трава горца птичьего по 14%, листья мать-и-мачехи, трава пустырника, трава сушеницы топяной, трава эхинацеи пурпурной по 7,5%; хронического панкреатита и гепатита в стадии ремиссии – сбор №2 «Гепапанкреафит – Р»: корневища и корни девясила, цветки календулы, листья крапивы, листья подорожника большого, плоды шиповника по 15,5%, трава полыни обыкновенной, створки плодов фасоли, трава эхинацеи пурпурной по 7,5%; язвенной болезни желудка - сбор №3 «Ульцерофит»: цветки ромашки, трава сушеницы топяной, корни солодки, трава горца птичьего, корневища и корни девясила, листья подорожника большого по 12,5%, трава пустырника, плоды рябины, листья крапивы, плоды фенхеля по 6,25%; дисбактериоза кишечника - сбор №4 «Дисбакфит»: корневище лапчатки, листья шалфея, листья мяты перечной, корневища с корнями девясила, трава зверобоя, трава тысячелистника, трава череды, плоды фенхеля по 11,75%, кора крушины 6%. Кроме новых сборов, объектом исследования служил также разработанный и изученный ранее сбор «Экзофит», включающий траву зверобоя, цветки календулы, траву полыни горькой, соплодия хмеля, взятых поровну, и используемый для получения масляного растительного экстракта и приготовления на его основе лекарственных форм с противовоспалительной и ранозаживляющей активностью.

При подборе компонентов сборов, мы ставили перед собой задачу возможной их заготовки на территории Республики Башкортостан и промышленного производства. В состав разрабатываемых и изучаемых сборов вошли преимущественно виды местной флоры: из 28 видов лекарственных растений произрастают или культивируются на территории Республики Башкортостан - 25, остальные (мята перечная, фенхель обыкновенный, шалфей лекарственный) культивируются на территории Российской Федерации. Нами была проведена оценка запасов в некоторых районах Республики Башкортостан дикорастущих лекарственных растений, входящих в состав сборов, на основе которых были составлены практические рекомендации по их заготовке и рациональному использованию.

Для решения вопроса расширения сырьевой базы составных компонентов сборов, которые не произрастают в диком виде на территории Республики Башкортостан, были проведены исследования по введению в культуру таких растений как мята перечная, фенхель обыкновенный, шалфей лекарственный и других пряно-ароматических и эфиромасличных растений, применение которых имеет большое значение для профилактики заболеваний пищеварительной системы.

Исследования по интродукции пряно-ароматических и эфиромасличных растений в Республике Башкортостан проводились в г. Бирске в рамках совместных исследований с биологами на базе агробиостанции БГПИ. Проводя отбор различных видов пряно-ароматических и эфиромасличных растений из других географических пунктов для их интродукции в лесостепную зону Республики Башкортостан, учитывались продолжительность жизненного цикла растений и климатические условия произрастания, сравнивая их с таковыми в Южном Предуралье, обращалось внимание на количество атмосферных осадков, температуру воздуха, продолжительность безморозного периода. Выделялись факторы, ограничивающие интродукцию новых видов в республику: поздние весенние и ранние осенние заморозки, недостаток влаги в определенные сроки летнего периода, относительно низкая температура при отсутствии достаточного снежного покрова. Анализируя эти данные предполагалось, что в условиях Южного Предуралья хорошо будут расти и развиваться виды растений из лесной и лесостепной зон умеренных широт, из Средиземноморья – виды, произрастающие в горах; из тропических и субтропических районов - виды, проходящие весь жизненный цикл за один вегетационный период.

Таким образом, в условиях Башкортостана была изучена интродукция 50 видов пряно-ароматических и эфиромасличных растений, из которых хорошо адаптировались в условиях лесостепной зоны Южного Предуралья только 20 видов и форм растений. В результате оценки успешности интродукции пряно-ароматических, эфиромасличных растений, основанной на способности растений сохранять в культуре присущие им в природе габитус и размеры, было установлено, что интродукция 13-ти из 20-ти изученных видов растений перспективна в условиях лесостепной зоны Южного Предуралья. Поэтому в дальнейшем автором было проведено более глубокое изучение химического состава исследуемых образцов растений на содержание основных групп биологически активных веществ, что позволило бы расширить сферу их применения с профилактическими целями.

Таким образом, производство сборов может осуществляться как в результате заготовки дикорастущих лекарственных растений местной флоры, так и путем закупки в других регионах страны или введения в культуру отдельных видов растений в Республике Башкортостан, что способствует сохранению природных растительных сообществ и биоразнообразия ценных местных видов.

Фармакогностические исследования, стандартизация разработанных растительных сборов и фитохимическое изучение

интродуцированных растений

Для внедрения в медицинскую практику новых лекарственных средств, в том числе сборов, необходимо проведение исследований по разработке  критериев подлинности сборов, гарантирующих эффективность, безопасность, воспроизводимость действия, и на основе полученных результатов, проектов ФС.

Макроскопический анализ проводили при осмотре составных компонентов аналитической пробы сборов визуально и с помощью лупы (10х), обращая внимание на структуру растительной смеси, цвет, запах, и вкус водного извлечения. В результате были выделены характерные внешние признаки сборов. В связи с тем, что разработанные сборы являются многокомпонентными, мы дифференцировали компоненты сборов по принадлежности к определенной морфологической группе. Затем из каждой морфологической группы выделяли отдельные растительные компоненты и их характерные диагностические признаки, необходимые для установления подлинности, на основе которых были разработаны «Определители» для морфологических групп: плоды, коры, подземные органы, листья и травы, цветки, входящие в состав сборов, и цветки, составляющие элементы трав.

При проведении микроскопического анализа изучали диагностически значимые признаки отдельных растительных компонентов и сборов. Микроскопия всех изученных сборов проиллюстрирована фотографиями.  Исследуемые сборы включают сырье различных морфологических групп и при их описании важно определение диагностичности компонентов при совместном присутствии. Это связано с тем, что сборы могут выпускаться не только в измельченном виде, фасованные в пачки, но и в порошкованном в фильтр-пакетах, что изменяет характер микродиагностических признаков. Поэтому следующим этапом работы являлась количественная оценка проявления диагностически значимых признаков для определения стандартности лекарственного растительного сырья и сборов. Результаты определения проявляемости диагностически значимых частиц отдельных растительных компонентов и сборов  №№ 1 - 4 представлены в таблице 1.

Таблица 1

Проявляемость микродиагностически значимых признаков

отдельных растительных компонентов и сборов

Наименование сырья

Проявляемость диагностически значимых

признаков, %

отдельных растительных компонентов

в сборах

СБОР №1

1

Кора дуба 

40,0±0,8

33,1±1,5

2

Трава донника 

35,3±0,5

23,7±0,7

3

Корень солодки

39,2±0,8

24,4±1,1

4

Трава горца птичьего

41,5±1,1

28,0±1,4

5

Корни лопуха

36,4±0,7

25,7±0,8

6

Листья мать-и-мачехи

37,5±0,4

28,1±1,5

7

Трава пустырника

46,4±0,9

26,2±1,2

8

Трава сушеницы 

26,2±0,8

22,6±0,9

9

Трава эхинацеи

38,3±0,6

21,7±0,6

СБОР №2

1

Корневища и корни девясила

40,5±0,6

31,0±1,6

2

Цветки календулы

42,6±1,1

35,3±1,2

3

Листья крапивы

60,0±1,5

38,5±1,7

4

Листья подорожника

53,4±1,2

36,7±1,2

5

Плоды шиповника

46,3±1,2

38,5±0,8

6

Трава полыни обыкновенной

40,8±1,3

36,7±1,1

7

Створки фасоли

33,8±0,4

31,5±1,0

8

Трава эхинацеи

38,3±0,6

24,4±0,5

СБОР №3

1

Трава сушеницы

26,2±0,8

20,4±0,8

2

Трава горца птичьего

41,5±1,1

30,6±1,7

3

Плоды фенхеля 

38,1±1,0

23,4±0,9

4

Цветки ромашки

35,3±0,6

26,9±1,6

5

Корни солодки

39,2±0,8

34,7±1,2

6

Плоды рябины обыкнов.

36,7±0,5

25,5±1,3

7

Листья подорожника

53,4±1,2

42,5±2,8

8

Трава пустырника

46,4±0,9

28,5±1,5

9

Корневища и корни девясила

40,5±0,6

31,8±1,4

10

Листья крапивы

60,0±1,5

36,5±2,5

СБОР №4

1

Корневища лапчатки

36,6±0,6

29,4±1,6

2

Листья шалфея 

46,3±1,0

34,8±1,5

3

Листья мяты перечной

47,2±1,3

36,4±1,4

4

Корневища и корни девясила

40,5±0,6

30,7±1,3

5

Трава зверобоя

39,7±0,7

27,8±1,0

6

Трава тысячелистника

35,3±0,6

21,6±1,2

7

Трава череды

39,3±0,5

32,4±1,7

8

Плоды фенхеля

38,1±1,0

24,7±1,1

9

Кора крушины

36,2±0,8

21,6±0,5

Таким образом, из результатов исследования видно, что процент проявления диагностически значимых частиц компонентов в сборах снижается, по сравнению с проявлением этих признаков для отдельных компонентов сборов, что объясняется снижением частоты встречаемости значимых частиц при анализе многокомпонентных смесей.

Определение характеристик подлинности проводили в аналитических пробах образцов пяти серий сборов, изготовленных в лабораторных условиях. В сборах определяли показатели влажности, золы общей, золы, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты, измельченность сырья, содержание примесей (органических и минеральных). При определении примесей одновременно обращали внимание на  наличие амбарных вредителей, которых в лекарственном растительном сырье обнаружено не было. Также в сборах было определено содержание экстрактивных веществ и установлено, что максимальное извлечение экстрактивных веществ из сборов наблюдается при использовании в качестве экстрагента: в сборах №1 и №4 - спирта 40%,  в сборе №2 - спирта 50%, сборе №3 – спирта 70%. Извлечение водой, также показало достаточно высокие результаты, что имеет значение при использовании сборов в качестве водных извлечений для приема внутрь.

Качественный анализ сборов

По данным литературы БАВ в изучаемых сборах представлены веществами разнообразной природы, которые обеспечивают совокупное профилактическое и лечебное действие. Этим обоснована необходимость их фитохимических исследований в целях установления параметров доброкачественности. Для обнаружения отдельных групп БАВ были проведены качественные реакции с 10% водным извлечением из сборов. В результате в сборах были обнаружены следующие группы веществ: во всех 4 сборах - полисахариды, дубильные вещества, флавоноиды, сапонины, аминокислоты, кумарины; в сборе №4 - антраценпроизводные.

Обнаружение и идентификацию БАВ осуществляли с использованием  хроматографических и спектральных методов исследований в сравнении со стандартными образцами.

Аскорбиновую кислоту в сборах обнаруживали в водном извлечении методом ТСХ, подвижная фаза (система «этилацетат - уксусная кислота (80:20)»), хроматографирование (~20 минут), детектирование осуществляли в УФ-свете до и после обработки 0,04% водным раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия. Присутствие аскорбиновой кислоты в сборах №№ 1 - 4 устанавливали по появлению белого пятна на розовом фоне со значением Rf~0,89 – зона аскорбиновой кислоты и неидентифицированная зона со значением Rf~0,95.

Разделение  каротиноидов проводили методом ТСХ, подвижная фаза (система «гексан - диэтиловый эфир (80:20)»), детектирование вели в УФ-свет до и после обработки 10% спиртовым раствором фосфорномолибденовой кислоты. Обнаружение каротиноидов в сборах №№ 1 - 4  устанавливали по появлению  пятен синего цвета на желто-зеленом фоне со следующими значениями Rf~0,16; Rf~0,25; Rf~0,61; Rf~0,82, два из которых предположительно отнесены к каротиноидам, а два – не идентифицированы. Для подтверждения полученных данных, пятна элюировали с хроматограммы и снимали спектральные характеристики в интервале длин волн 350 – 500 нм  и 470 – 700 нм. Результаты значений Rf и спектральные характеристики сопоставляли друг с другом и установили присутствие в сборах   и – каротина.

Для обнаружения витамина К1 также использовали ТСХ при температуре 40-70С, подвижная фаза (система «бензол - петролейный эфир (1:1)»). Хроматограмму высушивали и выдерживали в УФ-свете при длине волны 360 нм (2 минуты). В сборах №2, №3, №4 наблюдали появление пятна с желто-зеленой флюоресценцией со значением Rf~0,68 – зона витамина К1 и не идентифицированная зона со значением Rf~0,34.

С целью разделения фенольных соединений проводили избирательную экстракцию последовательно хлороформом, этилацетатом и бутанолом. Извлечения подвергали анализу на присутствие веществ гидрофильной природы: флавоноидов, оксикоричных и фенолкарбоновых кислот и кумаринов. Для анализа агликонов флавоноидов спиртовые извлечения сборов подвергали гидролизу и экстрагировали диэтиловым эфиром.

Флавоноиды обнаруживали в этилацетатной фракции сборов. Наилучшее их разделение методом одномерной БХ наблюдалось в системах  I - н-бутанол - уксусная кислота – вода (4:1:2), II-15% уксусная кислота, III - муравьиная кислота - уксусная кислота - вода (4:1:3),  методом двумерной – в системах I и II. Детектирование зон флавоноидов проводили как по собственной флюоресценции веществ в УФ-свете (при = 254 и 366 нм), так и с помощью следующих проявителей: пары аммиака, 5% водный раствор натрия карбоната, 5% спиртовый раствор алюминия хлорида. Для сравнения использовали достоверные образцы свидетелей флавоноидов. Результаты хроматографического анализа флавоноидов сборов №1 - №4 свидетельствовали, что зоны адсорбции соединений данной группы в видимом свете имели бледно-желтую окраску, в УФ-свете обладали собственной флюоресценцией - от желтой, желто-зеленой до коричневой, которая усиливалась после проявления хромогенными реактивами. В системах растворителей I и II обнаружено 12 зон адсорбции в сборе №1; 9 зон адсорбции в сборе №2; 14 зон адсорбции в сборе №3 и 11 зон адсорбции в сборе №4, из которых к веществам флавоноидной природы можно отнести 9 зон в сборе №1, 6 зон в сборе №2, 11 зон в сборе №3 и 9 зон в сборе №4.

Обнаружение флавоноидов с помощью ТСХ проводили в системах «н-бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:5)» и «этилацетат - уксусная кислота - вода (5:1:1)», при этом наилучшее разделение наблюдалось в системе «этилацетат - уксусная кислота - вода». В этилацетатной фракции установлено присутствие рутина в сборах №1 - №4 (Rf~0,28), гиперозида в сборах №1 и №3 (Rf~0,42), лютеолин-7-глюкозида в сборах №1 - №4 (Rf~0,57),  авикулярина в сборах №1 и №3 (Rf~0,70), ликуразида в сборах №1 и №3 (Rf~0,43). Обнаружение агликонов флавоноидов проводили после кислотного гидролиза. В эфирной фракции обнаружили кверцетин в сборах №1 - №4 (Rf~0,98), мирицетин в сборе №4 (Rf~0,87), апигенин в сборах №1 - №4 (Rf~0,46), кемпферол в сборе №1 (Rf~0,88). 

Обнаружение оксикоричных и фенолкарбоновых кислот  проводили методом БХ в этилацетатной фракции. При этом наилучшее разделение наблюдалось в системе I и IV- 2% раствор уксусной кислоты. Методом ТСХ хорошее разделение наблюдалось в системе «хлороформ – метанол - вода (62:32:7)». Детектирование зон оксикоричных и фенолкарбоновых кислот проводили также по собственной флюоресценции в УФ-свете и после обработки хромогенными реактивами (пары аммиака, 3% спиртовый раствор треххлористого железа, раствор диазотированной сульфаниловой кислоты), сравнивая с аутентичными образцами свидетелей. Оксикоричные и фенолкарбоновые кислоты обнаруживали по ярко-голубой, зеленовато-голубой, фиолетовой флюоресценции, которая становилась интенсивнее после обработки проявляющими реактивами. В системе I обнаружено 4 зоны в сборе №1 и сборе №2, 5 зон в сборе №3 и 3 зоны в сборе №4 и установлено  присутствие  кофейной (Rf~0,73) и хлорогеновой кислот (Rf~0,36) в сборах №1 - №4; галловой кислоты (Rf~0,64) в сборе №1 и №4. 

Обнаружение кумаринов проводили в хлороформной фракции методом ТСХ в системах «этилацетат - бензол (1:2)» и «хлороформ - петролейный эфир (1:2)». Наилучшее разделение наблюдалось в системе «этилацетат - бензол». Детектирование осуществляли в УФ-свете до и после обработки обрабатывали 10% спиртовым раствором калия гидроксида, хроматограммы высушивали и прогревали при температуре 110-1200С (2-3 мин), после чего опрыскивали свежеприготовленным диазореактивом. Кумарины обнаруживали по ярко-голубой флюоресценции в УФ-свете до обработки хромогенными реактивами, а после обработки пятна приобретали флюоресценцию от кирпично-красного до сине-фиолетового цвета. Наблюдали появление 7 зон адсорбции в сборе №1, 6 зон адсорбции в сборе №2, 8 зон адсорбции в сборе №3 и 5 зон адсорбции в сборе №4, из которых 5 зон в сборе №1 идентифицированы с умбеллифероном, дигидрокумарином, скополетином, герниарином, кумарином; 4 зоны в сборе №2 и №3 идентифицированы с эскулетином, умбеллифероном, скополетином, кумарином; 3 зоны в сборе №4 идентифицированы с эскулетином, умбеллифероном и скополетином.

Для получения более объективной информации наиболее интенсивные зоны флавоноидов и оксикоричных кислот счищали с пластинки и  элюировали 96% этиловым спиртом при нагревании на водяной бане с обратным холодильником. Контроль за составом элюированных фракций осуществляли хроматографически. Операцию повторяли до получения достаточного количества исследуемых веществ. Для идентификации выделенных веществ использовали спектральные методы: УФ- и ИК-спектроскопию, которые в комплексе позволяют установить наличие, положение и характер заместителей. Спиртовые растворы выделенных веществ анализировали при аналитически значимых интервалах оптической плотности и вещества идентифицировали по спектрам их поглощения в ультрафиолетовой области, характерным сдвигам максимумов поглощения при использовании соответствующих диагностических добавок (этилата или метилата натрия, алюминия хлорида). Данные ТСХ анализа (значения Rf) и спектральных исследований сопоставляли друг с другом. Дифференциальные спектры выделенных веществ характеризовались наличием двух максимумов поглощения: для флавоноидов - рутин (при 361 и 258 нм), кверцетин (при 374 и 258 нм), кемпферол (при 368 и 258 нм), лютеолин-7-глюкозид (при 352 и 266 нм), апигенин (при 338 и 270 нм), гиперозид (при 359 и 254 нм); для оксикоричных кислот  - галловой (при 276 и 222 нм), хлорогеновой (при 324 и 300 нм) и кофейной (при 324 и 292 нм).  Для идентификации выделенных препаративно индивидуальных веществ в инфракрасной области готовили гомогенизированные суспензии в вазелиновом масле. Отмечали наличие интенсивной широкой полосы с максимумом при 3370 см-1 для рутина, который обусловлен валентными колебаниями спиртовых и фенольных групп; полоса 1654 см-1 принадлежит карбонильной группе γ-пирона; ароматические >С=С< связи дают ряд полос 1610, 1584, 1510, 1456 см-1. У кверцетина в ИК-спектре были обнаружены полосы валентных колебаний при 3300-3500 см-1, соответствующие гидроксильным группам; 1660 см-1 (>С=О); 1612, 1558, 1522, 1462 см-1 (>С=С<). ИК-спектр кемпферола характеризуется полосами валентных колебаний при 3274-3520 см-1 (гидроксильные группы); 1654-1665 см-1 (карбонильная группа γ- пирона); 1610, 1510, 1462 см-1 (>С=С<). В ИК-спектре апигенина наблюдались полосы при 3286-3410 см-1 (фенольные ОН-группы); 1648-1660 см-1 (карбонильная группа γ- пирона); 1580, 1492  и 1450 см-1 (>С=С<). Для ИК-спектров изолированных оксикоричных кислот характерны валентные колебания при 1252-1300 см-1 (>С=С<); 1640-1705 см-1 (коричный фрагмент); 3280-3430 см-1 (наличие гидроксильных групп).

Для достоверного подтверждения качественного и количественного анализа фенольного комплекса сборов применяли метод ВЭЖХ. Анализ проводили на хроматографе с УФ-детектором при длине волны 360 нм. Для анализа получали спиртовое извлечение с экспериментально подобранными условиями. Параллельно готовили серию 0,05% растворов сравнения флавоноидных соединений и оксикоричных кислот в метиловом спирте. Идентификацию проводили путем сопоставления времен удерживания компонентов смеси и растворов сравнения. Результаты исследований представлены на рис. 2 - 5.

В сборе №1 (рис.2) установлено присутствие 34 веществ фенольной природы, из которых 9 идентифицированы как флавоноиды (рутин (10), авикулярин (14),  лютеолин-7-глюкозид (11), кверцетин (18), изокверцетин (12), гиперозид (21), геспередин (16), ликуразид (24), апигенин (25)) и 3, как оксикоричные кислоты (галловая (5), хлорогеновая (8) и кофейная (9)).

Рис. 2.  Хроматограмма спиртового извлечения сбора №1

В сборе №2 (рис.3) установлено присутствие 24 веществ фенольной природы, из которых 5 идентифицированы как флавоноиды (рутин (10), кверцетин (17), изокверцетин (12), лютеолин-7-глюкозид (11), апигенин (24)) и 3, как оксикоричные кислоты (галловая (4), хлорогеновая (8) и кофейная (9)).

Рис.3.  Хроматограмма спиртового извлечения сбора №2

В сборе №3 (рис.4) - 25 веществ фенольной природы, из которых 8 идентифицированы как флавоноиды (рутин (9), кверцетин (18), изокверцетин (11), авикулярин (14), гиперозид (20), лютеолин-7-глюкозид (10), ликуразид (23), апигенин (25)) и 3, как оксикоричные кислоты (галловая (4), хлорогеновая (6), кофейная (8))

.

Рис. 4.  Хроматограмма спиртового извлечения сбора №3

В сборе №4 (рис.5) - 29 веществ фенольной природы, из которых 7 идентифицированы как флавоноиды (рутин (9), кверцетин (19), изокверцетин (11), гесперидин (17), лютеолин-7-глюкозид (11), гиперозид (21), апигенин (23)) и  3, как оксикоричные кислоты (галловая (5), хлорогеновая (7) и кофейная (8)).

Рис.5.  Хроматограмма спиртового извлечения сбора №4

Количественное содержание идентифицированных компонентов рассчитывали по площади пиков. По рутину и кверцетину строили дополнительно градуировочные графики и также определяли их процентное содержание в сборах, чтобы выявить флавоноиды, доминирующие в сумме, на которые в дальнейшем будем вести пересчет при стандартизации сборов. Анализируя полученные результаты, было установлено, что доминирующим в количественном отношении в сумме флавоноидов сборов №1 - №4 является рутин.

Количественный анализ сборов

Согласно литературным данным, химический состав растений, входящих в состав сборов, изучен достаточно подробно, но поскольку мы предлагаем новые композиции из этих растений, для нас представляло интерес определить количественное содержание основных групп БАВ, чтобы среди них выбрать приоритетные маркеры, по которым в дальнейшем проводить стандартизацию.

Нами проведено количественное определение содержания различных групп БАВ по модифицированным методикам (табл.2).

Таблица 2

Содержание БАВ в сборах

Группа БАВ

Числовые показатели, %

Сбор №1

Сбор №2

Сбор №3

Сбор №4

Аскорбиновая кислота

3,55±0,07

6,26±0,14

5,08±0,10

4,31±0,14

Органические кислоты

0,37±0,01

0,50±0,02

0,45±0,02

1,07±0,04

Каротиноиды (в пересчете на -каротин)

0,021±0,001

0,063±0,003

0,041±0,002

0,035±0,001

Эфирные масла

0,728±0,023

0,437±0,010

0,956±0,025

1,140±0,025

Содержание алантолактона

1,03±0,03

1,40±0,04

2,03±0,05

Сапонины (в пересчете на олеаноловую кислоту)

1,37±0,03

1,20±0,04

1,45±0,03

1,18±0,03

Фенолкарбоновые кислоты (в пересчете на хлорогеновую)

1,85±0,08

1,06±0,03

1,75±0,06

1,24±0,05

Кумарины

0,40±0,02

0,27±0,01

0,45±0,02

0,31±0,01

Антраценпроизводные (в пересчете на истизин)

-

-

-

0,95 ± 0,02

Установлен качественный и количественный аминокислотный состав сборов на аминокислотном анализаторе ААА-339 (ЧССР) (табл. 3). Полученные данные позволили установить присутствие 14 аминокислот, из которых восемь незаменимых, шесть заменимых и среди них преобладают аминокислоты – пролин, глицин, валин, цистеин и аргинин.

Таблица 3

Содержание свободных аминокислот в сборах

Аминокислоты

Содержание аминокислот в сборах, %

Сбор №1

Сбор №2

Сбор №3

Сбор №4

Лизин*

0,33±0,01

0,112±0,004

0,21±0,01

0,26±0,01

Метионин*

0,110±0,005

0,160±0,006

0,13±0,005

0,133±0,002

Цистеин

0,63±0,03

0,60±0,01

0,53±0,02

0,54±0,02

Гистидин*

0,102±0,004

0,073±0,001

0,081±0,001

0,094±0,003

Аргинин

0,55±0,02

0,71±0,02

0,51±0,02

0,51±0,02

Треонин*

0,28±0,01

0,37±0,01

0,31±0,01

0,28±0,01

Серин

0,44±0,02

0,55±0,01

0,48±0,01

0,41±0,01

Пролин

1,41±0,06

1,60±0,08

1,40±0,05

1,29±0,05

Глицин

0,86±0,04

0,93±0,05

0,96±0,03

0,85±0,01

Валин*

0,63±0,03

0,73±0,03

1,16±0,04

0,83±0,02

Изолейцин*

0,36±0,01

0,28±0,01

0,19±0,04

0,27±0,01

Лейцин*

0,180±0,008

0,024±0,001

0,091±0,004

0,160±0,008

Тирозин

0,170±0,005

0,22±0,01

0,34±0,01

0,21±0,01

Фенилаланин*

0,31±0,01

0,45±0,02

0,37±0,01

0,32±0,01

Суммарное содержание

6,36±0,14

6,80±0,22

6,76±0,18

6,15±0,15

Примечание: * - незаменимые аминокислоты

Методом атомно-абсорбционной спектрометрии проведено определение макро- и микроэлементов в растительных сборах, поскольку они играют важную роль в формировании тканей организма, пластических процессах, проявляют фармакологическую активность, влияют на обмен веществ, активизируют ферментные системы, потенцируют действие витаминов (табл.4).

Таблица 4

Элементный состав сборов

Наименование элементов

Количественное содержание элементов

Сбор №1

Сбор №2

Сбор №3

Сбор №4

Макроэлементы, %

Калий

1,30±0,05

1,20±0,03

1,38±0,06

1,14±0,03

Натрий

0,191±0,008

0,21±0,01

0,24±0,01

0,20±0,01

Кальций

1,26±0,04

1,17±0,03

1,12±0,04

1,29±0,05

Фосфор

0,21±0,01

0,26±0,01

0,21±0,01

0,182±0,006

Микроэлементы, мг/кг

Цинк

78,48±2,14

96,80±4,05

129,90±4,11

76,31±3,15

Железо

233,74±5,14

309,56±7,18

798,06±9,14

298,34±6,24

Медь

2,40±0,11

1,54±0,05

2,20±0,05

2,38±0,08

Марганец

534,70±11,65

543,71±10,14

620,76±15,10

526,36±12,47

Иод

0,150±0,006

0,18±0,01

0,22±0,01

0,161±0,008

В сборах не были обнаружены свинец, ртуть, алюминий, кадмий, что характеризует экологическую чистоту лекарственного растительного сырья, входящего в состав сборов. В тоже время, наличие и относительно высокое содержание некоторых макро- (K, Na, Ca, P) и микроэлементов (Zn, Fe, Mn, Cu, J), расширяет диапазон применения сборов и область рекомендуемых заболеваний для их профилактического и лечебного использования.

Эфирные масла из сборов были получены методом перегонки с водяным паром с подбором оптимальных условий количественного определения. Установлено, что максимальный выход эфирных масел наблюдался при использовании: навески 30,0 г для сборов №1 и №3; 25,0 г – для сборов №2 №4; измельченности сырья 2 мм для сбора №2 и 3 мм для сборов №1, № 3 и №4; время перегонки 2 часа для всех сборов. Полученные эфирные масла были подвергнуты качественному анализу хромато-масс-спектрометрическим методом.Идентификацию компонентов проводили по масс-спектрам электронного удара, фиксируя следующие показатели: названия соединений; времена удерживания; величины количественного вклада в смесь; индекс сходства (Match qulity) библиотечного и полученного спектров, а также учитывая аналитические параметры компонентов эфирных масел (И.Г.Зенкевич,1997) для идентификации моно- и сесквитерпеновых углеводородов. При этом, индекс сходства с величиной более 90% свидетельствовал об очень хорошем совпадении. В остальных случаях обращали внимание на такие показатели, как коэффициент тождественности, различие «идеального совпадения» и коэффициента тождественности, меру чистоты спектра, коэффициент загрязненности, величину надежности, взаимную корреляцию. Опираясь на наилучшие значения вышеперечисленных показателей и, учитывая результаты масс-спектрометрического изучения процессов диссоциации сесквитерпенов, нам удалось однозначно идентифицировать компонентный состав эфирных масел, выделенных из сборов №1 - №4. Хроматограммы могут служить дополнительной характеристикой подлинности сборов.

Анализируя результаты изучения компонентного состава эфирного масла сбора №1 (рис.6) можно отметить, что среди 28 веществ, относящихся к монотерпеновым и сесквитерпеновым углеводородам, в максимальном количестве накапливаются -мууролен (17,99%), 6,10,14-триметил-2-пентадеканон (10,96%), -кадинол (8,99%), производные азулена (4,42%), эудесма-5,11(13)-диен-8,12-олид (3,59%), п-Мент-1(7)-ен-9-ол (3,23%), ледол (2,33%), и в меньшем количестве: кариофиллен оксид (1,61%), 9,10-дегидро-изолонгифолен (1,09%), спатуленол и -бисаболол.

Рис.6 Хроматограмма компонентного состава эфирного масла сбора №1

В результате исследования эфирного масла из сбора №2 (рис.7) обнаружено 14 веществ, относящихся к монотерпеновым и сесквитерпеновым углеводородам, среди которых преобладают эудесма-5,11(13)-диен-8,12-олид (27,27%), -мууролен (17,04%), производные нафтофурана (17,9%), -кадинол (7,51%), производные пентанола (4,73% и 5,25%), изоборнилацетат (1,96%).

Рис.7 Хроматограмма компонентного состава эфирного масла сбора №2

Анализируя полученные результаты представленные на рисунке 8 можно отметить, что в эфирном масле сбора №3 обнаружено 36 веществ монотерпеновой и сесквитерпеновой природы. В максимальном количестве накапливаются п-аллил-анизол (29,53%), эудесма-5,11(13)-диен-8,12-олид (18,54%), производные нафтофурана (15,46%), -мууролен (7,08%), циклогексена (5,31%), санталол (2,42%), -кадинол (1,86%), спатуленол (1,41%), в меньшем количестве: эвкалиптол, -калакорен, кариофиллен оксид, ледол, -бисаболол, изолонгифолен, D-лимонен, ментол.

Рис.8 Хроматограмма компонентного состава эфирного масла сбора №3

Компонентный состав эфирного масла из сбора №4 также представлен как монотерпеновыми, так и сесквитерпеновыми углеводородами (рис.9). В максимальном количестве содержатся п-аллил-анизол (30,68%), цис-5-метил-2-(1-метилэтил)-циклогексанон (7,33%), ментол (3,41%), азулен (4,71%), эудесма-5,11(13)-диен-8,12-олид (8,36%), производные нафтофурана (5,56%), -1-нафталенпропанол (4,66%), пулегон (2,78%), камфора (2,74%), туйон (2,04%), эвкалиптол (1,73%), в меньшем количестве: кариофиллен, спатуленол, ледол, копаен, кадинол, -бисаболен, -лимонен.

Рис.9 Хроматограмма компонентного состава эфирного масла сбора №4

В сборах №1 и №3 проводили также количественное определение глицирризиновой кислоты, в связи с наличием ее в корнях солодки, входящей в их состав, методом ВЭЖХ. Для анализа получали спиртовое извлечение с экспериментально подобранными условиями экстракции. Глицирризиновая кислота идентифицировалась по времени удерживания стандартного образца. Расчет количественного содержания глицирризиновой кислоты производили методом абсолютной калибровки с помощью компьютерной программы МультиХром для «Windows» и по формуле. Анализируя полученные результаты можно отметить, что содержание глицирризиновой кислоты составило в сборе №1 - 1,75±0,03%, в сборе №3 - 1,24±0,02%.

Учитывая значение отдельных групп БАВ в оказании конечного лечебного эффекта для стандартизации сборов были выбраны:

- флавоноиды и дубильные вещества - в сборах №1 и №4, поскольку дубильные вещества при взаимодействии с раздраженной и воспаленной слизистой поверхностью желудка, кишечника образуют защитную пленку, предохраняющую от воздействия раздражающих агентов и микроорганизмов, а флавоноиды оказывают разностороннее действие на желудочно-кишечный тракт - спазмолитическое действие на гладкие мышцы кишечника, желчных путей, желчного пузыря, кровеносных сосудов, противовоспалительное, антисекреторное, гастропротекторное, иммуномодулирующее и др., что имеет значение при лечении хронического панкреатита, гепатита в стадии обострения и дисбактериоза;

- флавоноиды и полисахариды - в сборах №2 и №3, так как флавоноиды оказывают противоязвенное, капилляроукрепляющее действие, а в сочетании с полисахаридами оказывают потенциирующее влияние на иммуностимулирующее действие. Кроме того, сами полисахариды оказывают иммуномодулирующее, гипогликемическое действие и также принимают участие в общем противоязвенном эффекте, что имеет значение при лечении язвенной болезни желудка и хронического панкреатита, гепатита в стадии ремиссии.

Для разработки методик количественного определения выбранных групп БАВ в сборах нами были подобраны оптимальные условия проведения анализа: выбор экстрагента, соотношение сырья и экстрагента, измельченность сырья, время, кратность экстракции, аналитическая длина волны.

В ходе эксперимента при разработке методики количественного определения флавоноидов в сборах был использован метод дифференциальной спектрофотометрии с подбором оптимальных условий проведения. При этом, чтобы исключить влияние сопутствующих веществ, к спиртовым растворам извлечений из сборов и растворов-стандартов флавоноидов добавляли комплексообразующую добавку - спиртовый раствор алюминия хлорида (III), с которым флавоноиды образуют комплексы, устойчивые в кислой среде и наблюдается батохромный сдвиг УФ-спектра. 

Рис. 10. Спектры поглощения: 1 – рутина, 2 – кверцетина, 3 – сбора №1, 4 – сбора  №2, 5 – сбора  №3, 6 – сбора №4

При сравнении дифференциальных УФ-спектров сборов и стандартных образцов ГСО рутина и кверцетина, присутствующих в большем числе компонентов сборов, установили, что максимум поглощения комплекса флавоноидов наблюдается для сбора №1 и №3 при длине волны 405 нм, сбора №2 – 395 нм, сбора №4 – 400 нм, а для стандартных образцов  ГСО рутина – 410 нм, кверцетина – 430 нм (рис.10).

Спектры поглощения сборов имеют более близкие максимумы к спектру рутина, поэтому этот флавоноид был выбран в качестве доминирующего в сумме, на который в дальнейшем вели пересчет. Изучение влияния различных факторов на выход флавоноидов из сборов позволило выбрать оптимальные условия, при которых необходимо проводить их количественное определение (табл.5).

Таблица 5

Оптимальные условия количественного определения флавоноидов 

Условия количественного определения

Сбор №1

Сбор №2

Сбор №3

Сбор №4

Экстрагент  (этиловый спирт)

70% 

60% 

60% 

70% 

Измельченность сырья

5 мм

3 мм

5 мм

3 мм

Соотношение сырье –

экстрагент

1:100

Время и кратность

экстракции

Трехкратная экстракция по 30 мин

Длина волны

408 нм

403 нм

408 нм

405 нм

Концентрация

комплексообразователя

5% спиртовый раствор AlCl3

Количество добавляемого

комплексообразователя

3 мл

2 мл

2 мл

1 мл

Время комплексообразования

30 мин и комплекс стабилен в течение 1 часа

Метрологические характеристики методики количественного определения флавоноидов в сборах отражены в таблице 6. 

Таблица 6

Метрологическая характеристика методики количественного определения флавоноидов в сборах

Объект

исследов.

f

-x

S

Sx

P

t

(P,f)

Δx

,%

Сбор №1

9

1,75

0,0221

0,00690

95

2,26

0,05

2,86

Сбор №2

9

1,14

0,0195

0,00617

95

2,26

0,04

3,51

Сбор №3

9

1,31

0,0164

0,00519

95

2,26

0,04

3,05

Сбор №4

9

1,43

0,0197

0,01028

95

2,26

0,04

2,80

Отсутствие систематической ошибки методики подтверждено «опытами с добавками» ГСО рутина. Результаты определения представлены в таблице 7.

Таблица 7

Определение флавоноидов с добавками стандартного вещества

Содержание флавоноидов мг

Добавлено рутина, мг

Должно быть фла-воноидов, мг

Найдено флавоноидов, мг

Δx, мг

ε, %

Сбор № 1

17,235

0,25

17,485

17,835

0,35

1,96

17,338

0,50

17,838

18,048

0,21

1,16

17,514

0,75

18,264

17,944

-0,32

1,78

Сбор № 2

11,435

0,25

11,685

12,015

0,33

2,75

11,387

0,50

11,887

12,287

0,40

3,25

11,506

0,75

12,256

11,956

-0,30

2,51

Сбор № 3

13,243

0,25

13,493

13,273

-0,22

1,66

13,347

0,50

13,847

14,117

0,27

1,91

13,186

0,75

13,936

14,286

0,35

2,45

Сбор № 4

14,346

0,25

14,596

14,176

-0,42

2,96

14,538

0,50

15,038

15,428

0,39

2,53

14,305

0,75

15,055

15,495

0,44

2,84

Количественное определение дубильных веществ проводили спектрофотометрическим методом в пересчете на галловую кислоту и (+) - катехин с подбором оптимальных условий экстракции (табл.8). При этом было установлено, что максимальный выход дубильных веществ наблюдался при пересчете дубильных веществ на (+)-катехин, что свидетельствует о преобладании в сборах дубильных веществ конденсированной природы. 

Таблица 8

Выбор оптимальных условий экстракции дубильных веществ

Концентрация этилового спирта

Содержание дубильных веществ, %

Сбор № 1

Сбор № 2

Сбор № 3

Сбор № 4

в пересчете на галловую кислоту

40%

3,05 ± 0,04

1,68 ± 0,02

2,17 ± 0,03

2,44 ± 0,05

50%

3,82 ± 0,11

2,03 ± 0,08

3,11 ± 0,10

3,34 ± 0,09

60%

3,25 ± 0,08

1,18 ± 0,03

1,37 ± 0,02

2,66 ± 0,04

70%

2,94 ± 0,06

1,02 ±0,01

1,21 ± 0,03

2,20 ± 0,03

в пересчете на (+) – катехин

40%

7,86 ± 0,20

4,78 ± 0,06

6,43 ± 0,11

8,85 ± 0,18

50%

13,24 ± 0,34

7,26 ± 0,18

8,56 ± 0,26

14,05 ± 0,35

60%

6,22 ± 0,12

4,96 ± 0,07

5,88 ± 0,14

7,41 ± 0,16

70%

4,68 ± 0,08

2,64 ± 0,05

3,04 ± 0,16

5,35 ± 0,12

Метрологические характеристики методики количественного определения дубильных веществ в сборах отражены в таблице 9. 

Таблица 9

Метрологическая характеристика методики количественного определения дубильных веществ в сборах

Объект

исследов.

f

-x

S

Sx

P

t

(P,f)

Δx

,%

Сбор №1

9

12,15

0,1549

0,04902

95

2,26

0,35

2,88

Сбор №4

9

13,76

0,1637

0,05176

95

2,26

0,37

2,69

Количественное определение содержания суммы полисахаридов проводили спектрофотометрическим методом после предварительного гидролиза и способности моносахаров восстанавливать в щелочной среде пикриновую кислоту до пикрамовой, с подбором оптимальных условий. В результате эксперимента было установлено, что оптимальным режимом для проведения количественного определения полисахаридов являются: для сбора №2 – измельченность 2 мм, а для сбора №3 – 3 мм, так как при такой степени измельченности достигается максимальный выход действующих веществ; соотношение сырья и экстрагента для сбора №2 – 1:25, для сбора №3 – 1:50; соотношение извлечения и 95% этилового спирта, необходимого для осаждения полисахаридов в обоих сборах 1:3 и количество хлористоводородной кислоты, необходимой для гидролиза 20 мл для сборов №2 и №3. Метрологические характеристики методики количественного определения полисахаридов в сборах отражены в таблице 10.

Таблица 10

Метрологическая характеристика методики количественного определения полисахаридов в сборах

Объект

исследов.

f

-x

S

Sx

P

t

(P,f)

Δx

,%

Сбор №2

9

5,94

0,0841

0,02661

95

2,26

0,19

3,19

Сбор №3

9

4,78

0,0558

0,02082

95

2,26

0,13

2,72

Таким образом, проведено подробное изучение химического состава сборов №1 - №4 и определено количественное содержание в них различных групп биологически активных веществ. Учитывая преобладание в процентном отношении и значение флавоноидов, полисахаридов и дубильных веществ, эти группы БАВ были выбраны в качестве приоритетных маркеров, по которым предлагается проводить стандартизацию и включить в нормативную документацию на сборы.

Таким образом, определены критерии подлинности сборов, регламентирующие их качество, выбраны группы БАВ, необходимые для стандартизации и установлены нормы их содержания (табл. 11):

Таблица 11

Числовые показатели качества сборов

Наименование показателей
Сбор №1
Сбор №2

Сбор №3

Сбор №4

Влажность

Не более 14%

Не более 14%

Не более 14%

Не более 14%

Золы общей

Не более 13%

Не более 11%

Не более 13%

Не более 11%

Золы, нерастворимой в 10% НСl

Не более 5%

Не более 4%

Не более 4%

Не более 3%

Частиц, не проходя-щих сквозь сито с отверстиями  размером 5 мм (сборы №1, №2, №4) и 7 мм (сбор №3)

Не более 10%

Не более 10%

Не более 10%

Не более 10%

Частиц, проходящих сквозь сито с отверсти-ями размером 0,18мм

Не более 7%

Не более 5%

Не более 7%

Не более 8%

Органической примеси

Не более 2%

Не более 2%

Не более 2%

Не более 2%

Минеральной примеси

Не более 1%

Не более 1%

Не более 1%

Не более 1%

Содержание суммы флавоноидов в перес-чете на рутин

Не менее 1,5%

Не менее 1,0%

Не менее 1,2%

Не менее 1,3%

Содержание дубиль-ных веществ в перес-чете на (+)-катехин

Не менее 10,0%

-

-

Не менее 13,0%

Содержание

полисахаридов

-

Не менее 5,0%

Не менее 4,0%

Для разработанных сборов было проведено определение микробиологической и радиологической чистоты и установлено, что они удовлетворяют требованиям изменения №3 от 19.06.03г. к ГФ-ХI, вып.2 «Методы микробиологического контроля лекарственных средств», а содержание радионуклидов не превышает уровня, установленного требованиями СанПиН 2.3.2.1078-01 п.п.1.6.10 (, и загрязнители отсутствуют).

Результаты проведенных товароведческих, морфолого-анатомических и фитохимических исследований легли в основу разработки проектов фармакопейных статей (ФС) на сборы: «Гепапанкреафит – О» - сбор №1, «Гепапанкреафит – Р» - сбор №2, «Ульцерофит» - сбор №3, «Дисбакфит» - сбор №4,  а также технических условий для приготовления чайных напитков из сборов, предназначенных для профилактики заболеваний пищеварительной системы (ТУ 9191-004-26795008-2002). Для разработанных сборов был определен срок годности, который составил 2 года при хранении их, упакованными в бумажные пакеты, уложенные в пачки из бумаги или картона в помещении с относительной влажностью воздуха от 60 до 80%, влажностью сырья от 8% до 12%. При этом содержание действующих веществ оставалось на уровне, удовлетворяющем требованиям проектов ФС.

На практике растительные сборы применяются в виде водных извлечений, изготавливаемых в домашних условиях, особенности которых зависят от морфологических групп сырья, входящих в их состав. Мы провели исследования влияния режима нагревания и настаивания, а также измельченности сырья, соотношение сырья и экстрагента, коэффициента водопоглощения, температуры экстрагента на качество водных извлечений. Для оценки эффективности экстракции проводили сравнительный анализ выхода сухого остатка и водорастворимых действующих веществ, по которым предлагалась стандартизация сборов, а именно дубильных веществ, флавоноидов и полисахаридов. Анализ полученных данных показал, что содержание биологически активных веществ в извлечениях, полученных фармакопейными методами (1:10) по технологии приготовления настоев и отваров отличается не существенно, а полученных по инструкциям к сборам (1:40 или 1:50) эти показатели ниже, что связано с получением менее концентрированных  растворов. В результате исследований, оптимальным для приготовления водных извлечений из сборов оказался режим настоя (15 мин нагревания и 45 мин охлаждения) на кипящей водяной бане (800С), при соотношении сырья и экстрагента 1:10, с учетом степени измельченности сырья и  коэффициента водопоглощения.

Фитохимическое изучение  интродуцированных пряно-ароматических, эфиромасличных растений

       Изучен химический состав интродуцированных пряно-ароматических растений и эфиромасличных растений и выделены виды, накапливающие максимальное количество эфирных масел: Mentha piperita L. (3,05%), Foeniculum vulgare Mill. (2,48%), Lavandula angustifolia Mill. (2,01%); флавоноидов – Ruta graveolens L. (3,372%), Thymus serpyllum L. (2,856%), Satureja hortensis L. (2.417%); аскорбиновой кислоты – Ocimum menthaefolium H. (0,812%), Artemisia dracunculus L. (0,789%), Mentha piperita L. (0,283%); каротиноидов – Ruta graveolens L. (0,313 мг%), Artemisia dracunculus L. (0,265 мг%), Mentha piperita L. (0,148 мг%); дубильных веществ - Salvia officinalis L. (5,400%), Apium graveolens L. (5,180%), Satureja hortensis L. (5,100%), а также в достаточном количестве аминокислоты, макро- и  микроэлементы.

Определена антиоксидантная активность перспективных образцов пряно-ароматических и эфиромасличных растений и установлена прямая зависимость между показателем антиоксидантной активности интродуцированных растений и содержанием в них биологически активных веществ. Виды, накапливающие большее количество биологически активных веществ, проявляют высокую антиоксидантную активность: полынь эстрагоновая (68,10%), чабер садовый (55,32%), шалфей лекарственный (53,15%). Несколько меньше этот показатель у мяты перечной (52,10%), базилика священного (51,12%). Наименьшее значение антиоксидантной активности наблюдалось у пажитника голубого - 5,33%, у которого и содержание биологически активных веществ по сравнению с другими образцами сравнительно ниже.

Среди изученных интродуцированных растений целый ряд объектов относится к лекарственным и разрешены для применения в медицине. Например, фенхель обыкновенный, мята перечная, шалфей лекарственный, тимьян ползучий, лаванда узколистная, сельдерей пахучий и др. Многие из них широко используются, как в качестве индивидуальных видов сырья, так и в составе многокомпонентных растительных сборов, как противовоспалительные, антибактериальные, спазмолитические, желчегонные, репаративные средства, для улучшения пищеварения, благодаря своим ценным фармакологическим свойствам. Все это имеет большое значение для профилактики различных заболеваний, в том числе пищеварительной системы.

Технологические исследования по разработке лекарственных форм на основе сборов

Изучение оптимальных условий получения сухих экстрактов из сборов

Многокомпонентные лекарственные растительные сборы являются наиболее популярной и широко используемой формой переработки лекарственного растительного сырья. Однако, неудобство применения сборов, связанные с их дозированием, приготовлением водных извлечений в соответствующем режиме, короткий срок их хранения, ставят актуальным вопрос о разработке рациональной лекарственной формы на их основе – сухих экстрактов, которые являются наиболее приемлемым вариантом для увеличения срока годности и точности дозирования.

Основными факторами, влияющими на скорость и полноту экстракции биологически активных веществ из растительного сырья, являются тип экстрагента, температура, измельченность сырья, продолжительность экстрагирования, гидродинамические условия. В качестве экстрагента была выбрана вода очищенная, температура (80-85°С), соотношение сырье - экстрагент 1:10, время экстракции 120 минут и трехкратная экстракция обеспечивала истощение сырья по основным компонентам в среднем на 80-90% от исходного содержания в сборах.

На основании полученных результатов исследований выбраны оптимальные условия и разработана схема получения сухих экстрактов из сборов, которая включает следующие основные стадии: экстрагирование, очистку водного извлечения, упаривание, сушку, фасовку готовой продукции.

Полученные экстракты представляли собой аморфные порошки от зеленовато- до буровато-коричневого цвета, специфического запаха, гигроскопичные, растворимые в горячей воде и в 20-40% этиловом спирте.

Результаты качественного анализа (качественные реакции, методы БХ, ТСХ и ВЭЖХ-анализа), количественного определения основных действующих веществ по методикам, разработанным для исходных растительных сборов, подтвердили присутствие в экстрактах веществ, обнаруженных в сборах. Таким образом, используемая схема получения сухих экстрактов позволяет добиться извлечения основных веществ, которые в совокупности обусловливают лечебное действие.

Процент выхода готовых экстрактов из сборов составил: для сбора №1 - 20,43 ± 0,21%; сбора №2 - 21,71 ± 0,15%; сбора №3 - 20,52 ± 0,08% и сбора №4 - 21,27 ± 0,02%. Для сухих экстрактов были установлены основные показатели их качества (табл.12).

Таблица 12

Показатели качества сухих экстрактов из сборов

Показатели

качества

Исследуемый объект

Сбор №1

Сбор №2

Сбор №3

Сбор №4

Влажность, %

2,75±0,08

2,46±0,05

3,28±0,06

3,41±0,05

Объемная плотность, г/см

0,45 ± 0,04

0,53 ± 0,02

0,52 ± 0,02

0,55 ± 0, 01

Сыпучесть, г/с

0,74 ± 0, 04

0,81 ± 0,03

0,80 ± 0,02

0,76 ± 0,04

Угол естествен-ного откоса,

34,0 ± 1,05

36,0 ± 1,0

37,0 ± 1,0

35,0 ± 1,0

Насыпная масса, г/см

0,64 ± 0,01

0,73 ± 0,02

0,54 ± 0,01

0,64 ± 0,01

Содержание суммы флавоноидов

4,98±0,02

3,02±0,03

3,96±0,01

4,47±0,06

Содержание  дубильных веществ

24,80±0,21

17,03±0,21

19,55±0,32

27,43±0,44

Содержание полисахаридов

10,23±0,34

10,23±0,34

12,22±0,26

8,68±0,26

Поскольку сухие водорастворимые экстракты планируется использовать для приготовления водных извлечений, были определены разовые дозы сухих экстрактов, которые по количественным характеристикам содержания основных действующих веществ соответствовали водным извлечениям из сборов.  Таким образом,  сухие экстракты могут быть использованы в качестве концентратов для приготовления водных извлечений.

Разработка лекарственных форм на основе масляного

растительного экстракта

Масляный экстракт получали из изученного ранее сбора «Экзофит» по разработанной нами технологии (патент № 17523957), стандартизировали по числовым показателям качества, характерным для масляных экстрактов (плотность, показатель преломления, кислотное число и др.) и содержанию основных действующих веществ (каротиноидов), обусловливающих суммарный фармакологический эффект.

Разработка и изучение геля с масляным растительным экстрактом

При выборе гидрофильной основы использовали сополимер стирола с малеиновым ангидридом (ССМА), который обладает выраженными противовирусными свойствами и может применяться в виде 1% и 2% растворов. Использование его в качестве вспомогательного вещества может улучшить не только технологические свойства новой разрабатываемой лекарственной формы, но и расширить возможности их использования.

Выбор оптимального состава гидрофильной основы проводили путем переменного изменения процентного содержания ингредиентов в количественном отношении. В подобранную гидрофильную основу вводили растительный масляный экстракт в разных соотношениях и также оценивали их технологические свойства. Оценку стабильности полученных гелей с растительным масляным экстрактом, а также способность к выделению жидкой фазы (масла, воды и других компонентов) проводили, применяя центрифугирование исследуемых образцов в сочетании с изменяющимися температурными воздействиями. На основании полученных результатов был выбран оптимальный состав, содержащий 20% растительного масляного экстракта и 80% гидрофильной основы (2% раствор ССМА) – состав №3, с которым и проводились дальнейшие исследования («Экзофитогель»).

Определены реологические свойства гидрофильной основы и «Экзофитогеля» (динамическая вязкость, напряжение сдвига, скорость деформации). Сравнивая зависимости величин динамической вязкости от скорости сдвига, как для основы, так и для «Экзофитогеля», следует отметить, что при возрастании скорости сдвига величины динамической вязкости обоих образцов резко падают. Такая зависимость свидетельствует о наличии структуры в изучаемых системах. Введение масляного экстракта в гидрофильную основу несколько снижало его упруго-пластичные свойства, что способствует получению лекарственной формы с необходимыми технологическими параметрами - легкость нанесения и хорошее распределение по поверхности кожи. 

Для разработанной лекарственной формы и гидрофильной основы определена осмотическая активность. Исследования показали, что введение в гидрофильную основу масляного растительного экстракта приводит к снижению осмотической активности, что связано с гидрофобными свойствами добавляемого масляного экстракта. Определены показатели рН лекарственной формы и гидрофильной основы и установлено, что «Экзофитогель» имеет нейтральную реакцию, а незначительное смещение рН в кислую сторону при хранении, не приведет к нарушению естественной кислой реакции слизистой, что может препятствовать размножению микроорганизмов.

При разработке метода стандартизации «Экзофитогеля» использовали группу каротиноидов, для количественного определения которых проводился подбор условий, позволяющих разрушить гель, представляющий гидрофильную систему и максимально извлечь липофильные вещества (табл.13). Важным показателем лекарственной формы является способность обеспечивать оптимальную биологическую доступность лекарственного вещества. В качестве модельной среды, характеризующей гидрофильно-липофильный баланс структур организма, оптимально приближающейся по своим свойствам к живой ткани, использовали экспериментально установленную среду, состоящую из равных частей эмульсий прямого и обратного типа. Результаты исследований показали, что степень высвобождения каротиноидов из гидрофильной основы достаточно высокая (70,19%), что может свидетельствовать о выраженности ожидаемого терапевтического эффекта.

Таблица 13

Подбор условий экстракции каротиноидов из гелевых основ

Навеска

Условия

Оптич. плотн.

D

Разрушения геля

Экстракция гексаном

(25 мл)

1

15,0

25% HCl, рН =5,5

Однократная экстракция, 1ч

0,016

2

20,0

25% HCl, рН =5,5

Однократная экстракция, 2ч

0,018

3

20,0

25% HCl, рН =5,5

Однократная экстракция, 3ч

0,038

4

20,0

кислота HCl развед., рН = 5,5

Однократная экстракция, 1ч

0,127

5

20,0

нагреван.(30-400С)

Однократная экстракция, 1ч

0,015

6

20,0

Этанол, 30 мл

Однократная экстракция, 1ч

0,151

7

20,0

Этанол, 30 мл

Двухкратная экстракция, 1ч

0,213

       Изучена стабильность геля в процессе хранения и определен срок годности – 1 год при хранении в алюминиевых тубах с лаковым покрытием в прохладном, защищенном от света месте.

       Разработанная лекарственная форма имеет перспективы использования в качестве противовоспалительного и ранозаживляющего средства при лечении воспалительных заболеваний, в частности для лечения воспалительных процессов слизистой оболочки желудка. Это было подтверждено методами фармакологических исследований на животных с моделированной язвой желудка и установлено, что гель обладает хорошей способностью восстанавливать поврежденную слизистую оболочку.

Разработка состава и изучение фитокарандашей с  масляным

растительным экстрактом

В задачи исследования входило создание рациональной лекарственной формы, содержащей масляный растительный экстракт, рекомендуемой для профилактики и лечения воспалительных заболеваний полости рта как первичного звена пищеварительного тракта, имеющей хорошую фиксацию, равномерное распределение на поверхности слизистых оболочек, приятный запах, вкусовые качества и удобство применения. В качестве лекарственной формы, для которой планировалось подобрать оптимальный состав и разработать технологию получения были выбраны карандаши. Нами были составлены разные варианты составов основ, с различным количественным содержанием масляного экстракта и вспомогательных веществ, для которых проведены испытания по определению намазываемости и температуры плавления. В результате исследований были выбраны три оптимальных состава основ, отвечающие всем технологическим требованиям:

основа 1: масло какао 2,0 + эмульгатор Т-2 0,02 + пентол 0,14 + масляный экстракт «Экзофит» 0,2;

основа 2:  масло какао 2,0 + эмульгатор Т-2 0,02 + эмульсионный воск 0,2 +  масляный экстракт «Экзофит» 0,12;

основа 3: масло какао 2,0 + эмульгатор Т-2 0,02 + эмульгатор №1 0,1+ масляный экстракт «Экзофит» 0,12.

Для изучения взаимного влияния компонентов основообразующих составов друг на друга и для выбора оптимальной основы, в исследуемых композициях различных составов фитокарандашей были определены значения биодоступности и высвобождаемости действующих веществ in vitro методом  диффузии в агаровый гель. Доминирующей группой действующих веществ являлись каротиноиды, высвобождаемость которых определяли путем экстракции петролейным эфиром с разрушением системы основы, содержащей экстракт, путем добавления 96% этилового спирта (рис. 11). На основании проведенных исследований установлено, что максимальный выход каротиноидов наблюдался из состава основы №1.

Рис. 12. Высвобождение каротиноидов из различных основ карандаша

Для всех композиционных составов основы были определены значения твердости по разработанной нами методике. Было установлено, что на твердость карандашей влияет содержание таких ингредиентов как эмульгатор №1 и эмульсионный воск. Оптимальным составом с хорошей намазываемостью и равномерным распределением на поверхности слизистой оболочки полости рта явилась основа №1, которая была выбрана для дальнейших исследований.

Для коррекции вкусовых качеств карандаша было изучено введение нового вспомогательного вещества коллидона CL – M, который обладает выраженными свойствами гелеобразования, маскировкой вкуса, уменьшает адгезию находящихся в полости рта бактерий. В состав основы вводили различное количество корригента от 1% до 10% и было установлено, что полное корригирование вкуса обеспечивает введение 8% от массы коллидона. Определение биодоступности показало, что при 8%-ном содержании коллидона увеличиваются значения биодоступности и улучшается намазываемость. Дальнейшее увеличение процентного содержания корригирующего вещества приводило к снижению значений биодоступности. При определении твердости карандашей с различным содержанием коллидона было установлено, что изменение количественного содержания корригента не оказывает существенного влияния на твердость карандашей. С учетом изученных технологических параметров различных составов основ карандашей была разработана схема их приготовления, включающая следующие стадии: сплавление компонентов основы (80-90С) по мере убывания их температур плавления, добавление рассчитанного количества поверхностно–активных веществ и пластификатора, перемешивание, добавление необходимого количества экстракта до получения однородной массы, фасовка готового продукта. 

Изучена стабильность карандашей в процессе хранения и определен срок годности – 1 год при хранении в пластмассовых пеналах с завинчивающейся крышкой в прохладном, защищенном от света месте.

Фармакологические исследования сборов и лекарственных форм на их основе

Определена острая токсичность четырех новых растительных сборов для профилактики и комплексного лечения хронического панкреатита и гепатита, язвенной болезни желудка, дисбактериоза. Доказано что, исследуемые образцы при однократном введении в желудок нетоксичны и в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 относятся к 4-му классу «Вещества малотоксичные».

Изучены профилактические и лечебные свойства сборов, лекарственных форм на их основе в эксперименте.

Разработан способ одновременного моделирования хронического панкреатита и гепатита на животных. Доказано, что сборы №1 и №2 уменьшают дегенеративно-деструктивные процессы в поджелудочной железе, печени и постепенно восстанавливают их функциональную активность.

Установлено, что сбор №3 и сухой экстракт на его основе обладают отчетливым гастрозащитным действием на моделях острых язв желудка и проявляет выраженный гастропротекторный эффект на развитие хронического язвенного процесса у животных; «Экзофитогель» на ранних сроках лечения язвы желудка способствует регенерации, восстановлению и сохранению слизистого барьера.

Эффективность местного применения разработанного фитокарандаша при воспалительных заболеваний слизистых оболочек подтверждена микробиологическими исследованиями.

Изучение сбора №4 и сухого экстракта на его основе показало, что они активно восстанавливают микрофлору кишечника, способствуют регенерации слизистой кишечника, защищая от раздражения и внедрения патогенных бактерий.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ:

  1. Изучено современное состояние фармацевтического рынка лекарственных растительных препаратов в Республики Башкортостан, применяемых при лечении заболеваний органов пищеварения, определены показатели потребности и спроса на них и обоснована целесообразность разработки новых растительных средств.
  2. Предложен научно-методологический подход и алгоритм действий к созданию новых многокомпонентных растительных сборов для профилактики и комплексного лечения заболеваний органов пищеварения.
  3. На основе литературных данных и фармакологического скрининга разработаны и обоснованы составы четырех новых растительных сборов для профилактики и комплексного лечения в стадии обострения и ремиссии хронического панкреатита, гепатита («Гепапанкреафит – О», «Гепапанкрефит – Р»), язвенной болезни желудка («Ульцерофит»), дисбактериоза («Дисбакфит») и новые лекарственные формы (гель и фитокарандаш) на основе масляного экстракта из разработанного ранее сбора «Экзофит» для комплексного лечения воспалительных заболеваний слизистых оболочек желудка и полости рта, как первичного звена пищеварительного тракта.
  4. Определена ресурсная обеспеченность составных растительных компонентов сборов и установлено, что они имеют достаточную сырьевую базу для заготовки в условиях Республики Башкортостан; с целью расширения сырьевой базы и ассортимента профилактических средств, изучена возможность интродукции в лесостепную зону Южного Предуралья пряно-ароматических и эфиромасличных растений и выявлено 13 видов, являющихся перспективными для введения в культуру.
  5. Разработаны «Определители» морфологических групп растительных компонентов сборов, выявлены диагностически значимые микроскопические признаки лекарственного растительного сырья и сборов, необходимые для установления их подлинности и стандартности.
  6. Изучен химический состав сборов, интродуцированных пряно-ароматических, эфиромасличных растений с использованием современных методов анализа (УФ- и ИК-спектроскопия, ВЭЖХ, хромато-масс- и атомно-абсорбционная спектрометрия), установлено содержание основных групп биологически активных веществ и разработаны методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на ГСО рутина в сборах №1 - №4; суммы полисахаридов в сборах №2, №3; суммы дубильных веществ в пересчете на (+) – катехин в сборах №1, №4.
  7. Разработаны критерии подлинности и нормы содержания биологически активных веществ, которые включены в проекты ФС на сборы: Species «Hepapancreаphytum – O»; Species «Hepapancreаphytum – R»;  Species «Ulcerophytum»; Species «Disbacphytum». 
  8. Установлено влияние основных факторов на выход биологически активных веществ: тип экстрагента, степень измельченности, соотношение сырья и экстрагента, температура, длительность, кратность экстракции и  предложена схема получения сухих экстрактов из сборов, определены показатели их качества.
  9. Разработаны состав, технология получения и методы стандартизации лекарственных форм на основе масляного растительного экстракта из сбора «Экзофит» (гель и карандаш).
  10. Экспериментально доказано специфическое профилактическое и лечебное действие разработанных сборов, сухих экстрактов при хроническом панкреатите, гепатите, язвенной болезни желудка и дисбактериозе; обоснована перспективность использования «Экзофитогеля» в комплексном лечении язвенной болезни желудка и эффективность применения карандашей  при лечении воспалительных заболеваний полости рта.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

  1. Исследования по созданию новых лекарственных растительных средств /Т.И. Никитина, К.А.Пупыкина, Н.В.Кудашкина, [и др.] //Формирование приоритетной лекарственной политики: мат. докл. Рос. нац.конгр. – М., 1995. – С.182– 184.
  2. Обоснование составления и стандартизации сборов /Т.И. Никитина, К.А. Пупыкина, Н.В. Кудашкина, [и др.] //Традиционная медицина: теоретические и практические аспекты: матер. науч. конгр. – Чебоксары, 1996. – С. 90.
  3. Разработка методов стандартизации многокомпонентных сборов /Т.И. Никитина, К.А.Пупыкина, Ю.Г. Афанасьева, [и др.] // Теорет. и практ. аспекты изучения лекар.растений: матер.конф. - Томск,  1996. – С.117-119.
  4. Изучение липофильных веществ многокомпонентных сборов с ранозаживляющим, противовоспалительным и антиаллергическим действием /Т.И. Никитина, Н.В. Кудашкина, К.А.Пупыкина, [и др.] //Традиционная медицина: теоретические и практические аспекты: матер. науч. конгр.-Чебоксары,  1996. - Ч.1. – С.91.
  5. Оценка активности препаратов из сбора экзофита / Т.И. Никитина, К.А.Пупыкина, С.Р. Хасанова //Человек и лекарство: тез. докл. V Рос. нац. конгр. - М., 1998. – С.398.
  6. Роль фитосборов в комплексном лечении больных хроническим панкреатитом алкогольного генеза/ Т.И. Никитина, К.А.Пупыкина, Р.Р. Газизова [и др.] // III тысячелетие. Пути к здоровью нации: матер. I Всерос. Форума. – М. -2001. - С. 25.
  7. Меры профилактики рецидивов хронического панкреатита у больных с сопутствующей гастродуоденальной патологией /Т.И. Никитина, К.А.Пупыкина, Э.Р.Валитова, [и др.] // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. -  2001. – Т.11, №5, Прил.№15.-С.64.
  8. Пути реабилитации больных хроническим панкреатитом/ Т.И. Никитина, К.А.Пупыкина, Э.Р. Валитова [и др.] // III тысячелетие. Пути к здоровью нации: матер. I Всерос. Форума. – М. -2001. - С.25-26.
  9. Внешнесекреторная функция поджелудочной железы у больных хроническим панкреатитом / Т.И. Никитина, К.А.Пупыкина, Э.Р.Валитова, [и др.] //Гастро-2001: матер. III-го Рос. форума.-Гастробюллетень №2-3. - С-Пб,  2001. - С.19.
  10. Патология гастродуоденальной зоны у больных хроническим панкреатитом/ Т.И. Никитина, К.А.Пупыкина, Э.Р.Валитова, [и др.] //Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2001. – Т.11, №5, Прил. №15. - С.64.
  11. Разработка сборов для комплексного лечения хронического панкреатита / Т.И. Никитина, К.А.Пупыкина, Э.Р.Валитова, [и др.] //Разработка и внедрение новых методов и средств традиционной медицины: науч. тр. - М.,2001. – С.102-103.
  12. Фармакогностическое исследование сборов для лечения хронического панкреатита / Т.И. Плеханова, К.А. Пупыкина, Ч.А. Петрова //Здравоохранение Башкортостана. - 2002. - спец. выпуск №2. - С.89
  13. Способ комплексного лечения панкреатита /Э.Р.Валитова, Р.Р.Газизова ……К.А.Пупыкина,  [и др.] //Патент РФ №2193411. – Москва. -2002.
  14. Способ лечения хронического панкреатита в фазе ремиссии /Э.Р.Валитова, Р.Р.Газизова……К.А.Пупыкина, [и др.] // Патент РФ №2178304. – Москва. -2002.
  15. Гистологические изменения поджелудочной железы белых крыс при интоксикации совтолом / Т.И. Плеханова, Х.М. Насыров, К.А. Пупыкина, [и др.] // Научно-теоретический медицинский журнал «Морфология». - 2002. – Т.121, 2-3. -С.123.
  16. Применение фитосбора в комплексном лечении хронического панкреатита с целью коррекции экскреторной недостаточности поджелудочной железы / Т.И. Плеханова, К.А. Пупыкина, Э.Р.Валитова, [и др.] //Сборн. матер. науч. юбил. конф., посвящ. 25-летию со дня открытия в Москве ЦНИИ рефлексотерапии. – М., 2002. –С.155-157.
  17. Профилактическое и лечебное действие растительного сборов при хроническом панкреатите у крыс /Т.И. Плеханова, Х.М. Насыров, К.А. Пупыкина, [и др.] // Научно-теоретический медицинский журнал «Морфология». - 2002. – Т.121, 2-3. -С.123-124.
  18. Изучение растительных сборов, предлагаемых для лечения хронического панкреатита / К.А. Пупыкина, Ч.А. Петрова, Э.Р. Валитова // Наука о человеке: матер. III-го конгр. мол. ученых. – Томск, 2002. - С.231.
  19. Морфофункциональные особенности печени при воздействии совтола и в процессе лечения растительными сборами / Т.И. Плеханова, Х.М. Насыров, К.А. Пупыкина, [и др.] // Научно-теоретический медицинский журнал «Морфология». - 2002. – Т.121, 2-3. -С.130.
  20. Новые сборы из лекарственного растительного сырья / Т.И. Плеханова, К.А. Пупыкина, Н.В. Кудашкина,  [и др.]  // Новая аптека. –2003. – №11. -С.75-76.
  21. Разработка сбора для комплексного лечения дисбактериоза / Т.И. Плеханова, К.А. Пупыкина, Д.С. Валеева  //Фармация ХХ1 века: матер. IV межрег..научно-практич.конф. – Новосибирск, 2004. – С. 120-122.
  22. О структуре и объеме предложения отечественных фитосредств, применяемых в гастроэнтерологии / В.В. Петров, Ч.А. Петрова, К.А. Пупыкина //Клиническая фармакология в России: достижения и перспективы 30 лет 1974-2004: матер. науч. конф. с междунар.участ. – М., 2004. - С. 185-186
  23. Мазь «Экзофитогель» для лечения воспалительных заболеваний /Ю.В. Шикова, К.А. Пупыкина, В.А.Лиходед, Т.А. Лиходед // Патент РФ №2232591. – Москва. - 2004.
  24. Разработка, доклинические и клинические исследования растительных сборов для лечения хронического панкреатита  / К.А. Пупыкина, Ч.А. Петрова, В.В. Петров [и др.] //Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины: матер. науч. конф. мол.ученых. - С-Пб.,2004. - С.139-140.        
  25. Использование лекарственных растений и препаратов из них для экопротективной помощи населению /Т.И.Плеханова, Н.В. Кудашкина, К.А.Пупыкина, Г.Г.Шайдуллина // Экология человека. - 2004. - спец. выпуск №4. - С. 29-32.
  26. Способ профилактики и лечения хронического панкреатита и гепатита в эксперименте /Т.И.Никитина, Х.М. Насыров……К.А.Пупыкина, [и др.] //Патент РФ №2223777. – Москва. - 2004.
  27. Разработка рецептуры сборов для лечения панкреатита / Т.И. Плеханова, К.А. Пупыкина //Комплексное использование растительных ресурсов лесных экосистем: матер. III регион. научно-практ. конфер. с междунар. участием. - Красноярск, 2004.-С.157-161.
  28. Изучение  сборов для лечения панкреатита и гепатита / Т.И. Плеханова, К.А. Пупыкина, Ч.А. Петрова // Фармация. - 2005. -  №3. - С.25-27.
  29. Исследование токсичности сборов для лечения панкреатита и гепатита / Т.И. Плеханова, К.А. Пупыкина, Ч.А. Петрова //Современные проблемы фармакологии и фармации: матер. Всерос. научно-практич.конф.- Новосибирск, 2005. - С.62-64.
  30. Учебное пособие с грифом УМО-39 от 27.01.05 «Учебная практика по фармакогнозии»  /Т.И. Плеханова, К.А. Пупыкина. – изд-во ГОУ ВПО «БГМУ Росздрава». - Уфа, 2005. - 86 с. 
  31. Профилактическое действие противоязвенного сбора / Л.А. Валеева, К.А.Пупыкина, Е.Л. Булыгина, [и др.]  // Фармация. - 2006. -  №2. - С.32-34.
  32. Фитотерапия в комплексном лечении воспалительных заболеваний пародонта / В.А. Лиходед,  К.А. Пупыкина,  Р.Р. Кутушева,  [и др.]  //Практическая фитотерапия. - 2006. -  №3 – С.28-31.
  33. Особенности использования растительного сбора в комплексном лечении хронического вирусного гепатита  /К.А. Пупыкина, Д.А. Валишин, Д.Н. Шакуров, [и др.]  // Медицинский вестник Башкортостана. -2006. - Т. 3,  №1. - С. 60-61.
  34. Изучение качественного и количественного состава сбора для комплексного лечения дисбактериоза /К.А. Пупыкина, Д.С. Валеева //Приоритеты фармацевтической науки и практики: матер. заочн. междунар. конф. - М., 2006. – С.317 - 319.
  35. Фитотерапия в комплексном лечении хронического вирусного гепатита / К.А. Пупыкина, Д.А. Валишин, Д.Н. Шокуров, [и др.]  // Практическая фитотерапия. - 2006. -  №3 – С.25-28.
  36. О возможности использования растительных средств для профилактики и комплексного лечения воспалительных заболеваний пародонта / В.А. Лиходед,  Р.Р. Кутушева, К.А. Пупыкина, [и др.]  // Медицинский вестник Башкортостана. -2006. - Т. 3,  №1. - С. 65-66.
  37. Фитотерапия в комплексном лечении хронического панкреатита в стадии обострения и ремиссии /К.А. Пупыкина, Э.Р. Валитова //Практическая фитотерапия. - 2006. -  №3 – С.20-22.
  38. Разработка оптимальных условий получения экстрактов из растительных сборов при заболеваниях желудочно-кишечного тракта /К.А. Пупыкина, Е.А. Клыш, Л.В. Рогачева, [и др.] //Медицинский вестник Башкортостана. - 2006. – Т.4, №1. - С.160-162.
  39. Фитохимическое изучение сбора для комплексного лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки /К.А. Пупыкина, Г.Р. Сафина //Приоритеты фармацевтической науки и практики: матер. заочн. междунар. конф. - М., 2006. – С.319-321.
  40. Основные подходы к разработке новых рецептур лекарственных сборов для лечения некоторых заболеваний желудочно-кишечного тракта /К.А. Пупыкина //Медиц.вестник Башкортостана.-2006.-№1, Т.4 .-С.155-159.
  41. Изучение возможности использования растительного сбора для профилактики и комплексного лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки /К.А. Пупыкина, Л.В. Рогачева  //Практическая фитотерапия. - 2006. -  №3 – С.18-20.
  42. Применение фитотерапии в комплексном лечении дисбактериоза кишечника / К.А. Пупыкина, Г.А. Павлова, О.В. Позолотина, [и др.] //Медицинский вестник Башкортостана. -2006. - Т. 3,  №1. - С. 62-64.
  43. Фитотерапия в комплексном лечении дисбактериоза кишечника  / К.А. Пупыкина, О.В. Позолотина, Г.А. Павлова, [и др.] //Практическая фитотерапия. - 2006. -  №3 – С.22-25.
  44. Фитохимическое изучение масляного растительного экстракта и лекарственной формы на его основе для применения в стоматологии /В.А.Лиходед, К.А. Пупыкина, А.Н.Мингазова //Медицинский вестник Башкортостана. - 2006. – Т.4, №1. - С.150-151.
  45. Изучение острой токсичности сборов для комплексного лечения язвенной болезни желудка, двенадцатиперстной кишки и дисбактериоза  / К.А. Пупыкина, Н.Ж. Басченко, Л.В. Рогачева, [и др.] //Новые достижения в создании лекарственных средств растительного происхождения: матер. Всерос. научно-практ. конф. - Томск, 2006 – С. 287-288.
  46. Исследования растительного сбора для комплексного лечения дисбакте-риоза на содержание макро- и микроэлементов /К.А. Пупыкина, Е.А.Клыш //Медицинский вестник Башкортостана. - 2006. - Т.4, №1. - С.135-136.
  47. Лечебное  действие противоязвенного сбора  /К.А. Пупыкина, Н.Ж. Басченко,  Н.С. Макара // Фармация. - 2006. - №3. - С.37-38.
  48. Микробиологические исследования фитокарандашей с масляным растительным экстрактом /К.А.Пупыкина, Р.Р.Кутушева, В.А.Лиходед, С.В.Чуйкин, и [и др.] //Медицинский вестник Башкортостана. - 2006. – Т.4, №1. - С.162-164.
  49. Фитохимическое изучение и антиоксидантные свойства некоторых растений, интродуцированных в Республике Башкортостан  /К.А. Пупыкина, Н.Ж. Басченко,  Н.С. Макара //Вестник ВГУ. Серия: Химия. Биология. Фармация. - 2006. - №2. - С.357-360.
  50. Способ одновременного моделирования хронического панкреатита и гепатита / Х.М. Насыров, Т.И. Плеханова……К.А.Пупыкина, [и др.] //Патент РФ №2271041. – Москва. - 2006.
  51. Учебное пособие с грифом УМО-703 от 15.11.05 «Ресурсоведение  ле-карственных растений» /Т.И. Плеханова, К.А. Пупыкина, Ю.Г. Афанась-ева, [и др.]. – изд-во ГОУ ВПО «БГМУ Росздрава».- Уфа,2006. - 115 с.
  52. Учебное пособие с грифом УМО-39 от 27.01.05 «Избранный цикл лекций по ботанике раздел «Основы гистологии, анатомии, физиологии и морфологии растений» /Т.И. Плеханова, К.А. Пупыкина, Г.Г. Шайдуллина. – изд-во ГОУ ВПО «БГМУ Росздрава». - Уфа, 2006.-130 с.
  53. Комплексное лечение дисбактериоза кишечника с использованием растительного сбора /К.А. Пупыкина, Е.А. Клыш, Г.А. Павлова, [и др.] //Традиционная медицина-2007: научн. тр. конгресса. – М., 2007. - С.81-82.
  54. Фармакологическое изучение растительного сбора для комплексного лечения дисбактериоза /К.А. Пупыкина //Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. - 2007. - №5. – С.68-70.
  55. Фармакогностическое изучение сборов для комплексного лечения язвенной болезни желудка, двенадцатиперстной кишки и дисбактериоза /В.А. Лиходед, К.А. Пупыкина, Е.А. Клыш, [и др.] //Запорожский медицинский журнал. - 2007. - №2. - С.134-136.
  56. Разработка основных подходов к комплексному лечению беременных женщин с хроническими вирусными гепатитами /К.А. Пупыкина, С.М. Фархутдинова, В.А. Кулавский, [и др.] //Традиционная медицина-2007: научн. тр. конгресса. – М., 2007. - С.145-147
  57. Применение сорбента и фитотерапии в комплексном лечении воспалительных заболеваний пародонта у женщин с ранним гестозом / В.А. Лиходед, С.В. Чуйкин, К.А. Пупыкина, [и др.] //Уральский медицинский журнал. - 2007. -№ 3 (31). - С.61-66.
  58. К вопросу изучения интродуцированных в Башкортостане пряно-ароматических растений, рекомендуемых для профилактики заболеваний ЖКТ / К.А. Пупыкина, И.В. Черных //Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования: научн. тр. VII-го междунар. симпоз. - Т. I. - Пущино, 2007. - С. 174 – 177.
  59. Особенности комплексного лечения воспалительных заболеваний пародонта с использованием растительных средств / В.А. Лиходед, К.А. Пупыкина, Р.Р. Кутушева [и др.] //Традиционная медицина-2007: научн. тр. конгресса. – М., 2007. - С.79-81.
  60. Влияние растительного сбора на дисбактериоз кишечника /К.А.Пупыкина, Н.Ж.Басченко, Г.А.Павлова, и [и др.] // Фармация. – 2007. - № 6. – С.37-39.
  61. Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в сборах / К.А. Пупыкина, С.А. Мещерякова, Л.В. Старцева, [и др.] // Достижения и перспективы в области создания новых лекарственных средств: матер.Рос.науч.конф. - Пермь, 2007. – С. 455 – 458.
  62. Пути переработки растительных сборов, разработанных для профилактики и комплексного лечения заболеваний ЖКТ /К.А. Пупыкина, Л.В. Старцева, Е.А. Клыш //Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования: научн. тр. VII междунар. симпоз.  - Т. III - Пущино, 2007. -С. 399-401
  63. Разработка стоматологических карандашей с растительным масляным экстрактом / К.А. Пупыкина, В.А. Лиходед, А.Н. Мингазова, Р.Р. Кутушева //Фармация. – 2008. - №1. – С.28-30.
  64. Стоматологический карандаш для лечения воспалительных заболеваний полости рта /Ю.В.Шикова,  В.А. Лиходед……К.А.Пупыкина, [и др.] //Патент РФ №2310438. – Москва. - 2007.
  65. Изучение растительного сбора для профилактики и комплексного лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки /К.А. Пупыкина, Н.Ж. Басченко,  Л.В. Рогачева // Традиционная медицина-2007: научн. тр. конгресса. –М., 2007. - С.78-79.
  66. Способ определения твердости мягких лекарственных форм /А.Н. Мингазова, В.А. Лиходед……К.А.Пупыкина, [и др.] //Патент РФ №2315279. – Москва. -2008.
  67. Сбор лекарственных растений для профилактики и комплексного лечения язвенной болезни желудка /К.А. Пупыкина, Л.В.Старцева, В.А. Лиходед, Г.А.Павлова //Положительное решение на выдачу патента (приоритетная справка № 2007123053/15(025101). – Москва. -2008.
  68. Сбор лекарственных растений для профилактики и комплексного лечения дисбактериоза кишечника /К.А. Пупыкина, Е.А. Клыш, В.А. Лиходед, Г.А.Павлова //Положительное решение на выдачу патента (приоритетная справка № 2007123054/15(025102). – Москва. - 2008.
  69. Способ комплексного лечения дисбактериоза кишечника /К.А. Пупыкина, Г.А.Павлова, Е.А. Клыш, [и др.] //Положительное решение на выдачу патента (приоритетная справка № № 2007123051/ 14 (025099). – Москва. - 2008.
  70. Корсун, В.Ф. Лекарственные растения в гастроэнтерологии /В.Ф. Корсун, К.А. Пупыкина, Е.В. Корсун. – изд-во «Практическая медицина». - Москва, 2008. - 464 с.

ПУПЫКИНА КИРА АЛЕКСАНДРОВНА

Исследования по разработке и стандартизации

лекарственных растительных средств для

профилактики и комплексного лечения

заболеваний органов пищеварения

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора фармацевтических наук

Подписано к  печати «___» ___________ 2008 г. Формат

Бумага книжно-журнальная. Печать ротапринтная. Усл. печ. л. 

Тираж экз. Заказ № ________.

Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному

развитию Росздрава»

450000, г. Уфа, ул. Ленина,3.







© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.