WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

ТЕРЕНТЬЕВА  Светлана  Владимировна

ПЕРСПЕКТИВЫ  ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИИ  В  АНАЛИЗЕ

СЕРДЕЧНОСОСУДИСТЫХ  ЛЕКАРСТВЕННЫХ  СРЕДСТВ

(КОНТРОЛЬ  КАЧЕСТВА  И  ФАРМАКОКИНЕТИКА)

14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора

фармацевтических наук

Москва  –  2012

Работа выполнена в  ГБОУ ВПО  «Новосибирский государственный

медицинский университет»  Минздравсоцразвития России

(г. Новосибирск)  и  ГУ НИИ кардиологии СО РАМН  (г. Томск)

Научные консультанты:  доктор фармацевтических наук, профессор

Ивановская Елена Алексеевна

доктор медицинских наук, профессор

Попов Сергей Валентинович

Официальные оппоненты:  доктор фармацевтических наук, профессор

  Черкасова Ольга Гавриловна

  доктор фармацевтических наук, профессор

  Сокольская Татьяна Александровна

доктор фармацевтических наук

Ковалева Елена Леонардовна

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Самарский государственный

медицинский университет»

Минздравсоцразвития России

Зашита состоится  ___ ______ 2012 г.  в  ___ ч.  на заседании Диссертационного Совета  Д.208.040.09 при  ГБОУ ВПО  Первый Московской государственный медицинский университет имени  И.М. Сеченова  Минздравсоцразвития России по адресу:  119019,  г.Москва,  Никитский бульвар, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в  Центральной научной медицинской библиотеке  ГБОУ ВПО  Первый Московской государственный медицинский университет имени  И.М. Сеченова  Минздравсоцразвития России  по адресу:  117998,  г. Москва,  Нахимовский проспект,  д.49

Автореферат разослан  « ____ »  _________  2012 года

Ученый секретарь

Диссертационного Совета  Д.208.040.09,

доктор фармацевтических наук,

профессор  Садчикова Наталья Петровна

ОБЩАЯ  ХАРАКТЕРИСТИКА  РАБОТЫ

       

Актуальность проблемы.  В настоящее время в России зарегистрировано и внесено в  Государственный реестр порядка  3000  лекарственных средств, ежегодно  их список пополняется на  200 – 300  наименований; вместе с тем, каждый год из списка разрешенных для клинического применения исключают  100 – 200  препаратов, чаще всего по причине высокой токсичности и широте побочных эффектов. Необходимо учитывать и то, что лекарственные средства в качестве монотерапии используют редко, чаще в виде сочетаний в одной лекарственной форме, что усиливает терапевтический эффект и увеличивает число побочных реакций  (Ю.Б. Белоусов,  2002;  И.И. Мирошниченко,  2002).

       В связи с этим, актуальным становится поиск и выбор современных высокочувствительных методов контроля качества лекарственных средств, при этом оптимальным является тот, который осуществляет детекцию по фармакологически активной группе, пригоден для анализа лекарственного средства в растворе стандартного образца, лекарственных формах и биологических жидкостях. Поскольку в оказании фармакологического эффекта непосредственно задействованы эндогенные электрохимические процессы, следует обратить внимание на электрохимические методы анализа, в частности, вольтамперометрию, используемую в настоящее время для контроля состояния окружающей среды, лекарственных средств, исследования физиологических процессов в организме и способную обеспечить определение значительного числа как неорганических, так и органических веществ. Она характеризуется высокой чувствительностью и селективностью, быстротой отклика на изменение состава анализируемого объекта, легкостью автоматизации и возможностью дистанционного управления, не требуют дорогостоящего аналитического оборудования и может применяться в лабораторных, производственных и полевых условиях. Нижняя граница определяемых концентраций при линейном изменении потенциала индикаторного электрода в классической вольтамперометрии составляет  106 105 моль/л,  для ее снижения до  108 107 моль/л  используют усовершенствованные инструментальные варианты:  переменнотоковую и дифференциальную импульсную.

Особый интерес представляет изучение возможности использования вольтамперометрии для анализа  сердечнососудистых  лекарственных средств, как наиболее обширной части рынка всех лекарственных средств.

       Цель и задачи исследования

Целью настоящего исследования являлось обоснование целесообразности использования вольтамперометрии для контроля качества и изучения фармакокинетики  сердечнососудистых  лекарственных средств на примере амиодарона, нибентана, спираприла гидрохлорида, фозиноприла натрия, беназеприла гидрохлорида и карведилола. Исследование возможности использования вольтамперометрии в анализе эндогенных полипептидов.

Для достижения поставленной цели требовалось решить следующие задачи:

  • выполнить  квантово–химические  расчеты структуры амиодарона, нибентана, спираприла гидрохлорида, фозиноприла натрия, беназеприла гидрохлорида и карведилола;
  • разработать вольтамперометрические методики количественного определения лекарственных средств в модельных растворах стандартного образца;
  • предложить валидированные условия количественного определения лекарственных средств в лекарственных формах;
  • изучить возможность количественного анализа лекарственных средств в сыворотке крови и предложить схему пробоподготовки анализируемых образцов крови;
  • провести сравнительные фармакокинетические исследования  сердечнососудистых  лекарственных средств вольтамперометрическим методом в сравнении с высокоэффективной жидкостной хроматографией;
  • исследовать возможность использования вольтмаперометрии в анализе эндогенных полипептидов.

       Научная  новизна

С помощью  квантово–химических  расчетов структур амиодарона, нибентана, спираприла гидрохлорида, фозиноприла натрия, беназеприла гидрохлорида и карведилола, выполненных методом РМ–3, впервые получены соответствующие значения энергий ионизации атомов, на основании чего дано заключение о вероятном механизме электродного процесса.

Впервые в мировой практике:

  • обнаружена способность и показана возможность амиодарона, нибентана, спираприла гидрохлорида, фозиноприла натрия, беназеприла гидрохлорида, карведилола и  ангиотензина II  участвовать в процессах, протекающих на поверхности стационарных электродов с образованием малодиссоциированных соединений, электрорастворение которых приводит к появлению сигнала на вольтамперной кривой с параметрами, являющимися качественной и количественной характеристикой определяемого вещества. Получены патенты:  «Вольтамперометрический способ определения инсулина»;  «Вольтамперометрический способ количественного определения нибентана»;  «Способ определения амиодарона  (кордарона)  методом инверсионной вольтамперометрии»;  «Способ определения  ангиотензина II  методом инверсионной вольтамперометрии»;  «Способ определения  спираприла гидрохлорида методом инверсионной вольтамперометрии»;  «Способ определения беназеприла гидрохлорида  (лотензина)  методом инверсионной вольтамперометрии»;  «Способ определения  фозиноприла натрия методом инверсионной вольтамперометрии»;  «Способ определения карведилола методом инверсионной вольтамперометрии»;
  • показана возможность и разработаны эффективные, экономичные и экологически безопасные технологии количественного определения  сердечнососудистых  средств в лекарственных формах вольтамперометрическим методом;
  • предложены методики пробоподготовки образцов сыворотки крови, содержащих амиодарон, нибентан, спираприла гидрохлорид, фозиноприл натрий, беназеприла гидрохлорид и карведилол для целей вольтамперометрического исследования;
  • вольтамперометрическим методом проведены сравнительные фармакокинетические исследования  амиодарона, нибентана, спираприла гидрохлорида, фозиноприла натрия, беназеприла гидрохлорида и карведилола  на базе отделения хирургического лечения сложных нарушения ритма сердца и электрокардиостимуляции (научный руководитель отделения  д.м.н.,  профессор  Попов С.В.)  и отделения сердечной недостаточности  (научный руководитель отделения  д.м.н.,  профессор  Тепляков А.Т.)  ГУ НИИ  кардиологии  СО РАМН  и установлены основные фармакокинетические параметры;
  • предложены методические подходы к определению соединений полипептидной структуры в биологических образцах вольтамперометрическим методом;
  • предложены вольтамперометрические  экспресс–методики  определения гормонов:  инсулина и  ангиотензина II  в сыворотке крови для целей изучения влияния лекарственных средств на организм человека.

       Практическая  значимость  результатов  исследования

Разработаны методики количественного определения амиодарона, нибентана, спираприла гидрохлорида, фозиноприла натрия, беназеприла гидрохлорида, карведилола, инсулина и  ангиотензина II  в модельных растворах, лекарственных формах и сыворотке крови вольтамперометрическим методом, защищенные патентом Российской Федерации и внедренные в практическую деятельность;

Рассчитаны основные фармакокинетические показатели нибентана, спираприла гидрохлорида, фозиноприла натрия, беназеприла гидрохлорида и карведилола, полученные с использованием вольтамперометрии и установлена степень влияния сопутствующих заболеваний на фармакокинетику указанных препаратов;

Разработанные методики вольтамперометрического определения лекарственных средств и полипептидов используются в работе  ГУ НИИ  кардиологии  СО РАМН,  ЗАО  «ВекторМедика»,  ГУ Новосибирского института органической химии  им. Н.Н. Ворожцова  (НИОХ СО РАН),  ФГУ  «Новосибирский научноисследовательский институт патологии кровообращения имени  Е.Н. Мешалкина  Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи»,  Государственного научного учреждения «Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока»  СО Российской академии сельскохозяйственных наук, что подтверждено актами внедрения.

Связь темы диссертации с проблемным планом фармацевтической науки

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательской работы  ГБОУ ВПО  «Новосибирский государственный медицинский университет»  Минздравсоцразвития России и г. Новосибирск:  «Системные механизмы действия ксенобиотиков на организм и разработка новых фармакологических препаратов»  № гос. регистрации  01.2.00709495,  код  ВНТИЦ  0203042450323  и  ГУ НИИ кардиологии СО РАМН,  г. Томск.

       Положения, выносимые на защиту:

–        исследование электрохимического поведения амиодарона, нибентана, спираприла гидрохлорида, фозиноприла натрия, беназеприла гидрохлорида и карведилола и соответствующие  квантово–химические  расчеты;

  • разработка методик вольтамперометрического количественного определения амиодарона, нибентана, спираприла гидрохлорида, фозиноприла натрия, беназеприла гидрохлорида и карведилола, в раствора стандартного образца, модельных смесях, лекарственных формах и сыворотке крови;
  • оценка валидности предлагаемых вольтамперометрических методик;
  • методические подходы к количественному определению эндогенных полипептидов инсулина и  ангиотензина II  в сыворотке крови вольтамперометрическим методом;
  • получение фармакокинетических характеристик амиодарона, нибентана, спираприла гидрохлорида, фозиноприла натрия, беназеприла гидрохлорида и карведилола вольтампеорметрическим методом у пациентов с  сердечнососудистой  патологией.

       Апробация работы

       Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на конференции  «Коммуникативная технология наркологии и психиатрии»  (Новосибирск, 2002);  научно–практической  конференции  «Рациональное использование лекарств»  (Пермь, 2004);  международном конгрессе молодых ученых и специалистов  «Науки о человеке»  (Томск, 2004);  XII  Российском национальном конгрессе  «Человек и лекарство»  (Москва, 2005),  VI Ежегодной конференции общества специалистов по сердечной недостаточности  «Сердечная недостаточность 2005»  (Москва, 2005);  Всероссийской научно–практической конференции  «Современные проблемы фармакологии и фармации»  (Новосибирск, 2005).  Первом съезде кардиологов Сибирского Федерального Округа  (Томск,  2005),  региональной конференция «Актуальные проблемы фармакотерапии с позиций доказательной медицины»  (Томск, 2006).

       Личный вклад автора:  для получения результатов, изложенных в диссертации, автор лично изучил электрохимические свойства амиодарона, нибентана, спираприла гидрохлорида, фозиноприла натрия, беназеприла гидрохлорида, карведилола, инсулина, ангиотензина II  вольтамперометрическим методом и разработал методики количественного определения перечисленных веществ в растворах стандартных образцов, модельных смесях и биологических средах, выполнил валидацию предложенных методик с использованием спектрофотометрии и  ВЭЖХ,  провел фармакокинетические исследования и рассчитал фармакокинетические параметры  сердечно–сосудистых  лекарственных средств с участием  59 пациентов.

       Публикации

       По теме диссертации опубликовано  34  работ, в том числе  8  патентов и  10  статей в научных журналах, рекомендованных  ВАК.

       Структура  и  объем  диссертации

       Диссертация изложена на  328  страницах машинописного текста, включая  107  таблиц и  81  рисунок, состоит из введения, обзора литературы, семи глав, посвященных экспериментальным исследованиям, выводов, списка литературы и приложения. Библиографический указатель включает  297  источников, из которых  147  на иностранных языках.

Во введении обоснована актуальность изучаемой проблемы, сформулированы основная цель и задачи исследования, научная новизна, практическая значимость полученных результатов.

       В обзоре литературы (первая глава)  рассмотрены вопросы современного состояния терапии сердечнососудистых заболеваний препаратами различных классов. Приведен обзор методов анализа нибентана, амиодарона, спираприла гидрохлорида, фозиноприла натрия, беназеприла гидрохлорида и карведилола. Рассмотрены вопросы физиологической роли и методов анализа полипептидных гормонов:  инсулина и ангиотензина II.

       Вторая глава посвящена описанию объектов и методов исследования.

В третьей главе отражены результаты  квантово–химического  исследования нибентана и амиодарона спираприла гидрохлорида, фозиноприла натрия, беназеприла гидрохлорида и карведилола.

       Четвертая глава посвящена разработке вольтамперометрических методик количественного определения лекарственных средств в растворах стандартных образцов.

В пятой главе продемонстрированы результаты подбора условий количественного определения лекарственных средств в модельных смесях и лекарственных формах, и валидация методик с использованием спектрофотометрии и  высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Шестая глава посвящена подбору условий определения лекарственных  и веществ в сыворотке крови вольтамперометрическим  экспресс–методом  и фармакокинетическим испытаниям лекарственных средств, валидации полученных результатов с применением высокоэффективной жидкостной хроматографии.

       В седьмой главе изложены результаты изучения электрохимической активности гормонов:  инсулина и  ангиотензина II,  разработке методик их определения в модельных растворах и сыворотке крови. Представлены результаты сравнительного определения инсулина в сыворотке крови, полученные электрохимически, с радиоиммунным методом и динамикой глюкозы после сахарной нагрузки, которые статистически обработаны в соответствии с  Приказом МЗ РФ № 45  от  07.02.2000  «О системе мер по повышению качества клинических лабораторных исследований в учреждениях здравоохранения российской федерации».  Составлены контрольные карты определения инсулина и  ангиотензина II  в сыворотке крови.

       В приложении представлены материалы, подтверждающие практическую значимость проведенных исследований:  патенты и акты внедрения.

ОСНОВНОЕ  СОДЕРЖАНИЕ  РАБОТЫ

ОБЪЕКТ  И  МЕТОДЫ  ИССЛЕДОВАНИЯ

В качестве объекта исследования для подбора оптимальных условий электролиза использованы субстанции:

1)  нибентана  [(R, S)–4–Нитро–N–[1–фенил–5–(диэтиламино)–пентил]–бенз-амида гидрохлорид]  с содержанием действующего вещества  99,9 %,  предоставленная  ГУПУХЛС – ВНИХФИ  г. Москва,  (серия  020301,  произведено  03.2001);

2)  амиодарона  [(2–Бутил–3–бензофуранил)–[[4–(2–диэтиламино)–этокси]–3, 5–дийодфенил]–метанона гидрохлорид],  предоставленного компанией  KRKA  (d.d.,  Novo mesto, Slovenia  в сотрудничестве с  Sanofi Pharma, France),  с содержанием действующего вещества 99,9 %.

3)  спираприла гидрохлорида  [7–[N–[1 (S)–этоксикарбонил–3–фенилпро-пил]–(S)–аланил]–1, 4–дитиа–7–азаспиро[4, 4]нонан–8 (S)–карбоксильной кислоты гидрохлорид  моногидрат],  с  содержанием  действующего  вещества  99,9 %,  предоставленная фармацевтической фирмой Арцнеймиттельверк Дрезден Гмбх  (Германия);

4)  фозиноприл натрия [1(S*(R*)],2α,4β]–4–циклогексил–1–[[[2–метил–1–(1–оксипропокси)пропокси](4–фенилбутил)фосфонил]–ацетил]–L–пролина натриевая соль, с содержанием действующего вещества  99,9 %,  предоставленная фармацевтической фирмой Бристол – Майерс Сквибб, (Щвейцария);

5)  беназеприла гидрохлорида  3–[([1–этоксикарбонил–3–фенил–(1 S)]–про-пил) амино]–2, 3, 4–тетрагидро–2–оксо–1 H–1–(3 S)–бензазепин–1–уксусной кислоты  гидрохлорид, с содержанием действующего вещества  99,9 %,  предоставленной фирмой–изготовителем  Novartis Farmaceutica S.A., Barbera, Испания;

6)  карведилола  [({±})1-(9 НКарбазол4илокси)3[[2(2-метокси фенокси) этил] амино] пропан2ол],  с содержанием действующего вещества  99,6 %,  предоставленный  ОАО «Химфармкомбинат «Акрихин», Россия.

7)  инсулина  (26,8 МЕ/мг  производства  ICN Biomedicals Inc.,  USA  (США),  Lot 12584–58–6;

8)  ангиотензина II  (Asp – Arg – Val – Tyr – Ile – His – Pro – Phe)  (фирмы Sigma  (Германия),  Lot. 70 К 5138.

Для изучения влияния компонентов лекарственной формы на параметры вольтамперометрического анализа использовали инъекционные лекарственные формы  «Нибентан»  и  «Кордарон»,  таблетированные лекарственные формы  «Кордарон»,  «Амиодарон»,  «Квадроприл»,  «Фозикард»,  «Моноприл»,  «Лотензин»,  «Дилатренд», «Карведилол», «Акридилол».

Растворы стандартных образцов готовили на воде бидистиллированной, для приготовления раствора инсулина в воде, с целью повышения растворимости, добавляли  0,1 моль/л  раствор хлороводородной кислоты.

Экспериментальные данные получали на полуавтоматическом анализаторе  ТА – 2  (ООО НПП  «Техноаналит»,  г. Томск)  с программным обеспечением в комплекте с  IBM–совместимым  компьютером  PENTIUM  и монитором  HYUNDΛI.  К автоматическому анализатору прилагаются ячейки со встроенными электродами. Источником информации служили вольтамперные кривые.

В работе использовали  ртутно–пленочный,  стекло–углеродный, графитовый, графитовый с золотым напылением и золотой электроды.  Стекло–углеродный, графитовый и золотой электроды представляют собой полые фторопластовые стержни с запакованной под вакуумом медной проволокой с прикрепленным к ней серебряным стержнем, выполняющим функции проводника и служащим для закрепления электрода в приборе, а также соответствующей рабочей поверхностью, которая погружается в датчик. Электродом сравнения служил  хлор–серебряный  (Ag / AgCl).

В эксперименте использовали кварцевую посуду, пластиковые стаканчики, стеклянные колбы для приготовления растворов. В качестве фоновых электролитов исследовали растворы:  Бриттона–Робинсона  (pH  5,02;  4,35);  хлоридов натрия, калия, лития, кальция;  сульфатов и нитратов натрия, калия, аммония, и ряда других растворов квалификации  ос.ч.  и  х.ч. Приготовление стандартных и фоновых растворов проводили общепринятыми методами.

Для количественного определения анализируемых веществ в модельных растворах использовали метод стандартных добавок, согласно которому, концентрацию определяемого вещества рассчитывали по формуле:

,

где    –  высота пика элемента на кривой пробы,  мкА;

  –  концентрация аттестованного раствора,  мг/л;

  –  объем добавки,  мл;

  –  высота пика элемента на кривой пробы с добавкой,  мкА;

  –  объем аликвоты,  мл.

Каждое из приведенных цифровых значений является средним из шести измерений.

Каждый эксперимент выполнен в соответствии со следующей схемой:  из программного обеспечения вольтамперометрического анализа запускали приложение, соответствующее наименованию вещества, на которое разрабатывали методику.  После загрузки приложения из окна графического интерфейса открывали команду главного меню  «Методика»,  где устанавливали следующие параметры:  порядок фильтрации сигнала, количество повторов серии  (2 – 5),  подготовительные стадии, которые подразумевали потенциал, время пропускания газообразного азота и процесс успокоения раствора. Кроме того, для проведения анализа указывали форму, время, границы и вид развертки потенциала  (возможен вариант обратного хода).  Программное обеспечение подразумевает сохранение выбранных параметров. После того как все параметры программы были заданы, приступали непосредственно к процессу электролиза, для этого в три стеклянных или пластиковых стаканчика объемом  20  или  40 мл,  соответственно, помещали по  10  или  20 мл  фонового электролита и запускали программу электролиза. При этом раствор предварительно перемешивали газообразным азотом с содержанием кислорода не более  0,001 %  в течение определенного времени, затем наступала стадия успокоения, и только после этого прибор фиксировал вольтамперограмму на экране монитора. Отсутствие посторонних сигналов на линии фона свидетельствовало о его чистоте. Затем в стаканчики добавляли исследуемый образец и вновь запускали программу электролиза.

Расчет  квантово–химических  параметров определяемых веществ произведен  полуэмпирическим методом с помощью программы  PM – 3  (RMS  0,1)  на кафедре органической химии и технологии органического синтеза Томского политехнического университета  (доцентом кафедры, к.х.н., Беляниным М.Л.,  заведующий кафедрой  д.х.н.,  профессор Филимонов В.Д.),  за что выражаю искреннюю признательность и благодарность.

Для валидации разработанных электрохимических методик сыворотки, содержащие лекарственные вещества проанализировали методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на микроколоночном жидкостном хроматографе  «Милихром  А – 02»  на базе  ЗАО  Института Хроматографии  «ЭкоНова»  (г. Новосибирск),  колонка диаметром  2 х 75 мм,  с сорбентом  Нуклеосил  100 – 5  С 18  в режиме градиентного элюирования с многоволновой детекцией. Многоволновая фотометрическая детекция повышала надежность идентификации препарата в пробе. Использование микроколоночного варианта высокоэффективной жидкостной хроматографии позволила снизить расход растворителей и сделать анализ более экономичным.

Пробоподготовка сыворотки крови

В первую очередь сыворотку  (3 4 мл)  очищали от мешающих компонентов: белков и липидов. Белки осаждали раствором серной кислоты с последующем центрифугированием при  1500 об/мин  на протяжении  20 мин. Надосадочную жидкость экстрагировали гексаном  (выделение липидов)  и центрифугировали  20 мин, органическую фазу отделяли. Определение лекарственных веществ проводили в очищенной плазме, которую предварительно сгущали до  0,2 – 0,5 мл.

А Б

Рис.  1. Хроматограммы  спираприла гидрохлорида

а)  хроматограмма стандартного раствора спираприла;

б)  хроматограмма сыворотки крови.

А Б

Рис.  2. Хроматограммы  фозиноприла  натрия

а)  хроматограмма стандартного раствора фозиноприла натрия;

б)  хроматограмма сыворотки крови.

Анализ спираприла гидрохлорида методом высокоэффективной

жидкостной хроматографии

1.  Стандартный раствор спираприла гидрохлорида  0,1 мг/л  приготавливали с использованием подвижной фазы.

2.  Хроматографическая система. Для анализа на хроматографе «Миллихром А – 02» использовали колонку, заполненную силикагелем Сепарон SGX С18  (5 мкм), диаметр и длина колонки  2,0 х 120 мм.  Подвижная фаза:  метанол вода  (60 : 40), значение  pH 3,0  (доводили  85 %  фосфорной кислотой).  Вводимый объем:  20 мкл  сыворотки очищенной. Скорость потока:  2,0 мл/мин,  время удерживания спираприла гидрохлорида  5,8 минут.  Время пробега  10 минут.  УФдетектция  при длине волны  217 нм.

3.  Содержание спираприла гидрохлорида оценивали по методу внешнего стандарта с использованием автоматической интеграции площадей пиков  (рис. 1).  Путем сравнения хроматограмм испытуемых растворов с хроматограммами стандартного раствора.

Методика анализа фозиноприла натрия высокоэффективной

жидкостной хроматографией

1.  Стандартный раствор фозиноприла натрия приготавливали с использованием подвижной фазы.

2.  Хроматографическая система. Для определения фозиноприла натрия в субстанции используют  колонку, заполненную силикагелем октадецилированным R (5 мкм)  «Ватерс Резолв Силика», диаметр и длина колонки 3,9 х 150 мм.  Для определении фозиноприла на приборе  «Миллихром А – 02»  использовали колонку  Силасорб С18  диаметр и длина колонки  3,0 х 150 мм.  Подвижная фаза:  метанол ацетат аммония  (50 : 50),  значение  pH 5.  Вводимый объем:  20 мкл.  Скорость потока:  1,5 мл/мин,  время удерживания фозиноприла натрия  5 минут.  УФдетектция  при длине волне  220 нм.

3.  Оценивали содержание фозиноприла натрия по методу внешнего стандарта с использованием автоматической интеграции площадей пиков  (рис. 2).  Путем сравнения хроматограмм испытуемых растворов с хроматограммами стандартного раствора.

Методика анализа беназеприла гидрохлорида

высокоэффективной жидкостной хроматографией

1.  Стандартный образец беназеприла гидрохлорида  0,1 мг/л  приготавливали с использованием подвижной фазы.

2.  Условия хроматографирования:  для анализа на хроматографе «Миллихром А – 02»  использовали колонку, заполненную силикагелем Сепарон SGX С18  (5 мкм), диаметр и длина колонки  2,0 х 120 мм.  Подвижная фаза:  метанол вода  (60 : 40), значение  pH 3,0  (доводили  85 %  фосфорной кислотой).  Вводимый объем:  20 мкл  сыворотки очищенной. Скорость потока:  2,0 мл/мин,  время удерживания спираприла гидрохлорида 5,8 минут.  Время пробега  10 минут.  УФдетектция  при длине волны  217 нм

3.  Оценивали содержание беназеприла гидрохлорида в сыворотке крови по методу внешнего стандарта с использованием автоматической интеграции площадей пиков  (рис. 3).  Путем сравнения хроматограмм испытуемых растворов с хроматограммами стандартного раствора.

А

 

Б В

Рис. 3. Хроматограммы  беназеприла гидрохлорида

а) хроматограмма фона

б) хроматограмма стандартного раствора беназеприла;

в) хроматограмма сыворотки крови.

 

А  Б

В

Рис.  4.  Хроматограммы  карведилола

а) хроматограмма фона

б) хроматограмма стандартного раствора карведилола;

в) хроматограмма сыворотки крови.

Методика анализа карведилола высокоэффективной

жидкостной хроматографией

1.  Стандартный раствор карведилола приготавливали с использованием подвижной фазы.

2.  Условия хроматографирования:  для анализа на хроматографе «Миллихром А – 02»  использовали колонку, заполненную силикагелем Сепарон SGX С18  (5 мкм),  диаметр и длина колонки  2,0 х 120 мм.  Подвижная фаза:  ацетонитрил и  0,1 моль/л  раствор однозамещенного фосфата натрия в соотношении  48 : 52  по объему, значение рН доведено до значения  3,7  с помощью 85 %  раствора фосфорной кислоты. Вводимый объем:  20 мкл.  Скорость потока:  0,8 мл/мин,  время удерживания карведилола  40,0  минут.  УФдетекция при длине волне  223 нм.

3.  Оценивали содержание карведилола в сыворотке крови по методу внешнего стандарта с использованием автоматической интеграции площадей пиков  (рис. 4).  Путем сравнения хроматограмм испытуемых растворов с хроматограммами стандартного раствора.

Для проверки результатов определения гормонов провели определение инсулина в крови с использованием набора  «INSULIN RIA  DSL – 1600»  (Diagnostic Systems Laboratories, Inc.;  Corporate Headqarters, 445 Medical Center Blvd.;  Webster, Texas  77598 – 4217  USA;  Revision date:  July 27, 1999)  на базе лаборатории радио–нуклидных методов анализа  НИИ кардиологии ТНЦ СО РАМН  к.м.н. Макаровой Е.В.  под руководством  д.м.н. чл.–корр. РАМН  Лишманова Ю.Б.

Статистическую обработку результатов проводили общепринятыми методами.

РЕЗУЛЬТАТЫ  КВАНТОВОХИМИЧЕСКОГО  ИССЛЕДОВАНИЯ  МОЛЕКУЛ  ЛЕКАРСТВЕННЫХ  СРЕДСТВ

Для теоретического обоснования электрохимической активности, выявления  электрохимичепски-активных  функциональных групп и конформационных особенностей исследуемых кардиопрепаратов выполнены  квантово–химические  расчеты структуры молекул нибентана, амиодарона, спираприла гидрохлорида, фозиноприла натрия, беназеприла гидрохлорида и карведилола.

При расчете распределения электронных плотностей между всеми атомами,  входящими в состав молекул, установлено, что в структуре нибентана наибольшей электрохимической активностью обладает  нитрогруппа, а также карбонильный фрагмент амидной функциональной группы,  отсюда можно предположить, что вероятный механизм электрохимического процесса соответствует предлагаемому Manuel M. Baizer и Henning Lynd  (1988),  что и было подтверждено в  Гл. 4.

При исследовании структуры амиодарона обнаружено, что основное участие в электрохимическом процессе будет принимать карбонильный фрагмент, высокое напряжение данной связи обусловлено значительной разницей в величине электронной плотности углерода и кислорода  (0,410  в сравнении с  – 0,309),  что не согласуется с нашими предположениями и литературными данными по высокой вольтамперной активности  ковалентно–связанного  йода в бензольном кольце, активность последнего уступает таковой в связи  ( С –O –)  и  (> С = С <).  Исходя из полученных результатов и литературных данных, можно сделать предположение о возможных механизмах реакций, проходящих на электродах. Первой стадией электровосстановления кратных связей  С=С,  С=О  может быть образование  ион–радикалов:

C = Z  +    C Z

где  Z  соответствует  О.  Протонизация такого  ион–радикала  приводит к образованию свободного радикала:

С Z  +  C Z

       При дальнейшем восстановлении:

С Z  +  H+ C ZH

Образующиеся при электродных процессах ионы  би-радикалы  благодаря своей высокой реакционной способности вступают в многочисленные реакции, главными из которых являются димеризации, диспропорционирования, взаимодействие с материалом электрода  и т.д.

Относительно ковалентно связанного йода можно предположить что восстановление будет происходить по механизму замены атома галогена на водород, которое может протекать в очень разных условиях:  как на ртути, так и на платине, как в водных, так и в неводных средах. Реакции в данном случае могут протекать по следующему механизму, согласующемуся со схемой, предложенной для гетероатомов:

RX  +  2  +  H+ RH  +  Х

RCX3  +  2  +  H+ RCHX2  +  Х

При подборе условий электрохимического анализа амиодарона, ориентированных на выявление лекарственного вещества по карбонильной группе, необходимо использование графитового или стеклоуглеродного индикаторного электрода и щелочной  рН  среды, что в целом совпадает с условиями анализа по  ковалентно–связанному  йоду. Можно также предположить, что весь фрагмент молекулы препарата электрохимически активен именно в щелочной среде, причем в качестве рабочего электрода следует апробировать графитовый, стеклоуглеродный и ртутно–пленочный.

При расчете распределения электронных плотностей между всеми атомами, входящими в состав молекул ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента:  спираприла гидрохлорида, фозиноприла натрия и беназеприла гидрохлорида установлено, что в структуре спираприла гидрохлорида наибольшей электрохимической активностью обладают карбоксильная группа, присоединенная к пирролидиновому циклу через атом углерода, далее по убыванию:  карбонильная группа и карбонильный фрагмент в сложноэфирной группе. Для фозиноприла натрия наиболее электрохимически активными являются:  фрагмент фосфинильной группы, далее по убыванию карбоксильная группа, карбонильный фрагмент  сложноэфирной  группы, карбонильная группа. В беназеприла гидрохлоридн наибольшей электрохимической активностью обладают карбамидная, карбоксильная и  сложноэфирная  группы. Исходя из полученных результатов по расчетам распределения электронной плотности в перечисленных лекарственных средствах, пришли к заключению, что механизм электродного процесса соответствует реакции, подобной реакции Гофера–Места, при которой карбоксильная группа замещается гидроксильной с образованием спирта и выделением углерода диоксида, и реакции  Кольбе.  Поскольку карбоксильная группа обладает повышенной реакционной способностью, полученные нами экспериментальные  (Гл. 4)  говорят в пользу протекания электрохимического процесса по карбоксильной группе по механизму  Гофера–Места.

По данным  квантовохимического  анализа фозиноприла натрия, наибольшей электрохимической активностью обладает фрагмент фосфинильной группы  (фосфиновой), но механизмов анодного окисления в литературных источниках не приведено, описаны лишь анодные процессы трех координированного атома фосфора в фосфорорганических соединениях с образованием  катионрадикалов  различной степени стабильности с дальнейшим образованием димерного  катионрадикала,  окисление которого дает соли дифосфония, в молекуле которых два положительно заряженных атома фосфора непосредственно связаны между собой. По своей структуре молекула фозиноприла напоминает фосфолипид, в котором имеются полярные  (карбонильные и карбоксильные группы)  и неполярные группы  (фенилбутиловый фрагмент, циклогексан),  а также остаток фосфиновой кислоты  (вместо остатка фосфорной).  Вероятно, этим объясняется его способность проникать в жировые ткани, что коррелирует с полученными нами данными о кумуляции фозиноприла натрия  (Гл. 6).

При расчете распределения электронных плотностей между всеми атомами, входящими в состав молекулы карведилола, установлено, что наиболее электрохимически активными являются: гидроксильная группа и атом кислорода алкилоксифенильной группы. Анализируя литературные данные, можно сделать предположение, что в подобных условиях при электрохимическом окислении гидроксильной группы, потенциал электролиза смещается в более положительную область, при этом на индикаторном электроде в водной среде образуется катион-радикал, который, теряя протон и электрон, образует карбениевый ион, образующий впоследствии оксогруппу. При  этом в молекуле происходит перераспределение электронной плотности, соответственно, изменение полярности и геометрии молекулы, поэтому она начинает адсорбироваться на индикаторном электроде.

Полученные результаты  квантово-химического  анализа использованы нами в  Гл. 4  для разработки вольтамперометрических методик.

РЕЗУЛЬТАТЫ  РАЗРАБОТКИ  МЕТОДИК  КОЛИЧЕСТВЕННОГО  ОПРЕДЕЛЕНИЯ  ЛЕКАРСТВЕННЫХ  СРЕДСТВ

ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКИМ  МЕТОДОМ

В  РАСТВОРЕ  СТАНДАРТНОГО  ОБРАЗЦА

Начальным этапом в разработке методики количественного определения лекарственных средств являлся выбор оптимальных условий обнаружения аналитического сигнала. Принимая во внимание результаты квантово–химического анализа  (Гл. 3),  где была выявлена высокая электрохимическая активность определенных функциональных групп, экспериментально подобрали оптимальные условия электрохимического анализа:  состав и  рН  фонового электролита, природу рабочего электрода, время и потенциал электролиза, границы и форму развертки потенциала  (табл. 1).  Сигналы лекарственных средств регистрировали преимущественно в положительной области потенциалов  (рис.6),  за исключением спираприла гидрохлорида. Сигналы амиодарона, фозиноприла натрия, беназеприла гидрохлорида и карведилола регистрировали в области  0,2 – 0,7 В,  нибентан, ввиду присутствия в структуре молекулы нитрогруппы, определяли 1,5 – 2 В  в виде двух сигналов. Минимальная определяемая концентрация лекарственных веществ составила  1 пг/л.

Зависимость силы тока в цепи от концентрации лекарственных веществ в датчике носила линейный характер до определенного момента, а затем резко уменьшалась. Данная особенность характерна

Таблица  1

ОПТИМАЛЬНЫЕ  УСЛОВИЯ  ЭЛЕКТРОЛИЗА  ПРИ  ОПРЕДЕЛЕНИИ

ЛЕКАРСТВЕННЫХ  ВЕЩЕСТВ

Вещество

Параметр

АМИОДАРОН

НИБЕНТАН

КАРВЕДИ-ЛОЛ

СПИРАПРИЛА  ГИДРОХЛОРИД

ФОЗИНОПРИЛ  НАТРИЯ

БЕНАЗЕПРИЛА  ГИДРОХЛОРИД

Фоновый электролит

0,005 моль/л  раствор  NH4NO3  в  0,015 моль/л растворе  NaHCO3

0,01 моль/л  раствор  КСl

0,005 моль/л  раствор  KCl

0,01 моль/л  раствор  NaNO3

0,005 моль/л  раствор  (NH4)2HPO4

pH

9,0

6,5  –  7,0

3,0

3,0

6,0

6,0 7,0

Потенциал  электролиза,  В

–  1,20

2,20

–  0,40

–  0,40

1,00

–  1,30

Время  электролиза,  с

300

180

210

210

270

210

Границы развёртки потенциала,  В

(–  1,20)  →  0,70

2,20  →  (–  1,50)

( 0,4)  →  1,50

( 0,4)  →  1,50

(–  0,50)  →  1,50

( 1,30)  →  1,50

Форма развёртки потенциала

Ступенчатая

Квадратно–волновая

Постоянно–токовая

Скорость развёртки потенциала,  мВ/с

70

50

150

25

70

50

 

А Б

В Г

Д Е

Рис.  6. Вид  вольтамперометрических  кривых  для  раствора

стандартного  образца  нибентана  (А),  аимодарона  (Б),

спираприла гидрохлорида  (В),  фозиноприла натрия  (Г),

беназеприла гидрохлорида  (Д),  карведилола  (Е)

в подобранных условиях

  линия  фона;

  вольтамперограмма,  соответствующая  пробе  (0,01 мл);

  вольтамперограмма, соответствующая пробе с добавкой  (0,02 мл).

для веществ органической природы и связана с тем, что их крупные молекулы постепенно занимают активные центры электрода, уменьшая тем самым его рабочую поверхность.

С целью проверки воспроизводимости результатов определения лекарственных средств по разработанным методикам поставили тест  «введено - найдено»  для ста двадцати проб с концентрацией около  1000;  100;  10;  1;  0,1  и  0,01 мг/л,  по двадцать проб для каждой кон центрации. Полученные результаты подвергли статистической обработке. Погрешность всех методик составила не более  10 %,  что соответствует погрешности вольтамперометрического метода, причем коэффициент  Стьюдента,  полученный расчетным путем, практически во всех случаях не превышал табличный, исключение составило определение нибентана в концентрации  0,01 мг/л, которое отягощено систематической ошибкой в  1,21 %.

Таким образом, в результате проведенных исследований выявлена способность и подобраны рациональные условия концентрирования лекарственных средств на поверхности рабочих электродов, сопровождающиеся регистрацией сигнала вещества на вольтамперограмме.

Установленные параметры методики дали возможность с высокой чувствительностью и экспрессностью определять содержание лекарственных средств в модельных растворах лекарственных форм вольтамперометрическим методом, что в дальнейшем позволило перенести разработанные методику на модельные смеси, лекарственные формы и биологические среды.

РЕЗУЛЬТАТЫ  РАЗРАБОТКИ  ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКИХ  МЕТОДИК КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ В МОДЕЛЬНЫХ СМЕСЯХ И ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ

       Поскольку вольтамперометрический метод анализа характеризуется высокой чувствительностью, избирательностью и экспрессностью, представляло интерес изучить возможность его использования для количественного определения действующих веществ в лекарственных формах.

       Данный раздел работы состоял из следующих этапов:

1.  Приготовление модельных смесей, соответствующих составу лекарственной формы, с последующим вольтамперометрическим опреде-

Таблица  2

ПАРАМЕТРЫ ЛИНЕЙНОЙ ЗАВИСИМОСТИ МЕЖДУ КОЛИЧЕСТВОМ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА, СОДЕРЖАЩИМСЯ В НАВЕСКЕ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ МОДЕЛЬНОГО РАСТВОРА, И ОПРЕДЕЛЕННЫМ ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ  (f = 8;  t [(P; f)  при  P = 95 %] = 2,23)

Исследуемый образец модельного раствора

b  ()

a  ()

r

1.

нибентана для инъекций

0,110 г

0,113 г

1,018 (0,009)

0,0001  (0,001)

5,439 107

0,001

0,999

2.

амиодарона для инъекций

90,15 мг

91,10 мг

0,993  (0,020)

1,600  (2,216)

3,580

1,050

0,999

3.

амиодарона, приготовленного из смеси для таблетирования

275,00 мг

275,56 мг

0,997  (0,024)

1,473  (7,316)

23,061

3,452

0,999

4.

спираприла гидрохлорида, приготовленного из смеси для таблетирования

5,50 мг

5,62 мг

0,995  (0,056)

0,147  (0,347)

5,175 102

0,164

0,997

5.

фозиноприла натрия, приготовленного из смеси для таблетирования

22,60 мг

22,64 мг

0,997  (0,016)

0,117  (0,440)

11,010 102

0,207

0,999

6.

беназеприла гидрохлорида, приготовленной из смеси для таблетирования

22,60 мг

22,64 мг

1,006  (0,016)

0,098  (0,431)

10,604 102

0,202

0,999

7.

карведилола, приготовленного из смеси для таблетирования

22,60 мг

22,67 мг

0,998  (0,018)

0,121  (0,485)

13,386 102

0,229

0,999

Таблица  3

ПАРАМЕТРЫ ЛИНЕЙНОЙ ЗАВИСИМОСТИ МЕЖДУ КОЛИЧЕСТВОМ НИБЕНТАНА В ИНЪЕКЦИОННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЕ ДЛЯ ИНФУЗИЙ, ОПРЕДЕЛЕННЫМ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИМ И ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДАМИ  (f = 8;  t [(P; f)  при  P = 95 %] = 2,23)

Фирмаизготовитель

b  ()

a  ()

r

1.

1 % в ампулах по 2 мл  (ФГУП ЦХЛСВНИХФИ),  Россия,  серия  200902

9,600 мг

9,827 мг

0,964  (0,049)

0,573  (0,472)

3,009 104

0,230

0,998

2.

1 % в ампулах по 2 мл  (ФГУП ЦХЛСВНИХФИ),  Россия,  серия  241002

9,951 мг

10,041 мг

1,031  (0,095)

0,217  (0,945)

1,407 104

0,431

0,993

3.

1 % в ампулах по 2 мл  (ФГУП ЦХЛСВНИХФИ),  Россия,  серия  261002

10,029 мг

10,262 мг

0,977  (0,111)

0,468  (1,114)

4,988 104

0,537

0,990

Таблица  4

ПАРАМЕТРЫ ЛИНЕЙНОЙ ЗАВИСИМОСТИ МЕЖДУ КОЛИЧЕСТВОМ АМИОДАРОНА В ИНЪЕКЦИОННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЕ ДЛЯ ИНФУЗИЙ 150 мг в  3 мл,  ОПРЕДЕЛЕННЫМ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИМ И ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДАМИ  (f = 8;  t [(P; f)  при  P = 95 %] = 2,23)

Фирмаизготовитель

b  ()

a  ()

r

1.

«СанофиАвентис Франс»,  Франция,  серия  1442,  № 6

51,565

54,835

0,774  (0,103)

14,932  (5,324)

4,724 10–2

3,236

0,986

2.

«СанофиАвентис  Франс»,  Франция,  серия  1538,  № 6

48,630

52,670

1,113  (0,091)

1,458  (4,448)

5,695 10–2

1,880

0,995

3.

«СанофиАвентис Франс»,  Франция,  серия  1541,  № 6

50,085

52,420

1,024  (0,073)

1,128  (3,636)

1,056 10–2

1,670

0,996

4.

«СанофиАвентис  Франс»,  Франция,  серия  1616,  № 6

50,305

52,595

1,056  (0,103)

0,546  (5,167)

1,516 10–2

2,300

0,992

Таблица  5

ПАРАМЕТРЫ ЛИНЕЙНОЙ ЗАВИСИМОСТИ МЕЖДУ КОЛИЧЕСТВОМ АМИОДАРОНА В ТАБЛЕТИРОВАННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЕ, ОПРЕДЕЛЕННЫМ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИМ И ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДАМИ  (f = 8;  t [(P; f)  при  P = 95 %] = 2,23)

Фирмаизготовитель

b  ()

a  ()

r

1.

«АМИОДАРОН  200 мг»  (№ 30,  серия  110510,  ЗАО  «Северная Звезда»,  Россия)

201,72

206,91

0,953  (0,073)

14,766  (14,823)

1,975 10–2

7,319

0,995

2.

«КОРДАРОН  200 мг»  (№ 30,  серия  0V010,  «СанофиАвентис  Франс»,  Венгрия)

202,40

206,38

0,876  (0,081)

28,989  (16,338)

6,948 10–2

8,767

0,993

3.

«КОРДАРОН  200 мг»  (№ 30,  серия  1084,  «СанофиАвентис  Франс»,  Франция)

201,30

204,67

0,119  (0,081)

23,890  (16,338)

3,274 10–2

10,867

0,990

4.

«КОРДАРОН  200 мг»  (№ 30,  серия  1085,  «СанофиАвентис  Франс»,  Франция)

193,96

197,10

0,957  (0,045)

11,498  (8,651)

4,764 10–3

4,252

0,998

5.

«КОРДАРОН  200 мг»  (№ 30,  серия  1086,  «СанофиАвентис  Франс»,  Франция)

199,64

201,88

1,045  (0,118)

6,691  (23,629)

1,788 10–3

10,637

0,990

6.

«КОРДАРОН  200 мг»  (№ 30,  серия  1087,  «СанофиАвентис  Франс»,  Франция)

200,12

203,35

0,950  (0,111)

13,147  (22,212)

1,727 10–2

10,991

0,989

7.

«АМИОДАРОН  200 мг»  (№ 10,  серия  90608,  ОАО  «Органика»,  Россия)

200,23

204,46

0,954  (0,099)

13,468  (19,805)

1,104 10–2

9,765

0,991

8.

«АМИОДАРОН  200 мг»  (№ 30,  серия  0090110,  ОАО  «Органика»,  Россия)

198,02

202,18

1,026  (0,080)

1,073  (15,854)

2,845 10–2

7,265

0,995

9.

«АМИОДАРОН  200 мг»  (№ 30,  серия  0481108,  ОАО  «Органика»,  Россия)

200,30

204,61

0,987  (0,067)

6,970  (13,515)

2,929 10–3

6,442

0,996

10.

«АМИОДАРОН  200 мг»  (№ 30,  серия  0491108,  ОАО  «Органика»,  Россия)

201,19

203,50

0,966  (0,037)

9,068  (7,483)

1,681 10–3

3,642

0,999

11.

«АМИОДАРОН  200 мг»  (№ 30,  серия  0531108,  ОАО  «Органика»,  Россия)

201,64

203,18

1,022  (0,067)

2,950  (13,453)

5,875 10–3

6,189

0,997

Таблица  6

ПАРАМЕТРЫ ЛИНЕЙНОЙ ЗАВИСИМОСТИ МЕЖДУ КОЛИЧЕСТВОМ СПИРАПРИЛА ГИДРОХЛОРИДА В ТАБЛЕТИРОВАННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЕ  «КВАДРОПРИЛ  6 мг,  № 30»,  ОПРЕДЕЛЕННЫМ ВЭЖХ И ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДАМИ  (f = 8;  t [(P; f)  при  P = 95 %] = 2,23)

Фирмаизготовитель

b  ()

a  ()

r

1.

Серия  9С001,  «Клоке  ФармаСервис  ГмбХ»,  Германия

5,831 мг

6,044 мг

1,003  (0,035)

0,198  (0,203)

2,616 10–5

0,095

0,999

2.

Серия  9С005,  «Клоке  ФармаСервис  ГмбХ»,  Германия

6,051 мг

6,272 мг

0,996  (0,058)

0,244  (0,348)

3,615 10–5

0,164

0,997

3.

Серия  9С005,  «Клоке  ФармаСервис  ГмбХ»,  Германия

6,080 мг

6,177 мг

0,958  (0,073)

0,352  (0, 443)

8,393 10–5

0,218

0,995

Таблица  7

ПАРАМЕТРЫ ЛИНЕЙНОЙ ЗАВИСИМОСТИ МЕЖДУ КОЛИЧЕСТВОМ ФОЗИНОПРИЛА НАТРИЯ В ТАБЛЕТИРОВАННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЕ,  ОПРЕДЕЛЕННЫМ ВЭЖХ И ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДАМИ  (f = 8;  t [(P; f)  при  P = 95 %] = 2,23)

Фирмаизготовитель

b  ()

a  ()

r

1.

«МОНОПРИЛ  10 мг»  (№ 10,  серия  7026093,  ООО «Серл Фарма»,  Россия)

10,004 мг

10,035 мг

0,994  (0,048)

0,088  (0,477)

1,115 10–5

0,225

0,998

2.

«МОНОПРИЛ  10 мг»  (№ 28,  серия  9В48025,  «Бристол – Майерс Сквибб  С.р.Л.»,  Италия)

9,986 мг

10,033 мг

0,986  (0,048)

0,190  (0,477)

2,532 10–5

0,281

0,997

3.

«МОНОПРИЛ  10 мг»  (№ 28,  серия  9К54650,  «Бристол – Майерс Сквибб  С.р.Л.»,  Италия)

9,967 мг

10,002 мг

1,016  (0,048)

0,121  (0,477)

2,979 10–5

0,256

0,997

4.

«МОНОПРИЛ  10 мг»  (№ 28,  серия  9L50963,  «Бристол – Майерс Сквибб  С.р.Л.»,  Италия)

9,976 мг

10,028 мг

1,015  (0,062)

0,101  (0,620)

1,927 10–5

0,287

0,997

5.

«МОНОПРИЛ  10 мг»  (№ 28,  серия  9L50966,  «Бристол – Майерс Сквибб  С.р.Л.»,  Италия)

9,973 мг

10,005 мг

0,993  (0,067)

0,105  (0,671)

1,985 10–5

0,318

0,996

6.

«МОНОПРИЛ  20 мг»  (№ 20,  серия  9L48530,  «Бристол – Майерс Сквибб  С.р.Л.»,  Италия)

19,992 мг

20,043 мг

0,987  (0,050)

0,317  (0,999)

3,472 10–5

0,476

0,998

7.

«МОНОПРИЛ  20 мг»  (№ 20,  серия  9L48530,  «Бристол – Майерс Сквибб  С.р.Л.»,  Италия)

19,981 мг

20,052 мг

1,006  (0,043)

0,054  (0,850)

1,110 10–5

0,397

0,999

8.

«МОНОПРИЛ  20 мг»  (№ 28,  серия  0G64054,  «Бристол – Майерс Сквибб  С.р.Л.»,  Италия)

19,930 мг

20,008 мг

0,970  (0,074)

0,678  (1,468)

1,812 10–5

0,712

0,995

9.

«МОНОПРИЛ  20 мг»  (№ 28,  серия  9L47543,  «Бристол – Майерс Сквибб  С.р.Л.»,  Италия)

19,996 мг

20,085 мг

0,994  (0,049)

0,211  (0,981)

1,114 10–5

0,464

0,998

10.

«МОНОПРИЛ  20 мг»  (№ 28,  серия  9L52407,  «Бристол – Майерс Сквибб  С.р.Л.»,  Италия)

19,982 мг

20,035 мг

1,022  (0,064)

0,380  (1,283)

2,452 10–5

0,591

0,997

11.

«МОНОПРИЛ  20 мг»  (№ 28,  серия  9L54033,  «Бристол – Майерс Сквибб  С.р.Л.»,  Италия)

19,986 мг

20,019 мг

0,982  (0,088)

0,395  (1,760)

4,994 10–5

0,843

0,994

12.

«ФОЗИКАРД  5 мг»  (№ 28,  серия  1199421209,  АО «Актавис»,  Исландия)

5,039 мг

5,060 мг

1,101  (0,118)

0,488  (0,589)

7,699 10–5

0,251

0,990

13.

«ФОЗИКАРД  5 мг»  (№ 28,  серия  1236970510,  АО «Актавис»,  Исландия)

5,039 мг

5,062 мг

0,927  (0,095)

0,393  (0,481)

1,918 10–5

0,244

0,992

14.

«ФОЗИКАРД  10 мг»  (№ 28,  серия  1236970510,  АО «Актавис»,  Исландия)

9,994 мг

10,032 мг

0,975  (0,067)

0,292  (0,668)

1,835 10–5

0,322

0,996

15.

«ФОЗИКАРД  10 мг»  (№ 28,  серия  1236940510,  АО «Актавис»,  Исландия)

9,963 мг

10,021 мг

0,993  (0,042)

0,747  (0,423)

7,544 10–6

0,214

0,998

16.

«ФОЗИКАРД  10 мг»  (№ 28,  серия  1236950510,  АО «Актавис»,  Исландия)

9,997 мг

10,018 мг

0,995  (0,062)

0,069  (0,617)

1,121 10–5

0,292

0,997

17.

«ФОЗИКАРД  20 мг»  (№ 28,  серия  1168840709,  АО «Актавис»,  Исландия)

20,032 мг

20,063 мг

0,987  (0,058)

0,300  (1,152)

1,088 10–5

0,549

0,997

18.

«ФОЗИКАРД  20 мг»  (№ 28,  серия  1181600909,  АО «Актавис»,  Исландия)

20,019 мг

20,023 мг

0,977  (0,056)

0,224  (1,143

1,036 10–5

0,501

0,998

19.

«ФОЗИКАРД  20 мг»  (№ 28,  серия  1230050410,  АО «Актавис»,  Исландия)

20,020 мг

20,070 мг

1,029  (0,059)

0,531  (1,182)

2,173 10–5

0,540

0,997

Таблица  8

ПАРАМЕТРЫ ЛИНЕЙНОЙ ЗАВИСИМОСТИ МЕЖДУ КОЛИЧЕСТВОМ БЕНАЗЕПРИЛА ГИДРОХЛОРИДА В ТАБЛЕТИРОВАННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЕ  «ЛОТЕНЗИН  20 мг,  № 28»,  ОПРЕДЕЛЕННЫМ ВЭЖХ И ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДАМИ  (f = 8;  t [(P; f)  при  P = 95 %] = 2,23)

Фирмаизготовитель

b  ()

a  ()

r

1.

Серия  5М56510,  «НовартисФарма  С.п.А.»,  Италия

20,012 мг

20,063 мг

0,996  (0,041)

0,124  (0,822)

1,120 10–5

0,388

0,999

2.

Серия  5М56530,  «НовартисФарма  С.п.А.»,  Италия

20,030 мг

20,125 мг

1,012  (0,105)

0,143  (2,102)

2,790 10–4

0,991

0,999

3.

Серия  5М56580,  «НовартисФарма  С.п.А.»,  Италия

20,241 мг

20,256 мг

0,997  (0,043)

0,281  (0,872)

3,052 10–4

0,412

0,999

Таблица  9

ПАРАМЕТРЫ ЛИНЕЙНОЙ ЗАВИСИМОСТИ МЕЖДУ КОЛИЧЕСТВОМ КВАДРОПРИЛА В ТАБЛЕТИРОВАННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЕ,  ОПРЕДЕЛЕННЫМ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИМ И ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДАМИ  (f = 8;  t [(P; f)  при  P = 95 %] = 2,23)

Фирмаизготовитель

b  ()

a  ()

r

1.

«ДИЛАТРЕНД  12,5 мг»  (№ 30,  серия  М1076В01,  «Ф. Хоффман – Ля Рош Лтд»,  Италия)

12,533 мг

12,584 мг

0,980  (0,031)

0,308  (0,391)

8,869 10–6

0,188

0,999

2.

«ДИЛАТРЕНД  25 мг»  (№ 30,  серия  М1112В01,  «Ф. Хоффман – Ля Рош Лтд»,  Италия)

24,890 мг

25,130 мг

0,976  (0,034)

0,827  (0,859)

8,713 10–4

0,414

0,999

3.

«ДИЛАТРЕНД  25 мг»  (№ 30,  серия  М1125В01,  «Ф. Хоффман – Ля Рош Лтд»,  Италия)

24,425 мг

25,560 мг

1,005  (0,065)

0,015  (1,591)

6,540 10–4

0,745

0,997

4.

«ДИЛАТРЕНД  25 мг»  (№ 30,  серия  М1125В01,  «Ф. Хоффман – Ля Рош Лтд»,  Италия)

25,030 мг

25,085 мг

0,976  (0,069)

0,655  (1,735)

2,618 10–4

0,836

0,996

5.

«ДИЛАТРЕНД  25 мг»  (№ 30,  серия  М1147В01,  «Ф. Хоффман – Ля Рош Лтд»,  Италия)

25,020 мг

25,190 мг

1,286  (0,126)

6,979  (3,151)

1,786 10–4

1,153

0,992

6.

«КАРВЕДИЛОЛ  0,0125 г»  (№ 30,  серия  090908,  ЗАО «Макиз–ФАРМА»,  Россия)

12,519 мг

12,565 мг

1,037  (0,062)

0,412  (0,779)

2,469 10–5

0,354

0,997

7.

«КАРВЕДИЛОЛ  25 мг»  (№ 30,  серия  040710,  ЗАО  «Вертекс»,  Россия)

25,055 мг

25,210 мг

0,978  (0,105)

0,719  (2,643)

2,735 10–4

1,272

0,991

8.

«АКРИДИЛОЛ  6,25 мг»  (№ 30,  серия  10808,  ОАО  «Акрихин ХФК»,  Россия)

6,100 мг

6,345 мг

0,963  (0,042)

0,471  (0,254)

1,887 10–4

0,124

0,998

9.

«АКРИДИЛОЛ  12,5 мг»  (№ 30,  серия  10210,  ОАО  «Акрихин ХФК»,  Россия)

12,524 мг

12,563 мг

0,971  (0,040)

0,402  (0,503)

8,498 10–6

0,243

0,999

10.

«АКРИДИЛОЛ  12,5 мг»  (№ 30,  серия  20410,  ОАО  «Акрихин ХФК»,  Россия)

12,475 мг

12,545 мг

1,000  (0,083)

1,035  (0,503)

2,500 10–5

0,487

0,995

11.

«АКРИДИЛОЛ  12,5 мг»  (№ 30,  серия  30610,  ОАО  «Акрихин ХФК»,  Россия)

12,486 мг

12,566 мг

0,971  (0,063)

0,441  (0,787)

2,211 10–5

0,381

0,997

12.

«АКРИДИЛОЛ  25 мг»  (№ 30,  серия  10410,  ОАО  «Акрихин ХФК»,  Россия)

24,980 мг

25,225 мг

0,955  (0,078)

1,357  (1,950)

2,340 10–4

0,960

0,995

13.

«АКРИДИЛОЛ  25 мг»  (№ 30,  серия  10410,  ОАО  «Акрихин ХФК»,  Россия)

24,920 мг

25,220 мг

0,965  (0,117)

1,165  (2,910)

5,924 10–4

1,418

0,988

14.

«АКРИДИЛОЛ  25 мг»  (№ 30,  серия  61209,  ОАО  «Акрихин ХФК»,  Россия)

24,725 мг

25,025 мг

0,093  (0,117)

2,295  (2,910)

5,651 10–4

1,122

0,993

лением лекарственного средства в присутствии вспомогательных веществ и статистической оценкой параметров линейной зависимости между массой навески и определенным количеством лекарственного средства  (Табл. 2).  Для всех лекарственных средств  (нибентана, амиодарона, спираприла гидрохлорида, фозиноприла натрия, беназеприла гидрохлорида и карведилола)  было показано, что предлагаемые электрохимические методики обладают специфичностью, избирательностью, точностью, чувствительностью, воспроизводимостью и линейностью, при этом для выполнения анализа не потребовалось отделения действующего вещества от сопутствующих веществ путем фильтрования, достаточно было использовать растворитель, пригодный для растворения определяемого вещества с последующим проведением анализа в мутных растворах.

2..  На втором этапом сравнивали результаты анализа лекарственных форм с исследуемыми лекарственными средствами, вольтамперомет-рическим и фармакопейным методами. При анализе лекарственных форм с нибентаном, амиодароном и карведилолом в качестве стандартного использован метод спектрофотометрии в  УФобласти,  для исследования спираприла гидрохлорида, фозино-прила натрия и беназеприла гидрохлорида применяли метод высокоэффективной жидкостной хроматографии. Данный этап исследования выполнили на примере  57  серий лекарственных форм  (Табл.  3 9).

Таким образом, пришли к заключению, что результаты, полученные при количественном определении лекарственных средств вольтамперометрическим методом коррелируют с результатами, полученными с использованием методов, рекомендованных нормативной документацией, коэффициент корреляции во всех случаях был не ниже, чем  0,98.  Следовательно, вольтамперометрическую методику целесообразно рекомендовать для анализа лекарственных форм.

       Подбор условий количественного определения лекарственных веществ в лекарственных формах, отличающегося специфичностью, точностью, воспроизводимостью и чувствительностью    сложный многостадийный процесс, каждый этап которого отвечает за возможности методики в определении качества изготовленной лекарственной формы. Проведенные нами исследования продемонстрировали точность предлагаемых вольтамперометрических методик на примере установления параметров линейной зависимости при анализе модельных смесей с переменным количеством лекарственных средств. Воспроизводимость вольтамперометрических методик анализа была доказана при выполнении анализа каждой серии лекарственной формы в десяти повторностях. Специфичность методики подтверждена наличием линейной зависимости между количеством определенного лекарственного вещества и его фактическим содержанием в модельной смеси и лекарственной форме, а также выраженной корреляцией с результатами, полученными с использованием фармакопейных методик. Высокая чувствительностьвольтамперометрических методик наглядно показана при исследовании модельных образцов и лекарственных форм с минимальным содержанием лекарственного средства.

РЕЗУЛЬТАТЫ  ФАРМАКОКИНЕТИЧЕСКИХ  ИССЛЕДОВАНИЙ  ЛЕКАРСТВЕННЫХ  СРЕДСТВ  С  ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ  ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИИ

       На начальном этапе исследования адаптировали предлагаемые нами методики количественного определения лекарственных средств применительно к сыворотке крови. В результате проведенной работы установили, что при  анализе нибентана, амиодарона и беназеприла гидрохлорида требуется дополнительная пробоподготовка сыворотки крови, тогда как спираприла гидрохлорид, фозиноприл натрия и карведилол целесообразно анализировать непосредственно в нативной сыворотке крови.

В работе изучена фармакокинетика  1 %  раствора нибентана в виде инъекционной лекарственной формы. Объектом исследования являлась сыворотка крови пациентов мужского пола, в возрасте от  37  до  64  лет  с диагнозом фибрилляции предсердий, доставленных в лечебное учреждение по скорой помощи. Раствор нибентана вводили болюсно в разовой дозе  10 мг,  под строгим мониторингом  ЭКГ.  Кровь отбирали из вены предплечья в сухие, чистые пробирки через определенные интервалы времени  (5,  10,  15,  20,  30,  45,  60,  90 мин)  после введения препарата. Полученную кровь центрифугировали в течение  10 мин,  проводили пробоподготовку и сразу анализировали методом катодной вольтамперометрии с накоплением. Содержание нибентана в анализируемых образцах находили методом добавок. По данным точкам восстановили ход всей зависимости концентрации нибентана в крови от времени, представленной на  рисунке  7.  Анализируя полученные результаты, можно прийти к заключению, что выбранная одночастевая модель адекватно оценивает фармакокинетику нибентана, так как объем распределения препарата не превышает  3,17 л,  следовательно, основная масса вещества находится в кровяном русле и мало распределяется по тканям организма. Из литературных данных известно,  что оптимальной является величина  ССР,  установившаяся в интервале так называемого  «коридора безопасности»  –  СЭФ < ССР < СS.  Исходя из полученных фармакокинетических данных, пациентов можно разделить на две группы, к первой  –  относятся те, у которых начальная дозировка препарата  (DН)  составляет  10,0 – 16,0 мг,  вторая  группа  характеризуется величиной  (DН)  в пределах  20,0 – 40,0 мг,  при поддерживающей дозе  (DПОД),  находящейся в пределах  3,5 – 8,0,  практически для всех пациентов, за исключением пациента № 3, у которого поддерживающая доза составляет  0,93 мг, что можно объяснить высоким значением периода полувыведения  (0,203 ч). Необходимо заметить, что клиренс данного препарата практически не зависит от индивидуальных особенностей организма. Полученные фармакокинетические параметры согласуются с литературными данными. По результатам фармакокинетических испытаний можно сделать вывод о том, что фармакологический эффект нибентана обусловлен как самим препаратом, так и его метаболитами, что подтверждают литературные источники, кроме того, соединение активно  и  прочно связывается  с  белками крови, так как его концентрация через  5 мин  после введения уменьшается в  1,5 – 2 раза.  Фармакокинетическое и фармакодинамическое различие в продолжительности действия нибентана  (1,5  и  8 ч,  соответственно)  может свидетельствовать о том, что в процессе быстрой биотрансформации  (1,5 ч)  выделяются активные метаболиты, действующие более продолжительно  (до 8 ч)  и не проявляющие электрохимической активности в подобранных условиях эксперимента. В связи с этим, терапию нибентаном рекомендуется проводить под постоянным мониторным контролем  ЭКГ.

Динамику концентрации амиодарона в крови изучили при одновременном внутривенном и пероральном введении под строгим мониторингом  ЭКГ,  что соответствует схеме лечения данным препаратом, при этом достигается максимальное насыщение организма, сопровождающееся ярко-выраженным терапевтическим эффектом. Внутривенное введение проводили инфузионно в дозе  300 мг,  таблетированная лекарственная форма содержала  200 мг лекарственного вещества. Поскольку терапию проводили одновременно инъекционной и таблетированной лекарственными формами, не представлялось возможным рассчитать фармакокинетические параметры с использованием классического алгоритма, поэтому приняли во внимание исключительно сведения по достижению терапевтической концентрации и времени полувсысывания в сочетании с полувыведением, при этом терапевтическая концентрация амиодарона в крови составила  0,5 – 2 мг/л. Суммарные данные по суточной динамике амиодарона для каждого пациента, представленн на рисунке  7.  Анализ графиков показывает, что практически на всех кривых присутствуют три максимума различной степени выраженности, при этом первый максимум характеризуется резким подъемом и резким спуском. Второй максимум в шести из восьми случаев присутствует в виде волны или плеча, исключение составляют пациенты  № 5  и  № 6,  где второй максимум более выражен по сравнению с первым и имеет такие же резкие подъем и спуск, что обусловлено повторным введением лекарственного вещества, так как ранее введенная доза была элиминирована из организма наполовину и более. Третий максимум присутствует в виде пика или волны с резким подъемом и пологим спуском, причем по времени он совпадает практически для всех пациентов. Исключение составляют пациенты  № 4  и  № 7,  для которых данный эффект соответствует пятичасовой точке и сочетается со слабой выраженностью второго максимума.

Разработанные методики количественного определения спираприла гидрохлорида и фозиноприла натрия и беназеприла гидрохлорида в сыворотке крови, позволили провести фармакокинетические исследования лекарственных веществ для группы пациентов с хронической сердечной недостаточностью. В настоящее время препараты активно применяют при лечении данной патологии. По данным литературных источников рекомендуемые средние терапевтические дозы при лечении сердечной недостаточности для спираприла гидрохлорида составляют от 3 до 6 мг, для фозиноприла натрия от 10 до 40 мг, для беназеприла гидрохлорида  5 – 20 мг.  В клиническом эксперименте с учетом исходного уровня артериального давления и проводимой мочегонной терапией начальные дозы препаратов подбирали индивидуально:  для спираприла гидрохлорида  – от 0,75 до 3 мг, для фозиноприла натрия – от 2,5 до 7,5 мг,  для беназеприла гидрохлорида  5 мг. В фармакокинетические исследования для спираприла гидрохлорида и беназеприла гидрохлорида было включено по  11  пациентов  и  10  –  для фозиноприла натрия. После приема препаратов в виде таблетированных лекарственных форм забор крови осуществлялся до и через определенные интервалы времени для спираприла гидрохлорида  (15, 30, 60, 90, 120, 240, 480, 1440 минут, 2, 14, 28, 56 сутки),  для фозиноприла натрия  (15, 30, 60, 120, 180, 360, 480, 720, 1440 минут, 3, 14, 28, 56 сутки),  для беназеприла гидрохлорида  (15,  30,  60,  90 мин, 2, 4, 8, 24 ч).  Полученную сыворотку анализировали вольтамперометрическим методом.

На рисунке 8  представлены фармакокинетические кривые  (фармакокинетический профиль)  концентрации спираприла гидрохлорида в определенные интервалы времени у каждого отдельного пациента, описывающие основные фармакокинетические процессы, происходящие с исследуемым препаратам. Анализируя полученные результаты, можно прийти к заключению, что константа элиминации у всех пациентов находится в узком промежутке значений, то есть мало зависит от индивидуальных особенностей организма за исключением пациента № 3, который находился в прединфарктном состоянии (эпизод инфаркта через день после фармакокинетических исследований). Кроме того, в зависимости от индивидуальных особенностей организма, препарат может находиться или в кровяном русле (объем распределения не превышает  5 л,  пациенты  № 3,  № 4,  № 5,  № 8,  № 10,  № 11),  или распределяться по тканям организма  (пациенты  № 1,  № 2,  № 6,  № 7,  № 9).  Для двух пациентов  (№ 5,  № 7)  величина  ССР  попадает в интервал безопасности. Однако для большинства участвовавших в исследовании (испытуемые  № 1,  № 2,  № 6,  №10,  № 11)  наблюдали быстрое выведение препарата и достижение уровня концентрации ниже минимального эффективного за счет малой величины  t1/2  или высокой  Vd,  что означает низкую эффективность терапии в предложенной дозировке. Для пациентов  № 3,  № 4,  № 8,  № 9,  напротив, установился высокий уровень концентрации препарата, выше максимально допустимого, то есть в данном случае высока вероятность возникновения токсических явлений. Исходя из полученных фармакокинетических данных, пациентов можно разделить на две группы, к первой  –  относятся те, у которых начальная дозировка препарата  (DН)  составляет  1 – 6 мг,  вторая группа характеризуется величиной  (DН)  в пределах  10 – 11 мг, в свою очередь, отсюда поддерживающая доза  (DПОД) практически у всех пациентов соответствует  0,69 – 3,00 мг и только у вышеупомянутого пациента  № 3  –  8,13 мг. Максимальную концентрацию спираприла гидрохлорида наблюдали на  109  минуте, что по своим абсолютным значениям несколько превышает соответствующие показатели, представленные в литературе, причем у пациента  № 8  отмечали самое медленное достижение максимальной концентрации  –  через  240 мин. Вместе с тем, установленные нами количественные параметры не противоречат особенностям всасывания лекарственных препаратов в слизистой ЖКТ при сердечной недостаточности.  Время полуэлиминации спираприла гидрохлорида в среднем по группе составляет  3,89 ч,  причем у пациента  № 8  процесс элиминации протекает атипично, с задержкой лекарственного вещества. Объем распределения лекарственного препарата колеблется в широком диапазоне у различных пациентов  (от  1,52  до  25,72 литра),  но при этом наибольшие вариации показателя наблюдались у пациентов со 2 ФК ХСН  (по NYHA)  (№ 1  и  № 9),  а наименьшие у больного с 4 ФК ХСН  (№ 8).

Фармакокинетический профиль препарата «Моноприл»  (фозиноприлат натрия)  для каждого пациента представлен на  рис. 8. При анализе средних фармакокинетических показателей для группы пациентов с хронической сердечной недостаточностью, перенесших инфаркт миокарда, мы их также разделили на две группы, к первой  –  отнесли тех, у которых начальная дозировка препарата  (DН)  составляет  2 – 7 мг,  вторая группа характеризуется величиной  (DН)  в пределах  11 – 20 мг.  Среднее значение по группе  (DН)  соответствовало  7,1 мг  при поддерживающей дозе  (DПОД)  2,27 мг. Константа элиминации у всех пациентов находится в узком промежутке значений, то есть мало зависит от индивидуальных особенностей организма, средний результат по группе  0,26 ч–1.  По результатам исследования у половины пациентов основная масса препарата находится в кровяном русле  (объем распределения не превышает  5 л,  пациенты  № 1,  № 4,  № 6,  № 7,  № 9),  а у оставшейся половины распределяется по тканям организма. Отмечено, что для большинства участвовавших в исследовании  (испытуемые  № 1,  № 2,  № 6,  №10,  № 11)  наблюдали быстрое выведение препарата и достижение уровня концентрации ниже минимального эффективного за счет малой величины  t1/2  или высокой  Vd,  что означает низкую эффективность терапии в предложенной дозировке. Максимальная концентрация ЛВ  (tmax )  для фозиноприла натрия достигает своего максимального значения на  160 минуте  наблюдения, что по своим абсолютным значениям несколько превышает соответствующие показатели, представленные в литературе,  причем у трех пациентов  № 3,  №7  и  №10  наблюдается самое медленное достижение максимальной концентрации  –  через  360 мин.  Вместе с тем, установленные нами

А

Б

В

Рис.  7. Фармакокинетические кривые  нибентана  (А),  амиодарона  (Б)  и  карведилола  (В)

А

Б

Рис.  8. Фармакокинетические кривые  спираприла гидрохлорида  (А),  фозиноприла натрия  (Б)  и  беназеприла гидрохлорида  (В)

количественные параметры не противоречат особенностям всасывания лекарственных препаратов в слизистой  ЖКТ  при сердечной недостаточности. Время полуэлиминации фозиноприла натрия в среднем по группе составляет  3,94 ч.  Объем распределения лекарственного препарата колебался достаточно в широком диапазоне у различных пациентов  (от  1,4  до  16,2 литра),  но при этом наибольшие вариации показателя наблюдали у пациентов  № 2  и  № 3  (III IV ФК по NYHA),  а наименьшие у  № 6  и  № 9  (II – III ФК по NYHA). Полученные фармакокинетические параметры согласуются с литературными данными.

Фармакокинетический профиль таблетированной лекарственной формы  «Лотензин»  (беназеприла гидрохлорид) представлен на  рисунке 8. Исходя из полученных результатов, концентрация беназеприла гидрохлорида в крови после однократного приема внутрь достигает максимума через  90,00 ± 10,80 мин, период полувыведения препарата из организма составляет  5,51 ± 0,70 ч. На основе усредненных значений фармакокинетических параметров пришли к заключению, что для данной группы пациентов динамика концентрации беназеприла гидрохлорида характеризуется высокой скоростью всасывания  21,12 ± 4,40 мин  и выведения  5,51 ± 0,70 ч,  в сочетании с низкой способностью распределения по тканям организма  (объем распределения  2,84 ± 0,35 л),  что приводит к низкой величине средней стационарной концентрации препарата в крови  4,99 ± 1,13 нг/л.  Практически для всех пациентов величина  ССР  не попадает в интервал «коридора безопасности». Период полувыведения беназеприла гидрохлорида, рассчитанный общепринятым способом, составил  7,9 ± 2,0 ч.  Значение эффективной концентрации  СЭФ  составило в среднем  9,45 ± 1,20 нг/мл,  токсической концентрации Сs  –  19,62 ± 2,07 нг/мл. Общий клиренс лотензина  (Clt)  равен  5,41 ± 1,10 мл/мин. Исходя из полученных фармакокинетических данных, оптимальная начальная дозировка препарата  (Dн)  составляет  8,28 – 10,18 мг, поддерживающая  5,84 – 7,36 мг.

Динамику карведилола изучали при пероральном введении в виде таблетированной лекарственной формы  «Акридилол».  Объектом исследования являлась сыворотка крови  11  пациентов мужского пола  в возрасте 47 71 г., массой тела  60 – 105 кг  с диагнозом ишемической болезни сердца  II ФК ХСН  (по NYHA)  в сочетании с сахарным диабетом различных стадий. Фармакокинетический профиль препарата  «Акридилол»  для каждого пациента представлен на рисунке  7.  Из полученных данных следует, что  максимальная концентрация карведилола в сыворотке крови наблюдается через  2,0 ± 0,63 ч.  У двух пациентов с замедленным всасыванием время достижения максимума составило  3 ч,  в то время как, у пациентов  № 2  и  № 10  оно не превышало  1 ч.  Практически для всех пациентов, за исключением  № 8,  величина  ССР  не попадает в так называемый «коридор безопасности». Это может быть связано с тем, что для данной группы пациентов динамика карведилола на основе усредненных значений фармакокинетических параметров, характеризуется высокой скоростью всасывания  [(23,43 ± 12,63) ⋅ 10–3  мин–1]  и выведения  [(437,91 ± 149,79) ⋅ 10–3  мин–1],  в сочетании с высокой способностью распределения  по тканям организма  (объем распределения  112,81 ± 26,95 л), что приводит к низкой величине средней стационарной концентрации препарата в крови  18,85 ± 5,58 нг/л. Значение  эффективной  концентрации  СЭФ  составило в среднем  21,04 + 4,3 нг/л,  токсической концентрации  Сs  –  39,2 + 10,3 нг/л,  максимальной концентрации  Сmax   41,23 + 10,8 нг/л. Период полувыведения карведилола, рассчитанный общепринятым способом,  составил  1,73 ± 0,40 ч,  за исключением пациентов:  № 4,  № 8  и  № 9,  у которых наблюдали замедленное выведение препарата  (10,37 – 16,11 ч),  а также пациента  № 2,  период полувыведения у которого составил  1,95 ч,  что связано с сопутствующими заболеваниями  желудочно–кишечного  тракта и почек. Необходимо заметить, что общий клиренс карведилола  (Clt)  не зависит от индивидуальных особенностей организма и равен  48,93 + 19,17 мл/мин. Исходя из полученных фармакокинетических данных  начальная дозировка препарата  (DН)  составляет  13,66 – 31,07 мг,  при поддерживающей дозе  (DПОД),  находящейся в пределах  7,17 – 12,77 мг.

ИЗУЧЕНИЕ  ВОЗМОЖНОСТИ  ИСПОЛЬЗОВАНИЯ  ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКОГО  ЭКСПРЕССАНАЛИЗА  ДЛЯ  ОПРЕДЕЛЕНИЯ  ЭНДОГЕННЫХ  ПЕПТИДОВ  В  БИОЖИДКОСТЯХ

В данном разделе работы в соответствии со стандартной схемой  (Гл. 4)  подобраны оптимальные условия определения инсулина и ангиотензина в модельных растворах и сыворотке крови  (рис 9,  табл. 12).

Минимально определяемые  концентрации инсулина и  ангиотензина II  соотавили  0,01 пг/л.

Валидацию подобранных условий выполнили с использованием внутреннего стандарта, для чего провели по двадцать параллельных

 

  А Б

Рис.  9. Вольтамперограммы  раствора  инсулина  (А)

и ангиотензина  (В)

Таблица  12

УСЛОВИЯ  ЭЛЕКТРОХИМИЧЕСКОГО  ОПРЕДЕЛЕНИЯ  ИНСУЛИНА  И  АНГИОТЕНЗИНА II  В  МОДЕЛЬНЫХ  РАСТВОРАХ

Параметр определения

Инсулин

Ангиотензин II

Потенциал электролиза

(– 1,45) В

(– 1,50) В

Время электролиза

150 с

330 с

Скорость развертки вольтамперограммы

50 мВ/с

200 – 300 мВ/с

Форма развертки вольтамперограммы

Постоянно–токовая

Постоянно–токовая

определений инсулина в концентрации  10–4  и  10–5  мг/л,  результаты которых статистически обработали с использованием коэффициента Стьюдента. При этом установили, что относительная погрешность среднего результата не превышает  0,5 %, а отдельной варианты  –  3 %  и соответствует погрешности вольтамперометрического метода. Аналогичный тест для  ангиотензина II  состоял из двадцати параллельных определений в концентрации  10–4,  10–5  и  10–6 мг/л. В данном случае относительная погрешность среднего результата не превышала  1,5 %,  а отдельной варианты  –  6 %,  что также соответствует погрешности вольтамперомет-рического метода. В свою очередь, значение коэффициента Стьюдента, полученное расчетным путем для всех выборок, не превышало табличное.

Подобранные условия вольтамперометрического определения  инсулина и  ангиотензина II  позволили выявить наличие прямолинейной зависимости силы тока в цепи от концентрации исследуемых вещества в электролитической ячейке  в концентрации  10–4,  10–5  и  10–6 мг/л,  что соответствует содержанию данных полипептидов в сыворотке крови.

Экспериментально установленные условия электрохимического анализа инсулина и  ангиотензина II  в растворах стандартного образцапозволили с высокой чувствительностью и экспрессностью определить микроколичества указанных полипептидов в биологических средах, при этом установили, что анализ целесообразно выполнять непосредственно в нативной сыворотке крови, изменения параметров вольтамперометрического анализа не требуется.

Валидацю разработанной вольтамперометрической методики определения инсулина в крови выполнили путем независимого параллельного контроля полученных результатов в сравнении с  радио–иммунным  и одновременным построением сахарной кривой  (тест, отражающий биологическую активность инсулина и являющийся наиболее часто используемым в клинических лабораториях).  Сравнение результатов, полученных двумя методами, показало, что отклонения в цифровых значениях не превышают коэффициента вариации.

Для оценки возможности введения предлагаемых вольтамерометрических методик определения инсулина и  ангиотензина II  в клиническую лабораторную практику в соответствии с приказом МЗРФ от 07.02.2000 г.  № 45  «О системе мер по повышению качества клинических лабораторных исследований в учреждениях здравоохранения»  проведен анализ двадцати образцов нормальной (непатологической) сыворотки крови  (содержание глюкозы  4,8 ммоль/л)  с составлением контрольной карты для каждого полипептида. Данный тест необходим для оценки систематической погрешности и общей воспроизводимости результатов.

По двадцати результатам рассчитали величину среднего значения  (:  2,04⋅10-4 мг/л  и  17,86 пг/мл),  дисперсию  (S2:  9,96⋅10-10  и  1,50),  величину среднеквадратичного отклонения  (S:  32,16⋅10-5  и  1,22)  и коэффициент вариации  (CV:  15,47  и  6,86 %)  для инсулина и ангиотензина II, соответственно. Для данных выборок рассчитаны контрольные пределы:    ±  1 S,   ±  2 S,   ±  3 S,  при этом не наблюдали значений, выходящих за пределы ±  3 S,  что свидетельствует о статистической достоверности полученных результатов и их воспроизводимости, следовательно, предлагаемые вольтамперометрические методики количественного определения инсулина и ангиотензина II  целесообразно рекомендовать для проведения лабораторных клинических анализов.

В Ы В О Д Ы

1.  Выполнены  квантово–химические  расчеты структуры нибентана, амиодарона, спираприла гидрохлорида, фозиноприла натрия, беназеприла гидрохлорида, карведилола и выявлены наиболее электрохимически активные группы:  нибентан  (нитрогруппа,  карбонильный фрагмент амидной  группы);  амиодарон  ( карбонильная группа, бензофурановый цикл,  ковалентно–связанный  йод);  спираприла гидрохлорид  (карбоксильная группа,  карбонильная группа и карбонильный фрагмент  сложноэфирной  группы);  фозиноприл натрия  (фосфинильная, карбоксильная, карбамидная и  сложноэфирная группы);  беназеприла гидрохлорид  (карбамидная, карбоксильная  и  сложноэфирная группы);  карведилол  (гидроксильная, метокси- и фенокси-группы).

2.  Впервые изучено электрохимическое поведение лекарственных средств в модельных растворах на электродах:  нибентан и амиодарон  -  на стеклоуглеродном;  фозиноприл натрия    на графитовом;  спираприла гидрохлорид и беназеприла гидрохлорид    на золотом;  карведилол    на графитовом с золотым напылением и установлена  минимально–определяемая  концентрация. Специфичность, точность, воспроизводимость и линейность разработанных методик подтверждена на основе статистической обработки с использованием коэффициента  Стьюдента  и  оценки параметров линейной зависимости.

3.  Впервые предложены электрохимические условия количественного определения лекарственных средств в лекарственных формах, которые валидированы на основе фармакопейных методик спектрофотометрического определения в  УФобласти  и  высокоэффективной жидкостной хроматографии. Экспериментально доказано, что предлагаемые нами методики характеризуются специфичностью и простотой пробоподготовки, которая исключает стадию фильтрования и отделения лекарственного средства от вспомогательных веществ.

4.  Изучено электрохимическое поведение гормонов полипептидной структуры:  инсулина на  ртутно–пленочном  электроде и  ангиотензина II  –  на графитовом электроде. Получены поляризационные кривые инсулина и  ангиотензина II,  пригодные для аналитических целей и установлена минимально–определяемая концентрация в  1 пг/л. Установлено, что количество аминокислот в полипептидной цепи влияет на выбор варианта анализа электрохимическим методом, так, инсулин целесообразно определять катодной вольтамперометрией без накопления, а  ангиотензин II,  представляющий октапептид,  –  инверсионной вольтамперометрией.

5.  Предложены оптимальные условия определения лекарственных веществ в сыворотке крови с использованием пробоподготовки. Для амиодарона предложен способ осаждения белков  10 %  раствором цинка сульфата. Методики определения лекарственных средств в сыворотке крови валидированы с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии.

6.  Выбранные условия вольтамперометрического определения позволили провести фармакокинетические исследования нибентана и амиодарона, спираприла гидрохлорида, фозиноприла натрия, беназеприла гидрохлорида и карведилола, результаты которых используются в работе  ГУ НИИ  кардиологии  СО РАМН,  ЗАО  «ВекторМедика»,  ГУ Новосибирский институт органической химии  им. Н.Н. Ворожцова  (НИОХ СО РАН),  ФГУ  «Новосибирский  научноисследовательский  институт патологии кровообращения имени  Е.Н. Мешалкина  Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи»,  ГНУ  «Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока»  СО Российской академии сельскохозяйственных наук, что подтверждено актами внедрения.

7.  Разработаны методики определения инсулина и  ангиотензина II  в нативной сыворотке крови. Методики анализа инсулина валидированы по радиоиммунному методу с одновременным построением сахарной кривой, различие в числовых показателях составило не более  15 %.  С целью рекомендации использования предлагаемых вольтамперометрических методик определения инсулина и  ангиотензина II  в клинических лабораториях рассчитаны коэффициенты вариации  (15,47 %  и  6,86 %,  соответственно)  и составлены контрольные карты.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.  Терентьева С.В., Матолыгина Е.М., Кулешов В.И., Ивановская Е.А., Гусакова А.М.  Вольтамперометрический способ определения инсулина  //  Патент РФ на изобретение  № 2234093, опубликован  10.08.2004.,  Бюллетень № 22.

2.  Терентьева С.В., Матолыгина Е.М., Аптекарь В.Д., Гусакова А.М., Ивановская Е.А., Тепляков А.Т.  Разработка вольтамперометрической методики определения инсулина в крови  //  Химикофармацевтический  журнал.  –  2004.  –  Т. 38,  № 7.  –  С. 54 – 56.

3.  Терентьева С.В., Комарова Е.Н., Андреева Т.И.  Инверсионная вольтамперометрия ангиотенизина II  //  Рациональное использование лекарств:  Материалы российской  научно–практической  конференции  (10 – 12 марта  2004 года,  Пермь).  –  С. 54 – 55.

4.  Терентьева С.В., Матолыгина Е.М., Чернышева С.В., Поздняков Е.Г.  Использование катодной вольтамперометрии для определения концентрации инсулина в крови  //  Рациональное использование лекарств: Материалы российской  научно–практической  конференции  (10 – 12 марта  2004 года,  Пермь).  –  С. 95 – 96.

5.  Терентьева С.В., Комарова Е.Н. Вольтамперометрическое определение  ангиотензина II  //  Пятый международный конгресс молодых ученых  «Науки о человеке»:  Сборник статей молодых ученых и специалистов  /  Под ред. Л.М. Огородовой, Л.В. Капилевича.  –  Томск,  СибГМУ,  2004  – С. 55 – 56.

6.  Терентьева С.В., Матолыгина Е.М., Чернышева С.В.  Вольтамперометрический анализ инсулина в крови  //  Пятый международный конгресс молодых ученых  «Науки о человеке»:  Сборник статей молодых ученых и специалистов  /  Под ред. Л.М. Огородовой, Л.В. Капилевича.  –  Томск,  СибГМУ,  2004  – С. 69.

7.  Терентьева С.В., Автунич Е.В., Ивановская Е.А.  Вольтамперометрический способ количественного определения нибентана  //  Патент РФ на изобретение  № 2247368, опубликован  27.02.2005.,  Бюллетень № 6.

8.  Терентьева С.В., Автунич Е.В., Ивановская Е.А.  Способ определения амиодарона  (кордарона)  методом инверсионной вольтамперометрии  //  Патент РФ на изобретение  № 2246722, опубликован  20.02.2005.,  Бюллетень № 5.

9.  Терентьева С.В., Комарова Е.Н., Андреева Т.И., Ивановская Е.А., Гусакова А.М., Карпов Р.С.  Способ определения  ангиотензина II  методом инверсионной вольтамперометрии  //  Патент РФ на изобретение  № 2260797, опубликован  20.09.2005.,  Бюллетень № 26.

10.  Кузнецова А.В., Терентьева С.В., Степачева Т.А., Дербенева Н.В.  Отдаленные результаты коронарного шунтирования больных инсулиннезависимым сахарным диабетом:  данные  3–летнего  проспективного наблюдения  //  Сибирский медицинский журнал. Приложение к журналу.  –  2005.  –  Т. 20,  № 2.  –  С. 121.

11.  Левшин А.В., Тепляков А.Т., Нилогов В.Л., Лукинов А.В., Терентьева С.В., Дербенева Н.В.  Влияние комбинированной терапии ингибитором  АПФ  квинаприлом и β–адреноблокатором  карведилолом на постинфарктное ремоделирование и регресс хронической сердечной недостаточности  //  Сибирский медицинский журнал. Приложение к журналу.  –  2005.  –  Т. 20,  № 2.  –  С. 131 – 132.

12.  Нилогов В.Л., Тепляков А.Т., Терентьева С.В., Левшин А.В.  Влияние  8–недельной  терапии карведилолом и спираприлом на регресс сердечной недостаточности у больных с постинфарктной дисфункцией миокарда  //  Сибирский медицинский журнал. Приложение к журналу.  –  2005.  –  Т. 20,  № 2.  –  С. 151.

13.  Тепляков А.Т., Кузнецова А.В., Терентьева С.В., Степачева Т.А., Сапожникова Т.Н.  Антиишемические и метаболические эффекты кардиоселективных  β1–адреноблокаторов  небиволола и беталок зок у больных с постинфарктной дисфункцией сердца, ассоциированной с сахарным диабетом  2-го типа  //  Сибирский медицинский журнал. Приложение к журналу.  –  2005.  –  Т. 20,  № 2.  –  С.  214 – 215.

14.  Комарова Е.Н., Терентьева С.В., Тепляков А.Т., Гарганеева А.А., Нилогов В.Л.  Изучение фармакокинетики и фармакодинамики моноприла у пациентов с хронической сердечной недостаточностью  //  Сердечная недостаточность 2005:  Тезисы  VI  ежегодной конференции общества специалистов по сердечной недостаточности  (7 - 9 декабря  2005 года, Москва).  –  С. 111.

15.  Изучение фармакокинетики и фармакодинамики квадроприла у пациентов с хронической сердечной недостаточностью  /  С.В. Терентьева, А.С. Комарова, Е.Н. Комарова, А.Т. Тепляков, А.А. Гарганеева, В.Л. Нилогов  //  Сердечная недостаточность 2005:  Тезисы  VI  ежегодной конференции общества специалистов по сердечной недостаточности  (7 - 9 декабря  2005 года, Москва).  –  С. 111.

16.  Комарова Е.Н., Чернышева С.В., Терентьева С.В., Комарова А.С., Нилогов В.Л., Аптекарь В.Д., Гаргенеева А.А., Тепляков А.Т.  Изучение фармакокинетики беназеприла гидрохлорида и спираприла гидрохлорида  //  Тезисы докладов  XII  Российского Национального конгресса  «Человек и Лекарство»,  г. Москва  18 – 22  апреля  2005 г.  –  С. 415.

17.  Терентьева С.В., Автунич Е.В., Ивановская Е.А.  Изучение фармакокинетики нибентана  //  Тезисы докладов  XII  Российского Национального конгресса  «Человек и Лекарство»,  г. Москва  18 – 22  апреля  2005 г.  –  С. 563.

18.  Комарова Е.Н., Терентьева С.В., Нилогов В.Л., Гарганеева А.А  Изучение фармакокинетики фозиноприлата натрия и спираприла гидрохлорида  //  Материалы Всероссийской  научно–практической  конференции  «Современные проблемы фармакологии и фармации»,  г. Новосибирск,  18 – 19 мая,  2005 г.  –  С. 135 – 137.

19.  Чернышева С.В., Левшин А.В., Терентьева С.В., Аптекарь В.Д., Тепляков А.Т.  Изучение фармакокинетики лотензина и его влияния на динамику инсулина и  ангиотензина II  в процессе терапии  //  Материалы Всероссийской  научно–практической  конференции  «Современные проблемы фармакологии и фармации»,  г. Новосибирск,  18 – 19 мая,  2005 г.  –  С. 142 – 144.

20.  Терентьева С.В., Комарова А.С., Комарова Е.Н., Поздняков Е.Г., Ивановская Е.А. Способ определения  спираприла гидрохлорида методом инверсионной вольтамперометрии  //  Патент РФ на изобретение  № 2280860, опубликован  27.07.2006.,  Бюллетень № 21.

21.  Терентьева С.В., Чернышева С.В., Ивановская Е.А., Карпов Р.С., Гусакова А.М.  Способ определения беназеприла гидрохлорида  (лотензина)  методом инверсионной вольтамперометрии  //  Патент РФ на изобретение  № 2280861, опубликован  27.07.2006.,  Бюллетень № 21.

22.  Терентьева С.В., Комарова Е.Н., Ивановская Е.А., Карпов Р.С. Способ определения  фозиноприла натрия методом инверсионной вольтамперометрии // Патент РФ на изобретение  № 2288469, опубликован  27.11.2006.,  Бюллетень № 33.

23.  Инверсионная вольтамперометрия спираприла гидрохлорида  /  Е.Н. Комарова, С.В. Терентьева, А.С. Комарова, Е.А. Ивановская  //  Журнал клинической и экспериментальной медицины.  –  2006.  –  Т. 11,  № 1 - 2.  –  С.  51 – 53.

24.  Изучение фармакокинетики лотензина у пациентов с ишемической болезнью сердца в сочетании с артериальной гипертонией  /  С.В. Чернышева, А.В. Левшин, С.В. Терентьева, А.Т. Тепляков, В.Д. Аптекарь, Е.А. Ивановская  //  Журнал клинической и экспериментальной медицины.  –  2006.  –  Т. 11,  № 1 - 2.  –  С.  57 – 59.

25.  Комарова Е.Н. Терентьева С.В., Гарганеева А.А.  Изучение фармакокинетики моноприла и квадроприла  //  Сибирский медицинский журнал. – 2006. – Т. 21,  № 3. – С.  100.

26.  Комарова Е.Н., Терентьева С.В., Гарганеева А.А.  Изучение фармакокинетики квадроприла (спираприла гидрохлорида) методом вольтамперометрии  // Сибирский медицинский журнал. – 2006. – Т. 21,  № 4. – С.  43 - 45.

27.  Терентьева С.В., Комарова Е.Н., Сапожникова Т.Н., Тепляков А.Т., Ивановская Е.А., Андреева Т.И.  Вольтамперометрическая методика определение  ангиотензина II в крови  //  Химико-фармацевтический  журнал. –  2006.  –  Т. 40,  № 12.  –  С.  54 – 56.

28.  Чернышева C.В., Левшин А.В., Терентьева С.В., Тепляков А.Т., Аптекарь В.Д., Ивановская Е.А.  Изучение фармакокинетики лотензина и исследование его влияния на динамику инсулина и ангиотензина II  //  Сибирский медицинский журнал.  –  2007.  –  Т. 22,  № 3.  –  С.  39 – 41.

29.  Чернышева C.В., Левшин А.В., Терентьева С.В., Тепляков А.Т., Аптекарь В.Д., Ивановская Е.А.  Изучение фармакокинетики акридилола у пациентов с ишемической болезнью сердца в сочетании с  II ФК ХСН  (по NYHA)  //  Сибирский медицинский журнал.  –  2007.  –  Т. 22,  № 4.  –  С.  17 – 19.

30.  Чернышева С.В., Терентьева С.В.  Количественное определение беназеприла гидрохлорида вольтамперометрическим методом  [Электронный ресурс]  //  Медицина и образование в Сибири:  электронный научный журнал. – 2007. – № 3. – Режим доступа: http://ngmu.ru/cozo/mos/article/text_full.php?id=152.

31.  Терентьева С.В., Чернышева С.В., Тепляков А.Т., Левшин А.В., Аптекарь В.Д. Способ определения карведилола методом инверсионной вольтамперометрии  //  Патент РФ на изобретение  № 2334510, опубликован  27.09.2008.,  Бюллетень № 27.

32.  Чернышева С.В., Терентьева С.В., Ивановская Е.А. Количественное определение карведилола вольтамперометрическим методом  [Электронный ресурс]  //  Медицина и образование в Сибири:  электронный научный журнал. – 2011. – № 2. – Режим доступа: http://www.ngmu.ru/cozo/mos/article/abauthors.php?id=481.

33.  Терентьева С.В., Ивановская Е.А., Чернышева С.В.  Количественное определение амиодарона в лекарственных формах вольтамперометрическим методом [Электронный ресурс]  //  Медицина и образование в Сибири:  электронный научный журнал. – 2011. – № 4. – Режим доступа: http://www.ngmu.ru/cozo/mos/article/text_full.php?id=520.

34.  Терентьева С.В., Ивановская Е.А., Попов С.В., Чернышева С.В.  Изучение возможности использования вольтамперометрии в исследовании фармакокинетики амиодарона и нибентана  [Электронный ресурс]  //  Медицина и образование в Сибири:  электронный научный журнал. – 2011. – № 5. – Режим доступа: http://www.ngmu.ru/cozo/mos/article/text_full.php?id=522.







© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.