WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

 

На правах рукописи

КУВЫРЧЕНКОВА  ИРИНА СЕРГЕЕВНА

ИССЛЕДОВАНИЕ  ВОЗМОЖНОСТИ  ПРИМЕНЕНИЯ  ОКИСЛИТЕЛЬНО-ВОССТАНОВИТЕЛЬНЫХ  РЕАКЦИЙ  ГИДРОКСИЛАМИНА  В ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОМ  АНАЛИЗЕ

15.00.02  -  фармацевтическая  химия  и  фармакогнозия

Автореферат

диссертации  на  соискание  ученой  степени

доктора  фармацевтических  наук

Москва - 2007

Работа  выполнена  в  Государственном  образовательном  учреждении  высшего  профессионального  образования  Московская  медицинская  академия  имени  И.М. Сеченова  Росздрава

Научный  консультант: доктор  фармацевтических  наук,  академик  РАМН,  профессор Александр  Павлович  Арзамасцев 

Официальные  оппоненты:

доктор  фармацевтических  наук, 

профессор ГОУ ВПО ММА

им. И.М. Сеченова  Росздрава Казьмина  Эма  Максимовна;

доктор  фармацевтических  наук,

профессор  МГМСУ  Росздрава  Берлянд  Александр  Семенович;

доктор  фармацевтических  наук,

профессор  РАМН  НИИ фармакологии

им. В.В. Закусова  Пятин  Борис  Михайлович.

Ведущая  организация:

Институт  стандартизации  и  контроля  лекарственных  средств  ФГУ  «Научный  центр  экспертизы  средств  медицинского  применения»

Защита  состоится  «_____»______________2007г.  в  _____часов  на  заседании  Диссертационного  совета  Д. 208.040.09  в  Московской  медицинской  академии  имени  И.М. Сеченова  по  адресу:  121019  г. Москва,  Никитский  бульвар, д. 13

С  диссертацией  можно  ознакомиться  в  библиотеке  ММА  имени И.М. Сеченова  по  адресу:  117998  г. Москва,  Нахимовский  проспект, 49

Автореферат  разослан  «____»  __________2007г.

Ученый  секретарь  Диссертационного  совета  Д. 208.040.09.

доктор  фармацевтических  наук,

профессор Наталья  Петровна Садчикова

ОБЩАЯ  ХАРАКТЕРИСТИКА  РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ  ТЕМЫ

  В  последнее  десятилетие  проблемы  обеспечения  качества лекарственных  средств  на  международном, региональном  и  национальном  уровне  приобрели  особенное  значение (М. Машковский, 2005; ICH, 2003;  Р. Хабриев, 2005). Внимание  к  качеству  лекарственных  средств  объясняется  постоянным  расширением  номенклатуры, в  первую  очередь  из-за  увеличения  числа  воспроизведенных  лекарств (дженериков), а  также  за  счет  их  доступности  в  сфере  обращения. Этому  способствовала  в  значительной  степени  концепция  Международной  конференции  по  гармонизации (ICH), в  которой  сформулирована  взаимосвязь  факторов:  эффективность, безопасность  и  качество  лекарственных  средств, которые, как  известно, определяют  целевое  назначение  лекарственных  средств.

  Принятый  в  России  закон  « О  техническом  регулировании », 2003 г., призван, в  целом, регулировать  отношения, возникающие  при  применении  и  исполнении  требований  к  продукции,  процессам  производства, эксплуатации, хранения, перевозки, реализации  и  утилизации.

  Указанное  выше  полностью  относится  к  области  стандартизации  лекарственных  средств; а  также - к  оценке  соответствия  продукции. Последнее  обычно  устанавливается  в  процессе  контроля  качества  лекарственных  средств. 

Современные  требования  к  качеству  лекарств  характеризуются  тенденцией  к  получению  новых  или  дополнительных  объективных  данных  о  свойствах  и  химических  превращениях  лекарственных  соединений. Предлагаемые  для  совершенствования  существующих  и  разработки  новых, методики  анализа  должны  быть универсальными, т. е. применимыми  к  большинству  объектов  исследования, характеризоваться высокой  чувствительностью  и  другими  показателями, в  соответствии  с  общей  фармакопейной  статьей  «Валидация  аналитических  методов».

К  числу  немногих  универсальных  реагентов, изученных  пока  недостаточно, следует  отнести  гидроксиламин, используемый  обычно  в  виде  гидрохлорида.  При  этом  сама  тематика  поиска  и  выявления  оптимальных  условий  универсального  реагента -  гидроксиламина, для  совершенствования  существующих  и  разработки  новых  унифицированных  методик  анализа  лекарственных средств, представляется  весьма  актуальной.

ЦЕЛЬ  И  ЗАДАЧИ

ПЛАНИРУЕМОГО  ИССЛЕДОВАНИЯ

ЦЕЛЬ  -  исследование  возможности  применения  окислительно-восстановительных  реакций  гидроксиламина в  фармацевтическом  анализе  для  различных  групп  лекарственных  веществ.

ЗАДАЧИ  -  изучение  оптимальных  условий  протекания  реакций  окислительно-восстановительного  характера  -  щелочного  раствора  гидроксиламина  с  около  50  лекарственными  веществами.  Для  этого  необходимо  было:

  1. Провести  критический  анализ  отдельных,  разрозненных  сведений  по  обобщению  изучения  свойств  и  реакционной  способности  гидроксиламина.
  2. Изучить  оптимальные  условия  взаимодействия  со  щелочным

раствором  гидроксиламина,  учитывая  его  окислительно-восстановительный  потенциал. 

  1. Определить  основные  оптические  характеристики  продуктов

реакций.

  1. Разработать  для  лекарственных  веществ, производных  фенотиазина,

многоатомных  и  ряда  одноатомных  фенолов, производных  пиридин-

4-карбоновой  кислоты, бензолсульфохлорамида, а  также – для

лекарственных  средств  неорганической  природы  методики

идентификации  и  количественного  фотометрического  определения,

с  учетом  параметров  валидации.

  1. Изучить  возможность  для  использования  новых  цветных  реакций  в 

тонкослойной  хроматографии, для  выявления  фальсифицированных

лекарственных  средств.

НАУЧНАЯ  НОВИЗНА  ИССЛЕДОВАНИЯ

  • Предложена  новая, не  описанная  ранее  в  литературе,  цветная

реакция  производных  фенотиазина  со  щелочным  раствором

гидроксиламина, с  последующим  подкислением,  позволяющая

дифференцировать  соединения  фенотиазинового  ряда (АС  № 

911261).

  • Предложена,  также  впервые,  новая  цветная  реакция  на  многоатомные  фенолы  со  свежеприготовленным  щелочным  раствором  гидроксиламина,  позволяющая  обнаружить  фенолы  по  варианту  получения  индофеноловых красителей  и отличить  многоатомные  фенолы  от  одноатомных  фенолов (АС  №  1789846).
  • Предложен  впервые  способ  идентификации изониазида  путем  обработки  свежеприготовленным  щелочным  раствором  гидроксиламина с  фиксированием  окраски.  (Патент RU  № 2249200  от  2005 года.).
  • Установлено, что  гидроксиламин  реагирует  с  многоатомными  фенолами, предложены  разнообразные  варианты  последовательности  добавления  реагентов  и  образования  окрашенных  соединений.
  • Разработаны  методики  идентификации  и  количественного  определения.
  • Выяснены  условия  взаимодействия  гидроксиламина с  лекарственными  веществами  неорганической  природы (соединениями  иода, гипохлоритами, марганца, висмута, серебра  и  железа).
  • Показана  возможность  количественного  фотометрического  определения  для  лекарственных  форм  хлорпромазина, прометазина, промазина, диэтазина, перфеназина, тиоридазина, флуацизина, азаклорзина, морацизина, резорцина, танина, гидрохинона, хинозола, изониазида, хлорамина «Б», железа (П)  лактата, железа (П) сульфата.
  • Показана  возможность  применения  щелочного  раствора  гидроксиламина  в  качестве  детектирующего  агента  для  тонкослойной  хроматографии  (ТСХ)  ряда  лекарственных  веществ.

ПРАКТИЧЕСКАЯ  ЗНАЧИМОСТЬ  ИССЛЕДОВАНИЯ

  Предложены  и  апробированы  методики  качественного  определения  около  50  лекарственных  веществ, также  разработано  около  40 методик  количественного  фотометрического  определения  исследуемых  групп  лекарственных  веществ,  как  лекарственных  форм  заводского,  так  и  аптечного  производства, включая лекарственные  смеси  многокомпонентного  состава. Сопутствующие  компоненты  не  мешают  определению  основных  веществ. Методики  анализа  позволяют  исключить  расход  дорогостоящих, труднодоступных  реагентов, сократить  время  анализа  при  исследовании  за  счет  применения  универсального  реагента. Методики  установления  подлинности  субстанций  и  препаратов, производных  фенотиазина, относящихся  к  списку  жизненно  необходимых  лекарственных  средств, методами  ИК-  и  УФ-спектроскопии, и  -  ТСХ,  а  также -  с  использованием  предлагаемых  нами  качественных  реакций, могут  быть  применены  для  выявления  фальсифицированных  лекарственных  средств.

  Материалы  о  практической  значимости  подтверждены Главным  Комитетом  ВДНХ  СССР  (свидетельство  № 39066  от  1980 года); актами  о  внедрении  в  учебный  процесс  Российского  Университета  Дружбы  Народов  медицинского  факультета  на  кафедре  фармацевтической  и  токсикологической  химии, и  - в  учебный  процесс  в  Пермской  государственной  фармацевтической  академии  кафедрой  фармацевтической  химии  очного  факультета;  также  - кафедрой  фармацевтической  химии  с курсом  токсикологической  химии  Московской  медицинской  академии  им.  И.М. Сеченова  в  виде  учебно-методической  разработки  для  студентов  5  курса  дневного  отделения  и  слушателей  ФУП  «Применение  щелочного  раствора  гидроксиламина  гидрохлорида в  окислительно-восстановительных  реакциях  на  лекарственные  средства», - (М.,: «Русский  врач» , -  1998г. -  27 стр.);  книгой  «Применение  гидроксиламина  гидрохлорида  в  анализе  лекарственных  средств», -  (М.; Художественно-полиграфический  салон  «Leon-XXI», - 2002г . – 101 стр.);  актом  о  внедрении  в  отдел  экспертизы  (химико-токсикологической)  111-го  Центра  судебно-медицинских  и  криминалистических  экспертиз  Министерства  обороны  Российской  Федерации; актами  о  внедрении  в  аналитические  кабинеты  аптек  ГУП «Столичные  аптеки» № 8/222; 4/113; 4/109; 1/33; 10/261 г. Москвы, и  - МПО «Фармация» аптеки  № 9  г. Рыбинска  Ярославской  области.

  АПРОБАЦИЯ  РАБОТЫ

Результаты  работы,  включенные  в  диссертацию, докладывались  и  представлялись  на:  конференции  молодых  ученых (Москва,  1980г.,);  на  IV съезде  фармацевтов  РСФСР (Воронеж, 1981г.); на  научных  сессиях  НИИФ  (Москва, 1984г., 1996г., 1997г., 1998г., 1999г.);  на  научно-практической  конференции, посвященной  25-летию  фармацевтического  факультета  Курского  медицинского  института  (Курск,  1991г.); на  юбилейной  научной  конференции, посвященной  30-летию  фармацевтического  факультета  Тюменского  медицинского  института  (Тюмень,  1994г.);  на  юбилейной  конференции,  посвященной  20-летию  фармацевтического  факультета  Казанского  медицинского  университета  (Казань,  1995г.); на  Российской  национальной  конференции  «Формирование  приоритетов  лекарственной  политики»  (Москва,  1995г.);  на  юбилейной  конференции, посвященной  20-летию  фармацевтического  факультета  Алтайского  государственного  медицинского  университета  (Барнаул, 1995г.);  на  научно-практической  конференции,  посвященной 25-летию  фармацевтического  факультета  Самарского  государственного  медицинского  университета  (Самара, 1996г.);  на  Международной  конференции  «Фармацевтическая  биоэтика»,  посвященной  850-летию г. Москвы  и  60-летию  фармацевтического  факультета  (Москва,  1997г.);  на  IV -  XIV  Российских  национальных  конгрессах «Человек  и  лекарство»  (Москва, 1997 - 2007г.г.);  на  научных  сессиях  Московской  медицинской  академии  им. И.М. Сеченова  с  1980 года  по  настоящее  время. Апробация  работы  состоялась  на  научной конференции  кафедры  фармацевтической  химии  с  курсом  токсикологической  химии  фармацевтического  факультета  ММА  им. И.М. Сеченова  от  20  декабря  2006 года.

ПУБЛИКАЦИИ

  По  материалам  диссертации  опубликовано  46  печатных  работ, в  том  числе – 1 монография, 2 авторских  свидетельства  и  1 патент  на изобретение.

СВЯЗЬ  ИССЛЕДОВАНИЯ  С  ПРОБЛЕМНЫМ  ПЛАНОМ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ  НАУК

  Диссертационная  работа  выполнена  в  рамках  комплексной  темы  кафедры  фармацевтической  химии  ММА  им. И.М. Сеченова  «Совершенствование  контроля  качества  лекарственных  средств»,  (№  гос. регистрации  01.200.110545).

ОБЪЕМ  И  СТРУКТУРА  ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация  изложена  на  251 страницах  машинописного  текста  и  состоит  из  введения,  обзора  литературы,  6  глав  экспериментальной  части, выводов, списка  литературы, а  также  отдельно  включает  в  себя  приложение. Работа  иллюстрирована  45 таблицами  и  27  рисунками. Библиографический  указатель  включает  323  источника,  из  них  92 – иностранных.

ОСНОВНЫЕ  ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ  НА  ЗАЩИТУ

  • Методологический  подход  к  изучению  закономерностей  окислительно-восстановительных  реакций  -  щелочного  раствора  гидроксиламина с  различными  химическими  классами  лекарственных  веществ. 
  • Результаты  изучения  поведения  определенных  лекарственных  веществ,  при  взаимодействии  с  гидроксиламином, при  определенном  значении  рН  среды,  с  учетом  окислительно-восстановительных  свойств  реагента.
  • Методики  контроля  качества  для  около  50  лекарственных  средств,  с  применением  гидроксиламина, как  универсального  реагента.
  • Комплексный  подход  к  выявлению  фальсифицированных  лекарственных  средств,  на  примерах  производных  фенотиазина. 

СОДЕРЖАНИЕ  РАБОТЫ

ОБЪЕКТЫ  ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами  исследования  являлись  лекарственные  средства

  органической  и  неорганической  природы.

1. Лекарственные  средства  органической  природы.

1) Производные  фенотиазина:  хлорпромазин,  прометазин, промазин, диэтазин,  перфеназин,  трифлуоперазин,  флуфеназин,  тиоридазин, флуацизин, азаклорзин,  морацизин,  этацизин. 2) Производные  многоатомных  и  конденсированных  одноатомных  фенолов: резорцин,  соли  адреналина  и  норадреналина, рутин,  танин,  гидрохинон,  пирогаллол,  флороглюцин,  хинозол,  токоферол.

  1. Производные  пиридин-4-карбоновой  кислоты: изониазид, фтивазид,

салюзид, метазид.  4)  Производные  бензолсульфохлорамида:  хлорамин  «Б»,  пантоцид. 2. Лекарственные  средства  неорганической  природы.

Иод,  калия  и  натрия  иодиды,  калия  перманганат,  кальция  гипохлорит,  соединения  висмута, серебра  и  железа.

В  диссертационной  работе  во  введении  раскрыты  актуальность,

определены  цель  и  задачи  исследования,  сформулированы  научная  новизна  и  практическая  значимость  работы.

ГЛАВА  1СВОЙСТВА  И  РЕАКЦИОННАЯ  СПОСОБНОСТЬ  ГИДРОКСИЛАМИНА  ГИДРОХЛОРИДА

Глава  1  посвящена  обзору  литературы, где  приведены  сведения  из  области  аналитической  химии.  Известно,  что  реагент  гидроксиламин  способен  давать  шесть  групп  химических  реакций  разнообразного  характера  с  различными  соединениями.  А  именно:

1 ) г  р  у  п  п  а  р  е  а  к  ц  и  й  - (Харитонов  Ю.Я., Саруханов  М.А.),  непосредственно  связанная  с  химическими  процессами

комплексообразования  неорганических  соединений,  например,  известны - 4MnCO3 . 2NH2ОН . 2H2О;  CoCl2 . NH2ОН;  FeCO3  . 2NH2OH.

2 )  г  р  у  п  п  а  р  е  а  к  ц  и  й  -  образование  оксимов  на  альдегиды,  кетоны, в  том  числе, включая  модификации Чичибабина  А.А.  и  Ворожцова  Н.М.

  1)  Общий  метод.

CH3  ____C _____H  +  NH2ОН  = CH3 ____CH ___OH + H2O 

  ||  ||

  O  NHOH

  2) Модифицированные  методы.

    Модификация  Чичибабина  А.А.: 

R1_____C____CH2___R2  +  HNO2  =  R1______C____C______R2  +  H2O;

|| ||  ||

  O  O N__OH

R1_____C_____C____R2  +  NH2OH  =  R1____C______C______R2 +  H2O

. || || || ||

O  N__OH  HO___N  N___OH

3 ) г  р  у  п  п  а  р  е  а  к  ц  и  й -  образование  гидроксаматов  на

сложные  эфиры,  лактоны,  амиды  и  др.  за  счет  гидроксиаминолиза:

R____COOR1  +  NH2OH  =  R______ CONHOH  +  R1___OH

3R____CONHOH  +  Fe3+  =  ( R______CONHO- )3  +  3H+

4 )  г  р  у  п  п  а  р  е  а  к  ц  и  й  -  где  известно,  что  гидроксиламин

  может  быть  сильным  восстановителем  для  отдельных  неорганических

  соединений, разрушаясь  до  молекул  азота  или  оксидов азота (N2, NO).

5 )  г  р  у  п  п  а  р  е  а  к  ц  и  й  -  где  известно,  что  гидроксиламин 

может  быть  для  ряда  неорганических  соединений  окислителем,

разрушаясь  до  молекулы  аммиака (NH3),  например, при  взаимодействии  с  Mn2+;  HI; Н2S;  Fe2+ .

6 )  г  р  у  п  п  а  р  е  а  к  ц  и  й  -  где  речь  идет  о  возможности  получения  из гидроксиламина  соли  Анджели  или  соли  натрия  нитрогидроксиламината,  в  определенных  условиях:

NH2ОН . HCl  +  C2H5ОNа =  NH2ОН + NaCl +  С2Н5ОН 

C2Н5ОNO2 +  NН2ОН + 2C2Н5ОNа =  2N2O3  +  3C2H5ОН

  В фармацевтическом  анализе  до  сих  пор  находили  применение  лишь  две  группы  из  перечисленных  групп  реакций: реакции  образования  оксимов  с  кетонами  и  альдегидами,  и  -  образования  гидроксаматов  на  производные  сложных  эфиров,  лактамов  и  др..  Весь  небольшой  имеющийся  литературный  материал,  по  применению  реагента  гидроксиламина  в  окислительно-восстановительных  реакциях,  касается  лишь  области  аналитической  химии  и представлен  лишь  для групп  неорганических  соединений. Имеются  отдельные  сведения  о взаимодействии  гидроксиламина  с  гипохлоритами, калия  перманганатом, соединениями  иода,  железа  (Брикун  И.К.  и  др., 1967 г.).  Из  литературы  известно  о  получении  более  сильного  окислителя  из  гидроксиламина,  в  определенных  условиях, а  именно  - о  получении  соли  АНДЖЕЛИ  или  натрия  нитрогидроксиламината,  в  спиртовой  и  азотнокислой  среде  одновременно  (Чернышов  В.А., 1976 г.),  т. е.  -  Na2N2O3 .

Следовательно, имеется  возможность  получения  более  сильного  окислителя,  нежели  сам  гидроксиламин. Таким  окислителем  является,  как  уже  было  ранее  отмечено,  натрия  нитрогидроксиламинат  или  соль  Анджели. О  возможности  проявления  у  гидроксиламина  окислительно-восстановительных  свойств,  как  у  реагента,  в  определенных  условиях, имеются  сведения применительно  к аналитической  химии (Файгль  Ф.  1962 г.;  Шарло  Г.  1965 г.;  Брикун  И.К., Козловский  М.Т.  1967 г.;  Чернышов  В.А.  1976 г.;  Хольцбехер  З.  1979 г.;  Кварацхелия  Р.  1981 г.;  Григорьев  Н.Б., Левина  В.И.  и  др.  1995 г., 2002 г.). Поэтому  представляет  интерес  детальное  обобщение  теоретического  и  экспериментального  материала  по  использованию  гидроксиламина,  применительно  к  классу  обширных  лекарственных  средств  органической,  смешанной  и  неорганической  природы. Согласно  сведениям  вышеперечисленных  авторов  исследований,  для  гидроксиламина, как  реагента, с  точки  зрения  окислительно-восстановительных  свойств, возможны, например,  следующие  варианты  его  распада  в  разных условиях. При  этом  следует  особое  внимание  обратить  на  его NO - донорную  активность, интерес  к  которой  сохраняется  в  течение  ряда  лет.

ПРИМЕРЫ  ОКИСЛИТЕЛЬНОГО  РАЗЛОЖЕНИЯ

ГИДРОКСИЛАМИНА

1)  В  щелочной  среде: 3NH2ОН  =  2NH3  + HNO2 +  H2О;

(рН среды  =  8 – 9)

либо -  3 NH2OH  =  3H2O  +  NH3  +  N2; 

2)  В  щелочной  среде: NH2ОН  + 4OH- -  4е-  = HNO2 + 3H2О;

  (рН среды  = 10 – 11)

3)  В  щелочной  среде:  5NH2ОН = 3NH3 + 2NO + 3H2О (это  реакция  диспропорционирования);

(рН среды  = 9 – 10)

4)  2NH2OH  = NH3  +  H2O  + NOH (нитроксил)

  NOH  +  NH2OH  =  N2 +  2H2O;

  либо -  NOH  +  OH-  =  NO-  +  H2O

  2NO-  =  N2O22-(анион  азотноватистой  кислоты):

5)  NH2ОН + [ O  ] =  NOH + H2О; 

  2NOH = H2N2O2  = N2О + H2О;

  NOH +  [ O  ] (O)   HNO2 (HNO3);

  NOH + NH2ОН = N2 + 2H2О;

6)  Сведения об  образовании  активных  радикалов  в  щелочной  среде  (Григорьев  Н.Б.,1995  г.) -  NH2ОН  +  OH-   = NH2О . -  e-  = NH2О .  = 2NH2ОН.

ГЛАВА  2ИССЛЕДОВАНИЕ  ОКИСЛИТЕЛЬНО-ВОССТАНОВИТЕЛЬНЫХ  РЕАКЦИЙ  ПРОИЗВОДНЫХ  ФЕНОТИАЗИНА

Идентификацию  лекарственных  веществ, производных  фенотиазина,  осуществляют  путем  обработки спиртовых  растворов исследуемых  соединений  свежеприготовленным, по  ГФ XI  издания, 10 %  щелочным  раствором  гидроксиламина  гидрохлоридом,  с  дальнейшим  добавлением  раствора  кислоты  азотной. В  работе  использован  стандартизованный  по  ГОСТ  реагент  гидроксиламина  гидрохлорид (ГОСТ  5456-79).

Приготовление  10 % щелочного  раствора  гидроксиламина

  1,0 г гидроксиламина  гидрохлорида (ГФ XI изд., вып. 2, - С.107) помещают  в  цилиндр  объемом  50 мл, растворяют  в  10 мл  воды  очищенной, перемешивают (раствор  А). 2,0 г  гидроксида натрия (ГФ XI изд., вып.2, - С.120) растворяют  в  20 мл  воды  очищенной  и  тщательно  перемешивают (раствор Б). (Срок  годности  растворов  А  и  Б  -  36 часов). Сливают  растворы  А  и  Б в  соотношениях  1:2. Далее  используют, полученный  сливанием, щелочной  раствор  гидроксиламина, в  анализе лекарственных средств. В  таблицах  1  и  2  представлены  объекты  и  результаты  исследования  производных  фенотиазина.

 

ТАБЛИЦА  1.

Результаты  исследования  10-алкилпроизводных  фенотиазина  с  гидроксиламином

Наименование лекарственного вещества (МНН)

Цвет продуктов

реакции

Предел обнаружения, в

мг/мл

Пределы количественного определения (соблюдения закона Бера в мг/мл)

Хлорпромазин

Розовый

0,04

0,05  -  0,9

Прометазин

Розовый

0,05

0,055 -  0,95

Промазин

Красный

0,04

0,06  -  0,8

Диэтазин

Розовый

0,02

0,04  -  0,75

Перфеназин

Розовый

0,025

0,07  - 0,07

Трифлуоперазин

Желтый

0,1

0,15  -  0,9

Флуфеназин

Коричневый

0,05

0,075  -  0,5

Тиоридазин

Голубой

0,004

0,025 -  0,35

  Реакции  окислительно-восстановительного  характера  с  исследуемыми  лекарственными  веществами  оценены  по  параметрам  валидации: специфичность,  правильность  (точность),  предел  обнаружения,  линейная  зависимость,  воспроизводимость,  предел  количественного  определения,  аналитическая  область  методики,  межлабораторная  воспроизводимость.

ТАБЛИЦА  2.

Результаты  исследования  10ацилпроизводных  фенотиазина  с  гидроксиламином

Наименование лекарственного вещества (МНН)

Цвет продуктов реакции

Предел обнаружения в мг/мл

Пределы количественного определения в мг/мл

Флуацизин

Желтый

0,02

0,05 – 0,65

Азаклорзин

Розовый

0,005

0,025 - 0,5

Морацизин

Фиолетовый

0,045

0,05  -  0,9

Этацизин

Фиолетовый

0,05

0,07 – 0,75

Предлагаемая  цветная  реакция  на  производные фенотиазина, как показано  в  таблицах  3  и  4, пригодна  для  подлинности  и  количественного  фотометрического  определения  лекарственных  средств. Нами  проведено  сравнение  предлагаемых  реакций  с  прототипом, где  прототипом  взят  способ  обнаружения  производных  фенотиазина  с  реагентом  -  калия  броматом  в  кислой  среде. Эта  методика  используется  в  нормативной  документации  на  ряд  производных  фенотиазина, например  для  аминазина  в  ФС  42-2578-88, для  пропазина  в  ФС  42-2502-94, для  дипразина  в  ФС  42-2539-88, для  динезина  в  ФС  42-2259-90. Результаты  реакций  представлены  в  таблице  4.  Предлагаемый  нами  способ  обнаружения  производных  фенотиазина  позволяет  в  2 - 6 раз  быстрее, в  сравнении  с  прототипом, и  - без  нагревания, обнаружить  12 лекарственных  веществ,  также -  пригоден  в  тонкослойной  хроматографии  и  количественном  фотометрическом  определении, а  по прототипу обнаружено  7 лекарственных  веществ; нет  применения  в  тонкослойной  хроматографии;  и  по  прототипу  -  лишь  в  единичном  случае  разработана  методика  количественного  определения,  на  примере  аминазина  в  2,5 %  растворе  для  инъекций).

ТАБЛИЦА  3.

Сравнительные  данные  по  применению  предлагаемой  нами  цветной  реакции  на  производные  фенотиазина  (в  сравнении  с  прототипом).

Название  лекарствен-ного  вещества (МНН) 

Цвет  продуктов  реакции  и  время  обнаружения

Предел  обнаружения,  в  г/мл

Название метода количественного определения

Наш способ

Прото-тип

Наш способ

Про-то-тип

Наш способ

Прото-тип

10- алкилпроизводные  фенотиазина

Прометазин

Розовый

(3 – 5мин.)

Красно-

оранже-вый за  10мин.,

затем  кроваво-красный  с выделе-нием осадка  вишнево- го цвета (20 мин.)

  5 . 10-5

2.10-3

ФЭК

10 мин.

-

Диэтазин

Розовый

(3 – 5мин.)

Красно-

оранже-вый за  10мин.,

затем розова-тый и  сирене-вый (20 мин.)

 

  2 . 10-5

2.10-3

ФЭК

10 мин.

-

Перфеназин

Розовый

(3 – 5мин.)

Сирене-вый,  за- тем  малино-вый  (10 – 15мин.)

2,5 . 10-5

-

ФЭК

10 мин.

-

Хлорпро-мазин

Розовый

(3 – 5мин.)

Малино-вый 

(10 мин.)

  4 . 10-5

2.10-3

ФЭК

10 мин.

Титро-вание за 40 мин.

Промазин

Красный

(3 – 5мин.)

Коричне-вый (10мин.)

4 . 10-5

2.10-3

ФЭК

10 мин.

-

Трифлуо-перазин

Желтый

(3 – 5мин.)

Розово-оранже- вый,  затем  ко- ричневый  и  затем  розово- оранже-вый ( 20мин.)

1 . 10-4

2.10-3

ФЭК

10 мин.

-

Флуфеназин

Коричне-вый

(3 – 5мин.)

Нет  сведений

5 . 10-5

  -

ФЭК

10 мин.

-

Тиоридазин

Голубой

(3 – 5мин.)

Нет  сведений

4 . 10-6

  -

ФЭК

10 мин.

-

  10-ацилпроизводные  фенотиазина

Флуацизин

Оранже-вый

(3 – 5мин.)

Нет  сведений

2 . 10-5

  -

ФЭК

10 мин.

-

Азаклорзин

Розовый

(3 – 5мин.)

Нет  сведений

5 . 10-6

  -

ФЭК

  10  мин.

  -

 

Морацизин

Фиолето-вый

(3 – 5мин.)

Нет  сведений

4,5 . 10-5

  -

ФЭК

10 мин.

-

Этацизин

Фиолето-вый

(3 – 5мин.)

Нет  сведений

5,5 . 10-5

  -

ФЭК

10 мин.

-

 

Предложенная  альтернативная  методика  обнаружения  лекарственных  веществ, производных  фенотиазина, с  применением щелочного  раствора  гидроксиламина (после  предварительного  растворения  исследуемых  соединений  в  спиртовой  среде), с  последующим  добавлением  раствора  кислоты  азотной, способствовала  значительному  повышению  по  своей  чувствительности определения (таблица  4). Аналогом, взятым  для  сравнения  с  предлагаемыми  нами  исследованиями  на  производные  фенотиазина, является  способ,  включающий  реакцию  пробы  с  1 %  раствором  калия  бромата  и  16 %  раствором  кислоты  серной, с  последующей  регистрацией  изменения  окраски,  где  перед  прибавлением в  раствор  кислоты  добавляют  производное  первичных  ароматических  аминов  с  концентрацией  до  0,25 %. Способом-аналогом  исследовано  также  ограниченное  количество  производных  фенотиазина. Способ-аналог, как  и  способ-прототип,  помимо  ограничений, имеет  ряд  существенных  недостатков. А  именно,  в  способе-аналоге  для  10-алкилпроизводных  фенотиазина  необходимо  проводить  реакцию  идентификации  в  течение  15-25 минут; а  для  10-ацилпроизводных - 25-35 минут. Предлагаемый  нами  способ  позволяет  в  3-12 раз  быстрее, и  -  без  нагревания  обнаружить  12  лекарственных  веществ, а  по  способу-аналогу - исследовано  8  лекарственных  веществ. Реакция  с  применением  реагента - гидроксиламина,  по  сравнению  со  способом-аналогом,  отличается  более  высокой  чувствительностью. Например, для  10-алкилпроизводных  фенотиазина  применение  окислителя  гидроксиламина, в  определенных  условиях, увеличивает  чувствительность  определения  в  30-100 раз, в  сравнении  с  аналогом, а  для  10-ацилпроизводных  фенотиазина  чувствительность  определения  увеличивается  в  100-250 раз. Перечисленные данные, в  сравнительном  аспекте,  представлены  в  таблице  4.

ТАБЛИЦА  4.

Цветная  реакция  производных  фенотиазина  путем  обработки спиртовых  растворов  свежеприготовленным  10 % щелочным  раствором  гидроксиламина  с  дальнейшим  добавлением  16 % раствора  кислоты  азотной.  Сравнение  с  реактивом-аналогом  -  калия  броматом  в  присутствии  0,25 %  свежеприготовленного  раствора  новокаина  в  16 % растворе  кислоты  серной (Д.В. Куприч  и  др.;  см. описание  изобретения  к  патенту  Российской  Федерации  «Способ  идентификации  производных  фенотиазина»  от  25.12. 1997 г.).

№ п/п  и  название  лекарственного  вещества  (МНН).

Цвет  продуктов  реакции.  Время  обнаружения

Чувствительность

определения, г/мл.

по  предла- гаемому  способу

по  способу- аналогу

по  предла- гаемому  способу

по  способу- аналогу

10- алкилпроизводные  фенотиазина

1)  Хлорпромазин.

Розовый

(3 – 5 мин.)

Малиновый, через  10 мин. бордовый,  затем  грязно-розовый

(15- 25минут)

4 . 10-5

2 . 10-4

2) Промазин.

Красный

(3 – 5мин.)

Розово-оранжевый

(15-25мин.)

4 . 10-5

2 . 10-4

3)  Трифлуопера-

зин

Желтый

(3 – 5мин.)

Желто-оранжевый

(15 –25мин.)

1 . 10-4

2 . 10-4

4)  Прометазин.

Розовый

(3 –5мин.)

Розовый, через 10мин. ярко-зеленый(15 – 25мин.)

5 . 10-5

  2 . 10-4

5)  Диэтазин 

Розовый

(3 –5мин.)

Розовый, через 10мин. серовато-зеленый

(15 – 25мин.)

2 . 10-5

  2 . 10-4

6)  Перфеназин

Розовый

(3 –5мин.)

Нет  сведений

2,5 . 10-5

-

7)  Флуфеназин 

Коричневый

(3 – 5 мин.)

Нет  сведений

5 . 10-5

-

8)  Тиоридазин 

Голубой

(3 - 5 мин.)

(3 - 5 мин.)

4 . 10-6

-

10 -  ацилпроизводные  фенотиазина

9)  Флуацизин 

Оранжевый (3 – 5 мин.)

После  гидролиза амидной  связи – синий (25 – 35 мин.)

2 . 10-5

1,25 . 10-4

10)  Азаклорзин.

Розовый

(3-5 мин.)

После  гидролиза - голубовато-зеленый

(25 – 35 мин.)

5 . 10-6

1,25 . 10-4

11)  Морацизин.

Фиолетовый

(3 – 5 мин.)

Нет  сведений

4,5 . 10-5

-

12)  Этацизин 

Фиолетовый

(3 – 5 мин.)

После  гидролиза фиолетовый, затем серый  и  далее 

зеленоватый

(25 – 35мин.)

5,5 . 10-5

1,25 . 10-4

Нами  для  получения  стабильной  окраски  продуктов  реакции  на  производные  фенотиазина  с  применением  окислителя - гидроксиламина,  предлагается  обязательное  использование  спиртовых  растворов  лекарственных  веществ, к  которым  добавляют  свежеприготовленный  10 %  щелочной  раствор  гидроксиламина, с  дальнейшим  добавлением  16 %  раствора  кислоты  азотной. Для  выполнения работы применяли  спектрофотометры  -  СФ-26  и  СФ-103, также - фотоэлектроколориметр  КФК- 2. В  аналитических  исследованиях  использовали  статистические  расчеты, принятые  ГФ XI издания. Исследование  полученных  цветных  продуктов  реакций  производных  фенотиазина  проведено  с  применением  спектрофотометрии  в  УФ-  и  видимой  областях  спектра (см. рисунки  1  и  2). Поглощение  продуктов  реакций  снято  на  однолучевом  приборе  СФ-103  (Аквилон,  Россия).  Управление  прибором  осуществляли  с  использованием  программы  «Спектр»  (Аквилон,  Россия).

Также  исследование  продуктов  реакции  проведено  с  применением  ВЭЖХ-метода  (метода  высокоэффективной  жидкостной  хроматографии) на  приборе «Милихром-А-02»  с  УФ-детектором  190 – 360 нм  и  стандартной  колонкой,  заполненной  сорбентом  ProntoSIL-120-5-C18 AQ  и  размером  75 мм х 2, зернением  5 мкм, где  применен  твердый  носитель  с  привитыми  гидрофобными  группами, предколонка  2,0 х 0 мм. В  качестве  подвижной  фазы  использована  смесь кислого водного  раствора  лития  перхлората  с  ацетонитрилом. Применено  градиентное  элюирование. Управление  прибором  и  расчет  хроматографических  параметров  осуществлены  с  использованием  программы  Мультихром-СПЕКТР  для  Windows. На  примере  фторацизина  окисленного  наглядно  наблюдается  обнаружение  продуктов  окисления  (см. рисунок  3). Найдено, что  время  удерживания (tR)  фторацизина  окисленного  составляет  32 мин., также  найдены  параметры  пиков  продуктов  окисления. Объем  вводной  пробы  -  4 мкл. Длина  волны  детектирования  - 210 нм. Скорость подачи: 100 мкл/мин.. Линейная  скорость - 0,76 мм/с. 

РИСУНОК 1.  Спектр поглощения  продуктов взаимодействия  аминазина  с  гидроксиламином.

  РИСУНОК 2.  Спектр  поглощения  продуктов взаимодействия  тиоридазина  с  гидроксиламином.

РИСУНОК  3. Хроматограмма  окисленного  фторацизина.

  На  рисунках  1  и  2  представлены  спектры  поглощения  продуктов  реакции  на  примерах  взаимодействия  аминазина  и  тиоридазина  в  50 % этиловом  спирте  с  10 %  щелочным  раствором  гидроксиламина, и  с  добавлением  16 %  раствора  кислоты  азотной  на  спектрофотометре  СФ-103, в  интервале  длин  волн  от  300 до 750 нм,  в  кварцевых  кюветах  с  толщиной  слоя  10 мм, относительно  контрольных  опытов. Спектры  поглощения характеризуются  наличием  двух  максимумов  поглощения, а  именно: слабовыраженного  коротковолнового (максимум  при  длине  волны  330–360 нм), и  интенсивного  длинноволнового  (максимум  при  длине  волны  415-630 нм). Результаты  исследований  показывают, что  продукты  окисления, полученные  в  ходе  реакции, имеют  специфические  максимумы  поглощения  на  спектральных  кривых  в  видимой  области  спектра, в  зависимости  от  характера  заместителей  во  втором  положении  фенотиазинового  ядра. В  таблицах  5  и  6  представлены  результаты  исследования  взаимодействия  10-алкилпроизводных  и  10-ацилпроизводных  фенотиазина  с  гидроксиламином.

ТАБЛИЦА  5.

Сравнительная характеристика  спектральных  данных  при  взаимодействии  некоторых  10 -  алкилпроизводных  фенотиазина  с  гидроксиламином.

Наименование лекарственного средства

МНН Торговое

Цвет продуктов реакции

Значение максимумов поглощения (нм).

Первого Второго

Хлорпромазин  Аминазин

Розовый

  345 420

Промазин  Пропазин

Красный

350 515

Тиоридазин  Апо-тиоридазин

Голубой

355 525

Для  10-ацилпроизводных  фенотиазина  характерно  наличие  трех  максимумов  поглощения.

ТАБЛИЦА  6.

Сравнительная  характеристика  спектральных  данных  при  взаимодействии  некоторых  10 - ацилпроизводных  фенотиазина  с  гидроксиламином.

Наименование лекарственного средства

МНН  Торговое

Цвет продуктов реакции

Значение максимумов поглощения (нм).

Первого Второго  Третьего

Флуацизин Фторацизин

Желтый

321 445  505

Азаклорзин  Нонахлазин

Розовый

  325 445  525

Морацизин Этмозин

Фиолетовый

  322 450  560

  Очевидно,  у  10-алкилпроизводных  фенотиазина  в  видимой  области  спектра,  по  сравнению  с  10-ацилпроизводными,  при  взаимодействии  с  гидроксиламином,  наблюдается  батохромный  сдвиг  первого  максимума  поглощения  и отсутствие  третьего  максимума  поглощения.

Исследована  возможность  применения  данной  реакции  для количественного  фотоэлектроколориметрического  определения  лекарственных  форм  хлорпромазина, прометазина, промазина, перфеназина,  диэтазина, тиоридазина, флуацизина, азаклорзина, морацизина.  Для  определения  оптимальных  условий  проведения  предлагаемой  реакции  применен  метод  математического  планирования  эксперимента - метод  латинских  квадратов. На  характер  спектров  поглощения  и  максимальный  выход  продуктов  окисления  существенно  влияют  следующие  факторы: концентрация  исследуемого  лекарственного  вещества; порядок  прибавления  основного  и  вспомогательного  реагентов, а  именно – «лекарственное  вещество  +  50 % этиловый  спирт  +  10 %  щелочной  раствор  гидроксиламина»  (где  рН  среды  составляет  11,0 – 11,5 – в  1 стадии  реакции); и  дальнейшее  добавление  объема  16 %  раствора  кислоты  азотной  (где  рН  среды  составляет  1,4 – 1,5 – во  2  стадии  реакции). Влияние  различных  факторов  мы  изучали  на  примерах  реакций  с  морацизином (или  этмозином), с  применением  фотометрических  методов  анализа  в  видимой  области спектра.

ПРИМЕНЕНИЕ  МАТЕМАТИЧЕСКОГО  ПЛАНИРОВАНИЯ  ЭКСПЕРИМЕНТА  -  МЕТОДА  ЛАТИНСКИХ  КВАДРАТОВ  В  ИССЛЕДОВАНИИ  ПРОИЗВОДНЫХ  ФЕНОТИАЗИНА

I)  Влияние  10 % щелочного  раствора  гидроксиламина на  интенсивность  окраски  продуктов  реакции.

Постановка  опытов  сводилась  к  следующему: в  мерные  колбы  вместимостью  50 мл  добавляли  по  2 мл  раствора  морацизина  в  50 % этиловом  спирте  (концентрации 5,0 мг/мл),  затем  туда  же  добавляли 

разные  объемы  10 %  щелочного  раствора  гидроксиламина и  равные  объемы  16 %  раствора  кислоты  азотной,  тщательно  перемешивали  и  доводили  объем  исследуемого  раствора  водой  очищенной до  метки. Оптическую  плотность  полученных  растворов  измеряли  на  ФЭК-е  - КФК-2  при  светофильтре  № 6,  в  кювете  толщиной  слоя  10 мм, относительно  контрольных  опытов.  Полученные  результаты  представлены  в  таблице 7 .

ТАБЛИЦА  7.

Данные  для  расчета  коэффициента  корреляции  с  учетом  добавляемого  объема  10 % щелочного  раствора  гидроксиламина .

D  x  1000 или х

Объем  10 %  щелочного раствора гидроксиламина в мл, или y

x2

y2

xy

(x+y)

(x+y) 2

211

0,5

44521

0,25

105,5

211,5

44732,25

255

1,0

65025

1,0

255

256

65536

346

2,0

119716

4,0

692

348

121104

418

3,0

174724

9,0

1254

421

177241

432

4,0

186624

16,0

1728

436

190096

450

5,0

202500

16,0

2250

455

207025

2112

15,5

793110

55,25

6284,5

2127,5

805734,25

  Значение  коэффициента  корреляции  очень  близко  к 1.

  Это означает, что  существенным  фактором  является  количество

добавляемого  объема  10 %  щелочного  раствора  гидроксиламина  к  исследуемым  лекарственным  веществам,  производным  фенотиазина.

II)  Влияние  16 %  растворов  кислоты  азотной  на  интенсивность  окрашивания.

  Результаты  полученных  исследований  представлены  в  таблице  8.

ТАБЛИЦА  8.

Данные  для  расчета  коэффициента  корреляции  с  учетом  добавляемого 16 %  раствора  кислоты  азотной.

D  x  1000 или х 

Объем  16 %  кислоты азотной в мл, или y

x2

y2

xy

(x+y)

(x+y) 2

119

0,5

14161

0,25

59,5

119,5

14280,25

192

1,0

36684

1,0

192

143

37249

215

2,0

46225

4,0

430

217

47089

242

3,0

58564

9,0

276

245

60025

300

4,0

90000

16,0

1200

304

92416

260

5,0

67600

25,0

1300

265

70225

252

6,0

63504

36,0

1512

258

66574

1580

21,5

376918

91,25

5419,5

1601,5

387848,25

Значение  коэффициента  корреляции  близко  к  1.  Это  значит,  что  существенным  фактором  является  количество  добавляемого  объема  16 % раствора  кислоты  азотной, что  влияет  на  величину  оптической  плотности  и  оптимальный  выход  продуктов  реакции. В  дальнейшем, для  составления  плана  эксперимента, использовали  дисперсионный  анализ  по  столбцам  и  строкам. Выбрали  два  фактора  и  выяснили  роль  каждого  фактора, влияющего  на  оптическую  плотность. В  таблицах  9  и  10  отражены  результаты  плана  эксперимента.  Для  выяснения  роли  добавляемых  объемов  10 % щелочного  раствора  гидроксиламина (фактор  А)  и  16 % раствора  кислоты  азотной (фактор В)  на  величину  оптической  плотности  факторы были  взяты  на  уровнях  А1 = 1,0 мл, А2 = 3,0 мл, А3 = 5,0 мл, А4  =  7,0 мл  с  интервалами  в  2,0 мл; и  В1 =  1,0 мл, В2 = 3,0 мл,  В3  = 5,0 мл,  В4 =  7,0 мл  -  также  с  интервалами  в  2,0 мл.

Величины  оптической  плотности  по  составленному  плану  эксперимента представлены  в  таблице  9.

ТАБЛИЦА  9.  Подробный  план  составления  эксперимента, с  учетом  оптических  плотностей.

Уровни  добавляемого  объема  10 % щелочного  раствора гидроксиламина - 

Уровни  добавляемого  объема 16 % раствора  кислоты  азотной -

  1,0 3,0 5,0  7,0 Сумма Среднее

значение

1,0

0,198 0,288 0,295 0,318  1,099 0,274

3,0

0,242 0,345 0,432 0,443  1,453 0,363 

5,0

0,263 0,417 0,527 0,581  1,788 0,447

7,0

0,276 0,449 0,632 0,679  2,036 0,509

Сумма

0,979 1,499 1,877 2,021

Среднее

0,244 0,374 0,469 0,505  Т =  6,376

 

  Результаты  дисперсионного  анализа  по  двум  факторам  представлены  в  таблице  10.

 

ТАБЛИЦА  10.

Дисперсионный  анализ  по  двум  факторам.

Источник варьирования

Сумма квадратов

Число  степеней свободы 

Средний квадрат

F

F0,95

Объем  10 % раствора гидроксиламина ( фактор  А)

0,1240

n1  - 1  =  3

S2A =  0,0413

11,09

4,76

объем  16 % кислоты азотной

(фактор  В)

0,1618

n2  - 1  =  3

S2B  =  0,0539

13,11

4,76

Ошибка  опыта (остаточная  дисперсия)

0,0331

(n1 -1)

(n2 -1)  .  = 9

S2  =  0,0036

2,19

4,76

Сумма

  0,3189

(n1 .  n2  ) – 1 = 15

Отсюда  вытекает,  что  для  группы  факторов  А  -

F  = 11, 09  >  F0,95(3,6) =  4,76,

и  для  группы  факторов В  -

FB  = 13, 11  >  F0,95(3,6) =  4,76

  В  результате  исследований  можно  сделать  вывод  о  том, что  оптимальные  условия  выполняемой  цветной  реакции - это  добавляемые  объемы  10 %  раствора  гидроксиламина и  16 %  раствора  кислоты  азотной. Очевидно, использование  метода  латинских  квадратов  позволило  определить  влияние  отдельных  факторов  и  подобрать  оптимальные  условия определения. На  основании  16  опытов  возможно  сделать  вывод  о  степени  влияния  12  уровней  двух  групп  факторов. Полученные  данные  с  помощью  математического  планирования  эксперимента  практически  совпадают  с  проведенными  исследованиями. Из  этого  следует, что оптимальные  условия  для  определения  лекарственных  средств  подобраны  правильно, что  послужило  основой  для  разработки  методик  качественного  и  количественного  определения  исследуемых  препаратов  в  субстанциях  и  лекарственных  формах. Представлены  результаты  количественного  определения  тиоридазина  и  морацизина  в  таблицах  11, 12, 13  и  14. В  качестве  стандартных  образцов  применили  РСО тиоридазина  и  РСО  морацизина  производства  ФГУП «ГНЦ  НИОПИК», соответствующих  требованиям  нормативной  документации  0310В31697 / Р и ФС 42-2190-98  соответственно.

ТАБЛИЦА  11.

Содержание  тиоридазина  в  субстанции.

Взято  тиоридазина, в  мг

Найдено

мг 

Метрологические характеристики

0,52

0,50 96,15

х  =  97,76%

0,52

0,53 101,92

S =  2,83

0,52

0,49 94,23

Sх =  1,16

0,52

0,50 96,15

х =  3,68

0,52

0,52 100,00

= 3,76%

ТАБЛИЦА  12.

Количественное  фотометрическое  определение  тиоридазина  в  драже  по  0,01г.

Навеска  массы  драже, г

Найдено  тиоридазина

  г  %

Метрологические

характеристики

0,2492

0,0101 100,67

х = 100,14%

0,2509

0,0098 98,93

S  =  2,65

0,2491

0,0093 96,91

Sх  =  1,08

0,2515

0,0108 103,15

  х =  3,44

0,2494

0,0096 97,66

    =  3,41%

0,2511

0,0104 102,93

ТАБЛИЦА  13.

Количественное  определение  морацизина  в  субстанции.

Взято  морацизина, мг

Найдено

  мг

Метрологические характеристики

0,25

0,25 100,00 

х =  98,67%

0,25

0,22 96,32

S  =  2,24 

0,25

0,26  101,24

Sх  =  1,04 

0,25

0,23 97,05

х =  2,83

0,25

0,24 98,73

= 2,78%

ТАБЛИЦА  14.

Количественное  определение  морацизина  в  таблетках  по  0,025г, покрытых  оболочкой.

Навеска  массы  порошка растертых  таблеток,  г

Найдено  морацизина 

г  %

Метрологические характеристики

0,3035

0,0247 98,84

х  =  98,64%

0,2969

0,0249 99,72 

S =  1,09

0,3014 

0,0243 97,52

Sх  =  0,45

0,2972 

0,0242  97,08

х = 1,42

0,2995

0,0249  99,60

= 1,44%

0,3003

0,0245  98,50

  Гидроксиламин, как  реагент  в  таких  условиях, является  достаточно  сильным  окислителем (Ео =  + 1,35 В); и  также -  в  спиртовой  среде,  с  последующим добавлением  раствора  кислоты  азотной  содержит  анион - гипонитрит  внутри  соли  Анджели  (Ео  =  + 2,65 В)  и  анион – нитрит ( Ео =  + 0,98 В). Техническим  результатом  является  повышение  чувствительности, упрощение  и  удешевление  определения. Предлагаемый  нами  способ  определения  производных  фенотиазина  может  быть  использован  для  контроля  качества  продукции,  выпускаемой  фармацевтическими  производствами  и  изготавливаемой  аптеками. 

  В  дальнейшем  применили  данные  цветные  реакции  в  тонкослойной  хроматографии  производных  фенотиазина, наряду с  изучением  хроматографической  подвижности  лекарственных  веществ. По  нашему  мнению, стабильность  полученной  окраски  пятен  веществ на хроматограмме  могла  способствовать  более  достоверному  обнаружению веществ.

  В  качестве  сорбентов  выбраны  готовые  пластинки  «Силуфол  УФ-254», «Сорбфил», «Армсорб»,  являющиеся  сорбентами  высокой  степени  активности  и  обладающие  достаточно  высокой  скоростью  перемещения  подвижной  фазы.  Нами  впервые  подобраны  высокочувствительные  реагенты  для  обнаружения  окрашенных  зон  адсорбции  имеющихся  препаратов  на  хроматограммах, с  учетом  окислительно-восстановительных  свойств  взятых  реагентов.  Найдено, что  лучшее  разделение  производных  фенотиазина  наблюдается  в  ПФ  основного  характера,  чем  кислого  или  нейтрального.  Предложены  две  альтернативные  ПФ,  позволяющие разделить  10 – алкилпроизводные  фенотиазина,  а  именно  -

  1. этилацетат – этанол – 25 %  раствор  аммиака  (17:2:1);
  2. гептан –хлороформ – ацетон – этанол – 25 % раствор  аммиака  (5:10:8:3:0,05).

Найдены  две  альтернативные  ПФ,  способствующие  разделению  10 - ацилпроизводных  фенотиазина,  а  именно  -

  1. н – бутанол – хлороформ – 25 %  раствор  аммиака  (8:3:0,5);
  2. хлороформ – изопропанол – 25 %  раствор  аммиака  (9,8:1:0,1).

В  последующем  такие  методики  могут  быть  включены  в  общий  план  исследований  по  разработке  комплексного  подхода  к  обнаружению  фальсифицированных  лекарственных  средств  среди  производных  фенотиазина. При  установлении  подлинности  предполагается  параллельное  нанесение  растворов  испытуемого  лекарственного  средства и  -  соответствующего  стандартного  образца. Результаты  исследований  представлены  в  таблицах  15  и  16. Предлагаемые  новые  способы  определения  лекарственных  веществ  характеризуются  большей  чувствительностью  и  специфичностью, по  сравнению  с  рядом  способов, имеющихся  в  нормативной  документации. Осуществлен  выбор  оптимальных  условий  и  характеристик, позволяющих  проводить  идентификацию  с  применением  метода  ТСХ. Для  проведения  экспресс-анализа  был  выбран  наиболее  простой  подход  к  пробоподготовке: для  растворения  фенотиазиновых  соединений  использовали  спирт  этиловый.

ТАБЛИЦА  15.

Характеристики  хроматографического  поведения  10 алкил-  производных  фенотиазина  в  ТСХ определении.

Подвижная фаза
Лекарственные  вещества

хлорпромазин  прометазин  перфеназин промазин

Зоны  (окраска, значение  величины Rf )

этилацетат – этанол – 25 %  раствор аммиака

(17:2:1)

~ 0,91  ~ 0,71  ~ 0,67  ~ 0,35

малиновая красная  оранжевая  розовая

гептан  – хлороформ – ацетон – этанол – 25 %  раствор  аммиака  (5:10:8:3:0,05)

~  0,86 ~ 0,76  ~ 0,40  ~ 0,22

малиновая  красная  розовая  красная 

ТАБЛИЦА  16.  Характеристики  хроматографического  поведения  10-ацилпроизводных  фенотиазина в ТСХ-определении.

Подвижная фаза
Лекарственные  вещества

флуацизин азаклорзин морацизин 

Зоны  (окраска, значение  величины Rf )

н-бутанол – хлороформ - 25 % раствор  аммиака

(8:3:0,5)

~ 0,72 ~ 0,24 ~ 0,86

коричневая  малиновая фиолетовая

гептан  – хлороформ – ацетон – этанол – 25 %  раствор  аммиака  (5:10:8:3:0,05)

~ 0,90 ~ 0,58 ~  0,65

оранжевая  розовая сиреневая

 

На  примерах  производных  фенотиазина  удалось  обнаружить возможность  и  преимущество  применения  реагента -  гидроксиламина в  фармацевтическом  анализе.  Предлагаемые  методики  разделения  и  идентификации  отличаются  высокой  специфичностью  и  чувствительностью  определения, что  также  значительно  расширяет  информацию  о  разнообразии  химических  свойств  применяемого  реагента  и  ряда  лекарственных  веществ. 

 

ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ  ОКИСЛИТЕЛЬНО ВОССТАНОВИТЕЛЬНЫХ  РЕАКЦИЙ  ДЛЯ  ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ, ПРОИЗВОДНЫХ МНОГОАТОМНЫХ  ФЕНОЛОВС  ПРИМЕНЕНИЕМ  ЩЕЛОЧНОГО  РАСТВОРА  ГИДРОКСИЛАМИНАПРИМЕНЕНИЕ  НОВЫХ  РЕАКЦИЙ  КОНДЕНСИРОВАННЫХ  ОДНОАТОМНЫХ  ФЕНОЛОВ

I)  Исследование  производных  многоатомных  фенолов, включая  двух-  и  трех- атомные  фенолы.

Объекты  исследования  -  двух – атомные  фенолы: резорцин,  соли  адреналина  и  норадреналина,  гидрохинон,  арбутин,  и  трех – атомные  фенолы:  пирогаллол, танин,  флороглюцин.  Разработаны  методики  исследования  для  перечисленных  препаратов  в  двух  вариантах.

    1. вариант).  С  применением  реагента  -  щелочного  раствора  гидроксиламина (без  дальнейшего  добавления  растворов кислот).
    2. вариант).  С  применением  щелочного  раствора  гидроксиламина, с последующим  добавлением  раствора кислоты.

1 вариант.

  При  взаимодействии  щелочного  раствора  гидроксиламина с  лекарственными  веществами,  производными  многоатомных  фенолов,  происходит  реакция  образования  индофенолового  (хинониминового)  красителя, где  гидроксиламин  взаимодействует  как  окислитель,  и  -  как  носитель  аммиака.

П р и м е р : 0,05 г лекарственного  средства  растворяют  в  2,5 мл  воды  очищенной. К  раствору  добавляют  1,5 мл  10 % свежеприготовленного  щелочного  раствора  гидроксиламина,  появляется  характерное  окрашивание. Результаты  исследования  отражены  в  таблице  17.

ТАБЛИЦА  17.

Результаты  реакций  идентификации  лекарственных  веществ,  производных многоатомных  фенолов  по  новому  варианту  получения  индофеноловых  красителей.

Исследуемое соединение

Результаты  исследований  при  рН  среды  =  10,5.

Резорцин.

Буровато-желтое  окрашивание, переходящее в коричневое. Чувствительность  реакции – 1,0 .  10-4  г/мл.

Время  реакции  -  3 – 5 минут.

Соли  адреналина.

Розовое  окрашивание  с  выделением  пузырьков газа. Чувствительность  реакции  -  8,5 .  10-3 г/мл.

Время  реакции - 3 – 5 минут.

Гидрохинон.

Желтовато-розовое  окрашивание, переходящее  в

коричневое  с  выделением  паров  коричневого  цвета. Чувствительность реакции  -  1,5 .  10-5  г/мл.

Время  реакции –3-5 минут.

Арбутин.

Постепенное  появление  зеленого  окрашивания, с

выделением  пузырьков  газа, после  нагревания  на  кипящей  водяной  бане.

Чувствительность  реакции  -  2,5 .  10-3 г/мл.

Время реакции -  10 – 15 минут.

Пирогаллол.

Желто-зеленое  окрашивание, переходящее  в  оранжевое  с выделением  пузырьков  газа.  Чувствительность  реакции  - 7,5 . 10-5  г/мл.

Время  реакции  -  3 – 5 минут.

Танин.

Красно-коричневое  окрашивание, с  выделением  пузырьков газа  и  паров  коричневого  цвета.  Чувствительность реакции  - 7,5 . 10-5 г/мл.

Время  реакции  -  3 – 5 минут.

Флороглюцин.

Малиновое  окрашивание,  с  выделением  пузырьков  газа  и паров  розового  цвета.  Чувствительность  реакции  -

5,0 . 10-6 г/мл.

Время реакции  -  3 – 5 минут.

2 вариант.

Вариант  получения  индофенолов,  основанный  на  взаимодействии  со щелочным  раствором  гидроксиламина, в  присутствии  кислоты  серной  концентрированной  или  разбавленной. Суть  реакции  идентификации  состоит  в  том, что  выделившаяся  в  реакционной  смеси  кислота  азотистая дает  в  дальнейшем  с  любым  соединением,  из  производных  многоатомных  фенолов, пара – нитрозосоединение  в  виде  важнейшего  промежуточного  продукта  реакции,  которое  в  дальнейшем  изомеризуется  в  монооксим  производного  пара – бензохинона,  переходящего  при  последующем  взаимодействии  с  первоначальным  соединением,  в  индофенол.

  Аналогом  предложенной  нами  новой  цветной  реакции  является  нитрозореакция  Либермана.  Недостатками  аналога  являются  низкая  чувствительность  и  специфичность  обнаружения  производных  исследуемых  фенолов.  Индофенолы,  полученные  с  реагентом  гидроксиламином  при  нитрозировании,  также  дают  стабильное  окрашивание,  что  пригодно  для  количественного  фотометрического  определения  исследуемых  нами  соединений.

  П р и м е р :  0,01 г  исследуемого  лекарственного  вещества  растворяют  в  2,0 мл  воды  очищенной,  добавляют  2,0 мл  свежеприготовленного 10 % щелочного  раствора  гидроксиламина,  фиксировали  первоначальное  появление  окраски,  далее  к  реакционной  смеси  прибавляли  0,5 мл  кислоты  серной  концентрированной  (рН  =  1,5).  Результаты  исследований  представлены  в  таблице  18.

ТАБЛИЦА  18.

Сравнительная  характеристика  идентификации  многоатомных  фенолов.

Исследуемое соединение.

Результаты  цветной  реакции.

Время  идентификации.

Открываемый минимум,  в г/мл.

Соли  адреналина  или норадреналина.

Переход  от  розового цвета  к  желтому.

3  -  5  минут

4,0  .  10-4

Резорцин.

Переход  от  желтого цвета  к  вишневому.

3 – 5 минут.

0,3  . 10-4

Гидрохинон.

Переход  от  оранжевого цвета  к  коричневому .

3  - 5 минут.

0,5 .  10-5

Арбутин.

Переход  при  нагревании от  зеленого  цвета  к оранжевому.

10  - 15 минут

3,5 .  10-3

Пирогаллол.

Переход  от  оранжевого  к желтому  цвету.

3  -  5  минут.

2,0 .  10-5

Танин.

Переход  от красно-коричневому  цвету.

оранжевого  к

3  -  5  минут.

3,5 .  10-5

Флороглюцин.

Переход  от  малинового  к  коричневому  цвету.

3  -  5  минут.

2,5 . 10-6

 

  Известны  другие  способы  идентификации  фенолов, например, взаимодействие  с  солями  трехвалентного  железа; с  бромной  водой  и  т.д..  Недостатками  способов  являются  относительно  низкая  чувствительность  определения  и  невозможность  отличить  одноатомные  фенолы  от  многоатомных. Прототипом  нами  выбран  способ  определения  производных  фенолов  путем  обработки  аммиаком,  с  последующим  добавлением  хлорамина «Б» и  нагреванием  на  кипящей  водяной  бане. К  недостаткам  прототипа  относятся: 1) невозможность  отличия  одноатомных  фенолов  от  многоатомных; 2) низкая  чувствительность  определения; 3) большая  продолжительность  исследования. По  предлагаемым  нами  первому  или  второму  вариантам  взаимодействия  исследуемых  производных  фенолов  с  гидроксиламином,  в  определенных  условиях,  удалось  повысить  чувствительность  и  упростить  определение, также -  отличить  многоатомные  фенолы  от  одноатомных. В  таблице  19  представлена  сравнительная  характеристика  экспериментальных  исследований  по  первому  варианту  взаимодействия  многоатомных  фенолов  с  гидроксиламином  в  щелочной  среде  и  по  предлагаемому  прототипу.

ТАБЛИЦА  19. Сравнительная  характеристика  дифференциации  многоатомных  фенолов.

Соединение

2 %  раствор  исследуемого  препарата

  По  первому  варианту  По  прототипу

Резорцин.

Буровато-желтое  окрашивание, переходящее  в  коричневое,  с  выделением  пузырьков газа  и паров  коричневого  цвета. Чувствительность  реакции –

1,0 . 10-4 г/мл.

Время  обнаружения  –  3 – 5 минут.

Буровато-желтое  окрашивание  после  нагревания  на кипящей водяной  бане. Чувствительность  реакции- – 4,0 . 10-3  г/мл.

Время  обнаружения – 10-15 минут


Адреналина гидрохлорид.

Розовое  окрашивание  с  выделением  пузырьков  газа. Чувствительность реакции – 8,5 . 10-4 г/мл. Время  обнаружения -  3 – 5 минут.

Розовое  окрашивание. Чувствительность реакции - – 2,5 .  10-3  г/мл.

Время  обнаружения – 10-15 минут


Гидрохинон.

Желто-розовое  окрашивание, переходящее  в  коричневое  с  выделением пузырьков  газа  и  паров  коричневого  цвета. Чувствительность реакции – 1,65 .  10-5 г/мл.

Время  обнаружения – 3- 5минут. 

Желто-розовое окрашивание после нагревания на  кипящей  водяной бане. Чувствительность  реакции –

2,5 . 10-4 г/мл.

Время 10 - 15 минут.


Флороглюцин.

Малиновое  окрашивание  с  выделением  пузырьков  газа  и  паров  розового  цвета. Чувствительность  реакции –

5,0 .  10-5 г/мл.

Время  обнаружения  -  3 – 5минут.

Малиновое  окрашивание после нагревания  на водяной бане. Чувствительность реакции - 8,0 . 10-4 г/мл. Время обнаружения  -

10  - 15 минут

Разработанные  методики  идентификации  для  многоатомных  фенолов  по  первому  и  второму  вариантам  также  могут  быть  применены  в  тонкослойной  хроматографии  лекарственных  средств. Помимо  предлагаемых  альтернативных  методик  идентификации, как  уже  было  отмечено  ранее,  по  второму  варианту  показана  возможность  количественного  фотометрического определения для  лекарственных  форм  резорцина, танина, пирогаллола, гидрохинона. Например,  разработаны  методики  количественного  определения  для  2 %  -  5 %  растворов  резорцина,  и  также -  для  резорцина  в  многокомпонентных  лекарственных смесях, например, в  различных  прописях  глазных  капель  с  резорцином:

1) Резорцина 0,5

  новокаина 0,5

  воды очищенной до 100,0 мл

2) Новокаина 0,5

  цинка сульфата 0,2

  резорцина 1,0

  кислоты борной 1,0

  воды очищенной до 100,0 мл

3) Раствора цинка сульфата 0,25 % - 10,0

  новокаина 0,05

  резорцина 0,1

  кислоты борной 0,2

Для  количественного  определения  резорцина  к  исследуемым  лекарственным  формам  добавляют  свежеприготовленный  10 % щелочной  раствор  гидроксиламина, затем – 30 % раствор  кислоты  уксусной  до  появления  зеленого  окрашивания.  Установлено, что  в  этих  условиях  закон  Бера  соблюдается  в  пределах  концентраций  резорцина  40,0 – 800,0 мкг/мл. Такие  методики  нашли  применение  в  количественном  определении  ряда  других  производных  многоатомных  фенолов,  где  рН  реакционной  смеси  составляет  2,5. Результаты  исследований, также  с  учетом  параметров  валидации, представлены  в  таблице 20.

ТАБЛИЦА  20.

Результаты  исследования  многоатомных  фенолов  с  10 %  щелочным  раствором  гидроксиламина, после  подкисления.

Соединение

Цвет  продуктов реакции.

Пределы  количественного  определения (соблюдение  закона  Бера,  в  мг/мл).

Резорцин.

Зеленый.

0,04  -  0,85

Флороглюцин.

Розовый.

0,03  -  0,9

Пирогаллол.

Желтый.

0,02 -  0,8

Танин.

Красно-коричневый.

0,035  - 0,85

Адреналина  гидрохлорид.

Желтый.

0,38 - 1,45

Гидрохинон.

Коричневый.

0,05 - 1,15

Арбутин.

Оранжевый.

0,25 - 1,55

  Также  изучались  некоторые  хроматографические  и  оптические  характеристики  полученных  продуктов  взаимодействия  с гидроксиламином,  в  таких  условиях. Очевидно,  могут  представлять  интерес  унифицированные  методики  установления  подлинности  соединений, производных  многоатомных  фенолов  методом  ТСХ,  где  в  качестве  детергента  применен  10 %  щелочной  раствор  гидроксиламина. Было  исследовано  влияние  подвижных  фаз (ПФ)  различного  состава  на  подвижность  исследуемых  соединений. Для  целей  разделения  и  идентификации  препаратов  рекомендованы  ПФ  кислого  характера, а  именно -  н-бутанол – кислота  уксусная – вода (10:1:9);  н-бутанол – кислота уксусная – вода (12:3:5); н-пропанол – кислота  уксусная - вода (10:1:9). Предложена  альтернативная  методика  ТСХ-обнаружения  изучаемых  соединений, которая  значительно  превышает  существующие  прототипы, по  своей  чувствительности  определения.

II)  Лекарственные  средства, производные  конденсированных

одноатомных  фенолов.

Разработаны методики  идентификации  для  конденсированных  одноатомных  фенолов: для  хинозола  и  витамина «Е» или  токоферола  ацетата.  Лекарственные  вещества,  очевидно,  дают  полиметиновый  краситель  при  взаимодействии  с  10 %  щелочным  раствором  гидроксиламина, в  сочетании  с  дальнейшим  подкислением  16 %  раствором  кислоты  азотной. Например,  в  случае  хинозола,  по  соседству  с  гетероатомом  азота,  может  происходить  раскрытие  шестичленного  цикла,  с  образованием  альдегидной  группировки.  Затем  идет  реакция  конденсации  полученного  производного  альдегида  с  производным  ароматического  амина,  с  дальнейшим  образованием  полиметинового  красителя,  имеющего  зеленое  окрашивание (рН  среды =  2,5). 

П  р  и  м  е  р : 0,04 г лекарственного  вещества  растворяют  в  10,0 мл  воды  очищенной, затем  3,0 мл  этого  раствора  переносят  в  мерный  цилиндр  на  10,0  или  15,0 мл,  добавляют  3,0 мл  10 %  щелочного  раствора  гидроксиламина. Затем  добавляют  в  реакционную  смесь  3,0 мл  16 % раствора  кислоты  азотной  и  отмечают  появление  зеленого  окрашивания.

  Разработана  методика  количественного  фотоэлектроколориметрического  определения  на  примере  0,4 %  раствора  хинозола  по  реакции  со  свежеприготовленным  10 %  щелочным  раствором  гидроксиламина,  с  последующим  добавлением  16 %  раствора  кислоты  азотной. Измерение  оптической  плотности  исследуемых  растворов  хинозола  проводили  на  приборе  фотоэлектроколориметре  КФК- 2,  в кювете  с толщиной  слоя  10 мм  (светофильтр  № 2),  используя  в  качестве  раствора  сравнения  контрольный  опыт. 

  Разработанная  методика  количественного  определения  также  находит  применение  для  анализа  лекарственных  форм  и  лекарственных  смесей,  содержащих  хинозол  в  следующих  прописях:

  1. раствор  хинозола  (1 :  3000)  -  100,0 мл;
  1. раствор  хинозола  (1 :  2000)  -  100,0 мл;
  1. раствор  хинозола  (1 :  1000)  -  1000,0мл;
  1. хинозола  0,2

талька 5,0

крахмала  5,0 

5)  хинозола  0,5 

  вазелина 10,0

Реагент  гидроксиламин,  в  определенных  условиях, также  пригоден  в  качестве  детергента  для  опрыскивания  хроматографических  пластинок  при  исследовании  конденсированных одноатомных фенолов  с применением  метода  ТСХ. Например,  разработаны  унифицированные  и  высокочувствительные  методики  установления  подлинности  для  исследуемых  лекарственных  средств  ТСХ-методом. Также  было  исследовано  влияние  подвижных  фаз  различного  состава  на  подвижность  исследуемых  соединений  и  селективность  хроматографической  системы.  Нами предложено  применение  ПФ  для  конденсированных  одноатомных  фенолов  наряду  с  многоатомными  фенолами -  кислого  характера, с  целью  разделения  и  обнаружения  исследуемых  соединений,  а  именно  -  н-бутанол  -  кислота  уксусная  - вода  (10:1:9). Результаты  исследований  представлены  в  таблице  21.

ТАБЛИЦА  21.

Результаты  определения  некоторых  производных  фенолов  ТСХ- методом.

Исследуемое

соединение.

Зоны

Окраска.

Величина  Rf

Открываемый  минимум (г/мл).

Хинозол.

Зеленовато-черноватый.

~  0,67

1,2  .  10-4

Токоферола ацетат.

Светло-зеленый.

~ 0,43

1,8  .  10-4

Резорцин.

Коричневый.

~  0,87

1,0  .  10-4

Танин.

Буровато-

красноватый.

~  0,79

1,3  .  10-5

Гидрохинон.

Желтый.

~  0,38

1,5  . 10-5

Арбутин.

Оранжевый.

~  0,22

2,6 .  10-3

ГЛАВА 4ОКИСЛИТЕЛЬНО-ВОССТАНОВИТЕЛЬНЫЕ  РЕАКЦИИ  ГИДРОКСИЛАМИНА  С  ПРОИЗВОДНЫМИ  ПИРИДИН- 4- КАРБОНОВОЙ  КИСЛОТЫ

Нами  найдено, что  изониазид, салюзид, фтивазид, метазид  вступают  в  реакцию  со  щелочным  раствором  гидроксиламина (без  последующего  подкисления).  Затем  вероятно  дальнейшее  превращение  исследуемых  соединений  в  нитрозопроизводные  и  в  азиды,  при  этом  наблюдается  характерное  окрашивание. Возможные  химические  превращения  представлены  на  схеме  реакций,  на  примере  изониазида.

П р и м е р:  0,01 г  исследуемого  лекарственного  вещества  растворяют  в  2,5 мл  воды  очищенной, затем  добавляют  2,0 мл  свежеприготовленного  10 %  щелочного  раствора  гидроксиламина, появляется  желтое  окрашивание, устойчивое  в  течение  двух  часов  (рН  среды  =  10,5). Чувствительность реакции  или  предел  обнаружения  –  1,0 . 10-4 г/мл. И также  после дальнейшего  добавления  к  полученной  реакционной  смеси  1,0 мл  3 % раствора  железа  (III) хлорида  наблюдается  переход  первоначального  окрашивания  в  красно-коричневое. Такой  способ  идентификации  обеспечивает  повышение чувствительности, специфичности  и  создает  минимальную  длительность  определения. Предлагаемая  новая  химическая  реакция, на  примере  способа  идентификации  изониазида, может  быть  использована  для  контроля  качества  продукции, выпускаемой  фармацевтическими  производствами  и  аптеками. В  качестве  РСО  взят  изониазид (ФС  42- 2081- 96). Ранее  были известны  способы  идентификации  изониазида  с  применением  других  реагентов: 2, 4 – динитрохлорбензола, аммиачного  раствора  серебра  нитрата, солей меди (II), раствора  иода  и  т.д.. В  качестве  прототипа, для  сравнения, нами  выбран  способ  обработки  изониазида  аммиачным  раствором  серебра  нитрата. Недостатками  прототипа  являются:  низкая  чувствительность,  недостаточная  специфичность  определения,  применение  дорогостоящего  и  малодоступного  реагента  -  серебра  нитрата,  необходимость  длительного  нагревания  реакционной  смеси на  кипящей  водяной  бане  и  наблюдения  фиксирования  первоначальной  неустойчивой  желтой  окраски,  переходящей  в  серую, а  затем  -  в  выделение  металлического  серебряного  зеркала.  В  таблице  22  представлены  результаты  экспериментальных  исследований.

ТАБЛИЦА  22.

Сравнительная  характеристика  способов идентификации  изониазида.

Соединение

Определение,  предел  обнаружения,  время исследования

Изониазид  (1 %

водный  раствор).

По  предлагаемому  способу.

Желтое  окрашивание. Предел  обнаружения  -  1,0 .  10-4 г/мл.

Время  исследования -

3- 5 минут.

По  прототипу.

Первоначально образуется желтоватый  осадок, при  нагревании на  водяной  бане  темнеет  и  в пробирке образуется  серебряное зеркало.

Предел обнаружения –

5,0 . 10-3  г/мл.

Время  исследования  -  25 минут.

  Предлагаемый  способ  изобретения, по  сравнению  с  прототипом,  позволяет  увеличить  чувствительность  определения  в  50 раз  и  сократить  время  исследования  в  5  раз. Нами  также  показана  возможность количественного  фотоэлектроколориметрического  определения  изониазида  в  лекарственных  формах, включая  инъекционный  раствор  изониазида  10 %  и  таблетки  изониазида  по  0,01 г. Измерение  оптической  плотности  полученных  окрашенных  продуктов  реакции  проводят  на  приборе  КФК – 2, светофильтр  № 3, в  стеклянной  кювете, толщиной  слоя  10 мм,  в  сравнении  с  контрольным  раствором (без  лекарственного  вещества). Найдено, что  закон  Бера  соблюдается  в  пределах  0,05 г/мл  -  0,4 г/мл. 

  Предлагаемые  методики  количественного  определения  хорошо  воспроизводимы, доступны, сокращают  время  анализа, по  сравнению  с  методиками, приведенными  в  нормативной  документации – иодометрическим  или  броматометрическим  определением.

  Разработанная  нами  новая  цветная  реакция  на  производные  пиридин- 4 – карбоновой  кислоты  была  использована при  исследованиях  ТСХ – методом, в  определенных  условиях. Подобран  состав  ПФ, а  именно:  н- бутанол – 10 %  раствор  аммиака (19:1).  В  таблице  23  представлены  результаты  исследования.

ТАБЛИЦА  23.

Результаты  определения  некоторых  производных  пиридин-4-карбоновой  кислоты  ТСХ-методом.

Исследуемое

соединение.

Зоны

Окраска.

Величина  Rf

Открываемый  минимум (г/мл).

Изониазид.

Желто-зеленый.

~ 0,68

0,05 .  10-4

Салюзид.

Желтый.

~ 0,15

0,03 .  10-3

Фтивазид.

Оранжевый.

~ 0,43

0,05  .  10-3

Метазид

Коричневый.

~ 0,28

0,05  .  10-3

ГЛАВА  5. ИССЛЕДОВАНИЕ  ОКИСЛИТЕЛЬНО-ВОССТАНОВИТЕЛЬНЫХ  РЕАКЦИЙ  ГИДРОКСИЛАМИНА  С  ПРОИЗВОДНЫМИ  АМИДА  ХЛОРБЕНЗОЛСУЛЬФОНОВОЙ  КИСЛОТЫ.

Объекты  исследования  -  хлорамин «Б»  и  пантоцид, применяемые  как  антисептические  лекарственные  средства.

Исследуемые  лекарственные  вещества, являясь  окислителями, активно  реагируют  со  щелочным  раствором  гидроксиламина. При  дальнейшем  подкислении  реакционной  смеси  происходит  распад  реагента  до  аммиака  и  оксидов  азота, а  исследуемых  соединений -  до  кислоты  хлорноватистой  и  соответствующих  амидов  органических  кислот, (рН  среды = 3,0):

  5 NH2OH  =  3NH3  + 2NO + 3H2O

П  р  и  м  е  р :  К  2,5 мл  1 %  раствора  хлорамина  «Б» или  пантоцида  добавляют  1,5 мл  свежеприготовленного  10 %  щелочного  раствора  гидроксиламина, затем – 1,5 мл  16 %  раствора  кислоты  серной. Появляется  зеленое  окрашивание. Чувствительность  реакции -  3,0 .  10-3  г/мл.

  Реагент - гидроксиламин  в  таких  условиях  проявляет себя  как  сильный  восстановитель, отражая  химические  процессы, очевидно, связанные  с  диспропорционированием в  присутствии  хлорамина  «Б»:

Cl2  +  2OH-  =  Cl- +  ClO- +  H2О

2NH2OH  +  HClO  =  N2 +  HCl + 3H2O

  Разработана  методика  количественного  фотоэлектроколориметрического  определения  для  5 %  раствора  хлорамина «Б». Оптическую  плотность  полученных  окрашенных  растворов  измеряют  на  фотоэлектроколориметре  КФК- 2, светофильтр  № 2, в  кювете  толщиной  слоя  10 мм,  используя  в  качестве  раствора  сравнения  контрольный  опыт (без  лекарственного  вещества). Подчинение  закону  Бера  наблюдается  в  пределах  3,7 .  10-3 г/мл  до  8,5 .  10-3 г/мл.

ГЛАВА  6. ПРИМЕНЕНИЕ  ГИДРОКСИЛАМИНА  В  ОКИСЛИТЕЛЬНО-ВОССТАНОВИТЕЛЬНЫХ  РЕАКЦИЯХ  С  ЛЕКАРСТВЕННЫМИ  ВЕЩЕСТВАМИ  НЕОРГАНИЧЕСКОЙ  ПРИРОДЫ

  Нами  изучена  реакционная  способность  гидроксиламина  в  отношении  ряда  лекарственных  веществ  неорганической  природы: иода,  натрия  и  калия  иодидов,  раствора  Люголя, кальция  гипохлорита,  калия  перманганата,  висмута  нитрата  основного, серебра  нитрата, протаргола, колларгола, железа (II) сульфата  и  натрия  нитропруссида. Найдено, что  в  определенных  условиях  гидроксиламин  может  реагировать  как  окислитель, а  именно – с  иодид- ионами  и  соединениями  железа (II). Также  реагент  может  быть  восстановителем  при  взаимодействии  в  определенных  условиях  с  иодом, гипохлоритами, перманганатом, с соединениями  висмута  и  серебра.

Реакции  неорганических  лекарственных  веществ

с  гидроксиламином  как  окислителем

Взаимодействие  натрия  и  калия  иодидов  с  гидроксиламином.

Изучено  взаимодействие  10 %  щелочного  раствора  гидроксиламина  с  натрия  и  калия  иодидами, с  последующим  добавлением  раствора  кислоты  уксусной  или  растворов  минеральных  кислот.  Известно, что  в  щелочной  среде  возможен  распад  гидроксиламина  до  натрия  нитрита, который  в  дальнейшем  способен  окислять  иодид-анион  до  свободного  иода, как  в  среде  органических, так  и  минеральных  кислот (рН  среды = 4,0). Схема  реакций:

NH2OH  +  4OH-  -  4е-  = HNO2 +  3H2О

HNO2  +  NaOH  =  NaNO2  +  H2O;

2NaNO2 + 2KI + 4CH3COOH  = 2NO + 2CH3COONa + I2 + 2H2O + 2CH3COOK;

2KI  +  H2SO4 =  K2SO4 +  2HI

2NaNO2 + H2SO4  =  2HNO2 +  Na2SO4 

2HNO2 +  2HI  =  I 2  +  2NO  +  2H2O

Взаимодействие  соединений  железа  с  гидроксиламином.  Изучено  взаимодействие  реагента  с  железа (II) сульфатом  и  натрия  нитропруссидом. Показано, что  соединения  железа (II)  активны  со  щелочным  или  аммиачным  раствором  гидроксиламина  в  сочетании  с  разными  реагентами,  где  основной  реагент  ведет  себя  как  окислитель,  согласно  схеме  реакций:

Fe2+  +  5NH2OH  = Fe3+ +  3NH3  + 2NO +  3H2O (рН среды  =  3,5),

Также  с  выделившимся  газообразным  NO  гидроксиламин  реагирует по  уравнению:

2NH2OH  +  2NO  =  N2O  +  N2 +  3H2O 

  Примеры

Методика 1. К  2,0 мл  1,5 %  раствора  железа (II) сульфата добавляют  2,0 мл 10 %  щелочного  раствора  гидроксиламина, появляется  желто-зеленое  окрашивание. Чувствительность  реакции – 3,0  . 10-4 г/мл.

Методика 2. К 2,0 мл  1,5 %  раствора  железа (II) сульфата  добавляют  4,0 мл  10 %  аммиачного  раствора  гидроксиламина  гидрохлорида. Через  3 – 5 минут  наблюдается  розовое  окрашивание  с  выделением  пузырьков  газа. Чувствительность  реакции -  2,5 . 10-4  г/мл.

Методика 3. К  2,5 мл  2 %  раствора  железа (II) сульфата  добавляют  3,0 мл  10 % щелочного  раствора  гидроксиламина, появляется  темно-синее  окрашивание, переходящее  при  добавлении  16 %  раствора  кислоты  азотной  в  красно-коричневое, а  затем - в  желто-коричневое окрашивание. Чувствительность  реакции - 1,5 . 10-4  г/мл.

Разработана  методика  количественного  фотометрического  определения  для  железа  (II)  сульфата, применяемого  для  лечения  гипохромных  анемий,  взятого  в  виде  4 %  раствора. Оптическую  плотность  полученных  растворов,  определяли  на  КФК- 2,  светофильтр  № 3, относительно  контрольных  растворов, в кюветах  с  толщиной  слоя  10 мм. Найдено,  что  подчинение  закону  Бера  соблюдается  в  пределах  от  0,02 г/мл  до  0,3 г/мл. 

Реакции  неорганических  лекарственных  веществ

  с  гидроксиламином  как  восстановителем

При  взаимодействии  калия  перманганата  с  гидроксиламином  образуется  первоначально  нитрит-анион,  который  затем  окисляется  до  нитрат-аниона  (рН  среды  =  4,5):

5NaNO2 +  2KMnO4  +  3H2SO4  =  5NaNO3  +  2MnSO4 + K2SO4 +  3H2O

При  взаимодействии  иода  с  гидроксиламином  происходит  реакция, в  которой  реагент  участвует  в  реакции  как восстановитель, согласно  схеме  реакций (рН  среды = 2,5):

NH2OH . HCl  +  2I2 +  NaOH  =  HNO2 + 4HI  + NaCl

В  уксуснокислом  растворе  гидроксиламин  окисляется  иодом  активнее, чем  в  растворах  минеральных  кислот.

В  медицине  применяют  серебра  нитрат  и  коллоидные  препараты  серебра: протаргол  и  колларгол. Найдено, что  при  взаимодействии  соединений  серебра  с  аммиачным  раствором  гидроксиламина, в  сочетании  с предварительным  подкислением,  возможно  восстановленние  соединений  серебра  до  металлического  серебра,  при  этом  происходит  распад  реагента  до  азота  ( рН среды = 4,5). 

  Схема  реакций:

2AgNO3  +  2NH3 . H2O  =  2AgOH  + 2NH4NO3

2AgOH  = Ag2O  +  H2O 

Примеры.

Методика 1. К  2,0 мл  2 %  раствора  серебра  нитрата  добавляют  1,0 мл  16 %  раствора  кислоты  серной  и  2,0 мл  10 %  аммиачного  раствора  гидроксиламина. Через  3 – 5 минут  наблюдается  выделение  осадка  сиреневого  цвета, постепенно  приобретающего  сероватый  оттенок. Чувствительность  реакции -  7,5 .  10-4 г/мл.

Методика 2.  К  2,0 мл  1 %  раствора  протаргола  или  колларгола  добавляют  по  1,0 мл  16 %  раствора  кислоты  серной  и  по  1,5 мл 10 %  аммиачного  или  щелочного  раствора  гидроксиламина. Появляется  коричневое  окрашивание, переходящее  в  желтое. Чувствительность  реакции  для  протаргола  -  9,0 .  10-4  г/мл, а  для  колларгола  -  3,5 .  10-4  г/мл.

В  таких  условиях, наряду с  распадом  гидроксиламина, лекарственные  вещества  также  ведут себя  либо - как  окислители,  либо – как  восстановители, также  как  и  применяемый  основной  реагент.

ГЛАВА  7. ЭКСПРЕСС - АНАЛИЗ  С  ЦЕЛЬЮ  ВЫЯВЛЕНИЯ  ФАЛЬСИФИЦИРОВАННЫХ  ЛЕКАРСТВЕННЫХ  СРЕДСТВ. (ЛЕКАРСТВЕННЫЕ  СРЕДСТВА, ПРОИЗВОДНЫЕ  ФЕНОТИАЗИНА).

Оборудование  и  условия  испытаний.

Для  исследуемых  лекарственных  средств, производных  фенотиазина, с  целью  выявления  фальсифицированных  лекарственных  средств, предложено  применение  разработанных  нами  качественных  химических  цветных  реакций,  в  том  числе - с  применением ТСХ-методов. Также  использованы  физико-химические  методы  анализа,  включая  ИК-спектроскопию  и  УФ-спектрофотометрию.

В  работе  использовали  однолучевой  интерференционный  ИК-спектрофотометр  Инфрафлюм  ФТ-02  (НПФ  «ЛЮМЕКС», Россия). Параметры  записи  спектров: диапазон  4000 – 400 см-1 , разрешение  1 см -1 , циклическая  запись  с  количеством  сканов  20, аподизация  стандартная.  Управление  прибором  и  обработку  спектров  осуществляли  с  использованием  программы  «Спектралюм» (НПФ  «ЛЮМЕКС», Россия). В  работе  использовали  также  однолучевой  спектрофотометр  СФ- 103 (Аквилон, Россия). Управление  прибором  осуществляли  с  использованием  программы  «Спектр» (Аквилон, Россия). Спектры  получали  в  интервале  длин  волн от  200 до 760 нм. В  качестве  раствора  сравнения использовали  соответствующий  растворитель.

Хроматографирование  проводили  на  пластинках  «Сорбфил»  размером  10х10 см (ТУ  26-11-17-89, ЗАО «Собполимер», г. Краснодар). На  линию  старта  пластин  с  помощью  микрошприца  наносили  5 мкл  спиртового  раствора  (5 мкг  действующего  вещества),  при  нанесении  проб  расстояние  между  пятнами – 2 см, на  каждую  пластину  наносили  до  4  растворов. Сушку  проб  осуществляли  с  помощью  устройства  для  сушки  пластин УСП-1 (ЗАО «Собполимер», г. Краснодар)  при  температуре  около 70о С.  Использовали  стеклянную  хроматографическую  камеру размером  150х120х80 мм. Насыщение  камеры  парами  ПФ  проводили  в  течение  20 минут. Пробег  фронта  растворителя составлял  8,5 см. Проявление  пятен  производных  фенотиазина  проводилось  либо  в  свете  УФ-лампы (при  254  и  365 нм)  облучателя  хроматографического  УФС  254/365 (ЗАО  «Собполимер», г. Краснодар), либо  -  опрыскиванием  10 %  щелочным  раствором  гидроксиламина с  последующим  опрыскиванием  16 %  раствором  кислоты  азотной, и  после  высушивали  хроматографическую  пластину  в  течение  5 – 10 минут  на  воздухе.

Результаты  исследования.

Цель  работы - разработка  методик  анализа  среди  производных  фенотиазина,  позволяющих  выявить  фальсифицированные  лекарственные  препараты. Рекомендуемые  методики  положены  в  основу  предлагаемых  способов  обнаружения  исследуемых  лекарственных  веществ. Такое  сочетание  позволяет  с  достаточной  степенью  достоверности  подтвердить  наличие  или  доказать  отсутствие  в  лекарственном  средстве  действующего  вещества,  указанного  на  упаковке.

Для  проведения  экспресс-анализа  совместно  применяются  качественные  химические  реакции  и  метод  ТСХ (результаты  исследований  см. на  10-15 страницах, и – на  24-25 страницах). Одновременное  применение  этих  аналитических  подходов  позволяет  с  большой  вероятностью  определить  факт  подделки.

  В  настоящей  работе  также  использованы  ИК-спектры  и  УФ- спектры  производных  фенотиазина. Методы  ИК- и  УФ-спектроскопии  позволяют  практически  однозначно  установить  подлинность  лекарственного  средства. При  несовпадении  ИК- спектра  или  УФ-спектра  испытуемого  препарата  со  стандартным  спектром  можно  предположить  о  том,  что  исследуемый  образец не  содержит  указанное  на  упаковке  действующее  вещество.

  ИКспектроскопия.

  Пробоподготовку  осуществляли  путем  диспергирования  испытуемых  лекарственных  средств  в  вазелиновом  масле. 

  Интерпретация  ИК-спектров.

  Найдены  общие  характеристические  полосы  поглощения  производных  фенотиазина  в  областях  3375-  3620 см-1; 2910 – 2940 см –1; 1600 – 2420 см-1; 145 – 1470 см-1  и  740 – 780 см-1, обусловленных  ароматической  структурой  препаратов. Основное  отличие  10-ацилпроизводных  фенотиазина  (фторацизин, этмозин, этацизин) от  10-алкилпроизводных  заключается  в  наличии  характеристических  полос  поглощения  с  максимумами  поглощения  при  1680 см-1, 1675 см-1, 1665 см-1  и  1660 см-1, обусловленных  амидным  карбонилом  в  10  положении. ИК-спектры  препаратов, содержащие  во  2 положении  трифторметильную  группу  (фторацизин, трифтазин, фторфеназин) характеризуются  высокоинтенсивными  колебаниями  в  областях 1160 и  1260 см-1, 1000 и  1245 см-1, 1170 и 1245 см -1.Органически  связанный  атом  хлора  в  аминазине, нонахлазине, этаперазине  обуславливает  наличие  максимумов  поглощения  в  областях  750 и  770 см-1. ИК-спектры  субстанций  и  препаратов  совпадали.

УФ спектрофотометрия

УФ-спектры 10-алкилпроизводных  сущетвенно  отличаются  от 

УФ-спектров  10-ацилпроизводных  фенотиазина. УФ-спектры  исследуемых  соединений  (концентрации  5 мкг/мл) измеряли  в  воде  очищенной, в  УФ-спектроскопии, как  и  в  ИК-спектроскопии проводили  сравнение  исследуемых  образцов  со  спектрами  РСО.

УФ-спектры  10-алкилпроизводных фенотиазина имеют  по  две характерных  полосы  поглощения  (при  242 – 261 нм  и  при  279 -  315 нм), в  то  время  как  для  10- ацилпроизводных  характерна  лишь  одна  полоса  поглощения (при  258  -  269 нм). Имеют  место батохромные  сдвиги  максимумов  поглощения  10-ацилпроизводных фенотиазина, по  сравнению  с  10 – алкилпроизводными. Результаты  исследований  представлены  в  таблице  24.

ТАБЛИЦА 24.

Основные  спектральные  характеристики  электронных  полос  поглощения  УФ-спектров  производных  фенотиазина  в  воде  очищенной.

Лекарственное вещество

Главный максимум поглощения

Оптическая плотность

Удельный показатель экстинкции

Молярный показатель экстинкции

10-алкилпроизводные  фенотиазина

Аминазин

255

305

0,814

0,112

815

113

28900

4010

Дипразин

250

300

0,870

0,104

875

104

27920

3337

Пропазин

250

300

0,935

0,122

937

122

29990

3910

Динезин 

250

300

0,845

0,105

841

105

28350

3520

Этаперазин 

255

306

0,583

0,084

585

86

25710

3700

Фторфеназин

257

307

0,700

0,076

607

76

28808

3607 

Трифтазин 

256

305

0,878

0,070

571

75

27100

3300

Тиоридазин

261

315

0,878

0,135

881

133

35691

5487

10ацилпроизводные  фенотиазина

Фторацизин

260

0,329

318

14168

Нонахлазин

262

0,290

290

14456

Этмозин

269

0,365

365

17649

Этацизин

260

0,243

243

9681

Для  обнаружения  фальсифицированных  лекарственных  средств,  не  содержащих  на  упаковке  действующего  вещества,  указанного  на  этикетке, и  содержащих  действующие  вещества,  указанные  на  этикетке, следует  использовать  следующие  методы  установления  подлинности:  простые  качественные  реакции, ТСХ, ИК-  и  УФ- спектроскопию.

На  основании  рекомендаций  ВОЗ  и  наших  собственных  исследований  нами  предлагается  комплексный  подход  к  обнаружению  фальсифицированных  лекарственных  средств  среди  производных  фенотиазина  с  использованием  современных  аналитических  методов.

ВЫВОДЫ

  1. Проведены  детальные  экспериментальные  и  теоретические  исследования  реакций  окислительно - восстановительного  характера  на  разнообразные  группы  лекарственных  веществ  с  реагентом  -  гидроксиламином,  учитывая  его  разнообразный  окислительно – восстановительный  потенциал. Показано  и  подтверждено, что  гидроксиламин  в  определенных  условиях  является  донором  оксидов  азота.
  2. Впервые  изучены,  разработаны  и  предложены  новые  цветные  реакции  для  идентификации  и  показана  возможность количественного  определения  в  лекарственных  формах  среди  соединений  органической  и  смешанной  природы, с  применением  щелочного  раствора  гидроксиламина, а  именно: для  производных  фенотиазина; для  многоатомных  и  некоторых  одноатомных  фенолов; для  производных  пиридин-4-карбоновой  кислоты; для  производных  амида  хлорбензолсульфоновой  кислоты  и  т.д..
  3. На  основании  предложенной  цветной  реакции  на  10-алкилпроизводные  и  10-ацилпроизводные  фенотиазина  для  12  лекарственных  средств  разработан  новый  способ  качественного  определения. Показано, что  процесс  окисления  проходит  в  2  стадии. Применен  метод  латинских  квадратов  как  метод  математического  планирования  эксперимента  при  выборе  оптимальных  условий  определения. Для  аминазина, дипразина, пропазина, этаперазина, динезина, фторацизина, нонахлазина, этмозина  показана  возможность количественного  фотометрического  определения  в  лекарственных  формах. Разработанные  методики  определения  просты, доступны, отличаются  быстротой, высокой  чувствительностью  и  групповой  специфичностью  определения, также  могут  быть  использованы  в  тонкослойной  хроматографии  и  количественном  определении.
  4. Впервые  доказана  возможность  получения  индофеноловых  красителей  для  10 лекарственных  средств, производных  многоатомных  фенолов, с  применением  в  качестве  реагента  щелочного  раствора  гидроксиламина. Разработаны  методики  идентификации  с  применением  тонкослойной  хроматографии  для  лекарственных  средств, производных  многоатомных  фенолов  также  в  лекарственном  арбутин-  и  рутин-содержащем  растительном  сырье.  Показана  возможность  количественного  фотометрического  определения  в  лекарственных  формах  для  резорцина, гидрохинона, танина.
  5. Изучены  условия  образования  продуктов  нитрозирования  и  нитрования  для  многоатомных  фенолов. Показано, что  течение  реакций  зависит  от  условий  предварительного  распада  гидроксиламина, ряда  физико-химических  факторов: рН  реакционной  смеси, химического  строения  исследуемых  соединений.
  6. Разработаны  методики  идентификации  и  показана  возможность количественного фотометрического  определения  для  лекарственных  форм  хинозола. В  основе  химических  процессов  предложено  образование  полиметинового  красителя, связанного  с  частичным  распадом  и  окислением  препарата, применяемого  реагента  и  последующей  конденсацией  до  получения  окрашенного  соединения.
  7. На  основании впервые  разработанной цветной  реакции  на  изониазид  и  другие  производные  пиридин-4-карбоновой  кислоты  предложены  доступные  и  высокочувствительные  методики  идентификации  с  применением  щелочного  раствора  гидроксиламина (без  последующего  подкисления). Для  изониазида  показана  возможность  количественного  фотометрического  определения  в  лекарственных  формах.
  8. Разработаны  и  изучены  методики  идентификации  и  количественного  определения  производных  бензолсульфохлорамида,  а  именно – хлорамина «Б»  и  пантоцида. Предложенные  методики  анализа  отличаются  экономичностью, простотой  и  быстротой  выполнения.
  9. Разработаны  методики  идентификации  и  количественного  определения  для лекарственного  средства -  железа (II)  лактата. Методики  определения  отличаются  доступностью  и  экономичностью.
  10.   Изучены  условия  взаимодействия  гидроксиламина  с  лекарственными  средствами  неорганической  природы. Предложены  оптимальные  условия  определения  иода, натрия  и  калия  иодидов,  кальция  гипохлорита, калия  перманганата, висмута  нитрата  основного, железа (II) сульфата. Показано, что  определяющим  фактором  в  подобных  окислительно-восстановительных  реакциях  является  последовательность  добавления  применяемых  реагентов. Для  железа (II) сульфата  показана  возможность  для количественного  фотометрического  определения  в  лекарственных  формах.
  11. Разработаны унифицированные  методики  идентификации лекарственных  средств  неорганической  природы, имеющих  комплексное  строение, с  применением  в  качестве  реагента  гидроксиламина,  а  именно – для  растворов  Люголя, Несслера, протаргола, колларгола, натрия  нитропруссида, где,  вероятно, имеют  место  твердофазные  явления  осаждения, наряду  с  окислительно- восстановительными  процессами.
  12. Предложен комплекс  химических  реакций  и  физико-химических  характеристик  производных  фенотиазина  для  выявления  возможных  фальсифицированных  лекарственных  средств, соединений  данной  группы.

СПИСОК  РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ  ПО  ТЕМЕ

ДИССЕРТАЦИИ

  1. А.С. 1789846  СССР, МКИ3  G 01 № 21/ 78. Способ  идентификации

двух- и трех-атомных  фенолов. / Кувырченкова И.С.,

Печенников  В.М., Митрягина  С.Ф., Садчикова  Н.П.. (СССР) -  2с.:

ил..

  1. А.С. 1286970  СССР, МКИ3  G 01 № 21/ 78. Способ  идентификации  производных  фенотиазина. / Прокофьева  В.И., Митрягина С.Ф., Егоренкова Г.И., Садчикова  Н.П., Кирпичева  Э.И., Глушакова  В.П., Фалина  Р.И., Кувырченкова  И.С.. (СССР) – 2с.: ил..
  2. Патент  RU  №  2249200. Способ  идентификации  изониазида.  / Кувырченкова И.С., Арзамасцев  А.П., Митрягина  С.Ф.. Опубл. 27.03.2005г.. Бюлл .№ 9.
  3. Кувырченкова  И.С., Прокофьева В.И., Чернова  С.В. и  др. Использование  хроматографических  и  экстракционно-фотометрических  методов  определения  некоторых производных  фенотиазина в биофармацевтических  исследованиях. // Сборник «Актуальные  проблемы  фармации». – М.,1981. – С.70-72.
  4. Аксенова  Э.Н., Арзамасцев  А.П., Брутко  Л.И., Кувырченкова И.С.  и  др.  Исследования  в  области  анализа  производных  фенотиазина (фотометрия  в  видимой  области  спектра). //Сборник  ВНИИМИ  «Современные  физико-химические  методы  анализа  лекарственных  препаратов.» - М.,1981. – Выпуск 1.- С.12-15.
  5. Прокофьева  В.И., Кувырченкова  И.С., Сенов  П.Л. Применение  цветной  реакции  для  качественного  определения  производных  фенотиазина  и  фотометрического  определения  этмозина. // Научные труды  НИИФ  «Физико-химические  методы  анализа  лекарств».  – М.,1984.- Т.XII. – С.146-152.
  6. Арзамасцев  А.П., Прокофьева  В.И., Чернова  С.В., Кувырченкова  И.С. Унифицированная  методика  для  дифференциации  восьми  лекарственных  средств  алкильных  производных  фенотиазина  методом  тонкослойной  хроматографии.  // Тез. докл. II съезда  фармацевтов  Молдавии. – Кишинев,1985. - С.86-88.
  7. Дмитриев С.В., Кувырченкова  И.С., Фетисов  А.И. Применение  физико-химических  методов  анализа при  исследовании  арбутина.  // Рукопись  депонирована  в  ВИНИТИ  от  4.02.1988г.- № 939 – В 88. – М.,1988. - 8С.
  8. Кувырченкова  И.С., Дмитриев  С.В. Применение  цветных  реакций  для  качественного  и  количественного  определения  арбутина  в  листьях  брусники.  //Рукопись  депонирована  в  ВИНИТИ  от  13.10.1989г. - № 7379 – В 89. – М.,1989. -  8С.
  9. Кувырченкова  И.С., Прокофьева  В.И., Трофимов А.Р.,  Родионова  Г.М. Применение  метода  латинских  квадратов  в  определении  этмозина  с  использованием  новой  цветной  реакции.  // Актуальные  вопросы  фармацевтической  науки  и  практики: Тез. докл. научно-практ. конф., посвящ. 25- летию  фарм. фак. Курского  мед.института. – Курск, 1991. – Ч.2.- С.67-68.
  10. Кувырченкова  И.С., Садчикова  Н.П. Применение  химических  и  физико- химических  методов  анализа  при  исследовании  лекарственных  средств, производных  фенолов. // Рукопись  депонирована  в  ВИНИТИ  РАН  от  19.02.1993г. - № 416 – В 93. – М.,1993. – 13С.
  11. Кувырченкова  И.С., Калмыкова  Т.П., Игнатьева Н.С. Фотометрическое  определение  многоатомных  фенолов, приготовленных  из  травы  зверобоя, листьев  шалфея, цветков  календулы. // Рукопись  депонирована  в  НПО «Союзмединформ»  в  ГЦНМБ от  14.04.1994г. - № Д – 24025. – М.,1994.- 10С.
  12. Арзамасцев  А.П., Кувырченкова  И.С., Садчикова  Н.П.,  Митрягина  С.Ф. Новый  способ  идентификации  многоатомных  фенолов. // Фармация. – 1994. - № 2. – С.47 – 50.
  13. Кувырченкова  И.С. Применение  гидроксиламина  гидрохлорида  в  окислительно-восстановительных  реакциях  для  определения  лекарственных  веществ  резорцина  и  хлорамина «Б». //Сборник  « Актуальные  проблемы  фармации», посвященный  30-летию  фарм. фак. Тюменского мед. института. –  Тюмень, 1994. – С.64 – 66.
  14. Кувырченкова  И.С. Применение  гидроксиламина  как  окислителя  для  качественного  и  количественного  определения  аминазина.  // Казанский  медицинский  журнал. -  Казань, 1995. - № 3. – С.261 – 263.
  15. Кувырченкова  И.С. Количественный  анализ  хинозола  при  взаимодействии  со  щелочным  раствором  гидроксиламина  гидрохлорида. // Формирование  приоритетов  лекарственной  политики: Матер. докл. 28-29 июня  1995г. – М.,1995.- С.125-126.
  16. Кувырченкова  И.С. Гидроксиламин  как  общий  реагент  в  окислительно-восстановительных  реакциях  при  исследовании  различных  групп  лекарственных  средств  органической  природы.  // Формирование  приоритетов  лекарственной  политики: Матер. докл. 28-29 июня 1995г. – М.,1995.- С.126-127.
  17. Кувырченкова  И.С. Фотометрическое  определение  пропазина  с  использованием  щелочного  раствора  гидроксиламина  гидрохлорида.  //Сборник «Актуальные  проблемы фармации.» - Барнаул,1995.– С.81-85.
  18. Арзамасцев А.П., Кувырченкова И.С., Садчикова Н.П. и  др. Применение  новой  цветной  реакции  для  качественного  и  количественного  определения  дипразина.// Фармация. - 1996. - № 1. -  С.12-15.
  19. Кувырченкова  И.С. Применение  щелочного  раствора  гидроксиламина гидрохлорида  для  качественного  и  количественного  фотометрического  определения  этаперазина. // Научные  труды  НИИФ «Актуальные  проблемы  фармацевтической  химии». – М.,1996. – Т.XXXV. – С.42-47.
  20. Арзамасцев  А.П., Кувырченкова И.С., Садчикова Н.П., Митрягина  С.Ф. Применение  гидроксиламина  гидрохлорида  в  окислительно-восстановительных  реакциях  с  лекарственными  веществами  неорганической  природы. //Фармация. – 1996. - № 3. – С.31-34.
  21. Арзамасцев  А.П., Кувырченкова  И.С., Садчикова  Н.П., Митрягина  С.Ф. Применение  нитрогидроксиламината  натрия  для  определения  лекарственных  веществ  различных  химических  групп.- // Сборник  трудов  «Современное  состояние  и  перспективы  научных  исследований  в  области  фармации».  – Самара,1996. – С.77-78.
  22. Кувырченкова  И.С. Новые  окислительно-восстановительные  реакции  в  фармацевтическом  анализе  с  применением  гидроксиламина  гидрохлорида.  //Человек  и  лекарство: Тез. докл. IV Росс. нац. конгр. – М.,1997.- С.68.
  23. Кувырченкова  И.С. Применение  щелочного  раствора  гидроксиламина  гидрохлорида  как  окислителя  для  фотометрического  определения  фторацизина. // Научные  труды  НИИФ «Фармацевтическая  наука  и  практика  в  новых – социально-экономических  условиях». – М.,1997. – Т.XXXVI. – Ч.II. – С.48-53.
  24. Арзамасцев  А.П., Кувырченкова  И.С., Садчикова  Н.П. и  др. Использование  гидроксиламина  гидрохлорида  в  окислительно-восстановительных  реакциях  с  лекарственными  веществами  органической  природы. // Фармация. – 1997. - № 4. – С.21-23.
  25. Кувырченкова  И.С. Разнообразные  варианты  применения  щелочного  раствора  гидроксиламина  гидрохлорида  -  реагента  окислительно-восстановительного  и  кислотно-основного  характера  в  фармацевтическом  анализе. //Фармацевтическая  биоэтика: Матер. междунар. конф., посвящ. 850-летию г. Москвы. – М.,1997.-С.40-41.
  26. Кувырченкова  И.С. Новые  способы  нитрозирования  и  нитрования  лекарственных  средств, производных  фенолов. // Человек  и  лекарство: Тез. докл. V Росс. нац. конгр. – М.,1998. – С.655.
  27. Кувырченкова  И.С. Количественное  фотометрическое  определение  изониазида  с  применением  щелочного  раствора  гидроксиламина  гидрохлорида. // Человек  и  лекарство: Тез. докл. V Росс. нац. конгр. – М.,1998. – С.655.
  28. Кувырченкова  И.С.  Фотометрическое  определение  нонахлазина  с  применением  щелочного  раствора  гидроксиламина  гидрохлорида  как  окислителя. // Научные  труды  НИИФ «Фармацевтическая  наука  в  решении  вопросов  лекарственного  обеспечения». – М.,1998. – Т.XXXVII. – Ч.II. – С.56-61.
  29. Арзамасцев  А.П., Кувырченкова  И.С., Садчикова  Н.П., Митрягина  С.Ф. Применение  гидроксиламина  гидрохлорида  в  реакции  нитрозирования  лекарственных  веществ, производных  многоатомных  фенолов. // Фармация. – 1998. -  № 3. – С.35-36.
  30. Кувырченкова  И.С. Способы  превращения  реагента  гидроксиламина  гидрохлорида  с  дальнейшим  применением  в  фармацевтическом  анализе. //Человек  и  лекарство: Тез. докл. VI Росс. нац. конгр. – М.,1999. – С.427.
  31. Кувырченкова  И.С.  Количественное  фотометрическое  определение  тиоридазина  с  применением  щелочного  раствора  гидроксиламина  гидрохлорида  как  окислителя.  // Научные  труды  НИИФ  «Современные  проблемы фармацевтической  науки  и  практики». -  М.,1999. -  Т. XXXVIII. -  Ч. II. -  С.61-64. 
  32. Кувырченкова  И.С. Количественное  фотометрическое  определение  железа  закисного  сульфата. // Человек  и  лекарство: Тез. докл. VII  Росс. нац. конгр. – М.,2000. -  С.612.
  33. Кувырченкова  И.С. Применение  щелочного  раствора  гидроксиламина  гидрохлорида по  типу  химических  реакций в  фармацевтическом  анализе.  //Человек  и  лекарство: Тез. докл. VII Росс. нац. конгр. – М.,2000. – С.612-613.
  34. Кувырченкова И.С. Гидроксиламина  гидрохлорид  как  универсальный  реагент  в  фармацевтическом анализе. //Фармация. –2001.- № 2.– С.39-41.
  35. Кувырченкова  И.С. Количественное  фотометрическое определение  гидрохинона. //Человек  и  лекарство: Тез. докл. VIII Росс. нац. конгр.  – М.,2001. – С.695.
  36. Кувырченкова  И.С., Митрягина  С.Ф. Применение  некоторых  модифицированных  типов  химических  реакций  в  анализе  лекарственных  веществ  с  использованием  щелочного  раствора  гидроксиламина  гидрохлорида  как  реагента  окислительно-восстановительного  характера. // Человек  и лекарство: Тез. докл. IX  Росс. нац. конгр. – М., 2002. – С.640-641.
  37. Кувырченкова  И.С., Митрягина  С.Ф. Применение  гидроксиламина  гидрохлорида  в  анализе  лекарственных  средств.  Книга под редакцией  академика  РАМН, профессора  А.П. Арзамасцева.  -  М.: Издательство  ПБОЮЛ  Чернюгов  Л.И.  (Художественно-полиграфический салон  «Leon-XXI»),  2002. -  101с.
  38. Кувырченкова  И.С. Применение  гидроксиламина  гидрохлорида  как  окислителя  в  тонкослойной  хроматографии  лекарственных  средств. //Человек  и  лекарство: Тез. докл. X Росс. нац. конгр. -  М., 2003. – С.725.
  39. Кувырченкова  И.С., Митрягина  С.Ф. Окислительно-восстановительное  преимущество  гидроксиламина  гидрохлорида  как  реагента  перед  другими  типами  химических  реакций  в  фармацевтическом  анализе.  // Человек  и  лекарство: Тез. докл. X Росс. нац. конгр. – М., 2003. – С.725-726.
  40. Кувырченкова  И.С. Применение  гидроксиламина  гидрохлорида  для  качественного  и  количественного  фотометрического  определения  динезина  в  фармацевтическом  анализе.  //Человек  и  лекарство:  Тез. докл. XI Росс. нац. конгр. – М., 2004. – С.29.
  41. Кувырченкова  И.С. Исследование  спектральных  характеристик  при  взаимодействии  производных  фенотиазина  с  окислителем гидроксиламина  гидрохлоридом  в  фармацевтическом  анализе.  //Человек  и  лекарство:  Тез. докл. XII  Росс. нац. конгр. – М., 2005. – С.154-155.
  42. Кувырченкова  И.С.  Тонкослойная  хроматография  с  применением  реагента  окислителя  гидроксиламина  в  анализе  ряда  лекарственных  веществ, производных  фенолов.  //Человек  и  лекарство:  Тез. докл. XIII Росс. нац. конгр.- М.,2006. – С.709-710.
  43. Кувырченкова  И.С. Методики  анализа  производных  фенотиазина.  //Фармация. -  2006. - № 6. – С.18-21.
  44. Кувырченкова  И.С. Применение  тонкослойной  хроматографии  в  исследовании  продуктов  окисления  некоторых  производных  фенотиазина.  // Человек  и  лекарство:  Тез. докл. XIV Росс. нац. конгр. – М., 2007. – С. 296.
  45. Кувырченкова  И.С.  Применение  метода  высокоэффективной  жидкостной  хроматографии  в  исследовании  продуктов  окисления  производных  фенотиазина  при  взаимодействии  с  гидроксиламином.  // Человек  и  лекарство:  Тез. докл. XIV Росс. нац. конгр. – М., 2007. – С.296-297. 

 






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.