WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

 

На правах рукописи

Фетисова Анжелика Николаевна

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ СОЗДАНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ОСНОВЕ ЛИПОФИЛЬНЫХ ФРАКЦИЙ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ, СОЧЕТАЮЩИХ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЕ И АНТИОКСИДАНТНОЕ ДЕЙСТВИЕ С БАКТЕРИО- И ФУНГИСТАТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ

15.00.02 фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

доктора фармацевтических наук

Москва 2009

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова Росздрава

Научный консультант:

доктор фармацевтических наук, доктор педагогических наук,

действительный член РАО, профессор  Попков Владимир Андреевич

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук,

профессор  Белобородов Владимир Леонидович

доктор фармацевтических наук,

профессор  Берлянд Александр Семенович

доктор фармацевтических наук,

профессор  Даргаева Тамара Дарижаповна

Ведущая организация: Федеральное Государственное Учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения Росздравнадзора» (ФГУ НЦ ЭСМП).

Защита состоится «___» _____________ 2009 г. в  ___  часов на заседании Диссертационного совета Д.208.040.09 при ГОУ ВПО Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова Росздрава по адресу: 119019, Москва, Никитский бульвар, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова Росздрава по адресу: 117998, Москва, Нахимовский проспект, 49.

Автореферат разослан «___» ______________ 2009 г.

Ученый секретарь

Диссертационного совета Д.208.040.09,

доктор фармацевтических наук,

профессор Садчикова  Наталья Петровна  

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Критический анализ медико-социальной проблемы лекарственной полипрогмазии указывает на целесообразность углубления теоретических и эмпирических знаний в области разработки лекарственных средств природного происхождения, обладающих сочетанным фармакологическим действием за счет содержания комплекса биологически активных веществ (БАВ). В контексте проблемы  актуальным представляется проведение изысканий по созданию лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью.

Перспективным технологическим способом получения липофильных  фракций природного происхождения, обладающих указанным комбинированным фармакологическим действием, является экстракция сверхкритическими флюидами (СКФ), в частности, сверхкритическим диоксидом углерода. Разработки по экстракции липофильных фракций из растительного сырья диоксидом углерода в сверхкритических условиях имеют отечественный приоритет и находят широкое применение в пищевой отрасли промышленности с 60-х гг. XX века. С 90-х гг. XX века по настоящее время отмечается возрастание практического интереса фармацевтической отрасли к созданию лечебно-профилактических средств на основе липофильных фракций, извлекаемых из растительного сырья сверхкритическим диоксидом углерода. Данные изыскания имеют локальный характер и в целом направлены на разработку биологически активных добавок (БАД).

Системный анализ научных информационных источников показывает, что в контексте решения проблемы лекарственной полипрогмазии и ятрогенной патологии актуальным направлением  также является изыскание средств и способов получения из отечественных видов лекарственного растительного сырья (ЛРС) и пищевых растительных источников фармакологически активных конституентов для производства мягких лекарственных форм (суппозиториев и мазей).

Однако современная тенденция роста производства, распространения, использования низкокачественных и фальсифицированных лекарственных препаратов и БАД природного происхождения, в частности изготовленных на основе масличного растительного сырья, определяет несовершенство существующих подходов к процессу их разработки, стандартизации и валидации производства. Увеличение доли фальсифицированных лекарственных средств представляет значимую медико-социальную проблему, связанную с угрозой здоровью населения страны и оборачивающейся многомиллионными убытками для государственной казны и  частных производителей. В соответствии с разработанным ВОЗ «Планом действий по борьбе с фальсифицированными лекарственными средствами» определение показателей состава и качества (ПСК) лекарственных средств является одной из основных составляющих процесса выявления фальсифицированной и низкокачественной продукции среди препаратов и БАД, изготовленных из масличного ЛРС.

Вышеуказанная проблематика обусловливает необходимость проведения комплексных изысканий, базирующихся на постулатах фармацевтической и медицинской науки и направленных на формирование единообразных подходов к разработке, стандартизации и валидации производства лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, обладающих сочетанным фармакологическим действием. Направление исследований предусматривает сопоставительный априорный и апостериорный анализ особенностей производства, характеристик показателей состава и качества липофильных фракций растительного сырья, извлекаемых с использованием различных по химической природе экстрагентов; формирование экспериментально-теоретической базы и синтез аутентичной системы, позволяющей создавать качественные лечебно-профилактические  средства на основе липофильных фракций растительного сырья, обладающих сочетанной фармакологической активностью.

Целью исследования является создание аутентичной системы разработки и спецификации лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью.

Сформулированная цель исследования обусловила постановку следующих задач исследования:

  1. Провести сопоставительный анализ показателей состава и качества липофильных фракций, полученных из различных видов растительного сырья экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода и неполярными органическими растворителями, и  обосновать критерии спецификаций для контроля качества СО2-экстрактов, как новых лекарственных средств растительного происхождения, содержащих комплекс биологически активных веществ, обладающих сочетанной фармакологической активностью.
  2. Разработать способ получения фармакологически активных конституентов растительного происхождения для производства мягких лекарственных форм из отечественного сырья.
  3. Обосновать концептуальные подходы обнаружения недоброкачественной продукции и потенциальных фальсификаций  среди препаратов и биологически активных добавок, изготовленных из масличного растительного сырья.
  4. Разработать эмпирическую расчетную методику скрининговой оценки доброкачественности объектов растительного происхождения, характеризующихся неспецифичным составом биологически активных веществ, в частности ацилглицеринов жирных кислот.
  5. На основании результатов теоретических и эмпирических изысканий сформировать аутентичную систему разработки и спецификации лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью.

Диссертационная работа выполнена в соответствии  с планом научных исследований ММА им. И.М. Сеченова и является составной частью  комплексной программы НИР  кафедры общей химии «Новые знания и подходы в оценке качества и сертификации биологически активных соединений синтетического и природного происхождения, лекарственных препаратов, изделий медицинской техники (технологические аспекты)» (номер Государственной регистрации  01.200.118.796).

Научная новизна. Впервые проведено теоретическое обобщение и обоснование априорной информации, касающейся процесса получения липофильных фракций из ЛРС экстракцией жидким оксидом углерода (IV) и перспектив использования СО2-экстрактов ЛРС для производства лечебно-профилактических лекарственных средств, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью. Апостериорные сопоставительные экспериментальные исследования липофильных фракций, полученных из 7 родов растительного сырья экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода, позволили, с учетом требований Государственных стандартов качества лекарственных средств (ГСКЛС), разработать аутентичную систему спецификаций для контроля качества СО2-экстрактов, как новых лекарственных средств природного происхождения. Впервые доказана бактериостатическая и фунгистатическая активность СО2-экстрактов семян винограда культурного (Vitis vinifera L.), жома плодов смородины черной (Ribes nigrum L.), а также СО2-экстракта шрота семян тыквы в отношении Staphylococcus aureus и Candida albicans. Также впервые выявлена фунгистатическая активность СО2-экстрактов плодов кориандра посевного (Coriandrum sativum L.), укропа пахучего (Anethum graveolens L.) и травы полыни горькой (Artemisia absinthium L.) в отношении наиболее распространенных поверхностных дерматофитов, а именно Microsporum canis и Trichophyton rubrum.

Разработан способ получения конституентов растительного происхождения для производства мягких лекарственных форм из отечественных видов растительного сырья. Способ основан на использовании ЛРС, произрастающего на территории Российской Федерации, и экстрагента (гексана), широко применяемого в фармацевтическом и пищевом производстве. Оригинальная технологическая схема  позволяет упростить процесс извлечения твердой липофильной фракции (ТЛФ) из плодов растений семейства Сельдерейные, увеличить в ней содержание сбалансированного комплекса БАВ, обладающих антиоксидантным и противовоспалительным действием (каротиноидов, токоферолов, фосфолипидов), обеспечивает получение стабильного целевого продукта. Предложенный способ предусматривает рациональное применение отечественных сырьевых запасов лекарственных растений и позволяет провести замены импортных конституентов для производства мягких лекарственных форм.

Впервые обоснованы принципиальные подходы и разработаны критерии для обнаружения недоброкачественной продукции и потенциальных фальсификаций  среди препаратов и биологически активных добавок, изготовленных из масличного растительного сырья, характеризующегося неспецифичным составом биологически активных веществ. Для скрининговой оценки потенциальных фальсификаций и выявления недоброкачественной продукции среди указанной группы лекарственных средств разработана методика расчета состава жирных кислот и глицеринов на основании значений эмпирических показателей состава и качества.

Экспериментально-теоретические исследования формируют основу  аутентичной системы создания и стандартизации лекарственных средств растительного происхождения на основе липофильных фракций, обладающих сочетанной фармакологической активностью. Аутентичная система показателей состава и качества включает спецификации и общедоступные сертифицированные методы и позволяет достоверно обнаруживать потенциальные фальсификации или несоответствия требованиям, предъявляемым Государственными стандартами качества к оценке и валидации технологии производства лекарственных средств природного происхождения.

Степень новизны проведенных исследований подтверждена шестью патентами РФ.

Практическая значимость и внедрение результатов исследования.

В результате проведенных изысканий сформирована экспериментально-теоретическая база для создания лечебно-профилактических лекарственных средств природного происхождения, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью.

Разработанная аутентичная система спецификаций для контроля качества лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью, позволяет объективно установить подлинность изученных объектов и обнаружить потенциальные фальсификации или несоответствия требованиям, предъявляемым Государственными стандартами качества к лекарственным средствам, получаемым из растительного сырья. Предварительные результаты доклинических испытаний являются основой для достоверного выявления, оценки и доказательства прогнозируемой терапевтической активности в ходе отдаленных клинических исследований лекарственных препаратов на основе СО2-экстрактов растительного сырья.

Результаты исследования положены в основу инновационной разработки и инновационного бизнес-предложения: «Лекарственные средства на основе липофильных фракций лекарственного растительного сырья для профилактики и лечения воспалительных заболеваний органов мочеполовой системы: технология создания и перспективы применения». Данный инновационный проект был представлен в финале  конкурсной программы инновационных проектов «Фабрика инноваций: прорыв в будущее», проводившейся в рамках V Московского Международного Салона инноваций и инвестиций (15-18 февраля 2005 г.),  и награжден Дипломом Федеральной Службы по интеллектуальной собственности, патентам и товарным знакам.

Разработанная автором методика расчета состава жирных кислот и глицеринов объектов природного происхождения внедрена в учебный процесс на химическом факультете МГУ им. М.В. Ломоносова и используется при изучении разделов, связанных с анализом подлинности и доброкачественности объектов липофильной природы. Указанная методика также внедрена в ГОУ ВПО РУДН (медицинский факультет, кафедра общей фармацевтической и биомедицинской технологии) при изучении модулей, включающих принципы валидации технологии производства и качества препаратов, изготовленных на основе липофильных фракций растений.

По результатам исследования в рамках реализации «Программы формирования инновационного образовательного пространства ММА им. И.М. Сеченова» (приоритетный национальный проект «Образование») автором выполнен проект «Разработка учебно-методического пособия курса дистанционного обучения «Технологии получения лекарственных средств на основе липофильных фракций сырья природного происхождения» (тема № 138, приказ № Р-98 от 27 марта 2007 г.) и создан одноименный учебник, являющийся основой учебно-методического обеспечения курса дистанционного обучения для повышения квалификации и переподготовки специалистов, работающих на фармацевтическом производстве и в  аптечной сети, имеющей рецептурно-производственные отделы. Учебник «Технологии получения лекарственных средств на основе липофильных фракций сырья природного происхождения (курс дистанционного обучения)» рекомендован Учебно-методическим объединением по медицинскому и фармацевтическому образованию вузов России для системы послевузовского профессионального образования провизоров (УМО-51-Д 12 февраля 2008 г.). Курс дистанционного обучения «Технологии получения лекарственных средств на основе липофильных фракций сырья природного происхождения» внедрен в ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова Росздрава, факультет послевузовского профессионального образования провизоров, кафедра фармации с курсом социальной фармации и в ГОУ Институт повышения квалификации Федерального медико-биологического  агентства (ИПК ФМБА) России, кафедра фармации.

Апробация работы.  Материалы исследования  были представлены для обсуждения  на следующих конференциях, съездах, конгрессах: III, IX-XI, XV и  XVI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1996; Москва, 2002-2004; Москва, 2008; Москва 2009); 51-ой региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров ПГФА (Пятигорск, 1996); научно-практической конференции, посвященной 50-тилетию Ботанического сада ММА им. И.М. Сеченова (Москва, 1996); юбилейной конференции «Актуальные вопросы фитотерапии» РОО «Фитотерапевтическое общество» (Москва, 2002);  I и II научно-практических конференциях Научного центра акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН «Традиционные методы лечения в акушерско-гинекологической практике» (Москва, 2001; Москва, 2003); 59-й региональной конференции по фармации и фармакологии ПГФА «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2004); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Восстановительная медицина и традиционные методы профилактики и лечения в акушерстве, гинекологии и перинатологии» (Волгоград, 2004); III-IX Международных съездах «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» (Санкт-Петербург-Пушкин, 1999; Великий Новгород, 2000; Санкт-Петербург, 2001; Санкт-Петербург, 2002; Санкт-Петербург-Пушкин, 2003; Миккели (Финляндия), 2004; Санкт-Петербург, 2005); Республиканской научно-практической конференции «Новые достижения в получении, изучении и применении лекарственных средств на основе природного сырья», посвященной 100-летию со дня рождения профессора Р.Л. Хазанович (Ташкент, 2006); VIII Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации» (Москва, 2007); научно-практической конференции «Актуальные вопросы образования, науки и производства в фармации» (Ташкент, 2008).

Публикации.   По материалам диссертации опубликовано 60 работ, в том числе  монография, учебник для системы послевузовского профессионального образования провизоров, созданный в рамках программы формирования инновационного образовательного пространства ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова Росздрава (Приоритетный национальный проект «Образование»), 7 статей в журналах, рекомендованных ВАК РФ для публикации результатов диссертаций на соискание ученой степени доктора наук, 6 патентов на изобретения.

Основные положения, выносимые на защиту.

  • Результаты исследования липофильных фракций растительного сырья, полученных экстракцией жидким оксидом углерода (IV). Разработка аутентичной системы спецификаций для контроля качества лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью.
  • Технологические основы получения фармакологически активных конституентов растительного происхождения для производства мягких лекарственных форм.
  • Концепция обнаружения потенциальных фальсификаций и недоброкачественной продукции среди лекарственных средств, изготовленных из масличного  растительного сырья.
  • Методика эмпирического расчета состава жирных кислот и глицеринов объектов растительного происхождения и руководство по ее использованию для скрининговой оценки доброкачественности растительного сырья, лекарственных средств, БАД липофильной природы, имеющих неспецифичный состав БАВ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 260  страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (глава I), 5 глав собственных исследований, выводов, глоссария, библиографического указателя и приложений. Работа иллюстрирована 37 таблицами и 18 рисунками. Библиографический указатель включает 250 источников, в том числе 106 на иностранных языках.

В обзоре литературы представлен критический анализ традиционных способов и современных технологий получения липофильных фракций из сырья природного происхождения; рассмотрены теоретические основы извлечения БАВ из растительного сырья сжиженными и сжатыми газами; изложены современные подходы к процессу разработки, стандартизации и валидации производства лекарственных средств растительного происхождения. Во второй главе обоснован выбор объектов исследования, представлена их характеристика, описание технологии получения липофильных фракций из растительного сырья экстракцией жидким оксидом углерода (IV) в сверхкритических условиях. Представлен анализ технологических особенностей извлечения липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные неполярными органическими растворителями по предложенному нами способу (А.Н. Фетисова с соавт., патент РФ 2147890, 2000). Вторая глава также содержит детальное описание методик анализа, использованных в настоящем исследовании, принципов статистической обработки и интерпретации полученных результатов. Третья глава включает исследование липофильных фракций растительного сырья, полученных экстракцией жидким оксидом углерода (IV); разработку аутентичной системы спецификаций для контроля  их качества и результаты экспериментального доклинического изучения. Четвертая глава посвящена изысканию средств и способов получения конституентов растительного происхождения для производства мягких лекарственных форм. В пятой главе обоснованы принципиальные подходы к обнаружению потенциальных фальсификаций и недоброкачественной продукции среди лекарственных средств, изготовленных из масличного растительного сырья; изложена методика расчета состава жирных кислот и глицеринов и руководство по ее использованию в оценке качества лекарственных средств растительного происхождения, имеющих неспецифичный состав БАВ. Шестая глава включает патогенетическое обоснование целесообразности применения лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, обладающих сочетанной фармакологической активностью, в комплексе лечебно-профилактических мероприятий при социально значимых заболеваниях человека.

Содержание работы.

Объекты и методы исследования.

В соответствии с целью исследования предварительные этапы разработки лекарственных средств на основе липофильных фракций ЛРС, обладающих сочетанным противовоспалительным и антиоксидантным действием, бактерио- и фунгистатической активностью, включали скрининг источников липофильных фракций, а также выбор экстрагента и, соответственно, способа получения липофильной фракции из ЛРС.

Скрининг видов ЛРС (источников липофильных фракций) проводился по содержанию БАВ, которые должны сочетать противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью. Для получения препарата с низкой себестоимостью необходимо наличие достаточной сырьевой базы, т.е. в качестве источников липофильных фракций целесообразно использовать виды ЛРС, имеющие либо обширный ареал произрастания, либо широко культивируемые или являющиеся отходами пищевых производств.

Экспериментально-теоретическое обоснование единообразных подходов к процессу создания лекарственных средств на основе липофильных фракций ЛРС, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью, проведено в настоящей работе на примере видов растительного сырья, относящегося к разным семействам и морфологическим группам. Объектами для создания аутентичной системы разработки и спецификации лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью, явились официнальные виды ЛРС и пищевые растительные источники, являющиеся отходами соответствующих производств:  плоды кориандра посевного (Coriandrum sativum L.),  укропа пахучего (Anethum graveolens L.), облепихи крушиновидной (Hippophaё rhamnoides L.), трава полыни горькой (Artemisia absinthium L.), семена винограда культурного (Vitis vinifera L.), жом плодов смородины черной (Ribes nigrum L.), шрот семян  тыквы обыкновенной (Cucurbita pepo L.), тыквы большой (Cucurbita maxima Duch.), тыквы мускатной (Cucurbita moschata (Duch.) Poir.) (аптечная смесь).

СО2-экстракты из указанных видов растительного сырья были получены на экспериментально-промышленном оборудовании экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода с учетом индивидуальных параметров процесса для конкретной морфологической группы и вида сырья и в соответствии с ТУ 9169-001-51032622-99 и ТУ 9169-001-96932037-99 «Экстракты из растительного сырья». Неполярными органическими растворителями липофильные фракции извлекались с использованием способа ступенчатого орошения растворителем противоточно перемещающегося обрабатываемого материала. Липофильные фракции и СО2-экстракты получали из  соответствующего сырья одной серии.

БАД масло семян тыквы (ТУ 9141-002-334-44-04-76-97), тыквин (ТУ 9141-001-34683967-2000), витадиойл (ТУ 9141-001-104073978-00) , масло зародышей пшеницы (ТУ 9141-013-180622042-96),  препарат тыквеол (ФС 42-3651-98) были выбраны в качестве модельных образцов для разработки критериев и обоснования принципов выявления недоброкачественной продукции и потенциальных фальсификаций  среди препаратов и БАД, изготовленных из масличного растительного сырья, жирное масло которого имеет неспецифичный состав ацилглицеринов жирных кислот. Исследование проведено на пяти сериях каждого из объектов.

Так как спецификация является необходимой составляющей сертификации как липофильной фракции, извлекаемой из ЛРС или пищевых растительных источников, так и разрабатываемого в последующем препарата, принцип соответствия ПСК лекарственных средств на основе липофильных фракций ЛРС требованиям  ГСКЛС был положен нами в основу создания аутентичной системы спецификаций для контроля качества получаемых липофильных фракций.

В работе использовались следующие физико-химические методы анализа: газожидкостная хроматография (ГЖХ), высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), тонкослойная хроматография (ТСХ), потенциометрия, спектрофотометрия, гравиметрия.

Состав триацилглицеринов (ТАГ) жирных кислот липофильных фракций изучали с использованием метода ГЖХ. Исследование проводили на приборе «Биохром-1» с пламенно-ионизационным детектором. Для анализа применялись стеклянная или кварцевая капиллярные колонки, имеющие  длину  54 м или 25 м и внутренний диаметр 0,27 мм или 0,32 мм, соответственно. Неподвижная фаза – OV-101 или SE-30 (полидиметилсилоксан). Условия хроматографирования: газ-носитель – гелий, давление гелия на входе в колонку – 0,15 МПа, скорость потока – 2,4 мл/мин, коэффициент деления потока – 1:20 или 1:100; расход воздуха – 300 мл/мин, водорода – 20 мл/мин; температура испарителя – 360оС, детектора – 310оС. Температура термостата колонки программировалась от 160оС до  260оС, время экспозиции при начальной температуре – 0 мин, при конечной температуре – 5 мин, градиент – 4 градуса/мин, диапазон чувствительности усилителя – 4,8⋅10-10А, объем вводимой пробы –1,5 мкл. Для идентификации метиловых эфиров жирных кислот изучаемых объектов использовался  масс-селективный детектор. Результаты анализа обрабатывались с помощью компьютерных баз данных Wiley и Wist 98.

Методика, позволяющая  установить подлинность  липофильных фракций, полученных из жома плодов черной смородины, включает  идентификацию γ-линоленовой кислоты. Методика определения γ-линоленовой кислоты, специфичной для растений семейства  Saxifragaceae, основанная на ГЖХ, была модифицирована к условиям производства. В анализе использовался газожидкостной хроматограф марки ЛХМ-8М, укомплектованный пламенно-ионизационным детектором; металлическая колонка длиной 2 м с внутренним диаметром 3 мм, заполненная Chrommosorb W (1% H3PO4, 18% НДЭГС). Температура испарителя – 250оС, температура детектора – 260оС, температура термостата колонки – 200оС. Скорость газа-носителя (азот) – 30 мл/мин, водорода – 30 мл/мин, воздуха – 300 мл/мин, объем вводимой пробы – 1,5 мкл.

Состав основных групп неомыляемых БАВ – каротиноидов, токоферолов, фосфолипидов, определен с применением известных методик спектрофотометрического, гравиметрического анализа и ТСХ.

Для идентификации и количественного определения добавок синтетических аналогов витаминов (α-токоферола ацетата и ретинола пальмитата) методом ВЭЖХ использовалась система фирмы «Gilson» (Франция): однопоршневой насос (модель 302) с манометрическим модулем (модель 802 С); инжектор для ввода проб («Rheodyne», США); ультрафиолетовый детектор с переменной длиной волны «Holochrom»; персональный компьютер IBM PC с программой «МультиХром» для записи и обработки хроматограмм (Ampersand, Россия); стальные аналитические колонки: Ultrasphere ODS – 5 µ (4,6 250 мм) с предколонкой Ultrasphere ODS – 10 µ (4,6 50 мм)  и  Separon SG-C18-5 µ (4 200 мм) с предколонкой Separon SG-C18-10 µ (4 50 мм). Скорость потока элюирующей смеси (метанол 100%) - 1 мл/мин. Пробоподготовка проводилась в соответствии с известными методиками. Детектирование α-токоферола ацетата  осуществлялось при мах поглощения в УФ области для данного соединения 292 нм. В качестве стандарта использовался Vitamin E acetate фирмы ICN (США).  Детектирование ретинола пальмитата осуществляли при мах=326 нм. В качестве стандартного образца использовался ретинола пальмитат (1800000 МЕ/г) фирмы Hoffman La Roche (Швейцария, США).

Для исследования элементного состава липофильных фракций ЛРС объекты подвергали поэтапному озолению в соответствии со следующей методикой: точную навеску (около 1 грамма) исследуемого образца помещали в калориметрическую «бомбу» из тефлона, прибавляли 4 мл концентрированной азотной кислоты, «бомбу» плотно завинчивали и выдерживали в СВЧ печи при температуре 30оС. По истечении 24 часов к содержимому «бомбы»  прибавляли 2 мл концентрированной азотной кислоты и 2 мл 30% пероксида водорода. После чего калориметрическая «бомба» выдерживалась в СВЧ печи последовательно при температуре 80оС в течение 8 часов и при температуре 96оС – 98оС в течение 1 часа. Элементный состав липофильных фракций ЛРС определяли с использованием портативного микропроцессорного спектрофотометра  DR/2010 (Mach, США) и  портативного сканирующего кристалл-дифракционного рентгеновского спектрометра «Спектрослан». Предел обнаружения элементов составлял 10-6.

Статистическая обработка проведена с учетом указаний Общей статьи ГФ XI «Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических испытаний»,  в основу которых положены принципы дескриптивного анализа и аналитической статистики. В исследовании использован программный комплекс SPSS for Windows 11.0.1. Результаты анализов представлены с указанием рассчитанного доверительного интервала (f = 5; Р = 0,95).

Микробиологический контроль объектов исследования осуществлялся в соответствии с Изменением № 2 к Общей статье Государственной Фармакопеи XI издания (ГФ XI) «Методы микробиологического контроля лекарственных средств». Исследование микробиологической активности проведено с использованием стандартных методов микробиологического анализа. Доказательство, а также оценка медико-биологической эффективности и безопасности использования липофильных фракций по декларируемым медицинским показаниям проводилась в соответствии с Федеральным законом № 86-ФЗ «О лекарственных средствах», Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических средств и международными правилами, предъявляемыми к  фармакологическим и токсикологическим исследованиям лекарственных средств.

Результаты и обсуждение

ИССЛЕДОВАНИЕ ЛИПОФИЛЬНЫХ ФРАКЦИЙ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ, ПОЛУЧЕННЫХ ЭКСТРАКЦИЕЙ ЖИДКИМ ОКСИДОМ УГЛЕРОДА (IV), И РАЗРАБОТКА СПЕЦИФИКАЦИЙ  ДЛЯ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА

Сравнительный анализ состава биологически активных веществ липофильных фракций растительного происхождения, извлекаемых сверхкритическим диоксидом углерода и неполярными органическими растворителями.

Изучение и обобщение тенденций экспериментально-теоретических исследований в области современных технологий получения липофильных фракций растительного происхождения указывает на целесообразность использования СКФ в качестве экстрагентов БАВ, обладающих широким спектром фармакологической активности.  К достоинствам процесса сверхкритического экстрагирования БАВ липофильной природы по сравнению с экстракцией неполярными органическими растворителями относят: энергосберегающий характер процесса; высокие массообменные характеристики и селективность экстрагирования; значительную степень извлечения соответствующих БАВ, сочетающуюся с высоким качеством конечного продукта; легкость процесса регенерации большинства СКФ, их нетоксичность и химическую инертность. 

Диоксид углерода является наиболее широко применяемым в сверхкритическом состоянии экстрагентом БАВ липофильной природы, т.к. использование его во флюидном состоянии гарантирует осуществление процесса экстракции в температурном режиме, обеспечивающем отсутствие термической деградации БАВ. Экстракт, получаемый в процессе сверхкритического экстрагирования диоксидом углерода, характеризуется практическим отсутствием остаточного растворителя.

Нами проведено сравнительное изучение качественного и количественного состава основных групп омыляемых и неомыляемых БАВ (ТАГ жирных кислот, токоферолов, каротиноидов и фосфолипидов) фракций, полученных из ряда видов пищевого и лекарственного растительного сырья, экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода и неполярными органическими растворителями - пищевым бензином марки «Нефракс» и гексаном.

Как показано в таблице 1, липофильные фракции, извлекаемые сверхкритическим диоксидом углерода и традиционными неполярными органическими растворителями, имеют идентичный жирнокислотный состав, который также сопоставим по общему содержанию насыщенных и ненасыщенных жирных кислот. Известно, что при использовании сверхкритического диоксида углерода отмечается инактивация пероксидазы, активность которой в указанном случае уменьшается приблизительно в 10 раз. Данный факт подтверждается в проведенном эксперименте и наглядно иллюстрируется значительно меньшим содержанием пальмитолеиновой (цис-9-гексадеценовой) кислоты в экстрактах, извлекаемых из плодов растений семейства Сельдерейные неполярными органическими растворителями, по сравнению с СО2-экстрактами тех же видов растительного сырья.  Содержание пальмитолеиновой кислоты в СО2-экстракте плодов кориандра посевного на 92,3% превышает соответствующий показатель для экстрактов, извлекаемых органическими растворителями. Для СО2-экстракта плодов укропа пахучего – на 19%. Содержание пальмитиновой кислоты в СО2-экстрактах плодов кориандра посевного  и укропа пахучего на 80% и 15%, соответственно, меньше, чем в экстрактах, извлеченных с использованием бензина «Нефракс» и гексана. 

Таблица 1.

Состав жирных кислот липофильных фракций растительного сырья, полученных с использованием различных экстрагентов.

Жирные

кислоты

Содержание жирных кислот в липофильных фракциях, %

Плоды кориандра посевного

Плоды укропа пахучего

Семена винограда культурного

Жом плодов черной смородины

Шрот семян тыквы

1

2

3

1

2

3

1

2

3

1

2

3

1

2

3

С16:0

1,5

7,5

7,5

5,6

6,5

6,7

6,7

6,2

6,2

7,3

7,0

7,1

13,1

12,6

13,0

С18:0

1,3

1,3

1,2

5,1

1,4

1,4

5,9

5,4

5,6

6,1

3,5

3,2

5,6

5,4

5,7

С16:1

5,2

0,4

0,4

5,3

4,2

4,4

-

-

-

-

-

-

-

-

-

С18:1*

72,5

75,1

75,0

59,0

71,4

71,1

58,7

65,2

67,8

13,3

14,5

14,5

27,3

31,7

27,6

С18:1 cis-6

53,0

50,0

50,0

25,3

26,2

25,3

-

-

-

-

-

-

-

-

-

С18:2

19,5

15,7

15,9

25,0

16,5

16,4

28,7

23,2

20,4

42,0

40,6

41,0

54,0

50,3

53,7

С18:3

cis-9,12,15

-

-

-

-

-

-

-

-

-

23,5

25,1

25,0

-

-

-

С18:3

cis-6,9,12

-

-

-

-

-

-

-

-

-

7,8

7,1

7,1

-

-

-

С18:4

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

2,2

2,1

-

-

-

Итого

100

100

100

100

100

100

100

100

100

100

100

100

100

100

100

Примечание:

1 – сверхкритический диоксид углерода;

2 – пищевой бензин марки «Нефракс»;

3 – гексан.

* - изомеры С18:1 cis-9 и С18:1 cis-6 суммарно.

Использование сверхкритического диоксида углерода позволяет получать экстракты из анализируемых видов растительного сырья идентичные по качественному составу БАВ неомыляемой фракции  экстрактам, извлекаемым неполярными органическими растворителями по традиционной технологии (таблица 2). Однако суммарное содержание БАВ неомыляемой фракции в полученных СО2-экстрактах в целом меньше, чем для соответствующих экстрактов, извлеченных с использованием бензина «Нефракс» и гексана. Это может быть объяснено

Таблица 2.

Содержание неомыляемых БАВ в липофильных фракциях, полученных с использованием различных экстрагентов.

Липофильные фракции

Суммарное содержание неомыляемых БАВ

Содержание токоферолов, в пересчете на

α-токоферол, мг%

Содержание каротиноидов, в пересчете на

β-каротин, мг%

Содержание фосфолипидов, %

1

2

3

1

2

3

1

2

3

Плоды кориандра посевного

10,06±0,06

16,04±0,10

17,30±0,10

2,02±0,01

4,90±0,03

5,25±0,03

-

0,95±0,02

0,98±0,03

Плоды укропа пахучего

8,05±0,05

12,08±0,07

13,06±0,08

5,04±0,04

40,23±0,32

46,88±0,37

-

0,80±0,02

0,86±0,02

Семена винограда культурного

146,64±0,88

248,10±1,50

256,12±1,54

1,42±0,01

28,50±0,20

27,22±0,20

-

1,26±0,03

1,30±0,03

Жом плодов черной смородины

18,00±0,11

30,01±0,18

32,42±0,19

22,00±0,15

25,60±0,18

24,03±0,16

-

0,40±0,01

0,57±0,01

Шрот семян тыквы

35,20±0,21

45,72±0,27

48,07±0,29

3,70±0,03

6,71±0,05

6,63±0,05

-

0,37±0,01

0,41±0,01

Примечание:

1 – сверхкритический диоксид углерода;

2 – пищевой бензин марки «Нефракс»;

3 – гексан.        

с точки зрения того, что в зависимости от технологических параметров процесса экстракции изменяется избирательная способность жидкого диоксида углерода, как экстрагента БАВ липофильной природы.

Оптимальным для обеспечения  максимального выхода БАВ считается температурный режим экстракции в пределах 15-20оС; повышение температуры процесса экстракции БАВ из растительного сырья жидким диоксидом углерода до его критической температуры (31,1оС) – фактор, снижающий выход экстрактивных веществ. Снижение выхода экстрактивных веществ при повышении температуры процесса экстракции жидким диоксидом углерода объясняется: агрегативной неустойчивостью жидкофазного состояния экстрагента в зоне его критической температуры; уменьшением градиента химических потенциалов по составу компонентов; снижением величины изотермической молекулярной диффузии извлекаемых компонентов в экстрагенте (несмотря на существование градиента концентрации).

Кроме того, изменяя давление в среде сверхкритического диоксида углерода можно получать вариабельные по составу экстракты. Но при этом ни одно из полученных извлечений не будет идентичным, в частности по количественному составу БАВ неомыляемой фракции, экстрактам, извлекаемым неполярными растворителями.

Также  известно, что применение неполярных органических растворителей обычно способствует увеличению содержания БАВ, сопутствующих глицеринам жирных кислот в липофильных фракциях растительного сырья.

Необходимо отметить, что в изученных СО2-экстрактах растительного сырья не обнаружены фосфороорганические соединения. Этот факт согласуется с имеющимися данными, указывающими на то, что фосфолипиды в липофильных фракциях, полученных экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода, либо не обнаруживаются, либо присутствуют в следовых количествах. Указанный феномен объясняется малой растворимостью фосфолипидов в сверхкритическом диоксиде углерода.

Сравнительный анализ состава БАВ липофильных фракций растительного происхождения, извлекаемых с использованием сверхкритического диоксида углерода и неполярных органических растворителей, показывает, что полученные экстракты имеют тождественный  качественный состав ТАГ жирных кислот. Это объясняется соизмеримыми значениями величины диэлектрической проницаемости  для сверхкритического диоксида углерода и неполярных органических растворителей, как экстрагентов БАВ липофильной природы: ТАГ, жирорастворимых витаминов, пигментов и др. Экстракция в среде сверхкритического диоксида углерода за счет отсутствия эффекта аэрации и инактивации пероксидазы обусловливает ингибирование окислительных процессов. В эксперименте данный факт подтверждается статистически достоверно большим выходом ТАГ ненасыщенных жирных кислот в условиях экстрагирования сверхкритическим диоксидом углерода по сравнению с экстракцией неполярными органическими растворителями. Качественный состав БАВ неомыляемой фракции изученных экстрактов растительного сырья в целом также является идентичным и включает группы БАВ, сопутствующих ТАГ жирных кислот, в частности токоферолы и каротиноиды. Однако экстракция в среде сверхкритического диоксида углерода способствует меньшему выходу указанных групп БАВ по сравнению с извлечениями, полученными с использованием неполярных органических растворителей. Указанный факт объясняется изменением избирательной способности диоксида углерода в зависимости от технологических параметров процесса экстракции, в частности от температуры. Кроме того, в изученных экстрактах растительного сырья, полученных в среде сверхкритического диоксида углерода в отличие от экстрактов, полученных с использованием неполярных органических растворителей, не обнаружена группа фосфороорганических соединений. Этот феномен согласуется с  имеющимися данными о малой растворимости фосфолипидов в сверхкритическом диоксиде углерода.

Исследование влияния химической природы экстрагента на элементный состав липофильных фракций растительного сырья.

Анализ научных информационных источников и патентной документации по проблеме извлечения БАВ из растительного сырья СКФ указывает на практическую целесообразность сопоставительного анализа элементного состава липофильных фракций растительного сырья, получаемых с использованием сверхкритического диоксида углерода и органических растворителей.

В представленном исследовании влияния химической природы экстрагента на элементный состав липофильных фракций растительного происхождения в качестве экстрагентов использовались сверхкритический  диоксид углерода и пищевой бензин марки «Нефракс».

В  результате проведенного сопоставительного анализа элементного состава СО2-экстрактов и липофильных фракций, полученных из соответствующего растительного сырья способом ступенчатого орошения растворителем (пищевым бензином марки «Нефракс») противоточно перемещающегося обрабатываемого материала,  были выявлены следующие закономерности (таблица 3, 4). Качественный элементный состав изученных липофильных фракций в целом соответствует элементному составу исходного растительного сырья. Содержание техногенных элементов, таких как кадмий, медь и цинк не превышает значений соответствующих  предельно допустимых концентраций.

Таблица 3.

Содержание элементов в липофильных фракциях растительного сырья, полученных экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода.

Липофильная

фракция

Содержание элементов, мг/кг

Mg

Al

Si

Crобщ

Mn

Fe

Ni

Cu

Zn

Se

Mo

Cd

Pb

Плоды кориандра посевного

0,60

0,90

0,60

-

-

12,80

0,41

1,60

1,05

-

0,11

-

-

Плоды укропа пахучего

0,52

0,80

-

-

-

12,10

0,37

0,45

0,96

-

-

-

-

Плоды облепихи крушиновидной

0,38

0,01

-

-

-

0,02

0,20

0,20

1,30

-

-

-

-

Трава полыни горькой

4,00

0,14

-

0,04

0,28

0,40

0,68

0,90

1,25

-

0,80

-

-

Семена винограда культурного

0,60

0,80

0,70

1,30

-

1,20

0,80

0,80

-

-

0,70

-

-

Жом плодов черной смородины

0,83

0,65

-

-

0,12

40,20

0,21

1,80

1,15

-

0,25

-

-

Шрот семян тыквы

5,80

-

-

0,02

0,11

0,05

0,20

0,51

0,71

-

0,46

-

-

Таблица 4.

Содержание элементов в липофильных фракциях растительного сырья, полученных экстракцией пищевым бензином марки «Нефракс».

Липофильная

фракция

Содержание элементов, мг/кг

Mg

Al

Si

Crобщ

Mn

Fe

Ni

Cu

Zn

Se

Mo

Cd

Pb

Плоды кориандра посевного

0,60

0,90

0,60

-

-

15,80

0,46

1,75

1,25

-

0,16

-

-

Плоды укропа пахучего

0,52

0,80

-

-

-

14,10

0,47

0,55

1,06

-

0,90

-

-

Плоды облепихи крушиновидной

0,40

0,01

-

0,09

0,05

0,03

0,25

0,26

1,67

-

-

-

0,01

Трава полыни горькой

4,02

0,14

-

0,04

0,28

0,50

0,80

1,01

1,40

-

1,15

-

0,12

Семена винограда культурного

0,60

0,80

0,70

1,30

-

1,50

0,90

0,87

-

-

1,02

-

1,25

Жом плодов черной смородины

0,80

0,65

-

-

0,12

50,10

0,25

2,15

1,40

-

0,08

-

-

Шрот семян тыквы

5,80

-

-

0,02

0,11

0,07

0,24

0,61

0,85

-

0,60

-

0,01

Химическая природа используемых экстрагентов (сверхкритического оксида углерода (IV) и пищевого бензина марки «Нефракс») не влияет на содержание магния, алюминия, кремния, общего хрома и марганца в липофильных фракциях плодов кориандра посевного, укропа пахучего, травы полыни горькой, семян винограда культурного. Исключением в данном случае являются липофильные фракции плодов облепихи крушиновидной. В частности, в липофильной фракции плодов облепихи крушиновидной, полученной экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода, не обнаружены (или содержатся в количествах ниже предела обнаружения) общий хром и марганец. Известно, что плоды кориандра посевного, укропа пахучего, трава полыни горькой, а также семена фармакопейных видов тыкв относятся к селенофилам, то есть характеризуются особенностью концентрировать селен. Однако при анализе липофильных фракций указанного сырья селен не был обнаружен (или концентрация селена была ниже предела обнаружения). Экстракция пищевым бензином марки «Нефракс» способствует, по сравнению с экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода,  увеличению содержания в исследуемых липофильных фракциях растительного сырья железа и молибдена в среднем в 1,3 раза; никеля, меди, цинка - в 1,2 раза.  Липофильные фракции травы полыни горькой  и семян винограда культурного, полученные экстракцией пищевым бензином марки «Нефракс», содержат токсичный элемент свинец в концентрациях значительно превышающих  значения содержания тяжелых металлов в экстрактах ЛРС, нормируемые ГСКЛС.

Результаты проведенного сопоставительного анализа элементного состава показывают, что химико-технологические характеристики сверхкритического диоксида углерода, как экстрагента липофильных фракций, позволяют получать экстракты из ЛРС и пищевых растительных источников, соответствующие требованиям ГСКЛС по показателю «содержание тяжелых металлов».

Разработка спецификаций для контроля качества СО2-экстрактов растительного сырья и экспериментальное доклиническое изучение

Результаты проведенных нами экспериментально-теоретических изысканий в области создания лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью, указывают на необходимость интенсификации процесса внедрения способа экстракции БАВ растительного происхождения СКФ на предприятиях фармацевтической промышленности. Современные ГСКЛС запрещают или ограничивают использование в экстракционных процессах в фармацевтической отрасли ряда органических растворителей, кроме того, повышаются требования к нормированию допустимого содержания остаточного растворителя в конечном продукте. В указанном аспекте проведенные нами исследования свидетельствуют о целесообразности широкого применения технологии экстракции БАВ липофильной природы сверхкритическим диоксидом углерода в фармацевтическом производстве лекарственных средств на основе растительного сырья.

Спецификации для контроля качества липофильных фракций, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью, были разработаны на примере СО2-экстрактов, полученных из 7 родов растительного сырья с использованием стандартных методов физико-химического анализа.

Растворимость объектов исследования определялась в растворителях различной природы, которые использовались в качестве реагентов при исследовании ПСК СО2-экстрактов. Изученные СО2-экстракты практически нерастворимы в воде, легко растворимы в диэтиловом и петролейном эфире, хлороформе, гексане, ацетоне, пиридине, мало растворимы в спирте метиловом. Характерной особенностью является растворимость СО2-экстрактов растительного сырья в 95% спирте этиловом: СО2-экстракт плодов облепихи крушиновидной очень мало растворим, СО2-экстракты плодов кориандра посевного и укропа пахучего практически нерастворимы, СО2-экстракты полыни горькой, винограда культурного и шрота семян тыквы мало растворимы,  СО2-экстракт плодов смородины черной легко растворим в 95% спирте этиловом.

Характеристика изученных СО2-экстрактов по показателю «Описание» и спецификации для контроля качества, разработанные на основе определенных в ходе исследования ПСК, представлены в таблицах 5 и 6, соответственно. 

Таблица 5.

Характеристика СО2-экстрактов  по показателю «Описание».

СО2-экстракт

ОПИСАНИЕ

Плоды кориандра посевного

Маслянистая прозрачная жидкость светло-коричневого цвета с приятным запахом эфирного масла плодов кориандра  и пряным вкусом.

Плоды укропа пахучего

Маслянистая прозрачная жидкость зеленовато-коричневого цвета с приятным запахом эфирного масла плодов укропа и пряным вкусом.

Плоды облепихи крушиновидной

Маслянистая вязкая жидкость оранжевого цвета со специфическим запахом плодов облепихи и сладковато-горьким вкусом.

Трава полыни горькой

Вязкая масса темно-бурого цвета, имеющая ароматный «полынный» запах и горький вкус.

Семена винограда культурного

Маслянистая прозрачная жидкость желтого цвета со слабой зеленой флюоресценцией, имеющая приятный  запах и горький вкус.

Жом плодов черной смородины

Маслянистая вязкая жидкость травянисто-зеленого цвета со специфическим запахом и приятным вкусом.

Шрот семян тыквы

Маслянистая прозрачная жидкость желто-зеленого цвета, имеющая приятный специфический «тыквенный» запах и горький вкус. В процессе хранения возможно образование осадка светло-желтого цвета.

Физико-химические свойства сверхкритического диоксида углерода способствуют извлечению из растительного сырья в значительных количествах БАВ, сочетающих противовоспалительную и антиоксидантную активность, в частности, полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК), токоферолов, каротиноидов. Исследованные СО2-экстракты растительного сырья содержат биологически активные эссенциальные ПНЖК, такие как линолевая, α-линоленовая, γ-линоленовая (таблица 7).

Таблица  6.

Основные разделы спецификаций для контроля качества СО2-экстрактов растительного сырья.

Объект

Показатель

СО2-экстракт плодов кориандра посевного

СО2-экстракт плодов укропа пахучего

СО2-экстракт плодов облепихи крушиновидной

СО2-экстракт травы полыни горькой

СО2-экстракт семян винограда культурного

СО2-экстракт жома плодов смородины черной

СО2-экстракт шрота семян тыквы

Плотность при 20оС, г/см3

0,880±0,002

0,888±0,002

0,9640±0,0002

0,8940±0,0002

0,9150±0,0002

0,9230±0,0002

0,9170±0,0002

Показатель преломления, n20D

1,4638

1,4696

1,4671

1,4854

1,4722

1,4681

1,4720

Число омыления

95-98

97-100

146-151

163-165

194-200

190-194

220-228

Кислотное число

Не более 7,0

Не более 7,0

Не более 3,5

Не более 42,0

Не более 32,0

Не более 1,5

Не более 3,0

Йодное число

71-74

82-86

68-70

80-84

114-118

146-150

118-122

Содержание перекисей, %

Не более 0,7

Не более 0,7

Не более 0,3

Не более 1,5

Не более 0,5

Не более 0,3

Не более 0,3

Сухой остаток, %

Не менее 56

Не менее 56

Не менее 84

Не менее 90

Не менее 96

Не менее 98

Не менее 96

Содержание неомыляемых веществ, %

Не менее 34,0

Не менее 32,0

Не менее 3,0

Не менее 10,0

Не менее 1,5

Не менее 2,0

Не менее 1,0

Содержание тяжелых металлов, %

Не более 0,01

Не более 0,01

Не более 0,01

Не более 0,01

Не более 0,01

Не более 0,01

Не более 0,01

Суммарное содержание каротиноидов в пересчете на β-каротин, мг%

Не менее 2,0

Не менее 5,0

Не менее 7,0

Не менее 18,0

Не менее 1,0

Не менее 25,0

Не менее 3,0

Суммарное содержание токоферолов в пересчете на α-токоферол, мг%

Не менее 10,0

Не менее 8,0

Не менее 50,0

Не менее 60,0

Не менее 140,0

Не менее 20,0

Не менее 30,0

Срок годности (при хранении в сухом защищенном от света месте при температуре 12-15оС)

2 года

2 года

2 года

2 года

2 года

2 года

2 года

Таблица 7.

Качественный и количественный состав жирных кислот СО2-экстрактов растительного сырья.

Качественный состав жирных кислот

Содержание жирных кислот в СО2-экстрактах, %

Плоды кориандра посевного

Плоды укропа пахучего

Плоды облепихи крушино-видной

Семена винограда культурного 

Жом плодов черной смородины

Шрот семян тыкв

С14:0

-

-

6,0

-

-

-

С16:0

1,5

5,6

12,6

6,7

7,3

13,1

С18:0

1,3

5,1

3,5

5,9

6,1

5,6

С16:1

5,2

5,3

8,4

-

-

-

С18:1

72,5*

59,0*

26,4

58,7

13,3

27,3

С18:1 cis-6

53,0

25,3

-

-

-

-

С18:2

19,5

25,0

39,0

28,7

42,0

54,0

С18:3 cis-9,12,15

-

-

4,1

-

23,5

-

С18:3 cis-6,9,12

-

-

-

-

7,8

-

Итого

100

100

100

100

100

100

* - олеиновая (цис-9-октадеценовая) и петрозелиновая (цис-6-октадеценовая) кислоты суммарно.

Прогнозируемая терапевтическая эффективность изученных СО2-экстрактов растительного сырья  связана с физиологической активностью содержащихся в них ПНЖК и антиоксидантов. Известно что, линолевая и линоленовая кислоты за счет наращивания углеродной цепи могут превращаться в арахидоновую кислоту. Таким образом, ПНЖК изученных СО2-экстрактов можно считать заменителями арахидоновой кислоты, являющейся структурным элементом фосфолипидов плазматических мембран. Особенности строения γ-изомера линоленовой кислоты, содержащейся в СО2-экстракте жома плодов черной смородины, позволяют непосредственно включаться в каскад арахидоновой кислоты, обусловливая тем самым ее основной биологический эффект, как универсального предшественника большой группы медиаторов – эйкозаноидов, обладающих широким спектром фармакологической активности. Учитывая функциональный синергизм содержащихся в СО2-экстрактах растительного сырья БАВ, которые сочетают противовоспалительную и антиоксидантную активность, можно прогнозировать терапевтический  эффект при использовании СО2-экстрактов и лекарственных средств на их основе  для профилактики и лечения  заболеваний, обусловленных, в частности, патологическим метаболизмом кислорода вследствие образования его активных форм. 

В результате проведенных микробиологических исследований была впервые выявлена бактериостатическая активность СО2-экстрактов семян винограда культурного, жома плодов черной смородины, а также СО2-экстракта шрота семян тыквы в отношении Staphylococcus aureus. Кроме того, указанные СО2-экстракты обладают фунгистатической активностью в отношении Candida albicans. Также впервые выявлена фунгистатическая активность СО2-экстрактов плодов кориандра посевного, укропа пахучего и травы полыни горькой в отношении наиболее распространенных возбудителей дерматомикозов человека, а именно Microsporum canis и Trichophyton rubrum (таблица 8).

Таблица 8.

Бактериостатическая и фунгистатическая активность (мкг/мл) СО2-экстрактов растительного сырья.

СО2-экстракт

Тест-микроорганизм

Escherichia coli

Staphylococcus aureus

Proteus

vulgaris

Bacillus subtilis

Pseudomonas aeruginosa

Candida

albicans

Microsporum canis

Trichophyton rubrum

Плоды кориандра посевного

1:250

1:250

1:250

1:250

1:250

1:500

1:250

1:250

Плоды укропа пахучего

-

-

-

1:250

-

-

1:250

1:250

Плоды облепихи крушиновидной

-

1:1000

-

-

-

1:1000

-

-

Трава полыни горькой

-

1:1000

-

-

-

1:1000

1:250

1:1000

Семена винограда культурного

-

1:1000

-

-

-

1:1000

-

-

Жом плодов черной смородины

-

1:1000

-

-

-

1:1000

-

-

Шрот семян тыквы

-

1:500

-

-

-

1:1000

-

-

Микробиологический контроль показал отсутствие Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и энтеробактерий в 1 г и отсутствие Salmonella в 10 г каждого из исследуемых СО2-экстрактов растительного сырья. Общее число аэробных бактерий и общее число грибов для всех изученных СО2-экстрактов равно нулю. Так как в ходе исследования было впервые выявлено или подтверждено антимикробное действие СО2-экстрактов растительного сырья, для получения достоверных результатов анализа микробиологической чистоты применялись специальные методы нейтрализации антимикробного действия СО2-экстрактов. Например,  вводились неспецифические инактиваторы в питательные среды или изменялось соотношение количества СО2-экстракта и питательной среды.

Известно, что в этиологии ряда воспалительных заболеваний, например, неспецифических воспалительных заболеваний органов мочеполовой системы, приоритетная роль принадлежит комбинированной инфекции, которая представляет ассоциативное взаимодействие неспорообразующих анаэробных микроорганизмов, неспецифической грамотрицательной и грамположительной микробной флоры. Микстинфекция является серьезной проблемой, так как в ряде случаев потенцирует патогенность каждого из возбудителей. В ходе проведенного исследования была выявлена бактериостатическая и фунгистатическая активность СО2-экстрактов растительного сырья в отношении наиболее распространенных возбудителей, идентифицирующихся при сочетанных инфекциях половой сферы. СО2-экстракты в концентрации 250-1000 мкг/мл обладают бактериостатической активностью в отношении  Staphylococcus aureus и проявляют фунгистатичекую активность в отношении  дрожжеподобных грибов рода Candida, в частности  в отношении наиболее распространенного вида Candida albicans, вызывающего кандидозный кольпит. Для СО2-экстракта плодов кориандра посевного характерно также бактериостатическое действие в отношении Escherichia coli (1:250).

Оценка безопасности использования СО2-экстрактов проводилась в соответствии с Федеральным законом № 86-ФЗ «О лекарственных средствах», Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических средств и международными правилами, предъявляемыми к  фармакологическим и токсикологическим исследованиям лекарственных средств. Исследование токсичности показало отсутствие токсического эффекта СО2-экстрактов при использовании в экспериментальных концентрациях.

Результаты исследования СО2-экстрактов растительного сырья являются экспериментально-теоретической базой для создания лечебно-профилактических лекарственных препаратов природного происхождения, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью. С учетом особенностей ПСК и изученных свойств, СО2-экстракты растительного сырья целесообразно использовать в качестве основных компонентов мягких лекарственных форм, в частности, суппозиториев и мазей. Предварительные результаты доклинических испытаний служат основой для достоверного выявления, оценки и доказательства прогнозируемой терапевтической активности в ходе отдаленных клинических исследований лекарственных препаратов на основе СО2-экстрактов растительного сырья,  сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью.

Разработанные спецификации для контроля качества СО2-экстрактов  позволяют достоверно и объективно установить подлинность изученных объектов и выявить потенциальные фальсификации или несоответствия ПСК Государственным стандартам качества лекарственных средств, получаемым из растительного сырья.

ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ПОЛУЧЕНИЯ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ КОНСТИТУЕНТОВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА МЯГКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ

В контексте решения проблемы лекарственной полипрогмазии целесообразным представляется изыскание средств и способов получения из отечественных видов ЛРС и пищевых растительных источников конституентов, содержащих комплекс фармакологически активных веществ, в частности, для производства мягких лекарственных форм (суппозиториев и мазей).

Известно, что жирное масло плодов растений семейства Сельдерейные содержит комплекс БАВ, обеспечивающих не только широкий спектр его фармакологической активности, но также обусловливающих возможность выделения твердых липофильных фракций (ТЛФ). Данные ТЛФ с нашей точки зрения могут быть использованы в качестве конституентов суппозиторных или мазевых основ растительного происхождения. Кроме того, растения семейства Сельдерейные являются широко культивируемыми в России, что представляет значимый фактор, влияющий на себестоимость конечного продукта. В середине XX века отечественными исследователями были проведены изыскания в области получения суппозиторной основы, представляющей собой твердую часть жирного масла плодов растений семейства Сельдерейные, близкую по консистенции и температуре плавления к маслу какао – классической суппозиторной основе (И.М. Фефер, 1953; Е.Н. Зарайская, Г.В. Макарова, 1955; М.Н. Бушкова, 1957). Однако длительность и многостадийность процесса получения твердой части из жирного  масла плодов растений семейства Сельдерейные являлась причиной потери термолабильных БАВ, таких как каротиноиды, токоферолы, фосфолипиды, и обусловливала в конечном итоге получение твердой фракции, представляющей собой в основном ацилглицерины цис-6-октадеценовой (петрозелиновой) кислоты.

С целью упрощения процесса извлечения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные и увеличения содержания в них комплекса нативных БАВ нами проведены изыскания по выбору селективного экстрагента и разработке оптимального технологического способа.

Для получения ТЛФ использовали фармакопейные виды растений семейства Сельдерейные – плоды фенхеля обыкновенного (Foeniculum vulgare Mill.), укропа пахучего (Anethum graveolens L.) и кориандра посевного (Coriandrum sativum L.). Изыскание селективного экстрагента для извлечения ТЛФ из  плодов растений семейства Сельдерейные проведено на примере малополярных органических растворителей и их смесей, наиболее широко используемых в качестве экстрагентов липофильных фракций из ЛРС и пищевых растительных источников.

ТЛФ получали из плодов растений семейства Сельдерейные с влажностью не более 2,5%, измельченных до размера частиц, проходящих через сито с диаметром отверстий 0,5 мм, циркуляционной экстракцией малополярными органическими растворителями или их смесями в аппарате Сокслета в течение 2,5-3 часов при соотношении сырье : экстрагент – 1 : 3-5. Указанные значения влажности, степени измельчения сырья, времени экстракции и соотношения сырье : экстрагент обеспечивают оптимальный выход липофильной фракции из плодов растений семейства Сельдерейные (А.Н. Фетисова с соавт., патент РФ 2147890, 2000). Экстрагент из полученной мисцеллы отгоняли на роторно-вакуумной испарительной установке при значениях величин температуры и давления, характерных для использованных в эксперименте органических растворителей и их смесей.  Продукт высушивали в сушильном шкафу до постоянной массы при температуре 40-45оС.

Экстракция липофильных фракций из масличного растительного сырья, как правило, проводится малополярными растворителями или их смесями с последующим удалением экстрагента; в каждом конкретном случае необходимо подобрать селективный экстрагент, обеспечивающий оптимальный выход БАВ. При этом условия удаления экстрагента не должны оказывать деструктивного влияния на выделяемый комплекс БАВ. Кроме того, в соответствии с поставленной исследовательской задачей, экстрагент должен обеспечивать выделение ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные, обладающих необходимыми структурно-механическими свойствами для производства мягких лекарственных форм.

Результаты проведенных исследований по выбору оптимального экстрагента показали, что гексан является селективным  экстрагентом для получения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные. Экстракция гексаном обеспечивает получение ТЛФ, характеризующихся структурно-механическими свойствами, которыми в соответствии с ГСКЛС должны обладать мазевые или суппозиторные основы. Из таблицы 9 следует, что попытка использования других малополярных органических растворителей (бензин «Нефракс», хлороформ, метанол) и/или их смесей не приводит к достижению исследовательской цели. Только использование гексана в качестве экстрагента для получения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные при соотношении сырье : экстрагент – 1 : 3-5 позволяет упростить технологический процесс и увеличить содержание в целевом продукте нативных БАВ.

Таким образом, поставленная исследовательская задача решалась способом, заключающемся в том, что ТЛФ получают из плодов растений семейства Сельдерейные с влажностью не более 2,5%, измельченных до размера частиц, проходящих через сито с диаметром отверстий 0,5 мм, экстракцией гексаном в аппарате Сокслета в течение 2,5-3 часов при соотношении сырье : экстрагент – 1 : 3-5 (рис. 1).

Предлагаемый технологический способ извлечения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные, по сравнению с прототипом,  позволяет исключить стадии кристаллизации и переэтерификации. Кроме того, использование в качестве экстрагента гексана позволяет упростить процесс очистки и, в целом, технологическую схему получения продукта (А.Н. Фетисова с соавт., патент РФ 2318867, 2008).

Таблица 9.

Выбор селективного экстрагента для получения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные (на примере плодов фенхеля обыкновенного).

Экстрагент

Характеристика липофильной фракции

Температура

загустевания (затвердевания*) липофильной фракции, оС

метанол : хлороформ

(1 : 1-2)

При температуре 20-25оС вязкая жидкость светло-зеленого цвета со специфическим запахом эфирного масла фенхеля. При температуре 7±2оС продукт представляет собой густую мазеобразную массу.

10±1

хлороформ

При температуре 20-25оС вязкая жидкость светло-зеленого цвета со специфическим запахом эфирного масла фенхеля. При температуре 7±2оС продукт представляет собой густую мазеобразную массу.

10±1

бензин «Нефракс»

При температуре 20-25оС вязкая жидкость коричневого цвета с зеленой флуоресценцией и специфическим запахом эфирного масла фенхеля. При температуре 7±2оС продукт расслаивается с образованием мазеобразной и жидкой фракций.

8±1

бензин «Нефракс» : хлороформ

(1 : 1-2)

При температуре 20-25оС жидкость болотного цвета со специфическим запахом эфирного масла фенхеля. При температуре 7±2оС продукт представляет собой вязкую жидкость.

10±1

гексан

При температуре 20-25оС твердая масса зеленого цвета со специфическим запахом эфирного масла фенхеля. В расплавленном состоянии зеленая прозрачная жидкость без механических примесей.

23±1*

               

Рис. 1. Технологическая схема получения твердой липофильной фракции из плодов растений семейства Сельдерейные (А.Н. Фетисова с соавт., патент РФ 2318867, 2008).

Широкое применение гексана пищевыми и фармавцевтическими производствами объясняется его стабильностью, высокой экстрагирующей способностью в отношении БАВ липофильной природы, малой потерей при испарении, более хорошими органолептическими свойствами шрота, остающегося после экстракции и использующегося в качестве кормовой добавки в животноводстве. Кроме того, имеются сведения, что для большинства органических растворителей характерна особенность экстракции афла- и микотоксинов, концентрирующихся в шроте. Исключением в данном контексте является гексан.

Гексан,  по сравнению с другими малополярными органическими растворителями, имеет узкий интервал температуры кипения, что обусловливает возможность создания щадящего температурного режима на стадии удаления экстрагента. В представленном исследовании отгон экстрагента из мисцеллы проводился на роторно-вакуумной испарительной установке при давлении 150 мм рт. ст. и температуре 30оС. Известно, что указанные условия обеспечивают оптимальную полноту удаления гексана из экстракта, полученного на основе  масличного растительного сырья. ГЖХ анализ показал отсутствие остаточных количеств гексана в экспериментальных образцах  ТЛФ плодов растений семейства Сельдерейные. Это позволяет сделать вывод о соответствии ТЛФ плодов растений семейства Сельдерейные, получаемых по предложенной технологии, требованиям отечественных и международных стандартов качества, предъявляемым к экстрактам, извлекаемым из ЛРС экстракцией органическими растворителями, по показателю «содержание остаточных количеств растворителя».

Выход ТЛФ зависит от родовой принадлежности исходного растительного сырья (плоды фенхеля обыкновенного – 4,87±0,22%; плоды укропа пахучего – 4,18±0,19%;  плоды кориандра посевного - 4,67±0,21%)  и составляет не менее 4% в пересчете на абсолютно сухое сырье. Полученные из плодов растений семейства Сельдерейные предложенным способом ТЛФ имеют показатели состава и качества, соответствующие требованиям ГСКЛС, предъявляемым к мягким лекарственным формам. Показатели состава и качества ТЛФ, полученной из плодов фенхеля обыкновенного предлагаемым способом, представлены в таблице 10  в сравнении с прототипом (И.М. Фефер, 1953). ТЛФ  содержат помимо специфичной для растений семейства Сельдерейные петрозелиновой кислоты,  которая обусловливает необходимые для конституентов мазевых и суппозиторных основ структурно-механические характеристики, также комплекс БАВ природного происхождения, обладающих антиоксидантной и противовоспалительной активностью. ТЛФ, полученные из плодов растений семейства Сельдерейные циркуляционной экстракцией гексаном в соответствии с  разработанной технологической схемой, по показателям состава и качества могут быть рекомендованы в качестве конституентов растительного происхождения при производстве мазей или суппозиториев из отечественного сырья.

Разработанная технологическая схема позволяет упростить процесс получения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные, а также увеличить содержание  в продукте нативного сбалансированного комплекса биологически активных веществ, обладающих антиоксидантным и противовоспалительным действием – каротиноидов, токоферолов, фосфолипидов. Предлагаемая технологическая схема получения  ТЛФ природного происхождения обеспечивает не только оптимальный выход БАВ, но и способствует получению стабильного целевого продукта, содержащего минимальное количество балластных веществ, способных негативно влиять на качество мягких лекарственных форм, приготовленных с их использованием. Предложенный способ получения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные обеспечивает рациональное применение отечественных сырьевых запасов лекарственных растений и позволяет провести замены  импортных суппозиторных или мазевых основ растительного происхождения.

Таблица 10.

Сравнительная характеристика показателей состава и качества ТЛФ, полученной из плодов фенхеля обыкновенного предлагаемым способом и способом-прототипом.

Показатели состава и качества

Предлагаемый способ

Прототип

Плотность при 20оС, г/см3

0,9050±0,0002

0,9130-0,9150

Показатель преломления, n20D

1,4776

1,4625

Температура плавления, оС

28-31

29-31

Температура затвердевания, оС

23-24

21-22

Кислотное число

5,05±0,05

2,99-3,32

Число омыления

189,3±2,8

189,5-189,9

Йодное число

80,0±1,3

81,50-81,83

Содержание перекисей,%

0,90±0,01

Не определялось

рН водного извлечения

6,9±0,1

Не определялось

Внешний вид изготовленных суппозиториев

Зеленого цвета, равномерно окрашенные, без вкраплений и трещин

Зеленого цвета, равномерно окрашенные, без вкраплений и трещин

Время полной деформации, мин

3

Не менее 15

Содержание неомыляемых веществ, %

20-25

-

Суммарное содержание каротиноидов в пересчете на β-каротин, мг%

5,20±0,07

-

Суммарное содержание токоферолов в пересчете на α-токоферол, мг%

10,7±0,2

-

Суммарное содержание фосфолипидов,%

0,90±0,04

-

Содержание ацилглицеринов петрозелиновой килоты,%

27,3

97,3

ОБНАРУЖЕНИЕ ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ ФАЛЬСИФИКАЦИЙ И НЕДОБРОКАЧЕСТВЕННОЙ ПРОДУКЦИИ СРЕДИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ, ИМЕЮЩИХ НЕСПЕЦИФИЧНЫЙ СОСТАВ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ

Общие аспекты выявления фальсификатов и недоброкачественной продукции среди лекарственных средств, изготовленных из масличного растительного сырья

Актуальной проблемой современного рынка фармацевтической и парафармацевтической продукции в Российской Федерации является рост производства, распространения и использования фальсифицированных лекарственных препаратов и БАД. Значительное количество фальсифицированной и низкокачественной продукции выявляется среди ассортимента лекарственных препаратов и БАД природного происхождения, в частности изготовленных на основе масличного ЛРС. Увеличение доли фальсифицированных лекарственных средств является серьезной медико-социальной проблемой, связанной с угрозой здоровью населения страны и оборачивающейся многомиллионными убытками для государственной казны и  частных производителей. В соответствии с разработанным ВОЗ «Планом действий по борьбе с фальсифицированными лекарственными средствами» определение ПСК лекарственных средств является одной из основных составляющих процесса выявления фальсифицированной и низкокачественной продукции среди препаратов и БАД, изготовленных из масличного ЛРС.

В настоящем исследовании на основании собственных эмпирических изысканий обоснованы принципиальные подходы и критерии обнаружения потенциальных фальсификаций и недоброкачественной продукции среди препаратов и БАД, изготовленных из масличного растительного сырья.

В качестве модельных объектов для разработки критериев и обоснования принципов выявления недоброкачественной продукции и потенциальных фальсификаций были выбраны БАД масло семян тыквы, тыквин, витадиойл, масло зародышей пшеницы,  препарат тыквеол, имеющие неспецифичный состав БАВ, в частности, ацилглицеринов жирных кислот.

Увеличение доли фальсифицированной и недоброкачественной продукции на отечественном фармацевтическом рынке обусловливает процесс изменения системы контроля качества лекарственных средств, связанный с необходимостью проверки большого количества образцов при сравнительно высокой стоимости фармакопейных анализов. В данном аспекте ВОЗ рекомендует использовать упрощенные тесты, так называемые методы скрининговой оценки.

Одним из простейших методов скрининговой оценки потенциальной фальсификации является визуальный контроль внешнего вида препарата или БАД. Проведенный нами анализ объектов исследования по показателю «Описание» (таблица 11) показал, что в целом препарат  тыквеол, БАД тыквин, масло семян тыквы, витадиойл и масло зародышей пшеницы соответствуют по данному показателю требованиям ГСКЛС, предъявляемым к лекарственным средствам, изготовленным из семян тыквы и зародышей пшеницы. Однако  изученные серии БАД масло семян тыквы имеют характерный запах масла семян подсолнечника, что может являться потенциальной фальсификацией данной БАД, декларируемой производителем как «масло семян тыквы, полученное из семян фармакопейных видов тыкв методом холодного прессования и представляющее собой маслянистую жидкость от зеленовато-коричневого до красно-коричневого цвета с характерным запахом и вкусом».

Таблица 11.

Характеристика исследованных серий препарата тыквеол, БАД масла семян тыквы, витадиойл и БАД масло зародышей пшеницы  по показателю «Описание».

ОБЪЕКТ

ОПИСАНИЕ

Тыквеол

Маслянистая жидкость зелено-бурого цвета с характерным запахом и вкусом масла семян тыквы.

Тыквин

Маслянистая жидкость зелено-бурого цвета с зеленой флуоресценцией, имеющая характерный запах и вкус масла семян тыквы.

Масло семян тыквы

Маслянистая жидкость зеленовато-коричневого цвета с характерным вкусом жирного масла семян тыквы, имеющая запах  масла семян подсолнечника.

Витадиойл

Маслянистая жидкость зеленовато-бурого цвета с характерным запахом и вкусом масла семян тыквы

Масло зародышей пшеницы

Маслянистая жидкость желтого цвета с характерным запахом и вкусом пшеничного хлеба.

Обнаружение в препарате или БАД, изготовленном из масличного растительного сырья, примеси других жирных масел сходных по составу ТАГ жирных кислот является трудной задачей, не всегда приводящей к однозначным решениям. Особую сложность представляет обнаружение примеси масла семян подсолнечника в препаратах и БАД масла семян тыквы и масла зародышей пшеницы даже с использованием хроматографических методов идентификации жирных кислот, так как жирнокислотный состав ТАГ указанных масел представлен неспецифичными жирными кислотами: пальмитиновой (C16:0), стеариновой (C18:0) , олеиновой (C18:1) и линолевой (C18:2). В данном случае для подтверждения выводов, полученных при первоначальной скрининговой оценке, приходится прибегать к расширенному фитохимическому исследованию в соответствии с утвержденными ГСКЛС методами анализа препаратов и БАД, изготовленных из масличного растительного сырья.

Проведенный фитохимический анализ препарата тыквеол, БАД тыквин, масло семян тыквы, витадиойл и масло зародышей пшеницы свидетельствует о том, что объекты исследования по основным показателям состава и качества идентичны,  и в целом соответствуют требованиям, предъявляемым ГСКЛС к качеству лекарственных средств, изготовляемых из семян тыквы и зародышей пшеницы (таблица 12, 13).

Таблица 12.

Показатели состава и качества препарата тыквеол и БАД масла семян тыквы исследованных серий.

Объект

Показатель

Тыквеол

Тыквин

Масло семян тыквы

Нормируемое значение

Плотность при 20оС, г/см3

0,9240±0,0002

0,9230±0,0002

0,9240±0,0002

0,880-0,940

Показатель преломления, n20D

1,4720

1,4715

1,4715

-

Число омыления

223,0±3,1

223,0±3,1

214,0±3,2

-

Кислотное число

1,05±0,02

0,39±0,01

0,62±0,01

Не более 1,25

Йодное число

116,0±2,3

126,0±2,5

124,0±2,5

100-140

Индекс окисленности

5,05±0,08

5,25±0,08

5,50±0,08

Не более 5

Содержание неомыляемых веществ, %

0,77±0,01

0,65±0,01

0,75±0,01

-

Содержание свободных жирных кислот, %

0,450±0,007

0,170±0,003

0,280±0,005

-

Содержание тяжелых металлов, %

Не обнаружены

Не обнаружены

Не обнаружены

Не более 0,001%

Суммарное содержание каротиноидов в пересчете на β-каротин, мг%

11,37±0,08

9,12±0,06

14,32±0,10

Не менее

10 мг%

Суммарное содержание токоферолов в пересчете на α-токоферол, мг%

34,98±0,21

25,80±0,16

25,43±0,15

Не менее

4 мг%

Таблица 13.

Показатели состава и качества БАД витадиойл и масло зародышей пшеницы исследованных серий.

Объект

Показатель

Витадиойл

Масло зародышей пшеницы

Нормируемое значение

Плотность при 20оС, г/см3

0,9220±0,0002

0,9190±0,0002

-

Показатель преломления, n20D

1,4766

1,4756

-

Число омыления

208,6±3,1

210,4±3,2

-

Кислотное число

1,16±0,02

3,21±0,05

Не более 4

Йодное число

137,1±2,7

138,4±2,8

-

Содержание перекисей, %

0,0250±0,001

0,032±0,001

Не более 0,04%

Содержание свободных жирных кислот, %

0,530±0,008

1,450±0,032

-

Содержание неомыляемых веществ, %

0,62±0,01

0,55±0,01

-

Содержание тяжелых металлов, %

Не обнаружены

Не обнаружены

Не более 0,001%

Суммарное содержание каротиноидов в пересчете на β-каротин, мг%

9,36±0,07

9,42±0,07

-

Однако препарат  и БАД масла семян тыквы исследованных серий не соответствуют требованиям ГСКЛС по показателю «Индекс окисленности». Индекс окисленности является одним из основных показателей доброкачественности лекарственных средств, изготовленных из масличного растительного сырья. Увеличение индекса окисленности свидетельствует о протекающих в  жирных маслах процессах окисления ненасыщенных жирных кислот пероксикислотами с образованием соответствующих эпоксидов. Так, для препарата тыквеол значение индекса окисленности превышает верхний нормируемый предел на 1%, для БАД тыквин – на 5%, для БАД масло семян тыквы – на 10%. Поэтому можно сделать вывод о недоброкачественности препарата и БАД масла семян тыквы исследованных серий. БАД тыквин также не соответствует требованиям ГСКЛС по показателю «суммарное содержание каротиноидов», данный показатель для БАД тыквин меньше нижнего нормируемого предела на 8,8%,  что согласуется с высоким значением индекса окисленности  данной БАД.

Возросший уровень ятрогенных влияний на организм человека, в том числе при применении лекарственных препаратов и БАД, изготовляемых из ЛРС,  связывается с увеличением выпуска фальсифицированной продукции. Производство фальсифицированных лекарственных средств из масличного растительного сырья  может включать введение в жирное масло для усиления фармакологического воздействия препарата или БАД веществ синтетического происхождения, в том числе синтетических аналогов витаминов – альфа-токоферола ацетата и ретинола пальмитата. При производстве фальсифицированного препарата или БАД из масличного растительного сырья производителем не указывается в соответствующем стандарте качества содержание в лекарственном средстве добавок синтетических аналогов витаминов.

ВЭЖХ позволяет достоверно идентифицировать введение синтетических аналогов витаминов при производстве лекарственных препаратов и БАД из масличного растительного сырья  и выявить фальсифицированную продукцию. Проведенный ВЭЖХ анализ показал отсутствие добавок синтетических аналогов витаминов – альфа-токоферола ацетата и ретинола пальмитата в исследованных сериях объектов (рис. 2). 

I II

Рис. 2. Общий вид хроматограмм, позволяющих идентифицировать ретинола пальмитат (I) и альфа-токоферола ацетат (II) в препаратах и БАД, получаемых из масличного растительного сырья (на примере БАД витадиойл).

А – общий вид хроматограммы стандартного образца ретинола пальмитата (I) или альфа-токоферола ацетата (II);

Б – общий вид хроматограммы образца БАД витадиойл.

Идентификация жирных масел, имеющих неспецифичный состав глицеринов жирных кислот, не всегда приводит к однозначным решениям, в связи с этим, идентификация жирных масел должна основываться главным образом на различии количественного состава их жирных кислот и глицеринов. Для скрининговой оценки лекарственных средств, получаемых из масличного ЛРС, может быть использован расчет количественного состава жирных кислот и их глицеринов на основании значений числа омыления, кислотного числа жирного масла и содержания неомыляемых веществ. Рассчитанный на основании полученных экспериментальных значений числа омыления, кислотного числа и  содержания неомыляемой фракции состав жирных кислот и глицеринов объектов исследования в совокупности с результатами их скрининговой оценки позволяет идентифицировать препарат тыквеол и БАД тыквин  как жирное масло семян тыквы, а также допустить потенциальную фальсификацию БАД масло семян тыквы, связанную с наличием в ней примеси масла семян подсолнечника. Известно, что средняя относительная молекулярная масса жирных кислот масла семян подсолнечника составляет 283. Как показано в таблице 14,  средняя относительная молекулярная масса ацилглицеринов БАД масло семян тыквы превышает соответствующий показатель для препарата тыквеол и БАД тыквин на 4,2%, а средняя относительная молекулярная масса жирных кислот соответственно выше на 4,6%.

Таблица 14.

Теоретический состав жирных кислот и глицеринов лекарственных средств, изготовленных из масличного растительного сырья, имеющего неспецифичный состав ацилглицеринов жирных кислот.

Объект

  Показатель

Тыквеол

Тыквин

Масло семян тыквы

Витадиойл

Масло зародышей пшеницы

Средняя относительная молекулярная масса ацилглицеринов

755

755

787

807

800

Средняя относительная молекулярная масса жирных кислот

239

239

250

256

254

Содержание

ацилглицеринов, %

99

99

99

99

98

Согласно техническим условиям БАД  витадиойл представляет собой смесь масла семян тыквы и масла зародышей пшеницы. При производстве данной БАД регламентируется содержание масла семян тыквы не более 80% и масла зародышей пшеницы не менее 20% по объему. Масло семян тыквы и масло зародышей пшеницы имеют практически идентичный жирнокислотный состав. Кроме того, в указанных маслах отсутствуют какие-либо сопутствующие вещества, типичные только для одного из масел. Органолептические особенности в смесях жирных масел весьма трудно распознаваемы, в особенности, если они неясно выражены, и если одно из жирных масел находится в смеси в небольшом количестве. Однако сопоставление рассчитанного состава жирных кислот и глицеринов БАД витадиойл с препаратом и БАД масла семян тыквы и БАД масло зародышей пшеницы позволяет идентифицировать витадиойл как смесь соответствующих жирных масел (таблица 14).

Выявление фальсифицированной и недоброкачественной продукции среди препаратов и БАД, изготовленных из масличного растительного сырья, является комплексной проблемой, обусловленной в первую очередь сложностью идентификации жирных масел, имеющих неспецифичный состав глицеринов жирных кислот и характеризующихся отсутствием каких-либо специфичных сопутствующих веществ. Кроме того, целесообразность увеличения частоты и масштабов проверок определяет необходимость снижения роста издержек при проведении скрининговой оценки. При этом издержки, связанные с проведением скрининговой оценки, следует соотносить с вероятностью проявления ятрогенной патологии, т.е. с возможностью возникновения более значимых медицинских, социальных и экономических проблем, обусловленных применением фальсифицированных или недоброкачественных препаратов и БАД.

С нашей точки зрения для достоверного выявления фальсифицированной и недоброкачественной продукции среди препаратов и БАД, изготовленных из масличного растительного сырья, имеющего неспецифичный состав глицеринов жирных кислот и характеризующихся отсутствием каких-либо специфичных сопутствующих веществ,  методы скрининговой оценки должны, во-первых, включать определение основных ПСК, представленных в таблицах  12 и 13. Предложенные методы скрининговой оценки экспериментальных значений основных показателей состава и качества препаратов и БАД, изготовленных из масличного ЛРС, не являются трудоемкими и дорогостоящими, включают в основном фармакопейные методики и являются базой для теоретического расчета состава жирных масел. Во-вторых, скрининговая оценка на основании расчетов состава жирных масел с использованием их основных показателей состава и качества может являться достоверным и объективным методом идентификации и выявления фальсифицированной продукции среди лекарственных средств, получаемых из масличного ЛРС, имеющего неспецифичный жирнокислотный состав и характеризующегося отсутствием специфичных сопутствующих веществ (таблица 14).

Вышеизложенные подходы являются экспериментально-теоретической базой выявления потенциальных фальсификаций и недоброкачественной продукции среди препаратов и БАД, изготовленных  из масличного растительного, имеющего неспецифичный состав БАВ. Для достоверного и объективного обнаружения фальсификатов и недоброкачественной продукции среди указанной категории препаратов и БАД оптимальная последовательность процедур должна включать следующие этапы:

  1. органолептический анализ;
  2. определение основных ПСК (плотность, показатель преломления, число омыления, кислотное число, йодное число, индекс окисленности, содержание неомыляемых веществ, суммарное содержание каротиноидов в пересчете на бета-каротин);
  3. расчет состава жирных кислот и глицеринов на основании эмпирических ПСК.

Расчет состава жирных кислот и глицеринов в оценке качества лекарственных средств

В настоящем исследовании на основании эмпирических ПСК препаратов и БАД, изготовленных из масличного ЛРС, разработана методика расчета состава жирных кислот и глицеринов, которая, как было показано выше, может быть использована для скрининговой оценки потенциальных фальсификаций и выявления недоброкачественной продукции среди указанной группы лекарственных средств.

Расчет состава жирных кислот и глицеринов выполняется на основании трех эмпирических ПСК лекарственных средств, изготовленных из масличного растительного сырья, а именно числа омыления, кислотного числа и содержания неомыляемых веществ.

1. Рассчитывают среднюю относительную молекулярную массу ацилглицеринов (ММГ), используя эмпирические значения числа омыления (ЧО) лекарственных средств, изготовленных из масличного ЛРС, по формуле

ММГ = , где

56110 относительная молекулярная масса гидроксида калия;

3 – коэффициент пересчета на ТАГ;

ЧО – число омыления образца.

2. Рассчитывают среднюю относительную молекулярную массу жирных кислот (ММЖК) по формуле

ММЖК = , где

  ММГ – средняя относительная молекулярная масса ацилглицеринов;

  3 – коэффициент пересчета на ТАГ;

  38 – относительная молекулярная масса углеводородной части глицерина.

3. Рассчитывают содержание свободных жирных кислот (СЖК) в процентах, используя эмпирические значения кислотного числа (КЧ) лекарственных средств, изготовленных из масличного ЛРС, по формуле

СЖК = , где

ММЖК – средняя относительная молекулярная масса жирных кислот;

56110 – относительная молекулярная масса гидроксида калия;

КЧ – кислотное число образца.

4. Рассчитывают содержание ацилглицеринов (САГ) в процентах, используя эмпирические значения содержания неомыляемых веществ (СНВ) (в процентах) в лекарственных средствах, изготовленных из масличного ЛРС, по формуле

САГ = (100 – СЖК – СНВ), где

СЖК – содержание свободных жирных кислот, %;

СНВ – содержание неомыляемых веществ в образце, %.

На основании эмпирических ПСК был рассчитан состав жирных кислот и глицеринов объектов исследования (таблица 14) в соответствии с описанной выше последовательностью расчета. Известно, что состав жирных кислот в липофильных фракциях масличного ЛРС постоянен. В тоже время количественное содержание отдельных жирных кислот в разных образцах одной и той же липофильной фракции (жирного масла), полученной из конкретного  ЛРС, может изменяться, но чаще всего в незначительных пределах. Различия в составе и количестве жирных кислот липофильных фракций растительного сырья отражаются на удельном расходе реагентов, затрачиваемых на соответствующие реакции. Для доброкачественного лекарственного средства, полученного из масличного ЛРС, удельный расход реагентов, выраженный соответствующими показателями (число омыления, кислотное число, содержание неомыляемых веществ, содержание свободных жирных кислот), изменяется в сравнительно небольших постоянных пределах. Кроме того, значения числа омыления и кислотного числа непосредственно связаны с жирнокислотным составом лекарственных средств, изготовленных из масличного ЛРС. Следовательно, совокупность таких ПСК, как число омыления, кислотное число и содержание неомыляемых веществ, позволяет проводить идентификацию лекарственных средств, изготовленных из масличного ЛРС.

Расчет состава жирных кислот и глицеринов лекарственных средств растительного происхождения, имеющих неспецифичный состав БАВ, производится на основании трех эмпирических ПСК – числа омыления, кислотного числа и содержания неомыляемых веществ, и позволяет достоверно и объективно идентифицировать соответствующий препарат или БАД, выявить потенциальную фальсификацию или недоброкачественную продукцию.

ВЫВОДЫ

  1. На основании апостериорных сопоставительных экспериментальных исследований липофильных фракций, полученных из 7 родов растительного сырья экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода и неполярными органическими растворителями, разработана аутентичная система спецификаций для контроля качества СО2-экстрактов, как новых лекарственных средств природного происхождения, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью. Предварительные результаты доклинических испытаний, в ходе которых доказано бактериостатическое и фунгистатическое действие, микробиологическая чистота,  отсутствие в экспериментальных дозах токсического эффекта СО2-экстрактов, являются основой для достоверного выявления, оценки и доказательства прогнозируемой терапевтической активности в ходе отдаленных клинических исследований лекарственных препаратов на основе СО2-экстрактов растительного сырья.
  2. Разработана технология получения фармакологически активных конституентов растительного происхождения для производства мягких лекарственных форм, основанная на выделении твердых липофильных  фракций из плодов растений семейства Сельдерейные с использованием селективного экстрагента. Эмпирически доказано, что предложенная технологическая схема обеспечивает выход стабильного целевого продукта, содержащего сбалансированный комплекс биологически активных веществ, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие. Разработанный способ получения твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные способствует рациональному применению отечественных сырьевых запасов лекарственных растений и позволяет провести замены  импортных суппозиторных или мазевых основ растительного происхождения.
  3. Обоснованы принципиальные подходы и разработаны критерии обнаружения недоброкачественной продукции и потенциальных фальсификаций  среди препаратов и биологически активных добавок, изготовленных из масличного растительного сырья. Предложенные методы скрининговой оценки показателей состава и качества препаратов и БАД, изготовленных из масличного ЛРС, базируются на использовании общедоступных сертифицированных методик, соответствующих  рекомендациями ВОЗ.
  4. Разработана методика эмпирического расчета состава жирных кислот и глицеринов объектов растительного происхождения, предназначенная для скрининговой оценки доброкачественности растительного сырья, лекарственных средств и биологически активных добавок липофильной природы, имеющих неспецифичный состав биологически активных веществ, в частности ацилглицеринов жирных кислот.
  5. В результате проведенных изысканий сформирована экспериментально-теоретическая база для создания лечебно-профилактических лекарственных средств природного происхождения, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью. Предложенная аутентичная система разработки и спецификации лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья позволяет достоверно обнаружить потенциальные фальсификации или несоответствия требованиям, предъявляемым Государственными стандартами качества к оценке и валидации технологии производства лекарственных средств природного происхождения.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

  1. Фетисова А.Н. Современный подход к исследованию лекарственного растительного сырья и получаемых на его основе лекарственных средств // Сборник трудов «Лекарственные растения Ботанического сада». - М.: ММА им. И.М. Сеченова, 1996.-С. 97.
  1. Фетисова А.Н., Нестерова О.В., Попков В.А. Разработка показателей качества жома плодов черной смородины // Мат. 51-й региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров ПГФА. - Пятигорск, 1996.-С. 20.
  2. Фетисова А.Н., Нестерова О.В., Попков В.А. Перспективы использования масличного лекарственного растительного сырья в качестве субстанций для изготовления суппозиториев //  Научные труды НИИФ «Фармацевтическая наука в решении вопросов лекарственного обеспечения». - М., 1998. - т. 37, ч. 1. - С. 242-246.
  3. Фетисова А.Н., Попков В.А., Нестерова О.В. Структурирование проблемы создания фитопрепаратов с точки зрения рационального использования официнальных видов лекарственного растительного сырья и пищевых растительных источников // Мат. III международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения». - СПб-Пушкин, 1999. - С. 266-268.
  4. Фетисова А.Н., Попков В.А., Самылина И.А., Нестерова О.В. Современные методы стандартизации липофильных комплексов лекарственного растительного сырья // Мат. III международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения». - СПб-Пушкин,  1999. - С. 171-174.
  5. Королева Е.А., Нестерова О.В., Попков В.А., Фетисова А.Н. Разделение и определение фосфолипидов плодов кориандра и укропа методом ТСХ // Мат. III международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения». - СПб-Пушкин, 1999. - С. 123-125.
  6. Фетисова А.Н., Нестерова О.В.,. Попков В.А и др. Анализ масличности некоторых сортов плодов кориандра посевного // Научные труды НИИФ «Современные проблемы фармацевтической науки и практики». - М., 1999. - т. 38, ч. 2. - С. 302-305.
  7. Фетисова А.Н., Попков В.А., Нестерова О.В. Изучение  числовых показателей  жома плодов фенхеля обыкновенного и жирного масла // Научные труды НИИФ «Фармация на современном этапе – проблемы и достижения». - М., 2000. - т. 39, ч. 2. - С. 288-290.
  8. Королева Е.А., Попков В.А., Нестерова О.В., Решетняк В.Ю., Фетисова А.Н. Стандартизация липидного комплекса и СО2-экстракта жома плодов укропа и кориандра // Научные труды НИИФ «Фармация на современном этапе – проблемы и достижения». – М., 2000. - т. 39, ч. 2.-С. 53-57.
  9. Фетисова А.Н.,  Нестерова О.В., Попков В.А. и др. Разработка вагинальной лекарственной формы на основе жирных масел плодов кориандра и укропа // Мат. IV международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения». - Великий Новгород, 2000. - С. 109-112.
  1. Фетисова А.Н., Самылина И.А., Нестерова О.В. и др. Методы анализа суппозиториев с лекарственным растительным сырьем // Мат. IV международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения». - Великий Новгород, 2000. - С. 325-327.
  2. Фетисова А.Н. Нестерова О.В. Предварительные результаты применения суппозиториев с маслом семян тыквы в терапии неспецифических воспалительных заболеваний женских половых органов // Мат. научно-практич. конф. «Традиционные методы терапии в акушерско-гинекологической практике». - М.: Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН, 2001. - С. 52-54.
  3. Фетисова А.Н., Еремина А.В., Нестерова О.В. Сравнительный анализ показателей качества липофильных фракций лекарственного растительного сырья, полученных экстракцией органическими растворителями и жидким диоксидом углерода // Мат. V международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения».- СПб., 2001. -С. 139-141.
  4. Попков В.А., Фетисова А.Н., Нестерова О.В., Самылина И.А. Опыт использования фитопрепаратов на основе пищевого растительного сырья для профилактики и коррекции воспалительной патологии мочеполовой системы // Вестник РАМН.-2001.-№2.-С. 11-13.
  5. Фетисова А.Н. Лекарственные растения и хронический простатит: место фитотерапии в решении андрологических проблем // Экономический вестник фармации.-2001.-№3 (37).-С. 23-24.
  6. Фетисова А.Н., Шереметьева Е.В. Особенности анализа ряда действующих веществ суппозиториев с СО2-экстрактом плодов кориандра посевного // Мат. IX Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - М., 2002. - С. 714.
  7. Фетисова А.Н., Шереметьева Е.В. Коррекция нарушений обмена липидов при беременности с помощью витадиойла // Мат. IX Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - М., 2002. - С. 474.
  8. Фетисова А.Н., Попков В.А., Нестерова О.В. и др. Исследование химического состава неомыляемой фракции биологически активной добавки «Витадиойл» // Мат. VI международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения».- СПб., 2002. - С. 597-600.
  9. Фетисова A.Н., Попков В.А., Нестерова О.В. и др. Анализ соответствия качества препарата «Тыквеол» требованиям Государственных стандартов // Мат. VI международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения».- СПб., 2002. - С. 315-317.
  10. Фетисова А.Н., Попков В.А., Нестерова О.В. и др. Новые фитотерапевтические возможности профилактики и лечения воспалительных заболеваний органов мочеполовой системы // Мат. юбилейной конференции «Актуальные вопросы фитотерапии» РОО «Фитотерапевтическое общество». - М., 2002. - С. 147-152.
  11. Фетисова А.Н. Лекарственные средства природного происхождения в терапии хронического простатита в середине  XX века // Экономический вестник фармации.-2002.-№ 5 (51). - С. 91-94.
  12. Фетисова А.Н. Простатит и ДГПЖ: аспекты заболеваемости и лекарственного обеспечения // Экономический вестник фармации.-2002.-№ 6 (52).-С. 51-56.
  13. Фетисова А.Н. Современные средства и методы регулирования рождаемости // Экономический вестник фармации.-2002.-№ 7 (53).-С. 57-61.
  14. Фетисова А.Н.  Воспалительные заболевания женской половой сферы: современные препараты // Экономический вестник фармации.-2002.-№ 8 (54).-С. 74-78.
  15. Фетисова А.Н. Препараты, применяемые при лечении импотенции // Экономический вестник фармации.-2002.-№ 10 (56).-С. 61-64.
  16. Фетисова А.Н. Лекарственная помощь при климактерических расстройствах: состояние и проблемы // Экономический вестник фармации.-2002.-№ 12 (58).-С. 50-54.
  17. Фетисова А.Н. Пихоцкий А.Н. Сравнительное изучение антимикробного действия эфиромасличных комплексов травы Artemisia absintium L., полученных различными технологическими методами // Мат. X Российского национального конгресса «Человек и лекарство».- М., 2003.-С. 677.
  18. Фетисова А.Н. Пихоцкий А.Н. Анализ микробиологической чистоты липофильных фракций лекарственного растительного сырья, полученных экстракцией сжиженными газами // Мат. X Российского национального конгресса «Человек и лекарство».- М., 2003.-С. 676-677.
  19. Фетисова А.Н., Пихоцкий А.Н., Нестерова О.В. Состояние проблемы расширения ассортимента лекарственных средств на основе растительного сырья для терапии воспалительных заболеваний органов женской половой сферы // Труды II научно-практич. конф. «Традиционные методы лечения в акушерско-гинекологической практике». - М.: Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН, 2003.-С. 11-13.
  20. Фетисова А.Н., Пихоцкий А.Н. Использование комплекса природных антиоксидантов семян тыквы в терапии неспецифических воспалительных заболеваний органов женской мочеполовой системы: клинический опыт // Труды II научно-практич. конф. «Традиционные методы лечения в акушерско-гинекологической практике». - М.: Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН, 2003.-С. 77-79.
  21. Фетисова А.Н., Попков В.А, Пихоцкий А.Н. Особенности современных способов получения жирного масла из лекарственного растительного сырья и перспективные технологии // Мат. VII международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения». Фитофарм-2003.- СПб-Пушкин, 2003.-С. 93-98.
  22. Фетисова А.Н., Пихоцкий А.Н. Изучение возможности использования липофильных фракций лекарственного растительного сырья, полученных экстракцией жидким диоксидом углерода, в качестве противовоспалительных средств // Мат. XI Российского национального конгресса «Человек и лекарство».- М., 2004.-С. 587.
  23. Фетисова А.Н., Пихоцкий А.Н. Липофильные фракции лекарственного растительного сырья, полученные экстракцией жидким диоксидом углерода, как перспективные противогрибковые средства // Мат. XI Российского национального конгресса «Человек и лекарство».- М., 2004.-С. 587.
  24. Фетисова А.Н., Пихоцкий А.Н. Исследование влияния химической природы экстрагента на элементный состав липофильных фракций лекарственного растительного сырья // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сб. науч. тр. – Пятигорск, 2004. – Вып. 59. – С. 223-224.
  25. Фетисова А.Н., Пихоцкий А.Н. Идентификация веществ синтетического происхождения в препаратах и биологически активных добавках, получаемых из масличного лекарственного растительного сырья // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сб. науч. тр. – Пятигорск, 2004. – Вып. 59. – С. 224-225.
  26. Фетисова А.Н., Попков В.А. Теория и практика создания лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья для профилактики и лечения воспалительных заболеваний органов мочеполовой системы // Вестник РАМН. – 2004. - №. 6 - С. 28-31.
  27. Фетисова А.Н. Использование средства на основе липофильной фракции плодов черной смородины в комплексе лечебно-профилактических мероприятий при воспалении придатков матки // Восстановительная медицина и традиционные методы профилактики и лечения в акушерстве, гинекологии и перинатологии: Сб. тезисов докладов Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. ВГМУ. – Волгоград: ООО «Принт», 2004. – С. 181-183.
  28. Фетисова А.Н. Профилактика осложненного течения беременности с использованием комплекса полиненасыщенных жирных кислот растительного происхождения // Восстановительная медицина и традиционные методы профилактики и лечения в акушерстве, гинекологии и перинатологии: Сб. тезисов докладов Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. ВГМУ. – Волгоград: ООО «Принт», 2004. – С. 183-185.
  29. Fetisova, A.N. Vegetable CO2-extracts Qualitative and Quantitative Characteristics. In VIII International congress “Phytopharm – 2004”: Mikkeli (Finland), 2004; pp. 716-720.
  30. Fetisova, A.N. Modern Methods of Identification of Adulterated Production among Medicines Containing Fatty Oils. In IX International congress “Phytopharm – 2005”: St. Petersburg (Russia), 2005; pp. 313-317.
  31. Фетисова А.Н. Доклиническое изучение эффективности применения лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного происхождения, полученных экстракцией жидким оксидом углерода (IV), при микстинфекции органов женской половой сферы // Мат. Республиканской научно-практической конференции «Новые достижения в получении, изучении и применении лекарственных средств на основе природного сырья», посвященной 100-летию со дня рождения профессора Р.Л. Хазанович. – Ташкент, 2006.- С. 205.
  32. Фетисова А.Н. Теоретическая скрининговая оценка лекарственных средств, получаемых из масличного лекарственного растительного сырья // Мат. Республиканской научно-практической конференции «Новые достижения в получении, изучении и применении лекарственных средств на основе природного сырья», посвященной 100-летию со дня рождения профессора Р.Л. Хазанович. – Ташкент, 2006.- С. 10.
  33. Фетисова А.Н., Лядова Е.В., Попков В.А. и др. Изыскание средств и способов получения конституентов мазевых и суппозиторных основ природного происхождения // Научные труды VIII международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации». - М.:РУДН, 2007. – С.644-645.
  34. Лядова Е.В., Фетисова А.Н., Попков В.А. и др. Разработка спецификаций для контроля качества твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные // Мат. XV Российского национального конгресса «Человек и лекарство».- М., 2008.-С. 548-549.
  35. Fetisova, A.N., Lyadova, E.V. Comparative analysis of chemistry of the lipophilic fractions extracted from spingel and coriander fruits as possible sources for the soft dosage forms production // Мат. научно-практической конференции «Актуальные вопросы образования, науки и производства в фармации». – Ташкент, 2008.- С. 239-240.
  36. Фетисова А.Н., Маркарян А.А., Глазкова И.Ю., Садоян В.А. Технологии получения лекарственных средств на основе липофильных фракций сырья природного происхождения (курс дистанционного обучения). Учебник. – М.: Изд-во «Серебряные нити», 2008. – 136 с.
  37. Фетисова А.Н. Создание лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью: теория и практика / Под ред. В.А. Попкова. – М.: ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова Росздрава, 2008. – 55 с.
  38. Фетисова А.Н., Попков В.А., Кузьменко А.Н. Эмпирический расчет состава жирных кислот и глицеринов в оценке качества лекарственных средств // Вестник Московского Университета, Серия 2, Химия. – 2008. – т. 49. - № 3. – С. 209-212 .
  39. Фетисова А.Н., Попков В.А. Теоретические и экспериментальные аспекты обнаружения потенциальных фальсификаций и недоброкачественной продукции среди лекарственных средств, изготовленных из жиромасличного растительного сырья // Вестник РАМН. – 2008. - № 2. - С.29-33.
  40. Фетисова А.Н. Сравнительный анализ состава биологически активных веществ растительного происхождения, полученных экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода и неполярными органическими растворителями // Химическая технология. – 2008. – т. 9. - № 3. - С. 123-127.
  41. Фетисова А.Н. Технологические аспекты получения твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные // Химическая технология.–2008.– т. 9.- № 9. - С.457-460.
  42. Фетисова А.Н. Проблемы использования органических растворителей для извлечения биологически активных веществ липофильной природы из растительного сырья // Химическая технология. – 2008. – т. 9. - № 10. - С.531-534.
  43. Фетисова А.Н., Попков В.А., Лядова Е.В. Описание изобретения к патенту RU 2318867 «Способ получения суппозиторной основы» // Инновационные разработки ученых и специалистов Московской медицинской академии имени И.М. Сеченова (Каталог патентов). – М.: Издательский дом «Русский врач», 2008.-С.114-115.
  44. Лядова Е.В., Фетисова А.Н. Исследование состава неомыляемых биологически активных веществ твердых липофильных фракций из плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного // Мат. XVI Российского национального конгресса «Человек и лекарство».- М., 2009.-С. 694.

Патенты:

  1. Патент 2057540 РФ, МПК А 61К 35/78, 9/02. Способ получения суппозиториев из лекарственного растительного сырья./И.А. Самылина, В.А. Попков, О.В. Нестерова, А.Н. Фетисова, О.Б. Лоран и др. (РФ); заявл. 01.10.1992; опубл. 10.04.1996, бюл. № 10.
  2. Патент 2077889 РФ, МПК А 61К 35/78, 9/02. Способ лечения хронического простатита./И.А. Самылина, В.А. Попков, О.В. Нестерова, А.Н. Фетисова, О.Б. Лоран и др. (РФ); заявл. 24.02.1993; опубл. 27.04.1997, бюл. № 12.
  3. Патент 2089211 РФ, МПК А 61К 35/78, 9/02. Средство для лечения хронического простатита./ О.В. Нестерова, А.Н. Фетисова, В.И. Деменко, В.А. Попков, И.А. Самылина, О.Б. Лоран и др. (РФ); заявл. 05.07.1995; опубл. 10.09.1997, бюл. № 25.
  4. Патент 2104022 РФ, МПК А 61К 35/78, 9/02. Средство для лечения хронических воспалений придатков матки./ О.В. Нестерова, А.Н. Фетисова, В.И. Деменко, В.А. Попков, И.А. Самылина и др. (РФ); заявл. 05.07.1995; опубл. 10.02.1998, бюл. № 4.
  5. Патент 2147890 РФ, МПК А 61К 35/78, С 11В 1/04, 1/10. Способ получения жирного масла из плодов растений семейства  Сельдерейные./А.Н. Фетисова, О.В. Нестерова, Е.А. Королева, В.А. Попков, И.А. Самылина  (РФ); заявл. 02.06.1999; опубл. 27.04.2000, бюл. № 12.
  6. Патент 2318867 РФ, МПК С 11В 1/10. Способ получения суппозиторной основы./А.Н. Фетисова, В.А. Попков, Е.В. Лядова (РФ); заявл. 05.06.2006; опубл. 10.03.2008, бюл. № 7.

Список сокращений

БАВ биологически активные вещества

БАД биологически активная добавка (добавки)

ВЭЖХ высокоэффективная жидкостная хроматография

ГЖХ  газожидкостная хроматография

ГСКЛС Государственные стандарты качества лекарственных средств

ЛРС  лекарственное растительное сырье

ПНЖК  полиненасыщенные жирные кислоты

ПСК  показатели состава и качества

СКФ сверхкритические флюиды

ТАГ триацилглицерины

ТЛФ  твердая липофильная фракция (фракции)

ТСХ тонкослойная хроматография




© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.