WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

 

На правах рукописи

КОМАРОВА Екатерина Федоровна

ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ ЛЕГКОГО

14.01.12 – онкология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора биологических наук

Ростов-на-Дону,

2011

РАБОТА ВЫПОЛНЕНА В ФЕДЕРАЛЬНОМ ГОСУДАРСТВЕННОМ УЧРЕЖДЕНИИ «РОСТОВСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ  ИНСТИТУТ»  МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РФ

(директор института – д.м.н., профессор Кит О.И.)

Научные консультанты:  - академик РАН и РАМН,

профессор  Ю.С. Сидоренко

- доктор биологических наук,

профессор Е.М. Франциянц

Официальные  оппоненты:  доктор медицинских наук,

  профессор Максимов Г.К.

  -  доктор медицинских наук,

  профессор Конопацкова О.М.

  -  доктор биологических наук,

  профессор Колмакова Т.С.

Ведущая организация:  ФГУ «НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова»

Минздравсоцразвития России, г. Санкт-Петербург

Защита диссертации состоится «__» _______2011 г. в___ часов на заседании диссертационного совета Д 208.083.01 при Федеральном государственном учреждении «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт» Минздравсоцразвития России (344037, г. Ростов-на-Дону, 14-я линия,63)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного учреждения «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт» Минздравсоцразвития России

Автореферат  разослан «___»_________2011г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор  Л.Ю. Голотина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. Рак легкого является одной из ведущих локализаций в общей структуре заболеваемости злокачественными новообразованиями населения России (11,8%), уступая лишь раку кожи (с меланомой – 13,4%). Каждая третья злокачественная опухоль, диагностируемая в настоящее время у мужчин (24,7%), локализуется в органах дыхания, у женщин доля этих опухолей почти в 6 раз ниже (4,3%). Стандартизованная заболеваемость на 100 тысяч населения России в 2007 году составила: у мужчин – 25,73, у женщин 6,8. По смертности от злокачественных новообразований в России рак легкого у мужчин стоит на первом месте. В 2007 году этот показатель в абсолютных числах составил: среди мужчин – 43460, среди женщин – 8452. Стандартизованная смертность на 100 тысяч населения составила 23,05 и 5,54 соответственно (Чиссов В.И. и соавт., 2009).  В настоящее время из всех видов злокачественных опухолей рак легкого является ведущей причиной смерти среди лиц мужского пола более чем в 35 странах мира (M. Sucena, 2003; P. Smartt, 2004; G. Wingren, 2004; C.P. Wen, 2004; C.A. Veys, 2004). Значительно возросли темпы заболеваемости раком легкого среди женского населения стран мира  (A. Jemal, 2003; J.R. Hernandez, 2004; W.K. Lam, 2004).

Многое известно о причинах возникновения рака легкого, но еще больше остается неизученного. В частности, почему существуют половые различия в заболеваемости раком легкого? Это  невозможно объяснить просто с позиций курения или вредного производства, а, только зная, какие метаболические процессы протекают в организме в целом и в ткани возникающей и растущей злокачественной опухоли.

В настоящее время в теоретической онкологии доминирует традиционное представление о возникновении злокачественных опухолей в связи с генетическими повреждениями. Одно из нетрадиционных представлений  опирается на факты, такие как тканевые изменения в предраке, повышенная пролиферация, нарушение дифференцировки, эмбрионализация и др. (Черезов А.Е., 1997). Те злокачественные признаки, которые идентифицируются у раковых клеток (клоногенность, аутокринный митоз, наличие активизированных онкогенов, иммортализация), являются атрибутом нормальных низкодифференцированных клеток (стволовых, коммитированных), вышедших из-под тканевого контроля, то есть различия между стволовыми и раковыми клетками не в измененных онкогенах, а в наличии или отсутствии тканевого гомеостаза (Лю Б.Н., 2003). «Опухолевое поле» или «тканевой регион, пространственно окружающий злокачественную опухоль, не имеющий морфологических признаков злокачественной перестройки, но обладающий определенными биохимическими признаками, присущими и самой опухоли» рассматривается как предопухолевое состояние, обладающее онкогенными свойствами (Ивашкин В.Т. и соавт.,1987). Считается, что изменения показателей метаболизма в этом регионе происходят значительно быстрее и интенсивнее, чем в отдаленных от опухоли частях организма.  С другой стороны, активно растущая в организме опухоль оказывает влияние на  его структурно-функциональную стабильность. Результатами системного действия опухоли как «генератора», прежде всего, агрессивных окисляющих веществ, являются снижение чувствительности клеточных рецепторов к гормонам и другим антагонистам, уменьшение управляемости клеток тканей, непосредственно не пораженных опухолью, расстройство гомеостаза опухолевого организма в целом.

Лишь глубокие знания причинно-следственных отношений организма и развивающейся в нем опухоли, изучение которых возможно только в условиях  эксперимента,  позволят разработать патогенетически обоснованные методы раннего выявления и лечения злокачественных новообразований, в том числе  опухолей легкого.

В настоящее время ведущим методом лечения рака легкого считается хирургический, но позволяет надеяться на стойкое выздоровление только около 20% больных (Трахтенберг А.Х., Чиссов В.И., 2000; Давыдов М.И., 2004). Вместе с тем, подавляющее большинство больных раком легкого не может быть подвергнуто радикальному хирургическому лечению, так как более чем в 60% случаев первично выявляется местно-распространенный нерезектабельный рак легкого. Существующие на сегодняшний день методы консервативной терапии рака легкого недостаточно эффективны. В нашем институте для лечения злокачественных опухолей различных локализаций академиком РАН и РАМН Ю.С. Сидоренко разработаны и успешно применяются методы консервативной и хирургической химиотерапии, основанные на использовании аутосред организма для введения химиопрепаратов (Сидоренко Ю.С., 2002, 2003). Многочисленными исследованиями доказана высокая эффективность данного метода для лечения злокачественных новообразований легкого (Чилингарянц С.Г., Зинькович С.А.,1999; 2000; Карташов С.З., 2002 и др.). Однако, несмотря на заметное снижение риска развития осложнений, необходимым является поиск дополнительных  неинвазивных воздействий, повышающих эффективность применяемых методов противоопухолевого лечения.

В последнее время активно обсуждается влияние факторов малой интенсивности на организм благодаря своей безопасности и поэтому привлекательности для  использования в лечебных целях, в частности противоопухолевых. Предполагается, что применение таких информационных воздействий, к которым относятся магнито- и СКЭНАР-терапия, позволит по-новому подойти к лечению многих патологических процессов, в том числе и новообразований. Кроме того, исследования эффектов от терапевтических воздействий, препятствующих развитию заболевания, могут быть ключом к изучению его патогенеза, в том числе новообразований легкого.

Таким образом, представляется актуальным и перспективным исследование патогенетических основ злокачественного роста опухолей легкого с целью получения и расширения  знаний о природе неогенеза, а также изучение механизмов различных видов противоопухолевого воздействия, дополняющих существующие традиционные методы лечения данной патологии.

Цель исследования

Изучить особенности морфофункциональных изменений ткани органа-мишени, регулирующих структур мозга и некоторых физиологических систем организма при развитии экспериментального злокачественного процесса в легких для определения их роли в патогенезе рака легкого и оценки эффективности различных противоопухолевых воздействий.

Поставленная цель достигалась решением следующих задач:

  1. Разработать способ получения индуцированной злокачественной опухоли, растущей в ткани легкого крыс обоего пола;
  2. Изучить структурно-метаболические изменения ткани опухоли легкого и некоторых функциональных систем организма крыс обоего пола в ранние сроки развития индуцированного в легком канцерогенеза;
  3. Исследовать морфо-функциональные изменения ткани органа-мишени  и некоторых физиологических систем на экспериментальной модели роста перевитой в легкое злокачественной опухоли крыс обоего пола;
  4. Изучить участие регулирующих структур мозга в инициации и развитии опухолей в легком на созданных экспериментальных моделях;
  5. Изучить влияние различных противоопухолевых воздействий на развитие и рост злокачественных опухолей легкого;
  6. Исследовать некоторые метаболические параметры ткани опухоли легкого и крови  больных раком легкого обоего пола;
  7. Выявить прогностические критерии развития злокачественного процесса в легком в клинике.

Научная новизна

В диссертационной работе впервые:

  • создана модель первичного опухолевого процесса в легком крыс;
  • изучена роль морфо-функциональных изменений ткани легкого с растущей в ней опухолью, и  выявлены общие механизмы, приводящие к образованию злокачественной опухоли и ее развитию;
  • показана роль половых различий в формировании и развитии первичного и вторичного злокачественного процесса  легкого крыс;
  • изучена роль регулирующих структур  мозга, в частности, гипофиза, в возникновении и развитии экспериментальных злокачественных новообразований легкого;
  • изучена роль комплексного электромагнитного воздействия факторами малой интенсивности на формирование и развитие злокачественной опухоли легкого крыс и определена возможность применения такого воздействия в качестве противоопухолевого;
  • показано, что проведение химиотерапии на органоспецифической крови меняет метаболический статус злокачественной опухоли, ее перифокальной зоны  и способствует значительному увеличению продолжительности жизни животных-опухоленосителей;
  • разработаны способы прогнозирования рецидивов и метастазов рака легкого у мужчин и женщин.

Практическая  значимость  работы.

Создана  модель  злокачественного роста непосредственно в легком крыс обоего пола, защищенная  патентом Российской Федерации  как  «Способ получения экспериментальной злокачественной опухоли легких» (патент №2375758, бюл. №34 от 10.12.2009) .  Создание модели  позволило изучить в динамике развития и роста злокачественных опухолей в легком состояние основных метаболических систем ткани органа-мишени и крови, а также регулирующих структур мозга. Полученные результаты дополняют и конкретизируют существующие представления о характере изменений этих систем и указывают на их важную роль в инициации реакций, приводящих к развитию опухолевого процесса.  Терапия в виде АГХТ или сочетанного электромагнитного воздействия, подтвердила патогенетическое значение найденных перестроек в возникновении и развитии злокачественного роста в эксперименте («Способ лечения злокачественных опухолей легких в эксперименте», решение патентной экспертизы о выдаче патента от 21.06.10) и клинике («Способ лечения рака легкого»,  патент №2406452, бюл.№35 от 20.12.2010) .

На основании результатов полученных в эксперименте предложены для онкологической клиники способы раннего выявления  генерализации злокачественного процесса («Способ определения направленности патологического процесса при раке легкого» - заявка №2009138695/14 (054798), приоритет от 19.10.2009  и «Способ прогнозирования развития церебральных метастазов при раке легкого у женщин» - решение патентной экспертизы о выдаче патента от 23.11.2010).

Использование патогенетически значимых параметров перестройки изученных метаболических систем, открывает новый методологический подход к созданию не только способов диагностики злокачественного процесса в легком, обнаруживаемого еще до его клинических проявлений, но и перспективу для выяснения  механизмов действия различных противоопухолевых мероприятий.  А это, в свою очередь, является базой для разработки патогенетически обоснованных способов воздействия на опухолевую болезнь.

Внедрение результатов исследования в практику

Использованные модели воспроизведения злокачественных опухолей в легком используются экспериментальными лабораториями РНИОИ с целью  изучения механизмов роста и развития неоплазм легкого, а также влияния и оценки эффективности различных противоопухолевых воздействий при злокачественных новообразованиях легкого. Разработанные методы прогноза течения, направленности злокачественного процесса в легком, а также метод химиотерапии на органоспецифичной крови из пораженного легкого  внедрены в работу торакального и торако-пластического отделений РНИОИ.

Основные положения, выносимые на защиту

  1. Одним из значимых звеньев патогенеза злокачественных опухолей в легком является метаболическая перестройка основных адаптационных систем ткани легкого, а именно гормональной, свободнорадикальной и гидролитической, начиная с ранних этапов канцерогенного воздействия или опухолевой инвазии.
  2. Важная роль в развитии неоплазмы в легком отведена нарушению функционирования регулирующих структур мозга, в частности, гипофиза, которое связано с изменением нейрогормональной секреции и свободнорадикального статуса, и предшествует появлению опухолевых узлов в ткани легкого.
  3. Существуют половые различия возникновения неоплазмы в легком, выражающиеся в сроках образования опухолевых узлов, скорости их роста и продолжительности жизни животных, связанные с изменениями изученных метаболических параметров организма и обусловливающие структурные изменения в ткани легкого.
  4. Обратная перестройка гомеостатических систем организма, направленная на нормализацию метаболизма, является универсальным механизмом реализации противоопухолевого эффекта при экспериментальных воздействиях, что, подтверждает патогенетическую значимость выявленных нарушений.

Апробация работы состоялась  24 июня 2010 г. на заседании Ученого Совета Ростовского научно-исследовательского онкологического института.

Материалы диссертации были представлены на: 4-ой региональной конференции молодых ученых  «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии» (Томск, 2009), Российской научно-практической конференции с международным участием «Современная онкология: достижения и перспективы развития» (Томск, 2009), научно-практической конференции с международным участием «Совершенствование медицинской помощи при онкологических заболеваниях, включая актуальные проблемы детской гематологии и онкологии. Национальная онкологическая программа.» VII съезд онкологов России (Москва, 2009г.), Всероссийской научной конференции, «Современные проблемы общей и частной патологической анатомии» (Санкт-Петербург, 2009), научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты» (Екатеринбург, 2009), 17-й Межрегиональной научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы клинической онкологии и преканцерогенеза» (Якутск, 2010), VI съезде онкологов и радиологов стран СНГ (Душанбе, 2010), Международной конференции “Tumour and host: novel aspects of old problem” (Киев,2010).

Публикации. Основные положения диссертации опубликованы в  53 научных работах, из них в рецензируемых ВАКом журналах – 18 работ.  По материалам диссертации получено 2 патента РФ на изобретения, 2 решения о выдаче патентов на изобретения, на 1 заявку получена приоритетная справка.

Объем и структура диссертации

Работа изложена на  315 страницах, состоит из обзора литературы, 5 глав собственных результатов исследования и их обсуждения, заключения, 12 выводов и указателя литературы, включающего  220 отечественных и 197 зарубежных источников, содержит 73 таблицы и 55 рисунков.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Экспериментальная часть исследования была выполнена в осенне-зимний и ранний весенний периоды на 960 белых нелинейных крысах обоего пола  массой 180-220 грамм. Животные были получены при собственной разводке из маточного поголовья, приобретенного в ОНЦ АМН РФ им. Н.Н. Блохина, и содержались  в стандартных условиях вивария.

В работе использованы: экспериментально полученные опухоли путем перевивки суспензии клеток соединительно-тканной опухоли саркомы 45 (С-45) подкожно (традиционная локализация), а также модели опухолей для воспроизведения и индукции злокачественного процесса в ткани легкого, полученные путем введения в подключичную вену:

- суспензии клеток С-45 и стерильный физиологический раствор;

- суспензии клеток  лимфосаркомы Плисса в физиологическом растворе;

- канцерогена 3,4-бензпирена в переокисленном оливковом масле и крысиной крови.

Штаммы  опухолей были получены в Российском онкологическом научном центре им. Н.Н. Блохина РАМН (Москва).

Материалами экспериментального исследования служили ткань опухоли легкого и ее перифокальной зоны, сыворотка, плазма и эритроциты крови, ткань гипофиза.

Для верификации опухолевого процесса животных декапитировали, предварительно усыпив парами хлороформа, извлекали легкие, мозг, быстро помещали их на лед. Забой животных осуществляли, начиная с 1-й недели после перевивки еженедельно вплоть до их гибели.

Для изучения противоопухолевого эффекта комплексной электромагнитной терапии животным с моделированным метастатическим поражением легких в конце 1–й недели после внутривенной перевивки клеток саркомы 45 и до момента гибели животных 4 раза в неделю производилось двойное воздействие физических факторов – сверхнизкочастотных магнитных полей (СНЧМП) с помощью магнитотерапевтического аппарата  «Градиент–2» с микропроцессорным программным управлением (НПФ «Пульс» при ВНИИ «Градиент», г. Ростов-на-Дону)  и  СКЭНАР (электростимулятор, прибор разработан и произведен ЗАО ОКБ «Ритм» г. Таганрог) без применения специального противоопухолевого химио- или лучевого лечения. Первым этапом комбинированной электромагнитной терапии являлось воздействие СНЧМП, осуществляемое на голову (в проекции гипофиза) животного-опухоленосителя, помещенного в пластиковую камеру, сконструированную с учетом норкового рефлекса для самофиксации животного. Воздействие СНЧМП проводилось в период 9-10 часов утра с использованием дискретной последовательности частот 0,03 Гц-0,3 Гц-9 Гц, временем предъявления сигнала соответственно 5 мин.-1 мин.-1 мин. и интенсивностью – 5 мТл-3,5 мТл-2,8 мТл, каждое из значений которой на протяжении курса уменьшалось  по экспоненте с коэффициентом 0,7, доходя до уровня значений 0,8 мТл-0,5 иТл-0,3 мТл. Через 15-20 мин. после первого воздействия следовало второе воздействие с использованием СКЭНАР-терапии, которое заключалось в обработке кожных покровов животного со стороны спины в проекции позвоночника (положение 1) и легких (положение 2), а со стороны живота (положение 3) – в проекции печени и иммунной зоны (грудина) импульсным электрическим током с порядком изменения частоты – 15,3 Гц, 18,6 Гц, 24,4 Гц, 30,5 Гц, 33,6 Гц, интенсивности – при положении 1 амплитуда 135 у.е., при положениях 2 и 3 амплитуда от 60 до 30 у.е. (в зависимости от чувствительности) и модуляцией 2:1 сек.

Для проведения экспериментальной химиотерапии кровь из пораженного опухолью легкого забирали при удалении органа в пробирки, содержащие гепарин. Циклофосфан добавляли в кровь и инкубировали при 370С в течение 30 мин, затем реинфузировали другим крысам-опухоленосителям в подключичную вену. Животных забивали на 40 сутки от момента перевивки С-45 в ткань легкого. Исследовали ткань опухоли и ее перифокальной зоны при росте С-45: без воздействий,  при внутривенном введении через 25 дней после перевивки 40 мг циклофосфана, разведенного на физиологическом растворе или преинкубированного с кровью из пораженного опухолью легкого.

Для морфологического исследования брали несколько кусочков опухоли и ее перифокальной зоны из разных участков легкого, избегая заведомо некротизированных. Фиксацию проводили в растворе 10% нейтрального формалина с последующей стандартной проводкой через спирты восходящей концентрации и заключали в парафин. Гистологические срезы окрашивали гемотоксилином и эозином и по Ван-Гизону. Микроскопию осуществляли в проходящем свете при увеличении  х10, х 20, х40,  х50, х90, х100, х200, х400 (микроскоп Leica DM LS2).

Материалом для  биохимических исследований  служили ткань опухоли легкого ее перифокальной зоны, ткань гипофиза, эритроциты, сыворотка периферической крови крыс обоего пола. Ткани органов гомогенизировали, центрифугировали при 3000 об/мин и исследовали супернатант. Кровь собирали в стеклянные пробирки, содержащие раствор гепарина (1000 ЕД в 1 мл) из расчета 75 мкл раствора на каждый миллилитр цельной крови. Выделение из цельной крови эритроцитов осуществляли центрифугированием при 3000 об/мин. Выделенные клетки дважды отмывали физиологическим раствором. Проводили определение: суммарной пероксидазной активности (СПА) (Покровский А.А.,1969 в модификации Внукова В.В., 1979); активности супероксиддисмутазы (СОД) (Beauchamp,  Fridovich, 1971); активности каталазы (Королюк М.А. и соавт., 1988); концентрации витаминов А и Е  (Черняускене Р.Ч. и соавт., 1984); активности катепсина Д (катД) (Оглоблина О.Г. и соавт., 1981); содержания продуктов ПОЛ - диеновых коньюгатов (ДК) (Копылова Т.Н., 1982) и малонового диальдегида (МДА) (Владимиров Ю.А., Арчаков А.И., 1972); активности кислостабильных ингибиторов (КСИ) и антитриптической активности (АТА) (Веремеенко  К.Н. и соавт., 1988); кислой (КФ) и щелочной фосфатаз (ЩФ) (унифицированным  методом с использованием наборов реагентов фирмы «Ольвекс»); сульфгидрильных групп (SH-группы) (Фаломеев В.Ф., 1989); активности калликреина (К), уровня прекалликреина (ПК) и общей аргинин-эстеразной активности (ОАЭА) (Пасхина Т.С. и соавт., 1970,1974); активности плазмина (П) и уровня  плазминогена (ПГ) (Пасхина Т.С. и соавт., 1976); активности  кининазы (К-ЗА) , активности 2 - макроглобулина (2-МГ) и 1-протеиназного ингибитора (1-ПИ) (Нартикова В.Ф., Пасхина Т.С., 1979); уровня моноаминов мозга - дофамина (ДН), норадреналина (НА), серотонина (5-НТ) и 5-оксииндолуксусной кислоты (5-ОИУК) (Коган Б.М., Нечаев Н.В., 1979).

Гормональные исследования. Учитывая влияние эстрального цикла на исследуемые показатели, а именно половые и гонадотропные гормоны, исследования у самок крыс проводили в стадии диэструса (определение стадии эстрального цикла проводили методом влагалищных мазков).  Материалом для исследования служили ткани легкого, гипофиза, периферическая кровь. Определяли уровень: прогестерона (Р4), тестостерона (Т), эстрадиола (Э2), фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), лютеинизирующего гормона (ЛГ), адренокортикотропного гормона (АКТГ) и соматотропного гормона (СТГ)  и содержание пролактина (ПРЛ) с помощью наборов для радиоиммунохимического анализа фирмы “Immunotech” a Beckman coulter company (Чехия) и иммуноферментного анализа фирмы «Хема»  (Россия).

Характеристика клинического материала. В основу клинического исследования были положены наблюдения над  37 пациентами обоего пола, имеющими диагноз рака легкого, находившимися на лечении в отделении торако-пластической хирургии РНИОИ с 2007 по 2010 гг.  В исследование включались пациенты в возрасте от 45 до 73 лет. Было обследовано 17 мужчин и 20 женщин (находящихся в менопаузе). При поступлении все больные проходили необходимый комплекс клинико-лабораторных методов обследования. Объектом исследования служила ткань легкого, полученная после пневмонэктомий. Навеску ткани опухоли легкого в количестве 100 мг измельчали в гомогенезаторе с 1 мл холодного физиологического раствора. Полученный гомогенат центрифугировали 30 мин при 18000 об/мин. Осадок отбрасывали, а в супернатанте определяли уровень пролактина и прогестерона радиоизотопным методом с помощью наборов фирмы “Immunotech” a Beckman coulter company (Чехия). В качестве контрольного образца (интактной ткани легкого) использовали навеску ткани, взятую из отдаленного от опухоли участка. У больных раком легкого также исследовали состояние свободнорадикальных и гидролитических процессов в плазме и форменных элементах крови  в сравнительном аспекте, используя периферическую кровь больных раком легкого и кровь, полученную из удаляемого легкого у этих же пациентов. При этом в качестве контроля использовали соответствующие значения показателей в крови здоровых доноров. В сыворотке крови определяли уровень пролактина, прогестерона, тестостерона и эстрадиола, а в плазме и эритроцитах крови изучали: содержание витаминов А и Е, малонового диальдегида, диеновых коньюгатов, SH-групп, суммарную пероксидазную и антитриптическую активность, активность каталазы, кислотостабильных ингибиторов, супероксиддисмутазы, кислой и щелочной фосфатаз с помощью методов, использованных в эксперименте.

Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием пакетов программ Statistica version 6.0 (StatSoft, USA). Оценку соответствия законов распределения исследуемых случайных величин закону нормального распределения осуществляли путем расчета основных числовых характеристик выборки и сопоставления значений среднего арифметического и медианы. Статистические гипотезы считали достоверными при уровне значимости р0,05, р0,01. Оценку значимости различий средних значений показателя осуществляли с использованием t-критерия Стьюдента для независимых выборок. Анализ выживаемости экспериментальных животных при изучении влияния противоопухолевых воздействий проводили методом Каплана-Мейера.

Результаты исследования и их обсуждение

На разработанных моделях воспроизведения перевивной опухоли и индуцированного канцерогенеза непосредственно в ткани легкого, от момента контакта опухолевого материала, либо канцерогена с организмом животного до момента гибели последнего, мы проследили изменение различных систем метаболизма в тканях органов и крови. Гистологически полученные  опухоли представляли собой морфологически подтвержденную саркому и подчинялась требованиям, предъявляемым к экспериментальным опухолям, то есть перевивались более чем в 90% случаев, росли и приводили животных к гибели. Мы проанализировали какая «метаболическая среда» способствовала возникновению опухолевого процесса и установили, что момент «выхода» опухоли у животных происходит на фоне разбалансировки в системах гомеостаза и нарушения функционирования со стороны регулирующих систем.

Таблица 1

Основные параметры роста и развития опухолей в легких у крыс самцов и самок после внутривенной перевивки саркомы 45.

Показатель

Самцы (n=190)

Самки (n=160)

Продолжительность жизни, дни (недели)

35-42

(5-6)

175-189

(25-27)

Срок «выхода» опухолевых узлов после введения канцерогена, недели

3-4

5-6

Количество опухолевых узлов в сроки «выхода», штук

3-5

2-3

Размеры опухолевых узлов в сроки «выхода», см3

0,8±0,2

0,3±0,1

Примечание: все исследованные показатели у самцов статистически достоверно отличались от значений у самок (р 0,01)

Макроскопическое наблюдение за динамикой роста и развитием опухолевых узлов внутривенно перевитой саркомы 45 в легких у крыс-самцов и самок показало, что «выход» опухолей у самцов происходил в сроки 3-4 недели, а у самок - 5-6 недель после перевивки опухоли. При высокой степени распространенности опухолевого процесса у крыс-самцов животные погибали в сроки 35-42 дня (5-6 недель). Крысы-самки продолжали жить до срока 175 -189 дней (25-27 недель) при заметном снижении количества и размеров опухолевых узлов (табл. 1).

а б

в

Рис 1. Этапы формирования «опухолевого поля» в ткани легкого самцов и самок (1-2 недели после перевивки в легкое С-45): а – обширные очаги кровоизлияния, Ув.: х 5;  б – заполнение эритроцитами межальвеолярного пространства, Ув.: х 40; в – скопление эритроцитов в просвете альвеол, Ув.: х 40. Окр. гематокс. и эоз.

При гистологическом исследовании ткани легкого у крыс-самцов и самок спустя неделю от момента введения опухолевых клеток нами были обнаружены сходные деструктивно-реактивные изменения со стороны кровеносных сосудов легкого: отмечалось полнокровие крупных и мелких сосудов, очаговые кровоизлияния, достигающие порой обширных участков, массы эритроцитарных клеток заполняли межальвеолярные пространства (рис. 1 а,б,в). 

а б

Рис. 2. Этапы формирования «опухолевого поля» в ткани легкого самцов и самок (1-2 недели после перевивки в легкое С-45): а – лимфоцитарная инфильтрация, Ув.: х 100; б - участок деструкции легочной ткани в виде «аэрированного рубца», Ув.: х 100. Окраска гематокс. и эоз.

Вторым важным моментом явилось развитие мелких и крупных дистелектазов и перибронхиальное образование лимфоцитарных инфильтратов. В соединительной ткани появлялись альвеолоподобные и железистоподобные структуры, ложные бронхи, тяжи эпителиальных клеток, которые не дифференцировались в новые альвеолы и не обеспечивали их функции, а принимали вид «аэрированного рубца» (рис. 2 а,б). 

На таком структурном и метаболическом фоне, начиная с 3-ей недели от момента перевивки у самцов наблюдалось развитие истинного опухолевого процесса в виде формирования по периферии и в центре легких

опухолевых очагов из клеток, имеющих четкую веретеновидную форму (рис.3 а,б).

На 5–6 неделях в легких у крыс-самцов наблюдалось массивное поражение злокачественным процессом. Наряду с крупноочаговым ростом в центральных прикорневых участках легких отмечался диффузный инфильтративный рост веретеновидных клеток, собранных вихреобразными пучками с очень мелкими некротическими зонами (рис.4 а,б). После 6-й недели крысы-самцы сразу погибали от глубокой опухолевой деструкции легких, интоксикации, острой гипоксии.

 

  а  б

Рис. 3. Активная стадия опухолевого роста в ткани легкого самцов (3-4 недели после перевивки в легкое С-45): а– формирование опухолевых узелков, Ув.: х 10; б – плотный рост веретеновидных клеток опухолевого узла С-45, Ув.: х 40;

Окраска гематокс. и эоз.

В отличие от самцов у самок к этому сроку исследования (к 5-6-й неделе) наблюдалась несколько иная картина (рис.5 а,б).

а б

Рис. 4. Терминальная стадия опухолевого роста в ткани легкого самцов (5-6 недели после перевивки в легкое С-45): а – крупноочаговый опухолевый рост с участками кровоизлияний, Ув.: х 10; б– значительное поражение доли легкого опухолевой тканью, Ув.: х 10. Окраска гематокс. и эоз.

На фоне кровоизлияния встречались участки опухолевых клеток, которые принимали более округлую или овальную, но не веретеновидную форму, отмечались фигуры патологического митоза.

  а  б

Рис. 5. Стадии опухолевого роста в ткани легкого самок на начальных этапах после перевивки С-45 в легкое: а – кровоизлияние, очаги воспаления и дистелектаза, Ув.: х 5; б– развитие мелких метастатических узлов с округлыми клетками в состоянии патологического митоза, Ув.: х 100; Окраска гематокс. и эоз.

Морфологическая картина  легких у крыс-самок отличалась выраженной активацией клеточных и тканевых элементов соединительной ткани (рис. 6 а,б).

  а  б

Рис. 6.  Опухолевый рост в ткани легкого самок на 5-6 неделе после перевивки С-45 в легкое: а– мелкие участки опухолевых клеток, окруженные плотным кольцом лимфоцитов , Ув.: х 100; б– усиление эластического и коллагенового каркаса стенок альвеолярно-бронхиальных структур, Ув.: х 100. Окр. гематокс. и эоз.

Так, в полях зрения зачастую встречались участки опухоли, окруженные плотным кольцом лимфоцитов и макрофагов, разросшейся молодой соединительной тканью с извитой структурой эластических волокон.

Обращало внимание, что терминальная стадия развития опухоли у самцов по времени совпадала с периодом мобилизации тканевых и клеточных элементов сосудистых и респираторных структур у самок, что, по-видимому, способствовало продлению их жизни до 25-27 недель.

Таблица 2

Основные параметры роста и развития опухолей в легких у крыс самцов и самок после внутривенного введения 3,4 бензпирена

Показатель

Самцы (n=170)

Самки (n=180)

Продолжительность жизни, дни (месяцы)

189-225

(6,3-7,5)

579-630

(19,3-21)

Срок «выхода» опухолевых узлов после введения канцерогена, месяцы

2,5-3

5,5-6

Количество опухолевых узлов в сроки «выхода», штук

4-5

2-3

Размеры опухолевых узлов в сроки «выхода», см3

0,6±0,1

0,4±0,1

Примечание: все исследованные показатели у самцов статистически достоверно отличались от значений у самок (р 0,01)

Индуцированная 3,4-бензпиреном злокачественная опухоль в легком белых беспородных крыс отличалась сроками появления опухолевых узлов (табл.2). У самцов это происходило через 2,5-3 месяца, а у самок – через 5,5-6 месяцев. Продолжительность жизни самок была в среднем в 3,5 раза больше.

Морфологически индуцированная 3,4-бензпиреном злокачественная опухоль в легком белых беспородных крыс характеризовалась  следующими особенностями (рис.7, а-г).

Отмечалось обилие однородных клеток, имеющих чаще всего округлую форму с гиперхромными ядрами и представляющих собой незрелую форму круглоклеточной саркомы с малым количеством стромы, которая развивалась на фоне кровенаполнения и отечности межальвеолярных перегородок, деструктуризации бронхиолярно-альвеолярного аппарата. Выявлены крупные очаги инфильтрации ткани легкого. У 30% крыс индуцированный рост опухоли в легком сопровождался прорастанием перикарда.

  а б 

  в  г

Рис. 7. Индуцированная 3-4-бензпиреном саркома легких: а - кровенаполнение сосудов, очаговая лимфоцитарная перибронхиальная инфильтрация, Ув.х10; б - крупные очаги кровоизлияния, скопление кровяных телец, Ув.х 100; в - истончение и деструкция межальвеолярных перегородок, очаги дистелектаза, мелкие комплексы клеток круглоклеточной саркомы, Ув.х 10; г - обилие клеток незрелой круглоклеточной саркомы на обширных  участках паренхимы легких, Ув.х100. Окр. гематокс. и эоз.

Таким образом, нам удалось показать, что пол животного влиял на сроки «выхода» опухоли, продолжительность их жизни и гистологические особенности неоплазмы.

Исследование структуры ткани легкого после комплексного электромагнитного воздействия показало выраженный положительный противоопухолевый эффект в виде достоверного увеличения продолжительности жизни животных, снижения количества и размеров опухолевых узлов, различия в сроках «выхода» последних (табл.3). Также были выявлены морфологические признаки, указывающие на сдерживание бурного роста опухоли. К таким признакам относилось усиление реакции со стороны соединительнотканных элементов, прежде всего, клеточного ряда – лимфоцитов, фибробластов, макрофагов, тучных клеток, а также волокнистой стромы.  Наблюдались качественные преобразования, выражающиеся в сохранении и увеличении резервной извилистости волокон, нарастании эластических и ретикулярных по отношению к коллагеновым. Иными словами, можно было констатировать фазу адаптации клеток, ткани и органа в целом к новому функциональному режиму, связанному с ингибированием или подавлением активности процессов злокачественного роста в легком. Несмотря на то, что получить рассасывание опухолевых узлов в большинстве случаев не удалось, стимулированное включение защитных механизмов на уровне тканевых структур легких обеспечивало компенсаторно-приспособительную перестройку дыхательной системы и пролонгировало жизнь животных.

Таблица 3

Основные параметры роста и развития опухолей в легких крыс после применения электромагнитного воздействия

Показатель

Группы животных

Контрольная

(без воздействия)

(n=22)

Опытная (с воздействием)

«без эффекта» (n=10)

«с эффектом» (n=46)

Продолжительность жизни, дни (недели)

35-42 (5-6 недель)

105-112 (15-16 недель)1

315 (45 недель)1,2

Срок «выхода» опухолевых узлов после введения С-45, недели

3-4

5-6 1

5-6 1 или отсутствуют

Количество опухолевых узлов в сроки «выхода», штук

5-7

До 6

4-5 или отсутствуют

Размеры опухолевых узлов в сроки «выхода», см3

0,4±0,1

0,4±0,1

0,2±0,11,2 или отсутствуют

Примечание: 1 – статистически достоверно по отношению к показателям группы без воздействия (р0,05); 2-достоверно по отношению к группе «без эффекта» от примененного воздействия (р0,05).

Различия в сроках «выхода» опухолевых узлов в ткани легкого и продолжительности жизни крыс самцов и самок указывали на гормональную зависимость именно  органа-мишени, так как для традиционного роста саркомы С-45 в подкожной клетчатке такой зависимости не отмечалось.

Анализ гормональной активности ткани легкого с перевитой С-45 показал, что направленность изменений, а именно  снижение  уровня эстрадиола, тестостерона в динамике злокачественного роста не имела половых различий. Однако были отмечены различия в сроках этих изменений. Значительное снижение уровня стероидов с последующей их унификацией у крыс самок было сдвинуто на 4 недели по сравнению с самцами.

Одним из принципиальных половых отличий был резкий подъем на 50,5% уровня пролактина  на фоне снижения уровня прогестерона в 1,4 раза у самцов (рис.8).

Рис. 8. Содержание половых гормонов (нг/г ткани) в ткани легкого самцов в норме и в динамике развития С-45 (* - различия достоверны при р0,05).

Вторым принципиальным отличием, имеющим несомненную половую принадлежность, явилось резкое увеличение - практически в 4 раза относительно нормативных показателей - содержания прогестерона у самок на 5 неделе после перевивки опухоли в легкое (рис.9).

Рис.9. Содержание половых гормонов (нг/г ткани)  в ткани легкого самок в норме и в динамике развития С-45 (* - различия достоверны при р 0,05).

В 1-ю неделю индуцированного 3,4-бензпиреном канцерогенеза в легком наблюдалась несколько иная картина. При достоверно неизменном уровне пролактина в ткани легкого крыс обоего пола содержание всех стероидов у самок увеличивалось, а у самцов – уменьшалось. Разнонаправленные изменения уровня прогестерона в ткани легкого крыс разного пола были общим моментом вне зависимости от индукции злокачественного процесса.

Обнаруженные нами изменения можно объяснить, принимая во внимание существующую «эмбриональную» концепцию злокачественного роста (Меклер Н.Б., 1977).  Вероятно, повышение уровня стероидов у самок отражает способность  женского организма реализовывать «привычную» физиологическую  программу «охраны чужого в своем», т.е. оплодотворенной пролиферирующей яйцеклетки, осуществляемую во время наступления беременности (Н.В.Васильев, 1982). В рамках указанной концепции значительное повышение содержания прогестерона у самок направлено не только на создание благоприятной среды для поддержания развития и роста делящейся клетки, но и на охрану самого «материнского» организма за счет выраженной антипролиферативной активности гормона, длительное время сдерживающей бурный рост неоплазмы. Как было отмечено, появление опухолевых узлов в легких и гибель животных-самок в отличие от самцов, происходит в более поздние сроки после имплантации опухолевого материала или индукции злокачественного процесса. У самцов, в связи с отсутствием подобной программы, сразу после воздействия инициирующего фактора начинается истощение выработки стероидов, что дает возможность прогрессированию злокачественного роста и быстрой гибели животных.

Таблица 4

Некоторые показатели состояния свободнорадикальной системы в ткани опухоли крыс на 1-й неделе развития злокачественного процесса

Показатели

Интактный контроль

С-45

3,4-бензпирен

Витамин Е, ед/г ткани

24,6±1,2

20,3±1,11

15,3±1,11,2

Витамин А, ед/г ткани

9,1±0,6

5,0±0,31

4,2±0,31

Коэф. Е/А

2,7±0,1

3,6±0,21

3,8±0,21

СОД,  ед. акт.

90,6±7,6

99,2±6,4

100,2±6,4

СПА, ед. акт.

14,0±0,9

26,1±1,11

29,6±1,11

Коэф СОД/СПА

6,5±0,3

3,8±0,21

3,4±0,31

Примечание. 1 – достоверно относительно значений у интактных животных (р0,01); 2 – достоверно относительно значений при развитии С-45 (р0,01)

Начиная с 1-й недели развития злокачественного процесса, наряду с морфологическими признаками, нарушением местного гормонального гомеостаза, обнаружено прогрессивное стрессорное состояние в главных системах адаптации, а именно, разбалансировка систем «ПОЛ-антиоксиданты» и «протеазы-ингибиторы», что легло в основу формирования «опухолевого поля» и являлось общим моментом развития перевивной и  индуцированной опухолей в легком (табл.4). В этот срок исследования найдено снижение уровня витаминов Е и А, нарушение работы каскада антиокислительных ферментов в ткани опухоли, выражающееся в снижении коэффициента СОД/СПА почти в 2 раза с накоплением продуктов ПОЛ – диеновых конъюгатов (в среднем 123,9±12,1 в ткани опухоли против 71,4±4,6 нМ/г тк у интактных животных)  и малонового диальдегида (в ткани опухоли 55,6±2,3 нМ/г тк против 38,8±2,1 в контроле). В динамике роста опухолей отмечалось последующее прогрессирование дисбаланса в системе «ПОЛ- антиоксиданты». 

В перифокальной зоне злокачественной опухоли легкого также было отмечено нарушение соотношения в системах  «ПОЛ – антиоксиданты» и «протеазы-ингибиторы» практически такое же, как и в ткани самой злокачественной опухоли. Так, было снижено относительно интактной ткани легкого содержание витаминов Е и А на 37,6% и в 1,8 раза соответственно, а сумммарная пероксидазная активность  повышена в 2,7 раза. Это, вероятно, и создавало условия для роста и развития опухолевых метастатических отсевов, найденных при морфологическом исследовании ткани перифокальной зоны.

Рис. 10. Некоторые показатели состояния гидролитических процессов ткани опухоли при злокачественном росте С-45 в легком крыс обоего пола. (Значение показателей у интактных животных принято за 100%. Сокращения в тексте).

Изменение показателей активности гидролитических процессов организма животных при развитии и росте перевивной и  индуцированной опухолей в легком имело половые различия и заключалось в сроках активации систем, участвующих в неоангиогенезе (фибринолитическая система), пролиферации ткани и ее морфогенезе (калликреин-кининовая система): у самок крыс дестабилизация соотношения компонентов указанных систем наступала позже и коррелировала со сроками появления опухолевых узлов (рис. 10). 

Патогенетическая значимость диссонанса в изученных метаболических системах была доказана не только сроками их обнаружения, но и экспериментальной  противоопухолевой терапией в виде АГХТ или сочетанного электромагнитного воздействия. Под влиянием указанных видов экспериментальной противоопухолевой терапии происходила нормализация процессов свободнорадикального окисления, заключающаяся в подавлении образования продуктов на фоне активизации обоих звеньев антиоксидантной системы и снижение уровня гидролаз на фоне повышения активности ингибиторов.

Таблица 5

Некоторые показатели активности свободнорадикальной и гидролити-

ческой систем ткани перифокальной зоны саркомы С-45 до и после  химиотерапии

Показатель

До лечения,

n=15

Стандартная ХТ,

n=15

Экспериментальная ХТ,

n=15

Интактная ткань легкого,

n=20

Витамин А, ед/г тк

5,0±0,3

5,1±0,4

15,2±2,01

9,1±1,02

Витамин Е,  ед/г тк

11,6±1,1

11,7±2,1

11,7±1,9

18,6±1,92

СОД, ед.акт

41,3±3,9

9,5±1,91

80,2±9,11

90,6±5,32

СПА, ед.акт

37,6±2,9

8,0±0,91

18,0±2,11

14,0±1,22

ДК, нМ/г тк

37,1±2,9

35,9±3,4

75,8±6,21

71,4±3,92

МДА, нМ/г тк

12,1±2,4

16,1±2,1

39,8±4,31

38,8±2.62

Катепсин Д, нМ/г.тк

262±22,3

275±10,12

360± 17,61

352±14,91

КСИ, мг.трипс./г.тк

1,1±0,2

2,1±0,21,2

3,0±0,41,2

4,0±0,31

Кат.Д/КСИ

238±18,3

131,2±5,21,2

120±10,91,2

89,1±5,61

Кислая фосфатаза, ед

69±6,6

63±5,82

60,5±5,32

5,0±0,41

Щелочная фосфатаза, ед

47±4,2

52±4,72

98±8,11,2

16,0±1,41

Коэф КФ/ЩФ

1,6±0,1

1,2±0,11,2

0,6±0,031,2

0,3±0,021

Примечание. 1 – достоверно относительно значений в ткани до лечения (р0,01);

2 – достоверно относительно значений в интактной ткани легкого (р0,01)

Особо необходимо отметить влияние АГХТ на метаболизм перифокальной зоны злокачественной опухоли (табл.5). В отличие от стандартного экспериментального химиотерапевтического воздействия такой вид биохимиотерапии приводил к нормализации метаболического состояния перифокальной зоны неоплазмы, что может обусловить длительное сосуществование органа и находящейся в нем злокачественной опухоли. 

Выявленные нами серьезные нарушения в функционировании метаболических систем легкого с растущей в его ткани опухолью, обусловило необходимость исследования показателей крови как отражение процессов всего организма с опухолевой болезнью. Это связано не только с обнаружением патогномоничных признаков злокачественного роста, но также с поиском прогностических критериев для ранней диагностики и оценки эффективности применяемого лечения.

Таблица 6

Показатели состояния свободнорадикальной системы крови крыс на 1-й неделе развития злокачественного процесса

Показатели

Интактный контроль, n=30

С-45,

n=50

3,4-бензпирен,

n=50

Витамин Е, ед/мл

1,1±0,01

0,7±0,031

0,59±0,021

Витамин А, ед/мл

0,96±0,02

0,52±0,051

0,3±0,011,2

Коэф. Е/А

1,0±0,02

1,5±0,11

2,0±0,41

СОД,  ед/мл

1134±11,3

166,0±3,21

139,0±7,61,2

СПА, ед/мл

9,9±0,3

25,4±0,21

22,2±3,11,2

Коэф СОД/СПА

114,5±7,3

30,7±2,11

6,3±0,41,2

МДА, нМ/мл

сыворотка

129,1±1,3

133,4±2,0

138,8±1,11

мембраны эритроцитов

6,5±0,4

9,5±0,51

13,8±0,81,2

Примечание. 1 – достоверно относительно значений у интактных животных (р0,01); 2 – достоверно относительно значений при развитии С-45 (р0,01)

Оценивая состояние свободнорадикальных процессов в крови крыс, мы установили, что в течение 1-й недели после перевивки опухоли и введения канцерогена мембраны клеток фактически лишались антиоксидантной защиты и становились подверженными действию повреждающих факторов. У животных значительно снизилось количество витаминов А и Е в крови с накоплением как в сыворотке  так и в мембранах эритроцитов продукта ПОЛ – МДА, резко возросла СПА и уменьшилась активность  СОД (табл.6).

Нарушения в системе «ПОЛ-антиоксиданты» в крови экспериментальных животных при росте злокачественной опухоли в легком нашло свое подтверждение и в клинике. Так было показано, что эритроциты, выделенные из периферической крови и крови из сосудов легкого больных раком легкого, находились в состоянии пероксидазного стресса, приводящего к дезадаптации организма на субклеточном уровне. Об этом свидетельствовало накопление в них первичных и конечных продуктов ПОЛ (увеличение содержания ДК и МДА в среднем в 3,2 раза и на 39% соответственно), а также снижение активности обоих звеньев антиоксидантной защиты (витаминов Е и А в 3 и 1,9 раза соответственно, и СОД – на 52,3%), т.е. нарушение динамического равновесия в системе ПОЛ-антиоксиданты.

Рис. 11. Некоторые показатели гидролитических процессов крови крыс на 1-й неделе развития злокачественного процесса в легких. (Значение показателей у интактных животных принято за 100%. Сокращения в тексте).

Исследования состояния системы протеолиза крови крыс позволили заключить, что при моделировании неопластического процесса нарушался баланс в метаболизме важнейших составляющих единой полифункциональной системы крови – кининовой и фибринолитической (рис.11). Проявлением этого нарушения явилось гиперпродукция ключевых ферментов указанных систем - калликреина и плазмина на фоне снижения активности их ингибиторов, что очевидно, свидетельствовало об  ответной системной реакции организма на воздействие инициирующего фактора, направленной на предотвращение процессов инвазии опухолевых клеток.

Особо интересные факты были выявлены при исследовании состояния гормонального гомеостаза крови. Было показано, что уровень пролактина, тестостерона и эстрадиола в первую неделю  после перевивки С-45 или индукции канцерогенеза статистически не изменялся относительно показателей у интактных животных, хотя отмечалась тенденция к некоторому снижению стероидных гормонов (рис.12). 

Рис. 12. Уровень половых гормонов в крови крыс на 1-й неделе развития злокачественного процесса. (За 100% принято значение показателей у интактных животных, * - различия достоверны при р 0,05).

Принципиальные половые различия были обнаружены при исследовании уровня прогестерона в крови в этом сроке. Отмечалось его повышение по сравнению с интактными животными  у самок крыс в 3,5 раза, и снижение у самцов на 39,5%.  Как отмечалось ранее, подобные изменения уровня изученных гормонов были обнаружены и в ткани опухоли легкого крыс. Однако уровень прогестерона в ткани легкого у самок значительно возрастал только к 5 неделе исследования, что может свидетельствовать о первичности изменений этого гормона в крови как ответ на стрессорное воздействие и последующем «захвате» его тканью легкого для осуществления антипролиферативной защиты. Следует отметить, что уровень пролактина в крови, в отличие от показателя в ткани легкого в этом сроке исследования, значимо не изменялся, что наталкивает на мысль о локальном образовании его тканью легкого или самой опухолью в процессе ее формирования и развития.

С позиций кортико-висцеральной теории патологии, очевидно, что изучение патогенетических механизмов развития опухолевой болезни, невозможно без  выяснения роли отдельных звеньев гомеостаза на уровне регуляторных и реализующих систем. Доказано, что все процессы, протекающие на органном, клеточном, и молекулярном уровнях, находятся под регулирующим влиянием головного мозга, осуществляющего поддержание и интегрирование перестроек гомеостаза организма как в физиологических, так и патологических состояниях (Schwartz et al., 2000).

В связи с этим нами было проведено исследование метаболического состояния ткани гипофиза крыс,  с растущей в ткани легкого опухолью. Показано, что в первую неделю злокачественного роста в легком в ткани гипофиза крыс значительно возрастала антирадикальная активность, приводящая к падению ниже нормального уровня концентрации ДК. Содержание витаминов А и Е значительно увеличивалось, и отмечалось снижение их соотношения. Компенсаторно увеличивалась СПА, что характеризует стрессорное состояние организма. Каталитическая активность СОД при этом не изменилась, однако коэффициент отношения СОД/СПА был снижен (табл.7). Отмечено увеличение уровня одного из конечных продуктов ПОЛ - МДА.

Таблица 7

Состояние свободнорадикальной системы в ткани гипофиза крыс на ранних этапах развития в легком злокачественной опухоли

Показатели

Интактный контроль,

(n=30)

С-45,

(n=40)

3,4-бензпирен,

(n=40)

Витамин Е, ед.

4,6±0,2

7,4±0,51

8,2±0,61

Витамин А, ед.

1,2±0,3

2,3±0,21

2,7±0,11

Коэф Е/А

4,0±0,2

3,2±0,41

3,0±0,11

СОД, ед/г ткани

144,2±9,6

126,8±11,7

132,8±9,9

СПА, ед/г ткани

3,3±0,2

5,5±0,11

5,2±0,41

Коэф СОД/СПА

43,7±3,5

23,1±5,41

25,5±2,11

МДА, нМ/г ткани

4,1±0,4

8,5±0,51

8,9±0,41

ДК, нМ/г ткани

10,6±1,1

7,4±0,41

9,7±0,3

Примечание: 1 - различия достоверны по сравнению с контролем (при р 0,05),

2 - различия достоверны по сравнению с предыдущим сроком исследования (при р 0,05).

В ткани гипофиза крыс уже на 1-й неделе развития и роста перевивной и  индуцированной опухолей в легком обнаружены выраженные нарушения нейрогормональных процессов, которые имели ряд общих и отличных для самцов и самок признаков (рис.13).

САМЦЫ  САМКИ

Рис. 13. Содержание гормонов и дофамина в ткани гипофиза у самцов и самок в норме и в динамике развития С-45 в легких (* -различия достоверны при р0,05).

Принципиальным половым различием при перевивной опухоли было увеличение уровня пролактина на фоне снижения содержания дофамина у самцов и снижение пролактина на фоне повышения уровня дофамина у самок, а также разнонаправленное соотношение гонадотропных гормонов ЛГ и ФСГ (рис.14 А,Б). 

  А

 

  Б

Рис.14. Содержание лютеинизирующего гормона, МЕ/г  (А) и фолликулостимулирующего гормона, МЕ/г (Б) в ткани гипофиза самцов и самок крыс в  норме и в динамике развития экспериментальных злокачественных опухолей в легких.

(*- различия достоверны относительно показателей интактных животных при р0,05; ** -  различия достоверны относительно показателей предыдущего срока исследования при р0,05).

При индуцированном канцерогенезе  повышение пролактина в первую неделю было общим моментом, и происходило на фоне однонаправленной реакции дофамина. Содержание дофамина в ткани гипофиза крыс обоего пола  снижалось. Повышение уровня адренокортикотропного гормона  уже через одну неделю после воспроизведения злокачественного процесса вне зависимости от его вида также было общим механизмом для самцов и самок.

Патогенетическая роль найденных нарушений была доказана при экспериментальной терапии путем направленного электромагнитного воздействия на орган-мишень (СКЭНАР) и проекцию гипофиза (СНЧМП). Так уже через 3 недели после перевивки опухоли в гипофизе крыс-самцов, положительно ответивших на противоопухолевое воздействие (см. табл. 3), уровень пролактина повышался  относительно показателя у интактных животных только на 32,4%, против, более чем двукратного возрастания в группе животных «без эффекта» (рис.15).

Рис.15. Содержание пролактина (мМЕ/г) в ткани гипофиза крыс в зависимости от эффективности экспериментальной терапии перевитой в легкое С-45 (* - различия достоверны относительно показателей интактных животных при р0,05).

Не обнаружено в этот срок достоверного изменения по сравнению с нормативными значениями содержания ЛГ в гипофизе крыс-самцов с выраженным эффектом, тогда как в группе с противоположным эффектом, также как и в контрольной группе, этот показатель превосходил нормативные значения на 42,9 и 73,7% соответственно (рис.16).

Рис. 16. Содержание лютеинизирующего гормона (МЕ/г) в ткани гипофиза крыс в зависимости от эффективности экспериментальной терапии перевитой в легкое С-45(* - различия достоверны относительно показателей интактных животных при р0,05).

Рис. 17. Содержание фолликулостимулирующего гормона (МЕ/л) в ткани гипофиза крыс в зависимости от эффективности экспериментальной терапии перевитой в легкое С-45 (* - различия достоверны относительно показателей интактных животных при р0,05). 

Уровень ФСГ в гипофизе крыс группы «с эффектом» через 3 недели снижался на 19,3% против 64,6% в контрольной группе и 40,4% в группе «без эффекта» (рис.17).

Используя знания, полученные в эксперименте, мы изучили содержание пролактина в ткани злокачественных опухолей людей для возможности раннего выявления генерализации рака легкого.

Были исследованы 17 больных раком легкого мужчин, находившихся на лечении в торако-пластическом отделении РНИОИ и подвергнутых радикальному оперативному вмешательству в объеме пульмонэктомии (табл.8).

Обнаружено, что у 6 из 17 больных в ткани злокачественной опухоли легкого содержание пролактина было повышено в 1,5 раза по сравнению с уровнем показателя,  определенного в интактной ткани легкого. У этих больных в течение ближайших 6 месяцев (от 4 до 6 месяцев) отмечено развитие метастазов в отдален­ных органах: у 3-х больных – в головном мозге, у  2-х больных – в позвоночнике и у одного больного – в печени.

Таблица 8

Содержание пролактина в ткани опухоли и в интактной  ткани  больных раком легкого

Показатель

Без отдаленных метастазов

(n=11)

Метастазы возникли в течение 6 месяцев

(n=6)

Интактная ткань легкого

(n=21)

Пролактин

(нг/г ткани)

298,7± 21,5

510,6±70,11

308,6±27,8

Примечание: 1- достоверно относительно показателя в интактной ткани (р0,05)

Подтверждением роли прогестерона, как патогномоничного фактора канцерогенеза,  влияющего на рост и метастазирование злокачественных опухолей легкого, является  обнаруженные различия уровня данного показателя в ткани опухоли больных раком легкого женщин. Были обследованы 20 больных женщин, находившихся на лечении в торако-пластическом отделении РНИОИ и подвергнутых оперативному лечению по поводу центрального или периферического рака легкого (табл.9).

Установлено, что у 5 из 20  больных содержание прогестерона в ткани опухоли было снижено в 5 и более раз относительно показателя, определенного в интактной ткани, что сопровождалось развитием у этих больных метастазов в головной мозг в течение ближайших 8 месяцев (от 3 до 8 месяцев).

Таблица 9

Содержание прогестерона в ткани опухоли и в интактной  ткани  больных раком легкого женщин

Показатель

Без отдаленных метастазов

(n=15)

Метастазы возникли в течение 8 месяцев

(n=5)

Интактная ткань легкого

(n=21)

Прогестерон

(нг/г ткани)

245,7± 18,5

35,2±4,11

258,2±21,5

Примечание: 1- достоверно относительно показателя в интактной ткани (р0,05)

Далее мы изучили уровень пролактина и половых стероидов  в крови больных центральным и периферическим раком легкого мужчин -20 чел. и женщин -10 чел. (табл.10). Все женщины находились в менопаузальном возрасте не менее 5 лет.

Таблица 10

Содержание гормонов в крови мужчин и женщин больных раком легкого

Показатели

Мужчины

Женщины

Здоровые доноры

Больные

раком легкого

Здоровые доноры

Больные

раком легкого

Пролактин, мМЕ/л

183,1±12,2

309,7±19,21

139,1±9,6

206,6±10,41

Прогестерон, нМ/л

2,0±0,3

1,4±0,1

2,5±0,3

4,7±0,21

Тестостерон, нМ/л

15,0±0,6

11,9±0,51

1,1±0,05

2,6±0,21

Эстрадиол, пМ/л

169,1±10,4

329±20,61

213±14,2

261,5±20,1

Примечание. 1 – достоверно относительно значений здоровых доноров (р0,01).

Были установлены половые различия в изменении изученных показателей. Так, у женщин больных раком легкого отмечалось  повышение уровня всех стероидных гормонов: прогестерона -  в 1,9 раза, тестостерона – в 2,4 раза при  незначительном повышении эстрадиола – на 22,5%.

У мужчин, напротив, происходило снижение уровня прогестерона и тестостерона на 30 и 26,1 % соответственно на фоне значительного увеличения почти в 2 раза содержания эстрадиола. Общим моментом характерным для больных обоего пола был рост уровня пролактина относительно показателей: у мужчин - в 1,7 раза, у женщин – в 1,5 раза. Обнаруженные в крови больных раком легкого изменения гормонального статуса в целом отражают картину метаболических нарушений в ткани злокачественной опухоли и коррелируют с показателями в крови животных при экспериментальном индуцированном канцерогенезе.

Таким образом, показаны конкретные нарушения основных соподчиненных систем организма-опухоленосителя и подтверждена их патогенетическая значимость в условиях первичного и вторичного злокачественного процесса в легком,  носящие гендерный характер. Знания, полученные в эксперименте, могут лечь в основу разработки новых подходов к диагностике и лечению рака легкого  в онкологической клинике.

ВЫВОДЫ

1. Создана модель индуцированного роста злокачественной опухоли легкого крыс, которая  воспроизводится путем внутривенного введения 3,4-бензпирена. Латентный период выхода опухоли и продолжительность жизни животных имеют выраженную половую зависимость: у самцов 2,5-3 месяца и 6,3-7,5 месяцев соответственно, у самок 5,5-6 месяцев и  19,3- 21 месяц соответственно, т.е. продолжительность жизни самок в среднем в 3,5  раза больше (р 0,01). Установлен гистологический тип индуцированной в легком злокачественной опухоли, соответствующей незрелой форме круглоклеточной саркомы. 

2. В 1-ю неделю индуцированного в легком канцерогенеза найдены различия гормонального статуса легкого, зависящие от пола животного: в ткани самок происходило увеличение стероидных гормонов – прогестерона в 1,8 раза, тестостерона в 4,8 раза и эстрадиола в 2 раза, в ткани легкого самцов, напротив, уровень стероидов снижался – прогестерона в 3,2 раза, тестостерона в 2 раза и эстрадиола в 2,3 раза. Не обнаружено в этот срок изменения уровня пролактина вне зависимости от пола животных.

3. Модель перевивной злокачественной опухоли легкого крыс, воспроизводимая путем внутривенного введения опухолевой взвеси клеток саркомы 45, имеет выраженную половую зависимость по основным показателям: латентный период выхода опухоли и продолжительность жизни самцов равны соответственно 3-4 недели  и 5-6 недель,  самок 5 -6 недель и  25 - 27 недель соответственно  (р 0,01).

4. Первичные механизмы, определяющие реализацию роста перевитой в  легкое С-45, не имеют половых различий и заключаются в формировании макроскопически и морфологически выявляемого кровоизлияния, снижении защитного потенциала эндотелиальной выстилки капилляров, как биохимически активного поля, способствующего выходу малигнизированных клеток и образованию опухолевых конгломератов. Терминальная стадия развития опухоли у самцов по времени совпадает с периодом появления опухолевых узлов, мобилизации тканевых и клеточных элементов сосудистых и респираторных структур у самок.

5. Анализ гормональной активности ткани легкого в динамике роста перевитой опухоли показал, что направленность изменений уровня пролактина, эстрадиола, тестостерона не имеет половых различий, патогенетическое значение имеет срок этих изменений. Значительное снижение уровня стероидов с последующей их унификацией у крыс самок было сдвинуто на 4 недели по сравнению с самцами, а  принципиальным отличием, имеющим несомненную половую принадлежность, явилось резкое увеличение практически в 4 раза относительно нормативных показателей содержания прогестерона у самок на 5 неделе после перевивки опухоли в легкое. В крови также выявлены принципиальные половые различия уровня прогестерона: у самок обнаружено повышение в 3,5 раза, у самцов, наоборот, - снижение на 39,5 % по сравнению с фоном.

6. Общим моментом развития перевивной и  индуцированной опухолей в легком, является реакция свободнорадикальной системы: первая  неделя после воспроизведения злокачественного процесса характеризуется угнетением звеньев антиоксидантной системы организма самцов и самок крыс, заключающимся в снижении уровня витаминов Е и А, активности антиокислительных ферментов в тканях и крови животных с накоплением продуктов ПОЛ – диеновых конъюгатов и малонового диальдегида, и последующим прогрессированием дисбаланса в системе «ПОЛ- антиоксиданты» в динамике роста опухолей. 

7. Динамика показателей активности гидролитических процессов организма животных при развитии и росте перевивной и  индуцированной опухолей в легком имела половые различия и заключалась в сроках активации систем, участвующих в неоангиогенезе (фибринолитическая система), пролиферации ткани и ее морфогенезе (калликреин-кининовая система): у самок крыс дестабилизация соотношения компонентов указанных систем наступала позже и коррелировала со сроками появления опухолевых узлов. 

8. Развитие и рост перевивной и  индуцированной опухолей в легком сопровождались нарушениями нейрогормональных процессов в ткани гипофиза. Принципиальным гендерным различием при перевивной опухоли было увеличение уровня пролактина на фоне снижения содержания дофамина у самцов и снижение пролактина на фоне повышения дофамина у самок в ранние сроки воспроизведения злокачественного процесса, а также разнонаправленное соотношение гонадотропных гормонов лютеинизирующего и фолликулостимулирующего гормонов. При индуцированном канцерогенезе  повышение пролактина на фоне падения уровня дофамина и повышение уровня адренокортикотропного гормона  в первую неделю было общим моментом развития патологической реакции в организме.

9. В периферической крови экспериментальных животных на 1-й неделе развития злокачественного процесса в легких обнаружена разбалансировка в системе «ПОЛ-антиоксиданты» со снижением активности антиокислительных ферментов, и в гидролитических системах с гиперпродукцией основных ферментов протеолиза не уравновешенных активностью их ингибиторов. 

10. Изменения состояния свободнорадикальных процессов в крови экспериментальных животных при развитии злокачественного процесса в легком подтверждены в клинике: эритроциты, выделенные из периферической крови и крови из сосудов легкого больных раком легкого, находились в состоянии пероксидазного стресса, заключающегося в сдвиге системы «ПОЛ-антиоксиданты» в сторону накопления продуктов пероксидации.

11. Экспериментальная противоопухолевая терапия  в виде аутогемохимиотерапии или сочетанном применении низкоинтенсивного магнитного поля со СКЭНАР-воздействием подтвердили патогенетическую значимость найденных нарушений метаболизма организма животных при развитии и росте экспериментальных опухолей в легком и  регулирующее значение центральной нервной системы и, в частности, гипофиза: ликвидация дисбаланса компонентов основных метаболических систем явилась универсальным механизмом реализации положительного эффекта при противоопухолевых воздействиях.

12. Патогенетическая значимость нарушения некоторых звеньев метаболизма организма в условиях злокачественного роста подтверждена в онкологической клинике: повышение уровня пролактина в ткани опухоли легкого позволило прогнозировать раннюю генерализацию процесса у мужчин, больных раком легкого, а снижение уровня прогестерона в ткани опухоли позволило прогнозировать возникновение церебральных метастазов у женщин, больных раком легкого. Направленность изменения исследуемых гормонов в крови больных полностью отражало состояние гормонального гомеостаза ткани злокачественной опухоли.

Практические рекомендации

  1. Больным раком легкого мужчинам с целью выявления ранней генерализации злокачественного процесса целесообразно определение уровня пролактина в ткани опухоли после пневмонэктомий.
  2. Целесообразно определение после проведенной пневмонэктомии содержания прогестерона в ткани опухоли больных раком легких женщин для прогнозирования церебральных метастазов и принятия своевременных превентивных мер.
  3. Для изучения патогенеза рака легкого, особенностей метастазирования, влияния различных противоопухолевых воздействий, эффективности проводимого лечения  целесообразно использовать предложенные модели воспроизведения злокачественного процесса у экспериментальных животных.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

  1. Комарова Е.Ф. Состояние гормонального гомеостаза и аминэргической системы гипофиза и легкого самцов крыс в ранние сроки после перевивки злокачественной опухоли / Ю.С. Сидоренко, Е.М. Франциянц, А.И. Шихлярова, Е.Ф. Комарова, Ю.А. Погорелова, О.Н. Кошелева, Е.М. Непомнящая, Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина // Известия ВУЗов. Северо-Кавказский регион. Естественные науки. 2009. №3. С.90-93.
  2. Комарова Е.Ф. Показатели гормонального гомеостаза легкого и гипофиза крыс обоего пола в динамике роста злокачественной опухоли. Является ли рак легкого гормонозависимым образованием? / Ю.С. Сидоренко, Е.М. Франциянц, А.И. Шихлярова, Е.Ф. Комарова, Ю.А. Погорелова, О.Н. Кошелева, О.Ю Бабенков, Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина // Сибирский онкологический журнал, №4 (34). 2009. С.36-41.
  3. Комарова Е.Ф. Экспериментальная  химиотерапия лимфосаркомы Плисса легкого / Ю.С. Сидоренко, Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина, Ю.А. Погорелова, Г.З. Сергостьянц // Российский биотерапевтический журнал. 2009. №2.Т.8. С.17.
  4. Комарова Е.Ф. Гидролитическая активность саркомы С-45, растущей в ткани легкого, после экспериментальной химиотерапии / Ю.С. Сидоренко, Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина, Ю.А. Погорелова, Г.З. Сергостьянц // Российский биотерапевтический журнал. 2009. №2.Т.8. С.16. 
  5. Комарова Е.Ф. Экспериментальная химиотерапия саркомы С-45, растущей в ткани легкого / Ю.С. Сидоренко, Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина, Ю.А. Погорелова, Г.З. Сергостьянц // Российский биотерапевтический журнал. 2009. №2.Т.8. С.16. 
  6. Комарова Е.Ф. Состояние свободнорадикальных процессов саркомы С-45, растущей в ткани легкого, после различных видов экспериментальной химиотерапии / Ю.С. Сидоренко, Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина, Ю.А. Погорелова, Г.З. Сергостьянц // Российский биотерапевтический журнал. 2009. №2.Т.8. С.17. 
  7. Комарова Е.Ф. Гидролитическая активность перифокальной зоны саркомы С-45, растущей в ткани легкого, после различных видов экспериментальной химиотерапии / Ю.С. Сидоренко, Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина, Ю.А. Погорелова, Г.З. Сергостьянц // Российский биотерапевтический журнал. 2009. №2.Т.8. С.15. 
  8. Комарова Е.Ф. Состояние свободнорадикальных процессов перифокальной зоны саркомы С-45, растущей в ткани легкого,  после различных видов экспериментальной химиотерапии / Ю.С. Сидоренко, Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина, Ю.А. Погорелова, Г.З. Сергостьянц // Российский биотерапевтический журнал. 2009. №2.Т.8. С.17.
  9. Комарова Е.Ф. Половые различия показателей гормонального статуса ткани легкого и гипофиза крыс в динамике роста перевивной опухоли / О.Ю. Бабенков, Е.Ф. Комарова, Ю.А.Погорелова, С.Д. Дмитриева, Е.М. Франциянц, О.Н. Кошелева // Сибирский онкологический журнал. 2009. (приложение №1). С.23-24.
  10. Комарова Е.Ф. Роль изменения гормонального статуса и аминэргической системы гипофиза крыс в формировании «опухолевого поля в ранние сроки перевивки опухоли в легкое / О.Н. Кошелева, Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, Ю.А. Погорелова // Сибирский онкологический журнал. 2009. (приложение №1). С.106-107.
  11. Комарова Е.Ф. Морфо-метаболические изменения в легком самцов-крыс в динамике злокачественного роста перевитой опухоли / А.А. Логвиненко, О.Н. Кошелева, Е.М. Франциянц, А.И. Шихлярова, Е.М. Непомнящая, Е.Ф. Комарова, Л.С. Козлова, Ю.А. Погорелова // Сибирский онкологический журнал. 2009. (приложение №1). С.124-125.
  12. Комарова Е.Ф. Влияние электромагнитного воздействия на содержание некоторых гормонов и пролактина в ткани легкого и гипофиза у крыс с перевивной опухолью С-45 / О.Н. Кошелева, Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, Ю.А. Погорелова, А.И. Шихлярова, Д.В. Леонтьева // Сибирский онкологический журнал. 2009. (приложение №1).  С.104-106.
  13. Комарова Е.Ф. Морфологические изменения в легком самцов-крыс в динамике злокачественного роста перевитой опухоли / Е.М.Франциянц, А.И.Шихлярова, Е.Ф. Комарова, Е.М. Непомнящая. // Материалы Всероссийской научной конференции «Современные проблемы общей и частной патологической анатомии». Санкт-Петербург, 2009. С.144-145.
  14. Комарова Е.Ф. Влияние электромагнитного воздействия на состояние гидролитической системы легкого самцов в динамике развития перевитой опухоли С-45 / Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина, Ю.А. Погорелова // Сибирский онкологический журнал. 2009. (приложение №2). С.101-102.
  15. Комарова Е.Ф. Роль изменения показателей гормонального гомеостаза легкого и гипофиза самцов крыс в динамике развития перевитой злокачественной опухоли / О.Н. Кошелева, Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, Ю.А. Погорелова, Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина, О.Ю.Бабенков // Сибирский онкологический журнал. 2009 (приложение №2). С.108-109.
  16. Комарова Е.Ф. Показатели соотношения кортизола/кортизона как прогноз эффективности лечения рака желудка / М.А. Аверин, Е.М. Франциянц, Д.А. Харагезов, Е.Ф. Комарова, М.М. Сальникова // Сибирский онкологический журнал. 2010. (приложение №1). С.11.
  17. Комарова Е.Ф. Активность свободнорадикальных процессов в нейтрофилах крови больных раком легкого / П.А. Анистратов, Е.М. Франциянц, Г.З. Сергостьянц, Е.Ф. Комарова, Ю.А. Погорелова // Сибирский онкологический журнал. 2010. (приложение №1).  С.16. 
  18. Комарова Е.Ф. Некоторые показатели гидролитических процессов в лимфоцитах крови больных раком легкого / О.Ю. Бабенков, Е.М. Франциянц, Г.З. Сергостьянц, Е.Ф. Комарова, Ю.А. Погорелова // Сибирский онкологический журнал.  2010. (приложение №1). С.21.
  19. Комарова Е.Ф. Состояние системы фибринолиза в сыворотке крыс с перевитой опухолью С-45 / А.А. Логвиненко, Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, Л.С. Козлова // Сибирский онкологический журнал.  2010. (приложение №1). С.70.
  20. Комарова Е.Ф. Состояние свободнорадикальных процессов в лимфоцитах больных раком легкого / К.С. Саркисьянц, Е.М. Франциянц, Г.З. Сергостьянц, Е.Ф. Комарова, Ю.А. Погорелова. // Сибирский онкологический журнал.  2010. (приложение №1).  С.91.
  21. Комарова Е.Ф. Состояние свободнорадикальной системы ткани легкого в динамике развития перевитой саркомы 45 / Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина, Ю.А. Погорелова // Мат. научно-практической конференции с международным участием «Совершенствование медицинской помощи при онкологических заболеваниях, включая актуальные проблемы детской гематологии и онкологии. Национальная онкологическая программа.» VII съезд онкологов России.  2009. Том 1. С. 67.
  22. Комарова Е.Ф. Состояние гидролитической системы ткани легкого в динамике развития перевитой саркомы 45 / Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, Л.Д. Ткаля, Н.Д.Черярина, Ю.А. Погорелова // Мат.научно-практической конференции с международным участием «Совершенствование медицинской помощи при онкологических заболеваниях, включая актуальные проблемы детской гематологии и онкологии. Национальная онкологическая программа.» VII съезд онкологов России.  2009. Том 1. С. 76.
  23. Комарова Е.Ф. Показатели гормонального звекна гомеостаза легкого и гипофиза крыс обоего пола в динамике роста перевитой в легкое С-45 / Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, Л.Д. Ткаля, О.Н. Кошелева, Ю.А. Погорелова. // Мат.научно-практической конференции с международным участием «Совершенствование медицинской помощи при онкологических заболеваниях, включая актуальные проблемы детской гематологии и онкологии. Национальная онкологическая программа.» VII съезд онкологов России.  2009. Том 1. С. 83.
  24. Комарова Е.Ф. Морфометаболические предпосылки возникновения и роста злокачественной опухоли в легком / Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина, Ю.А. Погорелова // Мат.научно-практической конференции с международным участием «Совершенствование медицинской помощи при онкологических заболеваниях, включая актуальные проблемы детской гематологии и онкологии. Национальная онкологическая программа.» VII съезд онкологов России.  2009. Том 1. С. 259.
  25. Комарова Е.Ф. Роль половых гормонов и пролактина в реализации центрального и периферического влияния электромагнитных воздействий на рост опухоли легких у крыс / Ю.С. Сидоренко, Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, Ю.А. Погорелова, А.И. Шихлярова, Д.В. Леонтьева, О.Н. Кошелева, Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина // Вестник Южного научного центра РАН. 2009. том 5. №4. С. 86-90.
  26. Комарова Е.Ф. Роль изменения показателей гормонального гомеостаза легкого и гипофиза самцов крыс в динамике развития перевитой злокачественной опухоли / А.И. Шихлярова, Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, Ю.А. Погорелова, Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина // «Сибирское медицинское обозрение». 2010. №1. С.29-32.
  27. Комарова Е.Ф. Роль компонентов фибринолитической и калликреин-кининовой системы легкого самцов крыс в динамике развития перевитой опухоли С-45 / Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, Ю.А. Погорелова, А.И. Шихлярова, Л.С. Козлова, Е.М. Непомнящая, Н.Д. Черярина, Л.Д. Ткаля //Вестник Южного научного центра РАН. 2010. том 6. №2. С. 81-85.
  28. Комарова Е.Ф. Индуцированные злокачественные опухоли в легком крыс и антиканцерогенное влияние сверхнизкочастотного магнитного поля / Ю.С. Сидоренко, Е.М. Франциянц, А.И. Шихлярова, Е.М. Непомнящая, Е.Ф. Комарова, Ю.А. Погорелова, Л.Д. Ткаля // Известия ВУЗов. Северо-Кавказский регион. Естественные науки. 2010. №2. С.89-91.
  29. Комарова Е.Ф. Есть ли объяснение возникновению рецидивов рака в культе желудка? / Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, О.В. Шляхова, С.Д. Дмитриева, В.М. Легостаев // Сибирский онкологический журнал. 2010. (приложение №2). С.50-51.
  30. Комарова Е.Ф. Кининовая и фибринолитическая системы крови крыс в динамике формирования перевитой опухоли с-45 / Е.М. Франциянц,  Л.С. Козлова, Е.Ф. Комарова, Е.М. Непомнящая // Известия ВУЗов. Северо-Кавказский регион. Естественные науки. 2010. №3. С.78-80.
  31. Комарова Е.Ф. Внутриорганная инкубация цитостатика в сочетании с ишемией селезенки как метод химиоиммунокоррекции организма-опухоленосителя / Ю.С.Сидоренко, Ю.А. Геворкян, Е.М. Франциянц, Д.А. Харагезов, Е.Ф. Комарова, М.М. Сальникова // Мат. 17-й Межрегиональной научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы клинической онкологии и преканцерогенеза». 2010. С.91-92.
  32. Комарова Е.Ф. Влияние химиоиммунокоррекции организма-опухоленосителя на фоне локального стресс-воздействия на некоторые метаболические показатели внутриорганной крови / Ю.С. Сидоренко, Ю.А. Геворкян, Е.М. Франциянц, Д.А. Харагезов, Е.Ф. Комарова, М.М. Сальникова // Мат. 17-й Межрегиональной научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы клинической онкологии и преканцерогенеза».  2010. С.92-93.
  33. Комарова Е.Ф. Влияние карбоплатина на трипсиноподобную и ингибиторную активность в перифокальной зоне глиальной опухоли головного мозга / Е.М. Франциянц, Л.С. Козлова, Е.Ф. Комарова, А.А. Логвиненко, Т.А.Горбунова // Мат. 17-й Межрегиональной научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы клинической онкологии и преканцерогенеза».  2010. С.163-164.
  34. Комарова Е.Ф. Состояние свободнорадикальных и гидролитических процессов в лимфоцитах крови больных раком легкого / Е.М. Франциянц, Г.З. Сергостьянц, Е.Ф. Комарова, К.С. Саркисьян // Паллиативная медицина и реабилитация. 2010. №3. С.15-18.
  35. Комарова Е.Ф. Морфологические изменения в легких крыс-самцов и самок при моделировании гематогенных метастазов эктопической перевивкой саркомы 45 / А.И. Шихлярова, Е.М. Франциянц, Е.М. Непомнящая, Е.Ф. Комарова, Д.В. Леонтьева, Ю.А. Погорелова // Вопросы онкологии. 2010. Т. №5.С.633-637.
  36. Komarova E.F. Obtaining the induced malignant tumour growing in rats,  lung / E.M. Frantziyantz, E.F. Komarova, Yu.A. Pogorelova, L.D. Tkalya) // Experimental oncology (International conference “Tumour and host: novel aspects of old problem”). 2010. Vol.32. C.36
  37. Komarova E.F. Reproduction of malignant process in lung of experimental animals / E.M. Frantziyantz, E.F. Komarova, Yu.A. Pogorelova, L.D. Tkalya // Experimental oncology (International conference “Tumour and host: novel aspects of old problem”). 2010. Vol.32. C.36.
  38. Komarova E.F. Some characteristics of kini blood system of rats with lung-transplanted S-45 / E.M. Frantziyantz, E.F.  Komarova, Yu.A. Pogorelova, L.D. Tkalya // Experimental oncology (International conference “Tumour and host: novel aspects of old problem”). 2010. Vol.32. C.37.
  39. Комарова Е.Ф. Свободнорадикальные процессы в ткани различных форм рака желудка / Ю.С. Сидоренко, Е.М. Франциянц, Ю.А. Геворкян, М.Л. Малейко, Д.А. Харагезов, Е.Ф. Комарова, Л.Д. Ткаля, М.М. Сальникова //  Мат. VI съезда онкологов и радиологов стран СНГ. г. Душанбе. 2010. С.41.
  40. Комарова Е.Ф. Способ воспроизведения индуцированного злокачественного процесса в легком / Ю.С. Сидоренко, Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, Ю.А. Погорелова, А.И. Шихлярова, Л.Д. Ткаля // Мат. VI съезда онкологов и радиологов стран СНГ. г. Душанбе. 2010. С.41.
  41. Комарова Е.Ф. Свободнорадикальные процессы в мозге при росте индуцированной опухоли легких у крыс / Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, Ю.А. Погорелова, Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина // Мат. VI съезда онкологов и радиологов стран СНГ. г. Душанбе. 2010. С.43.
  42. Комарова Е.Ф. Показатели аминэргической системы мозга крыс в динамике химического канцерогенеза в легких / Е.М. Франциянц, Е.Ф. Комарова, Ю.А. Погорелова, Л.Д. Ткаля, Н.Д. Черярина // Мат. VI съезда онкологов и радиологов стран СНГ. г. Душанбе. 2010. С.43. 
  43. Комарова Е.Ф. Половые гормоны и первично-множественный рак толстой кишки / А.В. Дашков, Ю.А. Геворкян, Е.М. Франциянц, М.Б. Козлова, В.А. Донцов, Е.М. Непомнящая, Е.Ф. Комарова, Ю.А. Погорелова // Мат. VI съезда онкологов и радиологов стран СНГ. г. Душанбе. 2010. С.180.
  44. Комарова Е.Ф. Влияние химиопрепаратов на фоне кратковременной ишемии селезенки как способ воздействия на злокачественный процесс / Ю.С. Сидоренко, Е.М.Франциянц, Ю.А. Геворкян, Д.А. Харагезов, Е.М. Непомнящая, Е.Ф. Комарова, Н.К. Гуськова, И.А.Горошинская // Мат. VI съезда онкологов и радиологов стран СНГ. г. Душанбе. 2010. С.323.
  45. Комарова Е.Ф. Сравнительная характеристика свободнорадикальных процессов ткани различных морфологических форм рака желудка / Ю.С. Сидоренко, Е.М. Франциянц, Ю.А. Геворкян, Д.А. Харагезов, М.Л. Малейко, Л.Д. Ткаля, Е.Ф. Комарова, М.М. Сальникова // Известия ВУЗов. Северо-Кавказский регион. Естественные науки. 2010. №5. С.116-119.
  46. Комарова Е.Ф. Состояние свободнорадикальной системы ткани легкого в динамике развития перевитой злокачественной опухоли / Е.Ф. Комарова, Л.Д. Ткаля, Н.Д.Черярина, Ю.А. Погорелова // Известия ВУЗов. Северо-Кавказский регион. Естественные науки. Спецвыпуск. 2010. С.96-99.
  47. Комарова Е.Ф. Воспроизведение экспериментальной злокачественной опухоли в легких / Ю.С. Сидоренко, Е.М. Франциянц, Л.Д. Ткаля, Е.Ф. Комарова, Ю.А. Погорелова // Известия ВУЗов. Северо-Кавказский регион. Естественные науки.  Спецвыпуск.  2010. С.101-104.
  48. Комарова Е.Ф. Некоторые показатели активности гидролитической системы в динамике роста перевитой в легкое саркомы 45 / Л.Д. Ткаля, Е.Ф. Комарова, Ю.А. Погорелова, Н.Д. Черярина // Известия ВУЗов. Северо-Кавказский регион. Естественные науки.  Спецвыпуск.  2010. С.104-107.
  49. Комарова Е.Ф. Половые гормоны и первично-множественный рак толстой кишки / Ю.С. Сидоренко, А.В. Дашков, Е.М. Франциянц, Ю.А. Геворкян, М.Б. Козлова, Е.Ф. Комарова, В.А. Донцов, Е.М. Непомнящая, Ю.А. Погорелова // Известия ВУЗов. Северо-Кавказский регион. Естественные науки.  2010. №6. С.122-124.
  50. Комарова Е.Ф. Активность свободнорадикальных процессов в ткани перифокальной зоны опухоли мозга и метастазов рака различной локализации в головной мозг /. Ю.С. Сидоренко, Е.М. Франциянц, И.В Балязин, Е.Ф. Комарова, Ю.А. Погорелова, Н.Д. Черярина, Т.А. Горбунова // Нейрохирургия. 2010. №4.  С.49-53.
  51. Комарова Е.Ф. Адаптационные реакции в динамике комплексного лечения больных со злокачественными глиомами больших полушарий головного мозга с использованием методов адьювантной химиотерапии на аутологичных средах / А.И. Шихлярова, Е.М. Франциянц, И.В. Балязин, О.В. Тарнопольская, В.П. Барсукова, Г.Я. Марьяновская, Д.П. Атмачиди, С.Э. Кавицкий, Е.Ф. Комарова // Российский нейрохирургический журнал им. А.Л. Поленова. 2010. №4. С.58-62
  52. Комарова Е.Ф. Способ получения экспериментальной злокачественной опухоли легких / Ю.С.Сидоренко, Е.М. Франциянц, Е.Ф.Комарова, Ю.А.Погорелова, А.И. Шихлярова // Патент №2375758. Бюл. №34  от 10.12.2009.
  53. Комарова Е.Ф. Способ лечения рака легкого / Ю.С. Сидоренко, Г.З. Сергостьянц, Е.М. Франциянц, К.С. Саркисьянц, Н.Д. Ушакова, Е.Ф. Комарова // Патент №240645. Бюл. №35 от 20.12.2010.



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.