WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

Сафонова Виктория Юрьевна

ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА

СОСТОЯНИЯ ОБЛУЧЕННЫХ ЖИВОТНЫХ  И СПОСОБЫ ПОВЫШЕНИЯ РАДИОРЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА

16.00.02 –  патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора биологических наук

Оренбург-2009

Работа выполнена на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы и заразных болезней ФГОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет»

Научный консультант:  заслуженный ветеринарный врач РФ,

доктор ветеринарных  наук, профессор

Жуков Алексей Петрович

Официальные оппоненты:  заслуженный деятель науки РФ,

доктор биологических наук, профессор

Шевченко Борис Петрович

заслуженный деятель науки РФ,

лауреат премии Правительства РФ,

доктор биологических наук, профессор

Левахин Владимир Иванович

доктор биологических наук, профессор

Сидорова Клавдия Александровна

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии  им. К.И.Скрябина»

Защита диссертации состоится 24 декабря 2009 года  в 10.00 часов на заседании диссертационного совета ДМ220.051.01  при ФГОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет» (460795, г. Оренбург, ул. Челюскинцев, 18).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет».

Автореферат разослан

Ученый секретарь

диссертационного совета,

профессор Р.Ш.Тайгузин

1 ВВЕДЕНИЕ



Актуальность темы. Источники ионизирующих излучений рассматриваются как существенные факторы загрязнения окружающей среды, что связано с интенсивным развитием атомной промышленности и ядерной  энергетики, с широким применением меченых атомов и ионизирующих излучений в биологии, в медицинской и ветеринарной практике.  Все это и возможные аварии на предприятиях ядерного топливного цикла и их последствия вызывают необходимость проведения фундаментальных  и прикладных исследований по проблеме  влияния радиоактивных излучений на организм животных и человека. Данная проблема определяет ряд актуальных научных направлений, связанных с изучением механизма первичного биологического действия радиации в патогенезе острой и хронической лучевой болезни. С  установлением величин предельно допустимых и переносимых доз внешнего и внутреннего облучения, с разработкой методов и способов повышения радиорезистентности  организма и многие другие вопросы (Шарецкий А.Н., Абрамова М.Р., 2005;  Аклеев А.В., Веремеева Г.А., Возилова А.В., 2006; Москалев А.А., 2008; P.W. Phipps et al., 2006).

Воздействие малых доз на организм животных и человека представляется наиболее возможным в современных условиях развития и применения радиационных технологий. О важности проведения исследований в этом направлении отмечается в решении  V съезда по радиационным исследованиям (2006),  на международных конференциях и работах зарубежных ученых (Алексахин Р.М., 2008; Cuttler J.M., 2007). Лучевые проявления хронического радиационного воздействия низкой интенсивности имеют сложный характер, так как длительное повреждение клеток сочетается одновременно с процессами репарации в них. Скорость протекания этих реакций определяется многими факторами – продолжительностью облучения, его характером, мощностью дозы, чувствительностью клеточных, тканевых систем, видом и возрастом животных и т.д. (Аклеев А.В., Алещенко А.В., Готлиб В.Я. и др., 2004; Ярмоненко С.П., 2006). Имеются противоречивые данные по механизму биологического действия пролонгированного воздействия радиации малой мощности (Жербин Е.А., Чухловин А.Б., 1989; Бурлаков Е.Б. и др.,  1996; Насонова Е.А. и др., 2006;  Бурлакова Е.Б. и др., 2006; Аклеев А.В. и др., 2006; Москалев А.А., 2008). В связи с этим данный вопрос является актуальным как по причине его важности, так и по причине недостаточной изученности. 

Острые лучевые повреждения, вызываемые однократным облучением более предсказуемы, но, тем не менее, внутренний механизм их развития, обусловленный цепочкой последовательно развивающихся физических, физико-химических, химических, биологических преобразований также зависит от многих факторов, включая и условия облучения (Кудряшов Ю.Б., 2004). К таковым можно отнести внешнее и внутреннее облучение. В механизм биологического эффекта радиации вовлекаются все системы организма, и в первую очередь кровеносная и иммунная (Ярилин А.А., 1980;  Петров Р.В., 1983; Орадовская И.В., 2006). При этом отдельные реакции, проявляемые со стороны этих систем, в зависимости от условий облучения, до сих пор остаются мало изученными.

Изучение механизма биологического действия радиации определяет следующую, не менее важную проблему, связанную с профилактикой и терапией лучевой патологии. (Решение V съезда по радиационным исследованиям, 2006). Формирование радиорезистентности организма много лет осуществлялось с помощью применения различных фармакохимических соединений (радиопротекторов), которые вводятся за небольшой промежуток времени до облучения, и часто обладают токсическим эффектом. Для преодоления этого недостатка большое развитие получает перспективное направление составления рецептур из комбинации двух или нескольких радиопротекторов, позволяющих снижать токсичность одного препарата с помощью другого (Владимиров В.Г. и др., 1988; Гончаренко Е.Н., Кудряшов Ю.Б., 1996; Грачев С.А. и др., 1999). Для решения этой задачи есть основания обратиться к биологически активным веществам природного происхождения (Кудряшов Ю.Б., 1989; Кудряшов Ю. Б., Гончаренко Е. Н., 1999). Среди них особый интерес вызывают  растительные препараты, и препараты, полученные из органов и тканей животных. Для повышения резистентности организма в животноводческой и  ветеринарной практике широко применяется эраконд (Байматов В.Н., 1999; 1999; 2000; Таирова А.Р., 2001; Гизатуллина Ф.Г., 2002); тимоген  (Жуков А.П., Биктеев Ш.М., 2001) и другие. Природные препараты, как правило, более доступны, не токсичны, а потому разработка  способов и методов их применения для повышения радиорезистентности организма является актуальной.

Интерес к возможности формирования адаптации к повторному облучению в больших дозах проявляется в научных задачах  вот уже несколько лет. Научные работы, проводимые в этом направлении, являются важными и существенными для настоящего времени, поскольку интерес к возможной адаптации живых организмов к воздействию радиации и к механизму ее формирования не ослабевает, а напротив возрастает (Решение V съезда по радиационным исследованиям, 2006; Аклеев А.В., 2009). Известны факты повышения радиорезистентности организма после предварительного воздействия низких доз радиации (Киршин В.А.  и др., 1984). Вместе с тем следует отметить, что используемые для этой цели дозы излучений, вызывают кратковременные изменения в картине крови. Поэтому комплексный подход к разработке способов повышения радиорезистентности,  включающий наряду с физическим фактором и применение биологических средств природного происхождения на сегодняшний день является наиболее актуальным.

Пребывание продуктивных животных на территории с повышенным радиационным фоном  вызывает следующую не менее важную проблему, связанную с их рациональным использованием. При подобных чрезвычайных ситуациях целесообразен убой на мясо (Сивохин П.А, 1990; Портнов В.С., 1993). При массовом убое животных получение сырья и продукции животноводческого происхождения будет иметь важное социальное значение. В связи с этим  изучение биологической ценности и безвредности мяса облученных животных представляется  весьма актуальным.

Указанные  причины явились побудительным мотивом для проведения данной работы.

Цель и задачи исследования.  Цель работы - изучить иммунобиологическое состояние животных при внешнем воздействии ионизирующего излучения, разработать способы  повышения радиорезистентности организма,  оценить санитарные и биологические качества мясной продукции облученных домашних животных.

Для решения поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Изучить влияние пролонгированного гамма-облучения в малых дозах низкой интенсивности на иммунобиологическое состояние животных.

2.  Изучить влияние предварительного однократного гамма-облучения в малых дозах на формирование радиорезистентности у животных к последующему летальному  воздействию  ионизирующего излучения.

3. Изучить  влияние предварительного облучения  в  сочетании с  эракондом на формирование радиорезистентности организма.

4. Изучить радиозащитные свойства флоренты в сочетании с предварительным  облучением. 

5. Изучить  комплексное радиозащитное  действие предварительного облучения и тимогена.

6.  Оценить по иммунобиологическим параметрам роль природных адаптогенов, в сочетании с предварительным облучением, на формирование радиорезистентности организма.

7. Изучить ветеринарно-санитарные показатели говядины, баранины и свинины, полученной от внешне облученных животных; определить биологическую ценность и безвредность мяса с применением нетрадиционных способов консервирования и хранения.

Научная новизна работы. Впервые изучено воздействие пролонгированного внешнего гамма-излучения в малых дозах низкой мощности на иммунобиологическое состояния крыс и свиней. Впервые изучены радиозащитные свойства биологических препаратов - эраконда, и тимогена в сочетании с предварительным облучением в малых и низких дозах. Впервые изучены радиозащитные свойства экстракта пихты сибирской как в отдельности, так и в сочетании с предварительным облучением. На примере облученных животных показано, что эраконд, флорента и тимоген обладают антиоксидантными, гемато- и иммуномодулирующими свойствами. Показана гистологическая структура внутренних органов крыс при пролонгированном воздействии внешней радиации в малых дозах  и при воздействии летальных доз на фоне применения радиозащитных способов. Приводится  ветеринарно-санитарная оценка свежего и консервированного мяса однократно и многократно облученных домашних животных  с определением его биологической ценности на растущих крысятах и с использованием культуры инфузории  Tetrahimena piriformis.

Теоретическая и практическая значимость работы

Полученные новые данные расширяют теоретические представления о механизме биологического влияния ионизирующих излучений в условиях внешнего однократного и пролонгированного низкоинтенсивного облучения в широком диапазоне доз на критические системы организма.

Исследования влияния средств физической и биологической природы на антиокислительные процессы, возникающие в клетке в период первичной реакции на облучение, а также пролиферативной активности наиболее радиочувствительных тканей  позволили обосновать и разработать способы профилактики острой лучевой болезни. Разработанные способы комплексной профилактики способствовали получению положительных клинических результатов, оцениваемых выживаемостью, средней продолжительностью жизни, а также  показателями реакции клеток костного мозга и периферической крови, показателями неспецифической и специфической защиты организма, антиоксидантной системы. По результатам проведенного анализа исследуемых показателей были выделены наиболее информативные из них, которые необходимо учитывать при оценке радиозащитных свойств различных препаратов.

На основании результатов исследований разработаны:

1. Способ физико-биологической профилактики острой лучевой болезни  (Патент РФ, № 2307898, 2007).

2. Способ профилактики острой лучевой болезни лабораторных животных (Патент РФ, № 2342099, 2008).

Разработанные способы относятся к экспериментальной медицине и радиологии и могут быть использованы в ветеринарной и медицинской онкологической практике, а также в неблагоприятных экологических условиях для повышения резистентности организма.

Результаты санитарно-биологических исследований продукции домашних животных  позволили установить, что свежее мясо, полученное от многократно облученных животных и подвергнутое консервации, соответствует требованиям установленных ГОСТов, что является важным моментом в практике получения и сохранения животноводческой продукции в условиях, связанных с чрезвычайными ситуациями.

Полученные результаты исследований внедрены:  в программу научно-исследовательских работ радиобиологического научного центра и учебный процесс  АО «Медицинский университет Астана» республики Казахстан; ГОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет» и другие. Вошли в учебные пособия для ВУЗов биологического профиля «Элементы ядерной физики и химии в биологии и ветеринарии»,  «Радиационная экология»; в учебно-методические разработки.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Иммунобиологическое состояние животных при длительном воз-действии низкоинтенсивного ионизирующего излучения в малых дозах.

2. Влияние предварительного однократного облучения в малых дозах на формирование радиорезистентности к последующему летальному воздействию радиации.

3. Радиозащитные свойства препаратов природного происхождения – эраконда,  флоренты и тимогена.

4. Эффективность применения предварительного облучения в сочетании с препаратами природного происхождения на формирование радиорезистентности  организма.

5. Антиоксидантные, иммуно- и гемомодулирующие свойства эраконда, тимогена и флоренты в условиях облученного организма.

6. Количественные и качественные показатели ветеринарно-санитарной и биологической ценности мяса, полученного от внешне облученных продуктивных животных в условиях длительного хранения  с применением консервирующих рецептур.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на: Всероссийской научно-практической конференции «Прикладные аспекты радиобиологии» (Москва, 1994);  региональной научно-практической конференции «Резервы увеличения производства и повышения качества сельскохозяйственной продукции» (Оренбург, 1994); региональной конференции молодых ученых и специалистов (Оренбург, 1997); международном координационном совещании «Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных» (Воронеж, 1997); международной научно-практической конференции «Морфология и хирургия в практической ветеринарии и медицине» (Оренбург, 1999); международной научно-производственной конференции по вопросам ветеринарии и животноводства, посвященной 70-летию зооинжинерного факультета КГАВМ (Казань, 2000); международной научно-практической конференции «Проблемы регионального управления рисками на объектах агропромышленного комплекса» (Оренбург, 2002); международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и биологии» (Оренбург, 2003); международном симпозиуме «Социально-экономические, политические и экологические проблемы в сельском хозяйстве России и стран СНГ (Оренбург, 2004); международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2004);  V конференции иммунологов Урала (Оренбург, 2006); международной конференции по патофизиологии животных (Санкт-Петербург, 2006); международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях» (Краснодар, 2006); 3-й международной научно-практической конференции «Биоразнообразие и биоресурсы Урала и сопредельных территорий». (Оренбург, 2006); международной научно-практической. конференции ветеринарных терапевтов и диагностов, посвященной 90-летию со дня рождения Заслуженного деятеля науки РСФСР, доктора ветеринарных наук, проф. Кабыша А.А. «Современные проблемы ветеринарной терапии и диагностики болезней животных» (Троицк, 2007);  международной научно-практической конференции «Роль биологии и ветеринарной медицины в реализации государственной программы развития сельского хозяйства на 2008-2012 гг.» (Оренбург, 2008); международной научно-практической конференции «Достижения современной ветеринарной науки и практики в области охраны здоровья животных» (Краснодар, 2009).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 50 научных работ (из них 12 в журналах, рекомендованных ВАК РФ для докторских диссертаций), в том числе учебное пособие с грифом МСХ РФ (18,1 п.л.),  2 патента РФ на изобретения.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 328  страницах текста компьютерного набора, состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения,  выводов, практических рекомендаций, списка  литературы и приложений. Работа содержит 63 таблицы, иллюстрирована 48 рисунками. Список литературы включает 610 источников, в том числе 115 зарубежных авторов.

2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 

Работа выполнена на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы и заразных болезней ФГОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет» в соответствии с государственным планом научно-исследовательских работ университета (№ государственной регистрации 01200105543).

Исследования проведены в экспериментальных условиях. Для достижения цели и поставленных задач в опытах были использованы белые нелинейные крысы, свиньи белой русской породы, овцы, крупный рогатый скот, культура инфузории Tetrahimena piriformis. Эксперименты проводили с соблюдением всех требований содержания лабораторных и домашних животных в условиях вивария. Лучевую патологию моделировали на гамма-установке ГУБ-20 с источником излучения Cs-137 при  мощности дозы 0,08 Гр/мин при однократном  и 0,39-1,2 мГр/час  при  пролонгированном облучении, а также  на  гамма-установке «Агат-С»,  с источником излучения Со-60 при мощности дозы 0,6 Гр/мин. Во всех условиях облучения неравномерность гамма-поля не превышала ±10%. Особенности методик отдельных исследований изложены в соответствующих разделах диссертации.

Выбор для опытов крыс  обусловлен общебиологической точкой зрения закономерностей развития радиобиологического эффекта. При одинаковых уровнях доз облучения организм крыс проявляет относительно малую степень различия радиационных эффектов, в частности, в уровнях эффективных доз для различных тканей, продолжительности жизни, изменений показателей иммунологической реактивности. Белые крысы имеют малые сезонные изменения биологических  процессов. Выбор свиней в качестве экспериментальных животных обусловлен тем, что из числа  сельскохозяйственных животных они отвечают требованиям большинству биологических, медицинских и ветеринарных исследований.

Общая схема исследований

Овцы и крупный рогатый скот и свиньи  были необходимы для получения мяса с последующей его санитарной и биологической оценкой.

Используемая в работе культура инфузории Tetrahimena piriformis является альтернативным универсальным тест-объектом для определения биологической ценности сельскохозяйственных продуктов, в частности, для определения биологической ценности и безвредности мяса.

В работе изучали наиболее информативные показатели, характеризующие степень лучевой патологии и эффективность применяемых радиозащитных средств.

Количество эритроцитов, тромбоцитов, ретикулоцитов, содержание гемоглобина, общий белок и его фракции  в периферической крови определяли общепринятыми в гематологии методами исследования  (Карпуть И.М., 1986).  Морфологическое изучение периферической крови осуществляли путем подсчета общего количества лейкоцитов, абсолютного и относительного содержания базофилов, эозинофилов, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, лимфоцитов и моноцитов; лимфоцитарный индекс (ЛИ) и лейкоцитарный индекс интоксикации (ЛИИ) - по методу, предложенному Я.Кальф-Калифом  (Ронин В.С., Рабинович И.М., 1973).  Общее количество клеток в костном мозге бедренной кости и подсчет абсолютного числа клеток различных генераций проводили по методу, предложенному  П.Д.Горизонтовым, О.И. Белоусовой, М.И. Федотовой (1983). Количество  Т- и В-лимфоцитов в периферической крови подопытных животных определяли, соответственно методами  Е-PОK и ЕАС-РОК (Фримель Г., Краузе Х. и др., 1987).

Количественное определение иммуноглобулинов различных классов в сыворотке крови  проводили методом радиальной иммунодиффузии в геле по Манчини. Для постановки реакции использовали моноспецифические антисыворотки против IgG, IgМ, IgА, изготовленные научно-исследовательским институтом эпидемиологии и микробиологии (Нижний Новгород).

Титры аутоантител к лизату собственных эритроцитов (ЛСЭ) определяли реакцией Уанье в модификации Н.Н.Клемпарсокй (1981). Количество бляшкообразующих клеток (БОК) в периферической крови, селезенке, печени, почках определяли реакцией Йерне в модификации Н.Н.Клемпарской  и др. (1981).

Циркулирующие иммунные комплексы в сыворотке крови определяли по методу M. Digenon и др. (1987).

Содержание гормонов тироксина, трийодтиронина, инсулина определяли радиоиммунологическим методом, используя тест-наборы: РИА-Т3-ПГ, РИА-Т4-Г, РИА-ИНС-ПГ-125I. Принцип метода заключается во взаимодействии меченного и исследуемого гормона со специфически связывающим реагентом ограниченной емкости. Радиометрию результатов проводили на гамма-спектрометре РИА-ГАММА. Расчет концентрации гормонов осуществлялся автоматически на основании существующих стандартов. Общую активность аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (АСТ) определяли с помощью тест наборов «Лахема». Интенсивность перекисного окисления липидов по накоплению малонового диальдегида (МДА) и состояние антиоксидантной системы по активности глутатионредуктазы (ГР) в печени крыс определяли методами, предложенными М.И.Прохоровой (1982), В.Н.Ореховичем (1987). В ткани печени контрольных и облученных животных определяли количество белка, холестерина, общих фосфолипидов. Экстракцию липидов про­водили по методу Фолча, разделяли липиды методом ТСХ на силикагеле/50 мк в системе гексан — эфир — уксусная кислота (73 : 25 : 2 по объему). Липидный фосфор определяли по методу Герлаха — Дойтике, холестерин и эфиры холе­стерина по реакции Либермана — Бурхарда, количество белка по методу Лоури. Все использованные методики приведены в работе И.К.Коломийцевой (1989).

Для повышения радиорезистентности организма животных использовали предварительное облучение в диапазоне доз 0,75 – 1,5 Гр за 28-30 дней до летального воздействия ионизирующих излучений в сочетании с природными адаптогенами - эракондом, флорентой и тимогеном.

Эраконд представляет собой экстракт люцерны посевной (Medicago sativa), полученный при гидробарометрической обработке наземной части растения с добавлением определенного набора микроэлементов. Препарат разработан в ТОО НВП «АПТ-Экология» (Екатеринбург). Густой экстракт люцерны, приготовленный в соответствии с ТУ 9337-004-12334249-97, представляет собой пластическую  стерильную субстанцию темно-коричневого цвета, которая при высушивании твердеет. Вкус горьковатый, хорошо растворим в воде (допускается появление незначительного осадка).

Флорента – это экстракт зелени пихты сибирской  выпускается во флаконах темного цвета 200 мл, по ТУ 8501-050-20680882-05. Изготовитель фирма  «Биолит» г. Томск. В  составе флоренты содержится комплекс растительных полифенолов, фитонцидные фракции,  микроэлементы, витамины.

Тимоген субстанция – мононатриевая соль дипептида, состоящего из остатков глутаминовой кислоты и триптофана, выделенный методом высокоэффективной жидкостной хроматографии из тималина. Препарат представляет собой бесцветный прозрачный раствор без запаха, совместимый со всеми лекарственными средствами.

Послеубойный ветеринарно-санитарный осмотр туш и внутренних органов проводили по общепринятой методике «Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов», 1988.

Органолептические исследования свежего мяса выполняли в соответствии с ГОСТом 72-69-79. Для консервации мяса использовали две рецептуры №1 и №2, разработанные во ВНИИВСГиЭ  (Сивохин П.А., Колякова В.Я., Захарова Л.Л., 1992).

Из физико-химических показателей определяли рН в фильтратах мышечной ткани, активность пероксидазы, количество бактерий и степень распада мышечной ткани путем микроскопирования мазков отпечатков по ГОСТу 23392-78. Определяли содержание аминоаммиачного азота, летучих жирных кислот (ЛЖК). Ставили реакцию  с сернокислой медью. Содержание азота в исследуемых пробах мяса определяли фотометрическим методом по Къельдалю.

Исследование мяса на инфузории Tetrahimena piriformis проводили согласно «Методическим рекомендациям для использования экспресс-метода биологической оценки продуктов и кормов», 1990. Каждая проба исследовалась  трижды в три  повторности для получения средних показателей. Оценка результатов велась путем подсчета выросших за четверо суток клеток инфузорий в десяти квадратах счетной камеры Фукса-Розенталя. Основным показателем явился коэффициент относительной биологической эффективности (ОБЦ) (Методические рекомендации по ветеринарно-санитарной экспертизе продуктов убоя  сельскохозяйственных животных, 1977).

Дальнейшие исследования биологической полноценности мяса проводили на взрослых белых крысах и крысятах-отъемышах. Взрослые крысы-самцы содержались в течение 7 суток на рационе, белковая часть которого состояла полностью из исследуемого мяса, контролем служили крысы, содержавшиеся на общепринятом рационе. При определении коэффициента эффективности белка (КЭБ) тест-объектом служили крысята-самцы-отьемыши в возрасте 30 суток.  Длительность опыта составлял 28 дней. Количество скармливаемого азота равнялось 180 мг на 1  голову в сутки. Безбелковая часть рациона состояла (%): сахар – 10,0; растительное масло – 8,0; клетчатка- 1,0, крахмал – 74,0; минеральная смесь -4,0; витаминная смесь – 1,0. Динамику раннего постнатального развития анализаторов слуха и зрения оценивали по времени отлипания ушной раковины с 1-х суток после рождения и открытия глаз с 13-х по 16-е сутки постнатальной жизни потомства. Взятие внутренних органов (печень, селезенка, сердце, почки, семенники) для определения веса и весовых коэффициентов проводили согласно «Методам биологической оценки продуктов животного происхождения», 1995. Для дальнейшего морфологического  исследования сердце, печень и селезенку фиксировали в 10% формалине  и 90% этиловом спирте.

Гистологические препараты готовили по общепринятой методике и окрашивали по Романовскому – Гимза. Для объективного суждения о реальности в степени достоверности результатов исследований цифровые данные подвергали статистической обработке по Стьюденту. Различия считали достоверными при уровне значимости Р<0,05.  Набор и корректура текста, графические изображения выполнены с помощью программ Microsoft Word 6.0 и Microsoft Excel 5.0 в операционной оболочке Windows–XP. Распечатка произведена на принтере HP LaserJet1010.

Часть исследований выполнена на базе Всероссийского НИИ ветеринарной санитарии гигиены и экологии РАСХН.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1  Влияние пролонгированного внешнего воздействия малых доз ионизирующей радиации на иммунобиологическое состояние животных

Изучение влияния пролонгированного внешнего гамма-воздействия малых доз ионизирующей радиации низкой интенсивности (0,39-1,2 мГр/час)  проведено на белых беспородных крысах и свиньях белой русской породы.

3.1.1 Опыты на крысах. При постановке опыта из крыс-самцов  было сформировано пять групп по 20 штук в каждой. Первая группа – нахождение под облучением 30 суток: вторая – 60; третья – 90; четвертая – 120 суток; пятая группа облучению не подвергалась и служила биологическим контролем. Исходная масса тела крыс всех подопытных групп составляла 160-165 г. По истечению указанных сроков пролонгированного облучения крыс выводили из-под облучения и при убое проводили гематологические, морфологические, иммунологические, биохимические исследования. Суммарная доза составила 0,28; 0,56; 0,84 и 1,2 Гр, соответственно

Наблюдение за общим состоянием крыс, находившихся под непрерывным облучением в течение 30 (1 группа), 60 (2 группа), 90 (3 группа) и 120 суток (4 группа) велось в течение всего эксперимента. Животные выглядели клинически здоровыми, адекватно реагировали на внешние раздражители, охотно поедали корм. Гибели крыс в течение эксперимента в подопытных группах и в группе контроля не отмечалось. В течение всего времени крысы не отставали в массе от своих аналогов группы контроля. При этом масса внутренних органов - печени, почек, селезенки находилась также в пределах контроля.  Осмотр внутренних органов животных опытных групп, при убое их сразу после прекращения облучения, не выявил видимых патологоанатомических изменений.

В картине периферической крови отмечалась слабая эритропения, анемия и лейкопения в течение первых двух месяцев пребывания крыс под непрерывным облучением низкой интенсивности. Количество эритроцитов на 30 и 60 день составляло соответственно 86,1% и 80,5% к контролю; содержание гемоглобина - 87,8% и 86,7%, соответственно. К завершению хронического облучения, т.е. к 120 суткам, эти показатели приближались к контрольным величинам.  Общее количество лейкоцитов через 30 дней уменьшалось на 19,8%, через 60 дней – на 18,6 % по отношению к биологическому контролю. На  90-й и 120-й день их количество достигало нижних границ физиологической нормы и составляло, соответственно, 84,7%,  91,4% к биологическому контролю. В лейкоцитарной формуле изменения среди гранулоцитов носили переменный характер. Появлялся невысокий процент юных клеток во всех подопытных группах. Процент палочкоядерных нейтрофилов был выше контрольного в первой и второй подопытных группах, но не достоверно. Увеличивался процент сегментоядерных нейтрофилов. Более заметное снижение лимфоцитов (8,5%) приходилось на 30 сутки после облучения.

Заметных изменений в содержании IgG, IgM, IgA  в сыворотке крови подопытных крыс выявлено не было. Подобная особенность была характерна и для циркулирующих иммунных комплексов (табл.1).

Таблица 1 – Содержание иммуноглобулинов G, M, A  и ЦИК в сыворотке крови крыс 

Время под блучением, сутки

Иммуноглобулины, г/л

ЦИК,

усл.ед.

G

M

A

30

контроль

6,40±0,70

6,90±0,80

0,40±0,80

0,47±0,08

0,65±0,09

0,59±0,08

39,8±1,21

41,4±1,22

60

контроль

6,80±0,03

7,00±0,04

0,47±0,04

0,47±0,07

0,64±0,03

0,64±0,04

38,2±0,84

39,1±0,32

90

контроль

6,80±0,31

6,90±0,80

0,58±0,01

0,47±0,09

0,67±0,01

0,59±0,08

39,0±0,24

41,3±0,32

120

контроль

6,72±0,04

6,92±0,22

0,42±0,08

0,44±0,01

0,58±0,08

0,60±0,08

36,8±0,24

37,9±0,42





Изменения наблюдались в соотношении Т- и В-лимфоцитов. На 30 день после облучения количество Т-лимфоцитов  снижалось на 28,2 %; спустя 60 дней  - на 27,8%;  90 дней - на 11, 6% по отношению к  контролю. К 120 дню их содержание соответствовало значениям контрольных величин. В отличие от Т-клеток  содержание В-лимфоцитов у подопытных крыс имело тенденцию к увеличению спустя 30, 60 и 90 дней. К 120 дню их количество находилось в пределах контроля. Таким  образом, Т-лимфоциты периферической крови при низкоинтенсивном пролонгированном облучении крыс имели тенденцию к снижению, а В-лимфоцитов – к увеличению (рис.1).

Рис.1 – Изменение содержания Т- и В-лимфоцитов у крыс при пролонгированном облучении

Титры аутоантител, со стороны антигенных субстанций собственных эритроцитов, селезенки, печени и почек, оценивались в 0,2-0,5 балла (реакция слабо положительная). Оценка в 0,5 балла, в большинстве случаев, была характерна для почек (табл.2).

Таблица 2 – Титры аутоантител (баллы) к аутологичным органам и тканям

Время

облучения

Дозы (Гр)

ЛСЭ

Селезенка

Печень

Почки

Пролонгированное облучение (0,39 мГр/час)

30 суток

0,28

0,3±0,01

0,3±  0,01

0,5±  0,05

0,5± 0,05

60 суток

0,56

0,3± 0,02

0,5± 0,05

0,3± 0,02

0,5± 0,06

90 суток

0,84

0,2± 0,01

0,3± 0,06

0,1± 0,01

0,5±  0,02

120 суток

1,12

0,4± 0,03

0,5± 0,03

0,1± 0,01

0,5± 0,05

Контроль

нет

следы

следы

следы

следы

Изучение влияния пролонгированного облучения в малой дозе низкой мощности на количество липидов в печени крыс показало, что количественные параметры общего белка в течение исследуемого периода имели отличия. Так спустя 30 суток содержание белка в печени подопытных крыс составило  196,0±15,5мг/г при  203,8±12,6 мг/г в контроле.  Спустя 60 суток 238,0±26,0 мг/г - при  206,0±9,1 мг/г в контроле; на 90 сутки содержание белка было по-прежнему повышенным  (235,0±22,0 мг/г  при 212,0+4,2 мк/мг в контроле). Через 4 месяца  этот показатель не имел заметных отличий от контроля и составлял 226,0±14,0мг/г. Содержание эфиров холестерина при облучении имело тенденцию к снижению. Заметные изменения произошли по этому показателю спустя 3 мес после облучения, когда уровень холестерина достоверно уменьшался  и составлял 2,7±0,4 мкг/г, что было ниже контрольной величины на 30%.  Через 120 дней он поднимался до уровня контроля (3,7±0,3мкг/г при 3,3+1,5мкг/г в контроле). Содержание общих фосфолипидов не отличалось от контрольной величины во все сроки исследования. Таким образом, после воздействия пролонгированного гамма-излучения, при мощности излучения 0,39 мГр/мин (1,810-7 Гр/с)  в печени облученных крыс через 1 мес (0,28 Гр) наблюдается уменьшение количества холе­стерина,  что сохраняется через 60 (0,56 Гр)  и 90 суток (0,84 Гр). Восстановление холестерина до нормальных количественных значений наблюдается  через 120 суток непрерывного пролонгированного облучения.

Гистологическое изучение препаратов сердца, селезенки и печени показало, что структура органов сохранена, а выявленные изменения носят однотипный характер и не имеют существенных отличий  от таковых контрольных животных.

3.1.2 Опыты на свиньях. Из свиней было сформировано три группы по пять голов в каждой: первая – нахождение под облучением при мощности дозы 0,39 мГр/час в течение 30 и 90 суток; вторая - при мощности дозы 1,2 мГр/час в течение 30 и  90 суток; третья группа облучению не подвергалась и служила биологическим контролем. Исследования крови у свиней проводили прижизненно на 30 и 90 сутки. Суммарная накопленная доза по срокам исследования составила 0,27; 0,81 Гр (первая группа); 0,87 и 2,61 Гр (вторая группа), соответственно. Весь период  нахождения под непрерывным облучением состояние животных было удовлетворительным. Случаев падежа не наблюдалось. Масса тела спустя 30 и 90 суток у подопытных животных первой и второй группы не отставала от таковой биологического контроля. Содержание лейкоцитов в крови свиней, находившихся в течение 30 и 90 суток в условиях двух различных уровнях излучения,  имело зависимость от мощности дозы. В первой группе подопытных животных при мощности 0,39 мГр/час количество лейкоцитов находилось в пределах физиологической нормы. Во второй группе  (1,2 мГр/час) - этот показатель был  ниже контрольных значений на 30 сутки. В лейкоцитарной формуле у животных первой и второй группы несколько увеличивался процент молодых форм нейтрофилов при относительном уменьшении сегментоядерных. К 90 суткам количество эритроцитов, содержание гемоглобина  и гематокрит  у подопытных свиней находился в пределах контроля (4,9±0,31012/л; 112,3±1,05 г/л; 40,2±0,16%), соответственно. Подобная закономерность наблюдалась в отношении содержания общего белка, альбуминов, -глобулинов, иммуноглобулинов IgG, IgА, IgМ. Содержание ЦИК носило изменчивый характер, но не выходило за пределы контроля. Бактерицидная активность сыворотки крови находилась в пределах контрольных величин, также как и фагоцитарная активность лейкоцитов. Повышение титров антител к ЛСЭ наблюдалось, но не превышало 0,5 балла.  Активность ферментов АСТ и АЛТ у свиней подопытных групп находилась также в пределах контроля.

Таким образом,  длительное низкоинтенсивное  γ-облучение крыс в течение 30, 50, 90, 120 дней и свиней в течение 30-90 суток не вызывает видимых  клинических нарушений в общем состоянии животных и в микроструктуре внутренних органах, но вызывает определенные изменения в некоторых гематологических, иммунологических, биохимических показателях, чаще при мощности излучения 1,20 мГр/час. Эти изменения в большинстве случаев носят недостоверный характер и приходятся на начальный период нахождения животных  под облучением.

3.2  Радиозащитные свойства предварительного облучения в малых и низких дозах в сочетании с препаратами природного происхождения

Данный этап работы посвящен разработке способов повышения радиорезистентности организма с использованием предварительного однократного облучения в сочетании с биологическими препаратами  - эракондом, тимогеном и флорентой.

3.2.1. Радиозащитное действие предварительного однократного облучения в  малых и низких дозах к последующему воздействию в летальной дозе. Для изучения  влияния предварительного облучения на выживаемость и клинико-гематологические показатели повторно облученных летальной дозой животных  в опыт были взяты белые беспородные крысы-самцы с массой тела 180-200 г. Из крыс было сформировано 5 групп, по 10 голов в каждой. Первая группа была облучена в дозе 0,25 Гр; вторая – 0,5 Гр; третья – 0,75 Гр; четвертая  в дозе 1,0 Гр; пятая -  предварительно не облучалась и служила контролем. Животных всех групп содержали в одинаковых условиях вивария. Через 28-30 дней после предварительного воздействия в указанных дозах животных подвергали облучению в дозе 9,0 Гр. Одновременно с ними была облучена в летальной дозе и группа крыс, без предварительного облучения, которая служила контролем однократного облучения (группа контроля облучения). Наблюдение за выживаемостью вели в течение 30 дней.

Начало гибели животных, облученных дозой 9 Гр, приходилось на шестые сутки после облучения; к 15 дню погибли 9  из 10 крыс. Внешние клинические признаки и ранняя гибель животных свидетельствовали о крайне тяжелой степени  острой лучевой болезни.

В двух группах крыс, которые были предварительно облучены в дозах 0,25  и 0,5 Гр за 28-30 дней до летального воздействия 9,0 Гр,  выживаемость составила 30-40%. Сроки гибели животных приходились на 9-18 сутки после облучения. 

Выживаемость животных, предварительно облученных  в дозе 0,75 – 1,0 Гр  за 28-30 суток до облучения в летальной дозе, составила 40-50%, а средняя продолжительность жизни павших крыс – 25 суток.  Внешние клинические признаки, отдаленная во времени гибель животных свидетельствовали о проявлении у них  средней степени острой лучевой болезни. Таким образом, дозы предварительного облучения 0,75 Гр и 1,0 Гр показали лучшую выживаемость при повторном облучении животных летальной дозой.

Изучение  гематологических показателей крыс в дополнительном опыте показало, что в период первичной реакции на облучение (через 24 часа) в крови крыс однократно облученных в дозе 9,0 Гр количество лейкоцитов достоверно уменьшалось и составляло 43,5% по отношению к биологическому контролю. В подопытной группе крыс, предварительно облученных в дозе 0,75 Гр, в этот период общее число лейкоцитов сохранялось на 24,6%;  нейтрофилов  и лимфоцитов на 28,7% и 23,2%;  ядросодержащих клеток в селезенке на 22,9% выше контроля облучения, соответственно. Подобная закономерность отмечалась и в группе крыс предварительно облученных в дозе 1,0 Гр (рис.2).

На седьмые сутки, которые приходятся на начало разгара острой лучевой болезни у крыс, количество лейкоцитов в группе животных, однократно облученных в дозе 9,0 Гр, составляло лишь 8,9% по отношению к биологическому контролю. Количество эритроцитов и содержание гемоглобина достоверно уменьшалось на  44,7% и 33,1%, соответственно.

Рис. 2 - Динамика лейкоцитов и ядросодержащих клеток селезенки (ЯСКС) в период первичной реакции на облучение (первые сутки)

Рис.3  - Динамика клеток периферической крови и ЯСКС крыс в период разгара острой лучевой болезни (7 сутки)

Развивалась тромбоцитопения с достоверным снижением кровяных пластинок  на 74,6% по отношению к значениям биологического контроля. Количество ядросодержащих клеток достоверно уменьшалось на 82,4% или в 5,6 раза (рис.3).

На этом фоне  в группе предварительно облученных животных в дозе 0,75 Гр  количество лейкоцитов было в 3,6 раза больше по сравнению с однократно облученным контролем. Количество эритроцитов, тромбоцитов  и содержание гемоглобина достоверно превосходило значения контроля облучения на 24,7; 31,7%  и 21,2%, соответственно.  Количество ядросодержащих клеток селезенки  в данной группе превосходило таковые  группы контроля облучения на 35,2% или в 3 раза. Такая же закономерность прослеживалась и в подопытной группе (1,0+9,0 Гр). Количественные значения лейкоцитов, эритроцитов, тромбоцитов, ядросодержащих клеток селезенки,  содержание гемоглобина у защищенных крыс достоверно превосходили таковые группы контроля облучения в 2,8; 1,6; 2,1; 2,9 и 1,3 раза, соответственно. 

Таким образом, предварительное облучение в дозах 0,75 и 1,0 Гр за 28-30 суток до воздействия ЛД90-100/30 способствует достоверному сохранению количества лейкоцитов, эритроцитов, тромбоцитов, гемоглобина в крови и  ядросодержащих клеток селезенки у крыс  по сравнению с однократным их облучением в дозе 9 Гр. Такая закономерность прослеживается во все периоды острой лучевой болезни (первичная реакция на облучение, латентный период, разгар болезни, восстановление). Указанный временной интервал предварительного облучения, по нашему мнению,  соответствует времени формирования основных защитных  реакций организма.

Рис. 4 – Титры антител к лизату собственных эритроцитов у крыс, облученных малыми и низкими дозами

При изучении влияния малых и  низких доз предварительного внешнего воздействия ионизирующих излучений в диапазоне доз от 0,5 до 2,0 Гр на формирование аутоантител к лизату собственных эритроцитов и к гомогенатам различных органов прослеживалась дозовая зависимость. Слабоположительные реакции регистрировались при дозе 0,5 Гр; положительные  в один балл - при дозах 0,75 и 1,0 Гр. Доза 2,0 Гр вызывала положительную реакцию, оцениваемую в два балла и более. Суточная динамика увеличения титров аутоантител приходилась на 5-15 сутки (рис.4).

Динамика образования антителообразующих клеток в крови, селезенке, печени, почках имела прямую связь с динамикой образования титров аутоантител.

3.2.2. Влияние предварительного облучения  в  сочетании с  эракондом на формирование радиорезистентности организма

Изучение влияния предварительного облучения в сочетании с эракондом на выживаемость повторно облученных летальной дозой  животных  проводилось с использованием -излучения в диапазоне доз от 0,5-1,0 Гр  и 10% раствора эраконда в дозе 5,0-7,5 мл/кг с водой и кормом за 5-10 дней до летального облучения в дозе 9 Гр. Вводимые дозы эраконда обоснованы нами экспериментально по их радиозащитному действию в диапазоне от 2,5-12,5 мл/кг.  Наибольший радиозащитный эффект при ЛД90-100/30  наблюдался при введении эраконда  в объеме 5,0-7,5 мл/кг. Эти  объемы препарата были взяты для разработки  радиозащитного способа.

Таблица 3.  Выживаемость белых крыс, облученных летальной дозой на фоне применения предварительного облучения и эраконда

Группы

Кол-во

крыс

(штук)

Доза про-

филактич.

обработки

-лучами

(Гр)

Доза

введения

эраконда

(мл/кг)

Летальная

доза облучения

(Гр)

Выживае-

мость

(%)

1. Биологич.

контроль

10

нет

нет

нет

100

2. Контроль

облучения

10

нет

нет

9,0

10

3. Контроль предваритель-

ного облучения

10

10

10

0,5

0,75

1,0

нет

нет

нет

9,0

9,0

9,0

20-30

40-50

50-60

4. Контроль

препарата

эраконд

10

нет

5,0-7,5

9,0

40-50

5. Опытная

24

0,5

5,0-7,5

9,0

50-60

6. Опытная

24

0,75

5,0-7,5

9,0

70-80

7. Опытная

24

1,0

5,0-7,5

9,0

70- 80

Радиозащитное действие способа испытано в экспериментальных условиях на белых беспородных крысах-самцах при тяжелой  степени острой лучевой болезни. В тесте 30-дневного наблюдения за клиническими проявлениями, выживаемостью и средней продолжительностью жизни павших животных в условиях применения различных доз облучения установлено, что наибольшим радиозащитным действием обладают дозы предварительного облучения 0,75-1,0 Гр в сочетании с эракондом в объеме 5,0-7,5 мл/кг (табл.3).

Таким образом, результаты опытов на крысах в течение 30-дневного наблюдения за выживаемостью показали, что радиозащитный эффект  наблюдается через 20-30 дней с начала применения способа, включающего предварительное воздействие -излучения в диапазоне от 0,75-1,0 Гр и введения эраконда в объеме 5,0-7,5 мл/кг  с водой и кормом ежедневно за 7-10 дней до облучения ЛД90-100/30.  При этом выживаемость составляет 70-80%.

Для изучения  влияния предварительного облучения в дозе 0,75 Гр в сочетании с эракондом на клинико-гематологические показатели и на клеточность бедренной кости  был проведен дополнительный опыт. При этом крысы были разбиты на группы: первая  (9,0 Гр – облученный контроль); вторая  (0.75 Гр + 9,0 Гр);  третья (эраконд + 9,0 Гр); четвертая (0,75 Гр + эраконд  + 9,0 Гр); пятая – биологический контроль.

В результате исследований установлено, что у большинства крыс первой группы, которая являлась контролем облучения 9 Гр, на третьи-пятые сутки отмечалась диарея, животные отказывались от корма, не адекватно реагировали на внешние раздражители, были вялыми, взъерошенными, грязными и неподвижными. На седьмые сутки вокруг глаз и носовых отверстий образовывались коричневые корочки, что свидетельствовало о выраженном развитии геморрагического синдрома.  Гибель крыс начиналась на 8-е сутки и составила 90% при средней продолжительности жизни 9,6±2,3 сут.

Таблица 4 – Показатели картины крови у подопытных крыс

Группы

Эритроциты,

1012/л

(7-е сут)

Тромбоциты,

109/л

(7-е сут.)

Лейкоциты,

109/л

(7-е сут)

1 к.о.

3,70±0,18*

96,2±4,02*

0,60±0,07*

2

4,57±0,23**

164,2±3,02**

1,20±0,07**

3

4,62±0.16**

176,4±4,12**

2,56±0.07**

4

  4,82±0,23**

189,4±3,02**

3,30±0.15**

5  б.к.

6,56±0,08

410,6±17,12

8,98±0.15

* Различия достоверны по сравнению с биологическим контролем при p<0.05.

** Различия достоверны по сравнению с контролем облучения при p<0.05.

У животных данной группы с первых дней после воздействия -излучения в дозе 9,0 Гр  резко снижалось количество лейкоцитов в крови. На седьмые сутки их количество достигало наименьших значений и насчитывало 0.6±0.07·109/л (табл.4).

У животных 2 группы  на седьмые сутки после повторного воздействия гамма-излучения в дозе 9.0 Гр количество лейкоцитов  было достоверно выше облученного контроля в 2 раза. Достоверная разница прослеживалась с эритроцитами и тромбоцитами. В этот период вялость крыс  чередовалась с адекватной реакцией на внешние раздражители.  Признаки диареи присутствовали, но непродолжительное время,  признаки  геморрагического  синдрома были единичными. Выживаемость в течение 30-дневного наблюдения составила 50%.

У животных 3 группы количество лейкоцитов на пятые сутки было достоверно выше в 4,1 раза, тромбоцитов в 1,83, эритроцитов в 1,24 раза. Клинические признаки были схожи с таковыми животных группы предварительно облученных в дозе 0,75 Гр. Выживаемость составила 40-50%.

У крыс четвертой группы (0,75 Гр + эраконд  + 9,0 Гр)  клиническое проявление острой лучевой болезни было выражено на уровне средней и легкой степени тяжести.  Животные в большинстве  оставались чистыми, адекватно реагировали на внешние раздражители, охотно поедали корм. Случаи диареи были единичными и непродолжительными. Количество лейкоцитов было достоверно выше контроля облучения в 5,5, тромбоцитов в 1,96 и эритроцитов в 1,3 раза. Выживаемость при данном способе профилактики составляла 70-80%.

В результате исследований установлено, что общее количество клеток в бедренной кости необлученных крыс (биологический контроль) колебалось в пределах 131,0±2,7·106. В период первичной реакции на облучение у крыс группы облученного контроля их количество достоверно уменьшалось до минимальных значений (рис. 5). Во второй, третьей и четвертой опытных группах общее количество клеток костного мозга было достоверно  выше по сравнению с облученным контролем в 2,0; 2,05 и 2,55 раза, соответственно. Обращают на себя внимание процессы, происходящие на 8-е сутки. Более высокий темп восстановления был более выражен во второй, третьей и четвертой группах подопытных животных  в 2,5;  2,55 и  2,8 раза, соответственно. Подобная закономерность прослеживалась и с разновидностями клеточных популяций  костного мозга: эритроидными, нейтрофильными и лимфоидными клетками. Динамика популяции эритроидных  клеток  примерно повторяла таковую, характеризующую общее количество клеток бедренной кости, как в период первичной реакции на облучение,  так и в период восстановления. Количество нейтрофильных клеток  во второй и третьей группах превышало таковые контроля облучения примерно в 2 раза, а в четвертой – в 2,3 раза. На восьмые сутки процесс восстановления нейтрофильных клеток  был более выражен у животных защищенных групп (рис.5).

Рис. 5 – Динамика общего числа клеток бедренной кости подопытных крыс: первая - (9,0 Гр – облученный контроль ); вторая - (0.75 Гр + 9,0 Гр);  третья - (эраконд + 9,0 Гр); четвертая - (0,75 Гр + эраконд  + 9,0 Гр); пятая – биологический контроль.

Таким образом, предварительное воздействие -излучения в дозе 0,75  Гр за 30 суток до  повторного облучения в дозе ЛД90-100/30 формирует адаптивный ответ, который характеризуется улучшением общего состояния животных, слабым проявлением клинических признаков геморрагического синдрома, увеличением средней продолжительности жизни и как следствие 40-50% выживаемостью. Применение 10%  эраконда за 5-10 дней до воздействия -излучения в дозе 9,0 Гр также увеличивает выживаемость крыс до 40-50% и переводит тяжелую степень лучевой болезни в среднюю. Последовательное применение предварительного воздействия -излучения и эраконда в указанных временных и дозовых диапазонах сохраняет 70-80% крыс, подвергнутых повторному воздействию радиации ЛД90/30, облегчает их общее состояние с проявлением клинических признаков, характерных для легкой степени острой лучевой болезни. У животных предварительно облученных малыми дозами внешней радиации восстановление костномозгового кроветворения происходит более интенсивно по сравнению с однократно облученным контролем. Предварительное облучение  и последующее применение эраконда, оказывает более выраженный положительный эффект на  сохранение  и восстановление кроветворных клеток у крыс, подвергнутых повторному облучению в летальной дозе. Различие в кроветворении выражается в более высоком содержании, как общего количества клеток, так и клеток эритроидного, гранулоцитарного и лимфоидного ряда в костном мозге бедренной кости крыс.

В опытах на облученных в дозах 0,5 Гр – 1,5 Гр крысах установлено корригирующее действие эраконда на функциональную активность щитовидной железы на 1, 7 и 30 сутки после облучения. Что касается временных изменений, то они были явными на 1 и 7 сутки после  облучения указанными дозами без применения эраконда. Влияние эраконда прослеживалось при всех радиационных нагрузках и во все сроки исследования. Оно характеризовалось стабилизацией функциональной активности щитовидной железы, определяемой содержанием гормонов Т3 и Т4, в пределах контрольных значений.

3.2.3 Радиозащитные свойства  предварительного облучения в сочетании с тимогеном

Радиозащитное действие предварительного облучения в малых дозах в сочетании с тимогеном на выживаемость животных, подвергнутых летальной дозе, заключалось в применении ионизирующего -излучения и пептида тимуса. Активнодействующими началами в данном способе являются энергия -излучения и тимоген. Профилактика острой лучевой болезни проводилась с использованием -излучения в диапазоне доз от 0,75-1,5 Гр  и введения тимогена с водой или кормом в дозе  10-12 мкг на одну крысу. Вводимые  дозы тимогена, повышающие выживаемость, обоснованы нами экспериментально на крысах, облученных в дозе 9 Гр, при этом изучаемый диапазон введения тимогена составлял от 2-14 мкг/крысу.

Наибольший радиозащитный эффект  наблюдался при введении тимогена в дозах 10-12 мкг/крысу (50±5 мкг/кг). Эти дозы введения препарата и были взяты для разработки способа профилактики острой лучевой болезни. Радиозащитное действие способа испытано в экспериментальных условиях на белых беспородных  крысах при тяжелой  степени острой лучевой болезни.

В опытах использованы  белые  крыс – самцы, с массой тела 180-190 г к началу эксперимента. Все животные по принципу аналогов были разбиты на группы по 10  штук в каждой:  первая – биологический контроль; вторая – контроль облучения; третья – контроль предварительного облучения; четвертая – контроль препарата; пятая, шестая и седьмая – подопытные  (0,75 Гр + тимоген; 1,0 Гр + тимоген и  1,5 Гр + тимоген, соответственно).

Условия содержания и кормления крыс всех подопытных групп были идентичными.

Выполнение способа. За 20-30 дней до воздействия ЛД90/30 крыс предварительно облучали дозами  0,75; 1,0  и 1,5 Гр, а за 7-10 дней до облучения указанной летальной дозой  крысы ежедневно получали 10-12 мкг  тимогена с водой и кормом. В перерасчете на массу тела доза тимогена составляла 50±5 мкг/кг.

Результаты исследований. Крысы групп биологического контроля в течение всего срока наблюдения (30 суток) были клинически здоровыми, охотно поедали корм,  адекватно реагировали на внешние раздражители, случаев гибели не наблюдалось.

У животных группы контроля облучения с первых дней после воздействия радиации в дозе 9,0 Гр  резко снижалось количество лейкоцитов в крови. У многих  крыс на 5-7 сутки отмечалась диарея. Вокруг глаз и носовых отверстий образовывались коричневые корочки из запекшейся крови, что свидетельствовало о выраженном проявлении геморрагического синдрома.  Гибель крыс начиналась с 7 суток и составила 90-100% при средней продолжительности жизни 10 дней. При патологоанатомическом вскрытии трупов павших животных диагностировалась лучевая болезнь тяжелой и крайне тяжелой степени.

В группе животных предварительно облученных малыми дозами признаки диареи  и геморрагического  синдрома были единичными. Гибель отмечалась с 12 суток. Средняя продолжительность жизни павших крыс составила 14-16  дней, выживаемость - 40-50%

У животных, получавших только тимоген в указанной дозе в течение 5-10 дней и затем облученных дозой 9,0 Гр (ЛД90/30), клинические признаки и были схожи с таковыми группы контроля предварительного облучения в малых дозах. Выживаемость составила 40-50%.

У крыс подопытных групп, после обработки  указанным способом (предварительное облучение + тимоген), клиническое проявление лучевой болезни было выражено на уровне средней и легкой степени, отсутствовали признаки геморрагического синдрома. Случаи диареи были единичными и непродолжительными. Животные  оставались чистыми, гладкими, подвижными, адекватно реагировали на внешние раздражители, охотно поедали корм. Средняя продолжительность павших животных составила 18-20 суток, выживаемость -  70-80% (табл.5).

Таблица 5.  Выживаемость облученных летальной дозой крыс

 

Группы

Кол-во

крыс

(штук)

Доза про-

филактич.

обработки

(Гр)

Доза

введения

тимогена (мкг)

Доза облучения

(Гр)

Выживае-

мость

(%)

1. Биологич.

контроль

10

нет

нет

нет

100

2. Контроль

облучения

10

нет

нет

9,0

0

3. Контроль предваритель-

ного облучения

10

10

10

0,75

1,0

1,5

нет

нет

нет

9,0

9,0

9,0

40

50

50

4. Контроль

препарата

тимоген

10

нет

10-12

9,0

40

5. Опытная

30

0,75

10-12

9,0

60-70

6. Опытная

30

1,0

10-12

9,0

70-80

7. Опытная

30

1,5

10-12

9,0

70- 80

Таким образом, результаты опытов на белых беспородных крысах показали, что радиозащитный эффект (70-80%) наблюдается через 20-30 дней с начала применения способа, включающего предварительное воздействие гамма-излучения в диапазоне доз от 0,75-1,5 Гр и введения тимогена в дозе 10-12 мкг/крысу (50±5 мкг/кг) с кормом ежедневно за 7-10 дней до облучения летальной дозой.

  В дополнительном исследовании изучали влияние предварительного облучения в дозе 0,75 Гр в сочетании с тимогеном на гематологические показатели (табл.6).

Таблица 6 – Показатели  картины крови облученных летальной дозой крыс с применением предварительного облучения в  и тимогена (7 сутки)

Группы, воздействие

Лейкоциты,

109/л

Эритроциты,

1012/л

Тромбоциты

109/л

1

9 Гр (к.о.)

0,70±0,07*

3,70±0,18*

96,2±4,06*

2

0,75 + 9,0 Гр

2,20±0,07**

4,57±0,23**

174,2±3,05**

3

тим+9,0 Гр

2,80±0,07**

5,02±0,16**

178,4±4,12**

4

0,75+т+9,0Гр

3,90±0,17**

5,82±0,23**

198,5±3,03**

5

биол.контр.

8,98±0,15

6,56±0,08

410,4±9,02

* Различия достоверны по сравнению с биологическим контролем при p<0.05.

** Различия достоверны по сравнению с контролем облучения при p<0.05.

У животных группы контроля облучения на 7 сутки после воздействия -излучения в дозе 9,0 Гр достоверно снижалось количество лейкоцитов в крови. В то время как у животных второй, третьей и четвертой групп содержание лейкоцитов на этот срок исследования было достоверно выше в 2,0;  4,6  и 6,5 раза, соответственно. В последующие сроки лейкоциты в защищенных группах сохраняли стабильную динамику роста и достигали нижних границ физиологической нормы к 30 суткам.

Содержание эритроцитов  у крыс  второй, третьей и четвертой групп на 7 сутки после облучения  было  достоверно  выше облученного контроля  на 23,5; 35,6  и 57,3%, соответственно. Содержание тромбоцитов на этот срок в защищенных группах было также достоверно выше контроля облучения в 1,81;  1,85 и 2,06 раза, соответственно.

Таким образом, количество лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов у однократно облученных 9 Гр животных резко снижается по сравнению с биологическим контролем, соответственно  - в 14,8 раза, в 1,7 раза и в 4,3 раза. Последовательное применение предварительного  облучения в дозе 0,75 Гр и тимогена обеспечивает достоверную сохранность клеток периферической крови крыс, облученных  летальной дозой.

3.2.4 Радиозащитные свойства  флоренты

Вводимые дозы флоренты, обладающие радиозащитным действием, обоснованы нами экспериментально на крысах.  Наибольший радиозащитный эффект  наблюдался при введении флоренты в течение недели с водой и кормом  в объеме 6,0-8,5 мл/кг (табл.7). При последующем летальном облучении в дозе 7,0 Гр  выживаемость составила – 80%,  в дозе 9,0 Гр  - 40%.

Таблица 7 - Выживаемость крыс при введении флоренты

Группы

Доза введения

флоренты

мл/кг

Доза облучения

Выживаемость

(%)

Доза облучения

(Гр)

Выживаемость (%)

1

3,5

7,0

60

9,0

20

2

6,0

7,0

80

9,0

40

3

8,5

7,0

80

9,0

40

4

11,0

7,0

60

9,0

30

5

13,5

7,0

60

9,0

30

Эти  объемы препарата нами взяты для изучения влияния флоренты на различные показатели иммунобиологического состояния организма облученных крыс и разработки  радиозащитного способа, включающего предварительное облучение в диапазоне доз 0,75-1,0 Гр+флорента+ ЛД. В результате было установлено, что применение способа по указанной схеме защищало 60-80% крыс, облученных в дозе 9 Гр.

3.2.4.1  Иммуномодулирующие и антиоксидантные свойства флоренты

Изучение влияния флоренты на функциональную активность щитовидной железы проводили на крысах, облученных в дозах 0,5; 1,0; 3,0; 5,0 Гр, соответственно.

Рис.  6  - Дозовая зависимость гормонов щитовидной железы на вторые сутки после облучения

На вторые сутки содержание Т3 при дозах от 0,5 Гр; 1,0 Гр; 3,0 Гр и 5,0 Гр  было ниже биологического контроля на 15%, 19,7%, 12,0%  и  30%,  соответственно. При дозе 5,0 Гр разница была достоверной. Подобная закономерность наблюдалась и с содержанием  тироксина (рис.6).

На седьмые сутки, активность железы  была еще более пониженной по сравнению с  первичной реакцией на облучение при дозах внешнего однократного -облучения, превышающих 0,5 и 1,0 Гр. Так, содержание Т3 при  дозах 3,0 и 5,0 Гр понижалось в 1,32 и в 1,38 раза, что было ниже биологического контроля на 24,7% и 27,2%, соответственно. Содержание Т4  при дозе 0,5 Гр -1,0 Гр уменьшалось, но не достоверно; при дозе 3,0 Гр - в 1,59 раза (на 37,2%), при дозе 5,0 Гр  - в 1,67 раза (на 40,5%), что достоверно по отношению к биологическому контролю.

Применение флоренты до облучения по указанной выше схеме способствовало определенной нормализации исследуемых показателей, характеризующих функциональную активность щитовидной железы,  и прослеживалось при всех радиационных нагрузках и во все сроки исследования.

Таким образом, внешнее однократное облучение в дозах от 0,5 до 5,0 Гр вызывает нарушение функциональной активности щитовидной железы. При этом наблюдается дозовая и временная зависимость. Наибольшие изменения наблюдаются при дозах 3,0-5,0 Гр на 2-7 сутки после облучения. Применение экстракта пихты сибирской до облучения нормализует функциональную активность щитовидной железы, что проявляется увеличением концентрации тиреоидных гормонов (Т3, Т4) у облученных животных до нижних границ физиологической нормы.

  Для установления антиоксидантных свойств флоренты изучали динамику малонового диальдегида и глутатионредуктазы в печени облученных крыс. Одновременно с этим определяли динамику титров аутоантител и бляшкообразующих клеток в периферической крови облученных крыс на фоне применения исследуемого препарата. Кровь и печень для исследования брали при убое животных через одни, пять и десять суток после облучения.

Однократное  внешнее общее облучение крыс в дозе 7,0 Гр подавляет активность глутатионредуктазы, которая является одним из компонентов антиоксидантной защиты организма, обладает способностью катализировать химические реакции, в результате которых токсичные свободные радикалы и перекиси превращаются в безвредные соединения. Снижение активности антиоксидантного фермента глутатионредуктазы  влечет за собой достоверный прирост малонового диальдегида. 

В результате наших исследований было установлено, что активность глутатионредуктазы  у животных группы облученного контроля, по сравнению с биологическим контролем,  была достоверно понижена на 1, 5 и 10 сутки исследования в 3,7; 2,9 и 2,08 раза, соответственно (рис.8). В то время концентрация малонового диальдегида  в печени крыс контроля облучения достоверно возрастала во все сроки исследования в 3,76; 2,93 и 2,02 раза, соответственно (рис. 7).

Введение крысам флоренты за 7 дней до летального облучения способствовало коррекции показателей антиоксидантной системы. Прирост малонового диальдегида в подопытных группах достоверно понижался, а активность глутатионредуктазы достоверно повышалась по сравнению с контролем облучения (рис.7, 8).

Рис.7 -  Динамика малонового диальдегида у облученных крыс на фоне применения  флоренты

Рис.8-Динамика глутатион-редуктазы  у облученных крыс на фоне применения флоренты

Так, через  1, 5, 10 сутки у крыс подопытной группы (фл + 7 Гр)  активность антиоксидантного фермента ГР было достоверно выше  по сравнению с животными группы облученного контроля  в 3,39; 2,87; 1,88 раза, соответственно. Подобная закономерность наблюдалась и в подопытной группе (1 Гр + фл + 7 Гр). Введение флоренты животным после облучения в течение 5-7 суток эффект коррекции показателей  антиоксидантной защиты организма был явным, но несколько слабее эффекта приема данного препарата перед облучением.  Следовательно, у животных, которые получали флоренту  сохранялась активность глутатионредуктазы, которая не позволяла накапливаться малоновому диальдегиду  в более высоких концентрациях, характерных для животных  незащищенной  группы.

Облучение в дозе 7,0 Гр вызывало  накопление аутоантител в периферической крови облученных животных с оценкой реакции  как «положительная» и «резко положительная». Резко положительных значений (3-4 балла) у крыс облученного контроля реакция Уанье достигала на 5 сутки после воздействия радиации. Применение экстракта пихты сибирской оказывало иммуномодулирующее влияние на образование антител к ЛСЭ, при этом титры аутоантител к ЛСЭ  выявлялись, но в менее высоких титрах, оцениваемых в 0,5-1,0 балла, а количество клеток аутогемолизинов (БОК) уменьшалось до нижних границ физиологической нормы (2-3%).

Можно считать, что применение флоренты сдерживает реакцию цепного окисления липидов, инициируемую ионизирующим излучением и играющую важную роль в патологии и гибели клеток. В результате понижается значимость такой реакции, способствующей массовому накоплению избытка токсических продуктов окисления липидов. Доказательством тому служат полученные данные по относительной нормализации антиоксидантной защиты, характеризующейся оптимальной активностью глутатионредуктазы и содержанием МДА в норме.

3.2.4.2  Влияние предварительного  облучения крыс в дозе 0,75 Гр в сочетании с эракондом и флорентой на содержание клеток  костного мозга и периферической крови крыс при дозе 7 Гр

Облучение крыс в дозе 7 Гр угнетало пролиферативную активность костного мозга. При этом общее количество клеток в костном мозге на вторые сутки  уменьшалось  на 70-80% по сравнению с биологическим контролем.  Предварительное облучение в дозе 0,75 Гр за 28-30 суток до воздействия в дозе 7,0 Гр  способствовало развитию адаптации клеток костного мозга к повторному воздействию радиации. Больший эффект наблюдался при предварительном облучении крыс с последующим введением препаратов природного происхождения – эраконда и флоренты. Так в четвертой и пятой группах в период первичной реакции на облучение клеток сохранялось достоверно на 45-48% больше, чем  в контроле облучения (рис. 9). Функциональный пул гемопоэза, который представлен форменными элементами периферической крови,  последовательно реагировал на воздействие ионизирующей радиации вслед за нарушением гемопоэза  в костном мозге (табл. 8).

Количество лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов у крыс, подвергнутых ЛД60/30, резко снижалось по сравнению с биологическим контролем соответственно в 5,6 раза (3 сутки), в 1,7 раза (7 сутки) и в 4,3 раза (7 сутки). Предварительное облучение в низкой дозе  оказывало защитное действие на опустошение функционального пула гемопоэза. При этом  содержание лейкоцитов периферической крови в указанные сроки повышалось в 1,4 раза, эритроцитов в 1,3 раза, тромбоцитов в 1,2 раза. Введение эраконда и экстракта пихты сибирской с водой и кормом в сочетании с предварительным облучением способствовало еще большему повышению радиорезистентности клеток периферической крови.

Таблица 8– Показатели картины периферической крови подопытных крыс

Группы

Эритроциты,

1012/л

(7-е сут)

Тромбоциты,

109/л

(7-е сут)

Лейкоциты,

109/л

(3-е сут)

1 б.к.

6.56±0.08

410±17

8.98±0.15

к.о.

3.70±0.18*

96±4,6*

1.60±0.07*

(0,75+7Гр)

4.57±0.23**

114±3,1

2.20±0.07**

( 0,75+э+7Гр)

4.62±0.16**

126±4,2

2.56±0.07**

(0,75+фл+7Гр)

4.72±0.23**

129±3,3

2.60±0.15**

* Различия достоверны по сравнению с биологическим контролем при p<0.05.

** Различия достоверны по сравнению с контролем облучения при p<0.05.

Так, сохранность лейкоцитов в крови защищенных животных с применением эраконда и флоренты, в среднем,  была на 60% выше по сравнению с облученным контролем. Подобная закономерность наблюдалась и с количественным содержанием эритроцитов и тромбоцитов.

3.2.5  Влияние предварительного облучения (1,0 Гр), эраконда, тимогена и флоренты на компенсаторные возможности популяции клеток костного мозга крыс

Для изучения влияния предварительного облучения в низкой дозе, эраконда, тимогена и флоренты, как в отдельности так и в их сочетании, на компенсаторные возможности различных популяций клеток костного мозга крысы были разбиты на 9 групп: первая – биологический контроль; вторая – облученный контроль в дозе 9,0 Гр;  третья – 1,0 Гр + 9,0 Гр; четвертая – эраконд + 9,0 Гр; пятая – 1,0 Гр + эраконд + 9,0 Гр; шестая – тимоген + 9,0 Гр; седьмая – 1 Гр + тимоген + 9,0 Гр; восьмая – флорента + 9,0 Гр; девятая – 1 Гр + флорента + 9,0 Гр.

На 2 сутки (период наибольшего опустошения костного мозга) после воздействия в дозе 9,0 Гр содержание эритроидных клеток по сравнению с биологическим контролем достоверно уменьшилось на 90% (p<0,01). Применение исследуемых радиозащитных способов способствовало достоверному сохранению данной популяции клеток в этот  период по сравнению с контролем облучения в 2-3 и более раза (рис.10). На восьмые сутки компенсаторные возможности эритроидных клеток были значительно выше у защищенных животных и составляли в третьей, четвертой, пятой, шестой, седьмой, восьмой и девятой групп - 80,6; 75,1; 83,1; 78,0; 94,4; 77,6; 92,2%%, соответственно по отношению к биологическому контролю, в то время как в незащищенной группе только 61,3%.

Количество нейтрофильных клеток на вторые сутки после облучения в дозе 9,0 Гр достоверно уменьшилось в 17,4 раза  или на 94,3% по отношению к биологическому контролю (p<0,01). Применение предварительного облучения в дозе 1,0 Гр, эраконда, тимогена и флоренты как в отдельности так и в их сочетании способствовало сохранению данной популяции клеток по отношению к контролю облучения в 4-5 и более раз (рис.11). На восьмые сутки компенсаторные возможности нейтрофильных клеток в костном мозге бедренной кости были выражены сильнее в третьей, четвертой, пятой, шестой, седьмой, восьмой, девятой групп подопытных животных и составляли 78,0; 81,0; 86,1; 83,0; 91,5; 80,4; 94,8%%, соответственно  по отношению к биологическому контролю. В то время как в группе крыс контроля облучения их содержание составляло только 61,0%, что было достоверно  ниже величин подопытных групп и биологического контроля, в среднем, в 1,6 раза (p<0,05).

Рис.10 - Изменение эритроидных клеток  в костном мозге крыс на вторые сутки после облучения ЛД60/30

Рис.11 - Изменение нейтрофильных клеток  в костном мозге крыс на вторые сутки после облучения ЛД60/30

При воздействии радиации в дозе 9 Гр на вторые сутки происходило достоверное  снижение лимфоидных клеток в бедренной кости в 12,7 раза  по отношению к биологическому контролю (p<0,01). Применение предварительного облучения в дозе 1,0 Гр, эраконда, тимогена и флоренты как в отдельности так и в их сочетании способствовало достоверному сохранению данной популяции клеток в этот период по отношению к контролю облучения в, среднем, в 2,5-4 и более раз (рис.12). На восьмые сутки компенсаторные возможности лимфоидных клеток в костном мозге бедренной кости были выражены сильнее у защищенных групп подопытных животных и составляли в среднем 76-90%% по отношению к норме. В то время как в группе крыс контроля облучения их содержание составляло только 58,1%, что было достоверно  ниже величин подопытных групп.

Рис.12 – Изменение лимфоидных  клеток  в костном мозге крыс на вторые сутки после воздействия ЛД60/30

Таким образом, облучение крыс в дозе 9,0 Гр достоверно угнетает пролиферативную активность костного мозга. При этом количество эритроидных, нейтрофильных и лимфоидных клеток на вторые сутки после воздействия радиации в указанной дозе достоверно уменьшается.  Применение предварительного облучения за 28-30 суток до летального воздействия, введение  эраконда, тимогена и флоренты как в отдельности,  так и в их сочетании с предварительным облучением способствует сохранности эритроцитарного, гранулоцитарного и агранулоцитарного ростков гемопоэза в костном мозге бедренной кости  крыс. При этом тимоген в большей степени оказывает положительное влияние,  как на сохранение,  так и на восстановление лимфоидных клеток костного мозга. 

3.2.6 Иммунобиологическое состояние защищенных и облученных летальной дозой крыс

На данном отрезке работы изучали влияние предварительного облучения в дозе 1,0 Гр в сочетании с  тимогеном, эракондом и флорентой на иммунобиологические показатели подопытных крыс (табл.9).

Однократное облучение крыс второй группы в дозе 9 Гр достоверно угнетало  синтез IgG, IgA, IgM  по сравнению с биологическим контролем  в 1,8; 2,0  и 1,7 раза,  соответственно (p<0,05).  При этом достоверно, на 48,7%, увеличивалось содержание ЦИК (p<0,05). В этих условиях реакция Уанье оценивалась как резко положительная.  Достоверно, в 3,2 раза, увеличивалось количество бляшкообразующих клеток; значительно уменьшалось содержание  Т- и В-лимфоцитов; понижалась функциональная активность щитовидной железы, оцениваемая содержанием Т3 и Т4. Перечисленные показатели  свидетельствовали о выраженном иммунодефицитном состоянии организма летально облученных животных. При этом нарушалась антиоксидантная система организма, о чем свидетельствовали достоверное повышение малонового диальдегида в 2,24 раза (p<0,01) и достоверное понижение глутатионредуктазы в 2,25 раза (p<0,01).

  На этом фоне  в третьей, четвертой и пятой подопытных группах происходила коррекция  содержания основных классов иммуноглобулинов, Т- и В-лимфоцитов. Функциональная активность щитовидной железы приближалась к норме. Снижалось  содержание агрессивных аутоантител, бляшкообразующих клеток и циркулирующих иммунных комплексов; повышалась активность глутатионредуктазы и понижалось содержание  малонового диальдегида  по сравнению с незащищенными и облученными в летальной дозе животных.  Нормализация иммунных и антиоксидантных  показателей у защищенных, а затем облученных летальной дозой  животных, свидетельствовало о положительном влиянии примененных способов профилактики острой лучевой болезни, включающих предварительное облучение в сочетании с тимогеном, эракондом и флорентой.

Таблица 9 – Иммунобиологические показатели подопытных крыс на 7 сутки после  воздействия радиации в ЛД90-100/30

Показатели

Группы

1

(б.к.)

2

(к.о.)

3

(1Гр+Эр+9Гр

4

1Гр+т+9Гр

5

1Гр+фл+9Гр

Ig G мг/мл

6,88±0,80

3,82±0,04*

5,94±0,12

6,24±0,18**

5,74±0,06**

Ig А мг/мл

0,49±0,08

0,24±0,02*

0,38±0,01

0,42 ±0,21**

0,38±0,04**

Ig М мг/мл

0,58±0,08

0,34±0,08*

0,62±0,04

0,64±0,14**

0,54±0,06**

ЦИК (усл.ед.)

41,4±1,22

61,6±0,12*

42,2±0,14

41,8±0,18**

42,6±0,24**

Антитела к

ЛСЭ (баллы)

0,29±0,09

2,2±0,03*

0,5±0,06

0,5±0,16**

0,3±0,01

БОК (%)

1,82±0,03

5,84±0,12*

2,08±0,09

2,22±0,21 **

2,24±0,06**

Т-клетки, %

45,5±1,82

34,5±0,24*

42,5±0,14

43,5±0,23

43,7±1,08

В-клетки, %

29,0±1,02

23,0±0,32*

26,4±0,16

27,4±0,26

26,8±0,82

Т3(нмоль/л)

1,29±0,15

0,72±0,01

1,12±0,01

1,22±0,06**

1,27±015**

Т4(нмоль/л)

54,2±2,02

44,2±0,42*

52,4±1,12

52,8±0,08**

51,8±0,32**

МДА

(н-моль/1г ткани)

2,24±0,05

5,02±0,04*

2,32±0,22**

2,36±0,08**

2,28±0,06**

ГР(Н-моль НАДФН2/1мг ткани за 1 мин.)

14,62±0,32

 

6,32±0,22*

13,42±0,70**

13,02±1,07**

14,02±0,21**

  Гистологические исследования сердца, селезенки и печени крыс, защищенных предварительным облучением в сочетании с препаратами природного происхождения от повторного летального воздействия, показали, что морфологическая структура органов сохранена, а имеющиеся изменения носят стереотипный характер и не имеют отличий от таковых биологического контроля.

Таким образом, способы профилактики острой лучевой болезни, включающие предварительное облучение, в сочетании с тимогеном, эракондом и флорентой в диапазоне доз костномозгового синдрома  сохраняют гемопоэз, количество форменных элементов периферической крови. Положительно влияют на неспецифические факторы защиты организма, способствуют нормальной координации гуморальных и клеточных факторов  иммунитета, нормализуют антиоксидантную защиту облученного организма, сохраняют морфологическую структуру внутренних органов, способствуют развитию восстановительных процессов в критических органах и тем самым  способствуют выживаемости животных, облученных летальными дозами ионизирующей радиации.

3.3 Санитарная и биологическая оценка мяса, полученного от животных при внешнем облучении

Возможность использования мяса, полученного от облученных продуктивных животных в чрезвычайных ситуациях, когда неизбежен их массовый убой,  на практике всегда вызывает определенный интерес. Наша работа выполнена на животных, при их внешнем облучении в экспериментальных условиях.

При этом нетели получили однократные дозы 4,0 и 4,5 Гр; свиньи – однократную дозу 4,0 Гр; овцы – однократную 3,5 Гр и трехкратную суммарную -  9 Гр, с интервалом в 1-2 месяца (1,0+3,5+4,5 = 9 Гр).  Работа  предусматривала получение мяса от облученных животных и возможности его длительного хранения в обычных условиях с применением нетрадиционных способов консервации с последующей его ветеринарно-санитарной и биологической оценкой.

Убой продуктивных облученных животных проводили в латентный период  острой лучевой болезни. Перед убоем проводили клиническое обследование животных, которое показало, что их общее состояние, температура, пульс дыхание, состояние  видимых  слизистых, количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина в периферической крови соответствовало значениям, характерным для латентного периода острой лучевой болезни. При осмотре туш и внутренних органов облученных животных  наблюдались признаки, характерные также для этого периода болезни  (Киршин В.А., Бударков В.А., 1990).

3.3.1 Ветеринарно-санитарная экспертиза показала, что  органолептические показатели свежего мяса животных, подвергнутых однократному и  трехкратному радиационному воздействию, соответствовали таковым доброкачественного мяса (ГОСТ 7269-79). По физико-химическим и микроскопическим показателям (содержание аминоаммиачного азота, летучих жирных кислот, реакция с серно-кислой медью в бульоне, концентрация водородных ионов, реакция на пероксидазу, количество микроорганизмов в одном поле зрения мазка-отпечатка) мясо, полученное от подвергнутых внешнему радиационному воздействию животных не отличалось от мяса интактных животных, и соответствовало требованиям ГОСТа 23392-78, принятым для доброкачественного мяса. При этом общая микробная обсемененность мышечных слоев говядины, свинины, баранины в остывшем состоянии, полученных от облученных животных, имела тенденцию к увеличению, по сравнению с мясом интактных животных, но отвечала требованиям ГОСТа 2123 7-75.

На следующем этапе работы оценивались ветеринарно-санитарные показатели и  биологическая оценка как  замороженного мяса, полученного от облученных животных, так и  говядины, свинины и баранины, подвергнутых нетрадиционным способам консервирования и хранения при температуре +15…+250С. В работе были использованы два консерванта, разработанных во ВНИИВСГиЭ (1992). Отличительной особенностью разработанных консервантов является то, что наличие в них кислотных добавок (рН рассола – 2,1-2,7%) в сочетании с 20% поваренной солью и 0,1% бензоатом натрия придает им высокие бактериостатические свойства. Все входящие в рецептуры компоненты разрешены к применению в пищевой промышленности Минздрава РФ и ФАО/ВОЗ. Через 60 суток хранения при температуре + 15…+250С консервированная говядина, свинина, баранина от облученных животных по органолептическим  соответствовали требованиям ГОСТа 1386-55, существенных изменений в содержании аминоаммиачного азота не наблюдалось. Бульон при добавлении в него 5% раствора сернокислой меди оставался прозрачным или слегка мутным. В поле зрения мазка-отпечатка из глубоких слоев микрофлора не обнаруживалась.  Результаты биохимических исследований показали, что концентрация водородных ионов увеличивалась к 60 суткам хранения  на 25 – 33%. Реакция на пероксидазу во все сроки  была положительной. Исследование консервирующей смеси выявили увеличение рН в процессе хранения  в среднем на 30%.

3.3.2 Изучение биологической ценности и безвредности свежего, замороженного и консервированного мяса облученных животных в процессе хранения

Нами исследовалось мясо различного состояния – свежее, консер­вированное холодом и химическим способом, полученное от животных, подвергнутых однократному и трехкратному внешнему гамма-облучению.

. Биологическую ценность и безвредность консервированной говядины, свинины и баранины проводили на  инфузории Tetrahimena piriformis и на белых беспородных крысах.

Основным показателем при оценке результатов биотестирования с помощью Tetrahimena piriformis является относительная биологи­ческая ценность (ОБЦ), которая определяется отношением числа вы­росших инфузорий на исследуемом продукте к числу их на стандарт­ном образце. В качестве стандартного образца нами использовалась говядина, свинина, баранина от клинически здоровых животных в остывшем состоянии (табл. 10).

Таблица 10 – Результаты биотестирования мяса животных с помощью инфузории Tetrahimena piriformis

Доза облуче- ния животных

(Гр)

Вид мяса

Состояние мяса

Консервант

ОБЦ

% к контролю

4,5

говядина

консерв.

№ 2

96,8±3,02

4,0

говядина

консерв.

№ 1

93,9±4,23

4,0

говядина

консерв.

№ 2

102,0±3,24

контроль

говядина

остывшая

-

100

4,5

свинина

консерв.

№ 1

99,9±1,52

4,0

свинина

консерв.

№ 1

100,0±05,43

4,0

свинина

консерв.

№2

97,4±2,37

контроль

свинина

остывшая

-

100

9,0

баранина

консерв.

№ 2

100,6±3,63

4,5

баранина

консерв.

холод

97,0±3,02

4,5

баранина

консерв.

№ 1

92,0±4,01

б.к.

баранина

консерв.

№ 2

100,4±2,32

контроль

баранина

остывшая

-

100

В целом количество инфузорий, выросших на питательных субстратах с добавлением консервированного мяса облученных животных, во всех подопытных группах не имела существенных или досто­верных отличий от контрольного показателя, которым являлось остывшее мясо, поэтому ОБЦ мяса находилась в пределах контроля (табл.10).

Для установления коэффициента эффективности белка мяса в опыте использовались и крысята-отъемыши, самцы со средней массой 54,2 г. В течение 28 дней крысята подопытных крыс ежесуточно получали 3-4,3 г иссле­дуемого продукта, содержавших 180 мг азота или 1,125 г белка.  Контрольная группа животных получала стандартный казеин. Через каждые  семь дней производили взвешивание животных. На протяжении всего опыта животные чувствовали себя хорошо. Крысята с удовольствием и полностью поедали мясо, вы­глядели бодрыми, подвижными. Реакция на внешние раздражители была адекватной.

В целом прирост массы крысят подопытных групп за 28 суток не имел достоверных отклонений от массы таковых контрольной группы. Отсюда коэффициент эффективности белка в подопытных группах соответствовал коэффициенту, полученному в контрольной группе. В конце опыта проводили патологоанатомическое исследование внутренних органов и их взвешивание. Масса печени, почек, селезенки, сердца, семенников и их весовые коэффициенты в подопытных группах  находились в пределах величин контрольной группы крысят.

Острый опыт в течение 7 суток проводили на половозрелых крысах-самцах. В задачу входило выявление острого токсического действия исследуемого консервированного мяса.

Содержание крыс на рационе, белковая часть  которого полностью состояла из консервированного продукта,  в течение 7 суток не выявило  заметных изменений в картине крови. Гематологические показатели подопытных животных находились на уровне контрольных величин. Биохимические исследования крови  крыс, получавших консервированную говядину, свинину и баранину (консервант № 1 и № 2) показали, что уровень гормонов щитовидной и поджелудочной желез не имел достоверных отличий от контрольных значений (табл. 11)

Таблица 11– Содержание гормонов Т3, Т4 и инсулина в сыворотке крови крыс

Группы

Т3

нмоль/л

Т4

нмоль/л

Инсулин

мкед/мл

Первая (свинина № 1)

1,22±0,260

38,61±4,721

19,98±4,365

Вторая (говядина № 2)

1,14±0,070

39,37±4,868

20,54±2,530

Третья (баранина № 2)

1,23±0,196

41,77±8,149

19,15±1,480

Четвертая (контроль)

1,17±0,154

40,58±3,548

20,65±1,807

В подостром опыте в течение 28 суток крысята отъемыши-самцы  содержались на рационе, белок которого полностью состоял из исследуемого продукта. Скармливание крысятам консервированного мяса в течение 28 суток не оказывало заметного влияния на их общее состояние.

Кормление крысят в течение 28 суток консервированным мясом от однократно облученных животных (консервант № 1 и № 2) не вызывало у них изменений в картине периферической крови, включая лейкоцитарный профиль. Аналогичные результаты  при исследовании гематологических показателей получены и при тестировании баранины от трехкратно облученных овец в суммарной дозе 9,0 Гр (консервант № 2). Результаты биохимических исследований показали, что уровень общего белка в сыворотке крови всех подопытных групп крыс находился в пределах контрольного значения. Колебания активности  аспартат- и аланинаминотрансферазы в сыворотке крови подопытных животных были незначительны по отношению к контролю. В печени активность перечисленных ферментов оставалась стабильной (табл.12).

Таблица  12 – Результаты биохимического исследования

Группы

Показатели

общий

белок (г/л)

АСТ нмоль/л-ч, г-ч

АЛТ нмоль/л-ч, г-ч

сыворотка

крови

печень

сыворотка

крови

печень

1

66.3±4,19

3.04±0,12

5,80±0,13

2,30±0,14*

2,58±0,15

2

61,1±6,13

2,65±0,22

5,83±0,10

2,06±0,19

2,89±0,17

3

65,7±6,92

2,36±0,08

6,07±0,02

2,03±0,07

2,93±0,09

4

60,8±3,24

2,54±0,21

6,10±0,14

1,97±0,05

3,11±0,25

5

72,3±2,81

2,74±0,19

5,72±0,15

2,23±0,11

2,79±0,10

6

60,3±6,42

2,89±0,18

5,66±0,13

2,02±0,13

3,04±0,06

контроль

69,7±5,06

2,53±0,18

5,81±0,21

1,91±0,08

2,90±0,07

* - Р 0,05

Гистоморфологические исследования сердца, селезенки, печени у всех контрольных и подопытных групп крысят выявили однотипность микроструктурного состояния перечисленных органов.

Таким образом, кратковременное (7 суток) и продолжительное (28 суток) содержание подопытных крыс на рационах с белковым компонентом за счет исследуемого консервированного мяса не оказывало отрицательного влияния на общее состояние, рост и развитие животных; на  качественный и количественный состав крови; на уровень общего белка крови. На содержание гормонов щитовидной и поджелудочной желез - тироксина, трийодтиронина и инсулина; на активность ферментов аспартат- и аланинаминотрансферазы в сыворотке крови и печени.

В опыте на трех поколениях крыс установлено, что длительное скармливание консервированной говядины, свинины и баранины  не оказывало отрицательного влияния на выживаемость, развитие молодняка, на его росто-весовые показатели, а также воспроизводительные функции самок и самцов крыс. При скармливании консервированного мяса в вареном виде в течение жизни трех поколений, как в опытных, так и в контрольных группах гибели животных не наблюдалось (в опытах использовано 440 крыс). Коэффициент эффективности белка изучаемых продуктов в исходном втором и третьем поколениях подопытных крыс в среднем составлял 2,11-2,68, при этом достоверных различий с контролем не отмечалось.

Народившееся потомство второго и третьего поколений было жизнеспособным, через 9-10 суток после рождения у крысят появлялся шерстный покров; на 13-15 сутки они становились зрячими; к 20-25 суткам (период отъема) набирали живую массу 40-50 г. Явлений тератогенеза не установлено. В возрасте трех месяцев  животные достигали живой массы 180-200 г и становились половозрелыми. Гематологический профиль находился в пределах физиологической нормы.

Таким образом, в опыте на трех поколениях крыс, содержавшихся на рационах с белковым компонентом за счет консервированного мяса, не выявлено каких-либо нарушений в воспроизводительных функциях подопытных животных - половой зрелости, сроках беременности, численности приплода, а также в выживаемости и развитии потомства.

ВЫВОДЫ

1. Однократное гамма-облучение  в дозах 7,0 и 9,0 Гр вызывает у крыс глубокие нарушения в кроветворении, угнетает гуморальные и клеточные факторы иммунитета, угнетает функциональную активность щитовидной железы,  нарушает антиоксидантную защиту организма и способствует развитию средней и тяжелой степени острой лучевой патологии.

2. Длительное низкоинтенсивное гамма-облучение в течение 30, 60, 90 и 120 суток  в суммарных дозах 0,28-1,12 Гр  не вызывает видимых клинических изменений у подопытных крыс. При этом наблюдается незначительная лейкопения, эритропения, недостоверное понижение функциональной актив-ности щитовидной железы. Гуморальное и клеточное звено иммунитета ос-тается без изменений. Наблюдается слабый процесс аутоиммунизации в крови, селезенке, печени, почках, который приходится на начальный период нахождения животных под непрерывным облучением. Недостоверное снижение содержания общего белка, эфиров холестерина наблюдается в течение  трех месяцев нахождения под облучением. Содержание общих фос-фолипидов не изменяется. Подобные особенности характерны и для свиней.

3. Однократное гамма-облучение крыс в диапазоне доз 0,5-2,0 Гр  вызывает изменения со стороны показателей картины периферической крови, достоверность которых носит временной и дозовый характер. Восстановительный процесс протекает интенсивно и  заканчивается к 30 суткам.

4. Предварительное однократное γ-облучение в малых  дозах,  препараты природного происхождения – эраконд, тимоген и флорента оказывают радиозащитное действие.

5. Предварительное облучение крыс в диапазоне доз от 0,5-1,5 Гр способствует развитию устойчивости их к последующему облучению в летальных дозах. При этом наибольший процент выживаемости (40-50%) у крыс наблюдается при предварительном облучении в дозах 0,75 и 1,0 Гр с временным интервалом между облучениями 28-30 дней.

6. Эраконд, тимоген и флорента, вводимые крысам до облучения в летальных дозах, стабилизируют гемопоэз, клеточные и гуморальные факторы иммунитета, нормализуют антиоксидантную систему организма, оказывают положительное влияние на функциональную активность щитовидной железы.

7. Повышение радиорезистентности организма (70-80%) достигается путем предварительного воздействия гамма-излучения в малых дозах  в сочетании с эракондом. При этом однократно за 28-30 дней до воздействия летальных доз крыс подвергают  предварительному воздействию гамма-излучения  в дозе 0,75-1,0 Гр, а в течение 5-10 дней до облучения летальными дозами ионизирующего излучения вводят эраконд  в расчете 5,0-7,5 мл/кг с водой или кормом.

8. Повышение радиорезистентности организма достигается путем предварительного воздействия гамма-излучения в малых дозах  в сочетании с тимогеном.  При этом однократно за 28-30 дней до воздействия гамма-излучения в летальной дозе крыс подвергают  предварительному воздействию гамма-излучения  в дозе 0,75-1,5 Гр, а в течение 5-10 дней до облучения летальными дозами ионизирующего излучения вводят тимоген с водой или кормом в дозе 40-60 мкг/кг. При этом выживаемость составляет 70-80%.

9. Повышение радиорезистентности организма достигается путем предварительного воздействия гамма-излучения в малых дозах  в сочетании с флорентой.  При этом однократно за 28-30 дней до воздействия гамма-излучения в летальной дозе крыс подвергают  предварительному воздействию гамма-излучения  в дозе 0,75-1,0 Гр, а в течение 5-7 дней до облучения летальными дозами ионизирующего излучения вводят флоренту с водой или кормом в объеме 6-8,5 мл/кг. При этом выживаемость составляет в среднем 60-80%.

10. Механизм радиозащитного эффекта предварительного облучения в сочетании с эракондом, флорентой и тимогеном обусловлен их адапто-генными, иммуномодулирующими и антиоксидантными свойствами. Сочетание предварительного воздействия радиации в малых дозах с препаратами природного происхождения повышает компенсаторные  возможности гемопоэза у животных, подвергнутых летальному воздействию радиации.  Оказывает корригирующее действие на гуморальные и клеточные факторы иммунитета, нормализует процессы аутоиммунизации, сохраняет антиоксидантную систему организма,  предотвращает развитие геморрагического синдрома.

11. Гистоморфологическая структура  сердца, селезенки и печени у крыс после пролонгированного низкоинтенсивного облучения в малых дозах, а также после облучения  в летальных дозах в условиях применения радиозащитных средств сохранена.

12. Мясо, полученное от животных в латентный период острой лучевой болезни при внешнем воздействии ионизирующей радиации,  и подвергнутое химическому консервированию  сохраняет доброкачественные показатели солонины по органолептическим, биохимическим и бактериологическим показателям до 60 суток при температуре окружающей среды +15…+250С. Биологическая ценность говядины, свинины, баранины по истечении 60 суток хранения не имеет существенных отличий от контрольного продукта.

13. Содержание крыс на рационах с белковым компонентом за счет исследуемой консервированной говядины, свинины и баранины не оказывает отрицательного влияния на общее состояние,  рост и развитие животных, на показатели картины крови, уровень гормонов тироксина, трийодтиронина, инсулина, на активность ферментов – аспартат- и аланинаминотрансферазы в сыворотке крови и печени. Не влияет на весовые коэффициенты паренхиматозных органов, воспроизводительную функцию подопытных  животных, а также на выживаемость и развитие потомства. Не вызывает гистоморфологических изменений в сердце и печени.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для  повышения резистентности организма  к неблагоприятным условиям среды, включая чрезвычайные ситуации, связанные с повышением уровня радиации,  рекомендуем  использовать природные адаптогены – эраконд, тимоген, флоренту.

2.  Для повышения надежности  комплекса мероприятий  по групповой защите животных от воздействия внешней радиации рекомендуем использовать разработанные способы профилактики острой лучевой болезни, которые предполагают предварительное облучение в малых дозах в сочетании с природными радиозащитными средствами.

3.  Для  установления антирадикальных, антиоксидантных и иммункорригирующих  свойств  испытуемых лечебных препаратов различной природы рекомендуем использовать облученных лабораторных животных (мышей, крыс).

4. Рекомендуем результаты исследований, связанные с предварительным облучением в малых дозах в сочетании с природными радиозащитными средствами,  изучить и учитывать в радиационной терапии онкологических заболеваний.

5.  Полученные экспериментальные данные по ветеринарно-санитарной экспертизе и биологической оценке мяса рекомендуем учитывать при решении вопросов рационального использования  облученных ионизирующей радиацией животных.

6.  Результаты исследований рекомендуем включить в учебный процесс ветеринарных и биологических вузов и факультетов при изучении радиобиологии, патологической физиологии, иммунологии, терапии, ветеринарно-санитарной экспертизы, экологии, радиоэкологии, а также использовать при написании учебников и учебных пособий.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

Публикации в научных изданиях, рекомендованных ВАК РФ

1. Сафонова, В.А. Влияние неблагоприятных экологических факторов физической природы на некоторые показатели специфической защиты у животных /В.А.Сафонова, В.Ю.Сафонова //Вестник Оренбургского ГУ. -2003. - № 6. –С. 161-165.

2. Сафонова, В.Ю. Биологическая оценка баранины, полученной от облученных животных /В.Ю.Сафонова  //Вестник Оренбургского ГУ. -2004. -№ 9. –С.107-110.

3. Сафонова, В.А. Влияние ионизирующей радиации на показатели гуморального иммунитета животных /В.А Сафонова, В.Ю.Сафонова //Вестник РАСХН». -2004. -№4. –С. 22-24.

4. Сафонова, В.Ю. О влиянии фитопрепаратов на  радиорезистентность организма  /В.Ю.Сафонова  //Вестник Оренбургского ГУ. -2005. -№ 4. –С.92-96.

5. Сафонова, В.Ю. Влияние экстракта пихты сибирской на некоторые показатели окислительных и аутоиммунных процессов у облученных животных /В.Ю.Сафонова  //Вестник Красноярского ГАУ. -2007. -Вып. 6.  -С.165-169.

6. Сафонова, В.А. Влияние предварительного облучения животных малой дозой радиации в сочетании с фитопрепаратами на содержание клеток костного мозга и периферической крови при последующем летальном радиационном воздействии /В.А.Сафонова, В.Ю.Сафонова //Вестник Красноярского ГАУ. -2008. -Вып.2. –С.190-195.

7.  Сафонова, В.Ю. Некоторые показатели радиочувствительности организма и их коррекция  / В.Ю.Сафонова //Вестник Оренбургского ГУ. -2008. -Вып. 6 (88). -С.112-117.

8. Сафонова, В.Ю. Влияние предварительного воздействия ионизирующего излучения в низкой дозе и эраконда на выживаемость, клиническое состояние и гемопоэз повторно облученных летальной дозой животных  /В.Ю Сафонова, В.А.Сафонова //Вестник Красноярского ГАУ. -2008. -Вып. 4. -С.196-201.

9. Сафонова, В.Ю.  Санитарная и биологическая оценка свежей говядины, полученной от облученных животных  /В.Ю.Сафонова //Вестник Оренбургского ГУ. -2008. -№ 81. –С .117-121.

10. Сафонова, В.Ю. Влияние ионизирующего излучения в низкой дозе на гистоморфологию печени крыс /В.Ю.Сафонова, В.А.Сафонова //Известия Оренбургского ГАУ. -2008. -№ 4(20). –С.122-124.

11. Сафонова, В.Ю. Влияние эраконда, флоренты и тимогена на содержание клеток костного мозга облученных крыс /В.Ю. Сафонова //Труды Кубанского ГАУ. Серия: Ветеринарные науки. -2009, № 1 (ч.1.). –С.237-239.

12. Сафонова, В.Ю. Влияние физического фактора и тимогена на клинические показатели облученных крыс /В.Ю. Сафонова //Труды Кубанского ГАУ. Серия: Ветеринарные науки. -2009, № 1 (ч.1.).  –С.239-241.

Изобретения по теме диссертации

13. Сафонова, В.Ю. Способ физико-биологической профилактики острой лучевой болезни: Патент РФ на изобретение № 2307398 /В.А.Сафонова, В.Ю.Сафонова, А.П.Жуков //Бюл., 2007. -№ 27. – 4 с.

14. Сафонова, В.Ю. Способ профилактики острой лучевой болезни лабораторных животных: Патент РФ на изобретение /В.Ю.Сафонова, В.А.Сафонова, А.П.Жуков //Бюл., 2008. -№ 36. -5 с.

Учебно-методические пособия

15. Сафонова, В.А. Элементы ядерной физики и химии в биологии и ветеринарии: учебное пособие /В.А.Сафонова, В.Ю.Сафонова. – Оренбург:  Издательский центр Оренбургского ГАУ, 2000. -118 с.

16. Сафонова, В.Ю. Радиационная экология: учебное пособие /В.Ю.Сафонова, В.А.Сафонова. – Оренбург: Издательский центр Оренбургского ГАУ,  2005. – 312 с.

17.  Сафонова, В.Ю.Относительная биологическая эффективность ионизирующих излучений: учебно-методическая разработка /В.Ю.Сафонова. – Оренбург: Издательский центр Оренбургского ГАУ, 2006. -12 с.

18.  Сафонова, В.Ю. Дозы ионизирующих излучений: учебно-методическая разработка /В.Ю.Сафонова. – Оренбург: Издательский центр Оренбургского ГАУ, 2006. -11 с.

19. Методы радиационной экспертизы объектов ветеринарного и экологического надзора: учебно-методическое пособие /В.А.Сафонова, Р.Ш.Тайгузин, В.Ю.Сафонова, Д.Г.Мустафина. – Оренбург: Издательский центр Оренбургского ГАУ, 2009. -80 с.

Публикации в материалах конференций, сборниках научных трудов и других периодических изданиях

20. Сафонова, В.Ю. Биологическая оценка мяса, полученного от облученных овец  /В.Ю.Сафонова, В.С.Портнов  //Прикладные аспекты радиобиологии: матер. Всероссийской научно-практической конференции. - Москва, 1994. -С.83-84.

21. Сафонова, В.Ю. Изучение биологической ценности консервированного  мяса экспресс-методом /В.Ю.Сафонова  //Резервы увеличения производства и повышения качества сельскохозяйственной продукции: матер. региональной научно-практической конференции. - Оренбург, 1994. –С.46-47.

22. Сафонова, В.Ю. Изучение биохимических показателей крови и органов крыс, получавших консервированное мясо /В.Ю.Сафонова //Резервы увеличения производства и повышения качества сельскохозяйственной продукции: матер. региональной научно-практической конференции. - Оренбург, 1994. –С. 47-48.

23. Сафонова, В.Ю. Биологическая оценка консервированного мяса /В.Ю.Сафонова //Проблемы ветеринарной санитарии и экологии:  тематич. сборник науч. работ. – Москва, 1994. -Т.94.  –С.24-25.

24. Сафонова, В.Ю. Активность аланин- и аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови и печени крыс, получавших консервированное мясо /В.Ю. Сафонова //Проблемы ветеринарной санитарии и экологии:  тематич. сборник науч. работ. - Москва, 1994. -Т.94. -С. 22-23.

25. Сафонова, В.Ю. Годовой отчет научно-исследовательской работы /В.Ю.Сафонова  //Государственное задание «Скатка-7». -М.:  ВНИИВСГиЭ, 1994. -11 с.

26. Сафонова, В.Ю. Некоторые показатели функционального состояния щитовидной и поджелудочной желез у крыс, получавших консервированную говядину от облученных животных /В.Ю.Сафонова  //Респ. научно-произв. конф. по актуальным проблемам ветеринарии и жив-ва: матер. конф. -Казань, 1997. –С. 143-144.

27. Сафонова, В.Ю. Отдаленные последствия у крыс, поедавших мясо свиней, подвергнутых химическому и радиационному воздействию /В.Ю.Сафонова //Регион. конф. молодых ученых и специалистов: сб. мат. конф. -Оренбург, 1997. –С.60-61.

28. Сафонова, В.Ю. Биологическая оценка мяса свиней, подвергнутых радиационному и химическому воздействию /В.Ю.Сафонова //Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных:: сб. матер. межд.. коорд.. совещ. - Воронеж, 1997. –С.254-255.

29. Сафонова, В.Ю. Ветеринарно-санитарные показатели баранины, полученной от пораженных ионизирующим излучением овец /В.Ю.Сафонова //Вестник ветеринарии: внутривуз. сборник научных работ. -Оренбург, 1999. -С.49-52.

30. Сафонова, В.Ю. Изучение биологической ценности говядины от облученных животных на культуре инфузорий /В.Ю.Сафонова  //Вестник ветеринарии: внутривуз. сборник научных работ. - Оренбург, 1999. –С.52-54.

31. Сафонова, В.Ю. Оценка безвредности говядины, полученной в различных экологических условиях /В.Ю.Сафонова  //Морфология и хирургия в практической ветеринарии и медицине: материалы научно-практической конференции. -Оренбург, 1999. -С. 157-158.

32. Сафонова, В.Ю. Клеточные и гуморальные факторы иммунитета животных при внешнем хроническом гамма-облучении  /В.Ю.Сафонова  //Незаразные болезни животных: матер. Международ.. научно-производ. конф., посвящ. 70-летию зооинж. фак-та  Казанской ГАВМ 30-31 мая 2000 г. -Казань, 2000. -С. 239-240.

33. Сафонова, В.Ю. Соотношение Т- и В-лимфоцитов в периферической крови хронически облученных крыс /В.Ю.Сафонова //Вестник ветеринарии: внутривуз. сборник научных работ. -Оренбург, 2000. –С. 100 -102.

34. Сафонова, В.А. Биологическая оценка малых уровней радиации при чрезвычайных ситуациях /В.А.Сафонова, В.Ю.Сафонова  //Проблемы регионального управления рисками на объектах агропромышленного комплекса: матер. международ. научно-практич. конф. - Оренбург, 2002. –С. 185-192.

35. Сафонова, В.Ю. О предварительном облучении крыс в малых дозах /В.Ю.Сафонова, В.А.Сафонова //Актуальные проблемы ветеринарной медицины и биологии: матер. междунар. научно-практич. конф., посвященной 150-летию ветеринарной службы Оренбуржья. -Оренбург, 2003. –С.294-297.

36. Сафонова, В.Ю. Влияние различных уровней радиации на формирование аутоантител у животных /В.Ю.Сафонова //Актуальные проблемы ветеринарной медицины и биологии:  материалы междунар. научно-практич. конф., посвященной 150-летию ветеринарной службы Оренбуржья. -Оренбург, 2003. –С. С.441-448.

37. Сафонова, В.Ю. Исследование говядины, полученной от облученных животных, на безвредность в условиях «острого» опыта на крысах  /В.Ю.Сафонова //Актуальные вопросы ветеринарной медицины: матер. междунар. научно-практич. конфер. -Новосибирск, 2004. –С.222-223.

38. Сафонова, В.Ю. Влияние радиации на образование циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови животных /В.Ю.Сафонова //Актуальные вопросы ветеринарной медицины: матер. международ. научно-практич. конференции. - Новосибирск, 2004.  –С.219-221.

39. Сафонова, В.Ю. К механизму формирования аутоантител в организме  облученных животных  /В.Ю.Сафонова //Известия Оренбургского ГАУ. -2005. -№ 2. –С.142-145.

40. Сафонова, В.Ю. Динамика образования аутоантител к лизату собственных эритроцитов у облученных животных /Сафонова В.Ю.  //Материалы 5 конференции иммунологов Урала. -Оренбург, 2006. -С.26-27.

41. Сафонова, В.Ю. Содержание Т- и В-лимфоцитов у облученных животных на фоне применения экстракта люцерны посевной /В.Ю.Сафонова //Материлы международной конференции по патофизиологии животных. -Санкт-Петербург, 2006. -С.95-96.

42. Сафонова,  В.Ю. Влияние хронического ионизирующего излучения низкой интенсивности на гистоморфологическую структуру внутренних органов животных /В.Ю.Сафонова //Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях:: матер. международ. научно-практич. конференции. -Краснодар, 2006. –С.68-69.

43. Сафонова, В.А. Возможные оценки сохранности биоресурсов в условиях повышенного радиационного фона /В.А.Сафонова, В.Ю.Сафонова //Биоразнообразие и биоресурсы Урала и сопредельных территорий: материалы 3-й Международной научно-практической конференции. -Оренбург, 2006. -С.290-292.

44. Сафонова, В.Ю. Влияние флоренты на  функциональную активность щитовидной железы облученных животных /В.Ю.Сафонова  //Известия Оренбургского ГАУ. -2006. -№ 3. -С.165-167.

45. Сафонова, В.Ю. Показатели антиоксидантной системы у облученных и защищенных животных /В.Ю.Сафонова //Материлы международной конференции по патофизиологии животных. -Санкт-Петербург, 2006. -С.93-95.

46. Сафонова, В.Ю. Реакция клеток костного мозга на повторное облучение /В.Ю.Сафонова  //Известия Оренбургского ГАУ. -2006. -№ 2. -С.171-174.

47. Сафонова, В.Ю. Влияние эраконда на показатели гемопоэза у животных, подвергнутых воздействию радиации /В.Ю.Сафонова //Современные проблемы ветеринарной терапии и диагностики болезней животных: матер. юбил. междунар. научно-практич. конференции ветерин. терапевтов и диагностов, посв.90-летию со дня рожд. заслуж. деятеля науки РСФСР, доктора  вет. наук, проф. Кабыша А.А. -Троицк, 2007. -С. 91-93.

48. Сафонова, В.Ю. Влияние эраконда на показатели антиоксидантной системы животных, подвергнутых ионизирующему излучению /В.Ю.Сафонова //Современные проблемы ветеринарной терапии и диагностики болезней животных: матер. юбил. междунар. научно-практич. конференции ветерин. терапевтов и диагностов. – Троицк, 2007. -С. 89-91.

49. Сафонова, В.А. Клинико-гематологические показатели крыс в условиях хронического воздействия гамма-излучения низкой мощности /В.А.Сафонова, В.Ю.Сафонова //Современные проблемы ветеринарной терапии и диагностики болезней животных: матер. юбил. междунар. научно-практич. конференции ветерин. терапевтов и диагностов. – Троицк, 2007. -С. 87-89.

50. Сафонова, В.А. Влияние радиации на некоторые показатели иммунитета у животных на фоне применения флоренты /В.А.Сафонова, В.Ю.Сафонова //Современные проблемы ветеринарной терапии и диагностики болезней животных: матер. юбил. междунар. научно-практич. конференции ветерин. терапевтов и диагностов. – Троицк, 2007. -С. 85-87.

Принятые сокращения

Гр  – Грей, единица измерения поглощенной дозы  ионизирующего излучения

ЛД50/30 – летальная доза, вызывающая 50% гибель животных в течение 30 дней

ПО – предварительное облучение

АОК - антителообразующие клетки

Т3 - трийодтиронин

Т4 - тироксин

БОК – бляшкообразующие клетки

ЦИК – циркулирующие иммунные комплексы

МДА – малоновый диальдегид

ГР - глутатионредуктаза

АСТ - аспартатаминотрансфераза

АЛТ - аланинаминотрансфераза

ЛСЭ – лизат собственных эритроцитов

СПЖ – средняя продолжительность жизни

КЭБ -  коэффициент эффективности белка

ПОЛ – перекисное окисление липидов

ОБЦ – относительная биологическая ценность






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.