WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

ШПРЫКОВ  Александр  Сергеевич

КЛИНИКА И ЭФФЕКТИВНОСТЬ ЛЕЧЕНИЯ  ТУБЕРКУЛЁЗА И БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЛЁГКИХ В УСЛОВИЯХ ХРОНИЧЕСКОЙ ТАБАЧНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ И КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ)

14.01.16 - фтизиатрия

14.01.25 - пульмонология 

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени

доктора медицинских наук

Москва 2011

Работа выполнена в Государственном  бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Нижегородская  государственная медицинская  академия Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации»

Научный консультант: академик РАМН, доктор медицинских наук,  профессор                                                 Перельман Михаил Израилевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор        Григорьев Юрий Геннадьевич

доктор медицинских наук, профессор        Дворецкий Леонид Иванович 

доктор медицинских наук, профессор        Леви Диана Тимофеевна 

Ведущая организация – ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И.Пирогова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации»

Защита состоится «___» ___________ 2011 г. в ____ часов  на заседании Диссертационного Совета Д 208.040.06 в Первом Московском государственном медицинском университете им. И.М.Сеченова по адресу: 119991, г.Москва, ул.Трубецкая, д.8, стр.2

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М.Сеченова» по адресу: 117998, г.Москва, Нахимовский проспект, д.49.

Автореферат  разослан  « » _____________        2011г.

Учёный секретарь Диссертационного совета,  доктор медицинских наук, профессор Грачёва  Марина  Петровна

ОБЩАЯ  ХАРАКТЕРИСТИКА  РАБОТЫ 

 

Актуальность темы

       В настоящее время общепризнано неблагоприятное воздействие хронической табачной интоксикации на развитие и течение  многих заболеваний, особенно лёгочных (Д.Г. Заридзе и соавт., 2002; Н.Ф.Герасименко и соавт., 2007; Е.И.Шмелёв, 2007; А.Г.Чучалин, 2009; В.В.Яковлев и соавт., 2010; С.В.Синцова, Е.Н.Чичерина, 2011;  M.Ezzati, A.D.Lopez, 2003;  R.Doll et al. 2004; B.Balbi et al., 2010; E. Brambilla et al., 2011).

       В общей проблеме заболеваний органов дыхания вопросы инфекционной патологии нижних  дыхательных путей, в первую очередь туберкулёза  и пневмонии, у потребителей табака изучены недостаточно, хотя очень актуальны (Л.И.Дворецкий, 2007; А.Г.Чучалин, 2009; K.Slama et al., 2007). Ситуация с туберкулёзом вызывает тревогу  во всём  мире. Ежегодно выявляется  8 – 10 млн. случаев бациллярного туберкулёза, а распространение лекарственноустойчивых штаммов микобактерий значительно снижает возможности этиотропной терапии (С.Е.Борисов, Г.Б.Соколова, 2001; А.А. Приймак, 2005; М.И.Перельман, 2007; В.Ю.Мишин, В.И.Чуканов, Ю.Г.Григорьев и соавт., 2009; М.В.Шилова, 2010; T.R. Frieden et al., 2003; M. Zignol et al., 2006; G. Maartens, N. Wilkinson, 2007; N.W.Schluger, 2007;  Migliori G.B. et al., 2011).

Ежегодно увеличивается  и число случаев пневмонии. Например, в США это самая частая  причина смерти от инфекционных заболеваний, а в России учитывается только около трети случаев пневмонии (А.Г. Чучалин и соавт., 1999, 2002; Дж.Бартлет, 2000; Р.С.Козлов, 2005; А.И. Синопальников, 2010; F.Blasi et al., 2009; S. Ewig et al., 2011).

               Сочетание инфекционной патологии дыхательных путей с хронической табачной интоксикацией является серьёзной медико-социальной проблемой  (Г.В.Федосеев и соавт. 2009; L.Arcavi, N.L.Benowitz, 2004; M.N. Altet – Gmez et al., 2005; P. Tonnesen et al., 2007; P.P.Vineis, 2008; S. Sethi, 2010).

       Cитуацию усугубляет  распространяющаяся эпидемия табакокурения: по оценкам Всемирного Банка  падение  потребления табака в развитых  странах  на 1%  перекрывается ростом потребления  в развивающихся государствах  на 3%, в первую очередь за счёт женщин, подростков и детей (В.Ф. Левшин,2005; А.Г.Чучалин, 2009; С.А.Бабанов, И.А.Агаркова, 2010; K.O.Haustein, 2003; J. Mackey  еt al. 2006;  R.N. van Zyl Smit et al., 2010).        Число курящих среди больных  инфекциями нижних дыхательных путей (туберкулёз, пневмония, хронический бронхит в стадии обострения) в 1,5 – 2 раза больше, чем среди остального населения.

Работы, посвящённые влиянию табакокурения на инфекционную патологию лёгких, носят, в основном, статистический характер (В.К.Смирнов, О.И.Сперанская, 2004; T.Sigsgaard et al., 2010). Практически отсутствуют данные о воздействии продуктов табачного дыма на фармакокинетику антибактериальных препаратов, применяемых для лечения инфекций дыхательных путей, на лекарственную чувствительность возбудителя, на активность туберкулёзного воспаления.

Имеющиеся единичные сообщения о влиянии хронической табачной интоксикации на свойства  Mycobacterium tuberculosis фрагментарны и не охватывают проблему жизнеспособности возбудителя туберкулёза. Сведения о влиянии продуктов табачного дыма на неспецифическую микрофлору нижних дыхательных путей  практически отсутствуют.

Данные о клинических особенностях  бактериальных  заболеваний лёгких  у курящих больных  немногочисленны и  противоречивы. Наряду с сообщениями о неблагоприятном влиянии курения на течение туберкулёза и других инфекционных заболеваний  нижних дыхательных путей (А.Г.Чучалин, 2008; Н.С. Антонов, Г.М.Сахарова,2009; V.Gajalakshmi et al.,2003; V.Trosini – Desert еt al., 2004; C –Y. Chiang et al. 2007; S.M.Alavi, S.Ershadian , 2009; J. Wang, et al., 2011), появляются работы, отрицающие или ставящие под сомнение  роль курения табака  в патогенезе и прогнозе туберкулёза и других  лёгочных  заболеваний ( A.Maier, 2004; N.Shetty et al, 2006; N.Lefebvre, D.Falson, 2008; K.Kliiman, A.Altraja, 2010)

       Таким образом, разноречивость и  недостаточность  данных о влиянии курения на туберкулёз и неспецифические инфекции лёгких, большое медико-социальное значение проблемы, указывают на актуальность темы.

Цель исследования

Оценка воздействия хронической табачной интоксикации на течение впервые выявленного инфильтративного туберкулёза  и неспецифическую бактериальную патологию лёгких, на  биологические  характеристики их возбудителей; разработка предложений по лечению  курящих больных.

Задачи исследования:

  1. Охарактеризовать курительное поведение больных с инфильтративным туберкулёзом  и неспецифической бактериальной патологией лёгких.
  2. Выяснить особенности клинического течения впервые выявленного инфильтративного туберкулёза лёгких, внебольничной пневмонии, обострений хронического бронхита у курящих больных.
  3. Провести исследование гистологического материала для оценки влияния курения  на активность туберкулёзного воспаления.
  4. Выяснить действие курения на фармакокинетику антибактериальных препаратов  у больных туберкулёзом  и внебольничной пневмонией.
  5. Изучить влияние курения табака на лекарственную чувствительность клинических штаммов  M. tuberculosis и K. pneumoniae.
  6. Определить особенности лечения инфильтративного туберкулёза лёгких, пневмонии и обострений хронического бронхита у курящих больных.
  7. Изучить в эксперименте  действие конденсата табачного дыма на свойства основных возбудителей бактериальной патологии лёгких  (Mycobacterium tuberculosis,  Streptococcus  pneumoniae, Haemophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae subspecium pneumoniaе, Pseudomonas  aeruginosa,  Staphylococcus аureus).
  8. Экспериментально изучить влияние продуктов табачного дыма  на лекарственную чувствительность M. tuberculosis  и S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa,  S. аureus.

 

Научная новизна

Впервые выяснены особенности курительного поведения больных с инфильтративным туберкулёзом и неспецифической бактериальной патологией лёгких.

В работе впервые изучены клинические особенности  и эффективность лечения инфильтративного туберкулёза лёгких, внебольничной пневмонии и хронического бронхита в стадии обострения у  курящих больных. Впервые описаны  изменения цитокинов у курящих больных инфильтративным туберкулёзом лёгких.

Впервые по морфологическим данным установлена связь  активности туберкулёзного воспаления с фактором курения.

Впервые показано, что хроническая табачная интоксикация  оказывает существенное влияние на фармакокинетику левофлоксацина, рифампицина, цефотаксима и  кларитромицина.

Впервые предложены рекомендации по лечению курящих больных с туберкулёзом лёгких и пневмонией.

Установлена зависимость  всех выявленных изменений от дозы продуктов табачного дыма.

Впервые экспериментально и клинически установлена связь жизнеспособности M. tuberculosis с действием компонентов табачного дыма.

Впервые в экспериментальных исследованиях получены данные, что ряд концентраций конденсата табачного дыма изменяет фенотип и ускоряет рост возбудителей неспецифических бактериальных заболеваний лёгких.

  Впервые в экспериментах с конденсатом табачного дыма и у клинических штаммов M. tuberculosis, выделенных от курящих больных, прослежена тенденция к  формированию  множественной лекарственной устойчивости.

  Впервые в экспериментальных данных установлена тенденция к формированию лекарственной устойчивости к ряду антибактериальных препаратов у возбудителей неспецифических бактериальных заболеваний лёгких после воздействия на них конденсата табачного дыма. Полученные экспериментальные данные нашли подтверждение у клинических штаммов K.pneumoniae.

Научная новизна  подтверждена патентом  РФ на способ исследования воздействия табачного дыма на возбудителя туберкулеза (№2083001 от 27.06.1997). Получено положительное решение о выдаче патента от 08.08.2011 по заявке № 2010132005, приоритет от 29.07.10 на изобретение «Способ выбора тактики стартовой антибактериальной терапии при лечении пневмонии».

Практическая значимость работы. По совокупности полученных данных разработаны практические рекомендации для лечения курящих больных туберкулёзом легких, что позволяет оптимизировать лечение  у данной категории больных  в условиях стационаров противотуберкулёзных диспансеров, санаториев, а также при амбулаторной терапии. Рекомендуется не прекратившим курение больным туберкулезом легких, особенно злостным курильщикам, до получения данных о лекарственной чувствительности возбудителя или при отсутствии их, назначать комбинацию из 4 основных противотуберкулезных препаратов (изониазид, рифампицин, пиразинамид, этамбутол) и 2-3 резервных – режим IIб по приказу МЗ РФ №109  для больных с высоким риском лекарственной устойчивости. Необходимо злостное курение (индекс курения (ИК) - 25 и более пачек/лет (п/л)) внести в число критериев применения этого режима. При лечении туберкулеза у данной категории больных следует назначать максимально допустимые дозы рифампицина и левофлоксацина.

       Тактика лечения, описанная нами в патенте «Способ выбора тактики стартовой антибактериальной терапии при лечении пневмонии», позволяет повысить эффективность  стартовой терапии внебольничной пневмонии у курящих больных.

Положения,  выносимые на защиту

  1. Хроническая табачная интоксикация определяет более выраженную тяжесть и распространенность бактериальной патологии легких, способствует учащению осложнений  и сопутствующих заболеваний.
  2. У курящих больных отмечается снижение показателей эффективности лечения инфекционных заболеваний нижних дыхательных путей, замедленная обратная динамика, склонность к затяжному течению и более выраженным остаточным изменениям.
  3. Для курящих больных с инфекциями нижних дыхательных путей характерна высокая степень табачной зависимости.
  4. По морфологическим данным у курящих больных туберкулезом лёгких имеет место бльшая активность туберкулезного воспаления.
  5. Хроническая табачная интоксикация у больных туберкулезом и пневмонией  влияет на фармакокинетику рифампицина, левофлоксацина, цефотаксима, кларитромицина в сторону уменьшения их концентрации в сыворотке крови.
  6. Конденсат табачного дыма в эксперименте увеличивает  жизнеспособность M.tuberculosis и  ускоряет  рост, изменяет  фенотип основных возбудителей неспецифических бактериальных заболеваний легких  (S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginоsa, K.pneumoniae ).
  7. Продукты табачного дыма в виде конденсата в эксперименте и курения в клинике способствуют снижению лекарственной  чувствительности возбудителей бактериальной  патологии  легких.

Внедрение результатов в практику. Полученные в исследовании данные  используются врачами при лечении больных туберкулезом легких и  пневмонией,  проведении профилактической и санитарно-просветительной работы. Опубликованные данные исследования  используются в педагогическом процессе и при чтении лекций студентам, интернам, ординаторам,  врачам на  кафедрах Первого  Московского государственного медицинского университета им. И.М.Сеченова, Нижегородской государственной медицинской академии и Военно-медицинского института ФСБ РФ (г.Н.Новгород).

       Апробация работы. Основные положения  диссертации доложены:  на 8, 9, 12, 13, 14 -м  Национальных  конгрессах по болезням органов дыхания (Новосибирск,1998; Москва, 1999; Москва, 2002; Санкт-Петербург, 2003; Москва, 2004); 3-ем региональном конгрессе Европейского отделения  Международного противотуберкулёзного союза (Москва, 2004); на 13, 15, 16, 18  конгрессах  Европейского респираторного общества, (Вена, 2003; Копенгаген, 2005; Мюнхен, 2006; Берлин, 2008); на 4-м Европейском конгрессе по химиотерапии и инфекциям (Париж, 2002); на заседаниях Международного медицинского форума на Нижегородской ярмарке (2002, 2010); на научных конференциях (совещаниях) кафедры фтизиопульмонологии ММА им. И.М.Сеченова (1999, 2003); на заседании Учёного Совета НИИ фтизиопульмонологии ММА им. И.М.Сеченова (2005); на заседаниях кафедры туберкулёза Ниж. ГМА (1999 - 2007); на заседаниях Нижегородского общества фтизиатров (2000 – 2008); на Нижегородской областной конференции фтизиатров (2008).

Личный вклад автора. Автору принадлежит определение основной программы исследования, разработка методик экспериментов. Автор лично обработал клинические данные по 348 больным бактериальной патологией легких, участвовал в консультациях и лечении большинства из эти больных, в проведении микробиологических экспериментов и морфологических исследованиях. Автор освоил методики и лично участвовал в определении концентрации антибактериальных препаратов в сыворотке крови. По материалам работы получено два патента.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 39 работ, в том числе 17 в журналах, рекомендованных  ВАК РФ.

Структура и объём диссертации.  Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 6 глав собственных исследований с обсуждением, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 561 источник (208  на русском языке и  353 на иностранных языках). Работа изложена на 311  страницах, содержит 45 таблиц, иллюстрирована 60 рисунками и 10 клиническими  примерами.

 

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Часть 1. Клинические исследования.

  Материалы и методы клинических  исследований

  Клиническая характеристика больных и методы обследования

Материалом для клинических исследований послужили данные обследования  348 больных с бактериальными заболеваниями органов дыхания: 193 больных с впервые выявленным инфильтративным туберкулёзом лёгких, 97 больных с  внебольничной пневмонией, 58 больных с хроническим бронхитом в стадии обострения. Больные закончили лечение в стационарах  Нижегородского областного противотуберкулёзного диспансера, инфекционной клинической больницы № 2 (г. Н. Новгород) и  401–го  военного госпиталя (г. Н.Новгород) в 1998 – 2009 гг. Возраст больных  -  от 18 до 72 лет.

Среди 193 больных инфильтративным туберкулёзом лёгких была выделена основная группа из 132  курящих пациентов и группа сравнения – 61 некурящий больной. По возрастно-половому составу обе группы были одинаковыми. В обеих группах преобладали мужчины (68,9 – 75,0%), хотя среди некурящих доля женщин была  несколько выше. Более 2/3 больных составляли лица самого трудоспособного возраста от 20  до 50 лет.

Среди 97 больных с внебольничной пневмонией  также была выделена основная группа из 65 курящих пациентов и группа сравнения  - из 32 некурящих больных. Среди 58 пациентов с обострением хронического бронхита была выделена основная группа  – 38 курящих больных и группа сравнения  - 20 некурящих больных.

По возрастно-половому составу основные группы и группы сравнения больных с неспецифической бактериальной патологией легких соответствовали  друг другу:  преобладали мужчины (61,5% - 66,0%), более половины пациентов были в возрасте от 20 до 40 лет. Среди курящих мужчин и женщин несколько меньше было лиц пенсионного возраста.

У 235 курящих больных, взятых в разработку, было изучено курительное  поведение: стаж и интенсивность курения, сорт употребляемых табачных изделий и определен индекс курящего человека (ИК), который подсчитывался путём умножения числа выкуриваемых в день сигарет на количество лет курения и деления на число сигарет в пачке, т.е. на 20. Выделена  подгруппа из 78 больных с максимальной интенсивностью курения (злостные табакокурильщики). ИК у них был равен и превышал 25 пачек/лет.

При поступлении в стационар у больных основной и сравниваемой  групп собирали анамнез жизни и заболевания, жалобы, уточняли образование, профессию, жилищно-бытовые условия и материальное положение, наличие сопутствующих заболеваний  и контакт с больными туберкулезом.

Больные были  обследованы с применением  обязательных и дополнительных методов исследования.

При объективном обследовании фиксировали все откло­нения в состоянии органов и систем организма, измеряли массу тела, пульс и артериальное давление. Клинико-лабораторные и инструментальные обследования выполняли согласно общепринятым  методическим указаниям, рекомендациям и приказам.

У 41 больного  (24 курящих  основной группы и  17 некурящих  из группы сравнения) было про­ведено изучение иммунологического статуса с определением цитокинов  (-интерферон, -фактор некроза опухоли, -интерферон, интерлейкин-8). В работе использовали реагенты фирмы «Вектор-Бест». Нормальные уровни показателей определены при обследовании 38 здоровых доноров.

Всем больным при поступлении и затем ежемесячно в интенсивной фазе лечения исследовали мокроту на микобактерии туберкулеза, трижды микроскопически и 3 раза посевом на среду Левенштейна-Йенсена.

Для ускорения  получения результатов посевов мокроты на M.tuberculosis у части больных использовали автоматизированную систему для обнаружения микобактерий "BD Bactec MGIT ТВ-960 system" и тест-систему для определения множественной лекарственной устойчивости "TB-БИОЧИП (МЛУ)".

Пациенты с тяжёлыми сопутствующими заболеваниями (сахарным диабетом, бронхиальной астмой, злокачественными новообразованиями, хроническим алкоголизмом, вирусным гепатитом) в разработку не включались, т.к. они могли значительно затруднить выявление закономерностей влияния курения табака на  организм.

       Клинико-экспериментальные сопоставления проводились нами  путём сравнения результатов  клинического обследования больных с данными экспериментов. Были сопоставлены данные по жизнеспособности  клинических штаммов M.tuberculosis выделенных от 140 пациентов с инфильтративным туберкулёзом лёгких с жизнеспособностью  экспериментальных штаммов  после их роста на средах  с разными разведениями конденсата табачного дыма.

Среди них были курящие больные (102 пациента) – основная группа и некурящие – группа сравнения (38 пациентов). Кроме того, среди курящих выделены лица с максимальной  интенсивностью курения  (подгруппа «злостных» курильщиков – 36 человек). Индекс курения у этих больных составлял 25 пачек/лет и более, в сутки они выкуривали более 1 -1,5 пачек сигарет. По возрастно-половому составу обе группы больных были сравнимы: преобладали мужчины работоспособного возраста.

При исследовании лекарственной чувствительности были изучены резистограммы 157 клинических культур M.tuberculosis, полученных от бациллярных больных с инфильтративным туберкулёзом лёгких,  и резистограммы 38 клинических культур K. pneumoniae, выделенных из мокроты  больных  внебольничной пневмонией. Среди них были определены  основная группа (соответственно 114 и 26 курящих пациента) и группа сравнения - (соответственно 43 и 12  некурящих пациентов).

  Морфологические исследования.

При изучении зависимости активности туберкулёзного воспаления  от фактора табакокурения по морфологическим  данным у 213 пациентов Нижегородского областного противотуберкулёзного диспансера, оперированных по поводу туберкулёза лёгких, проведено исследование резецированного материала. Для микроскопического исследования из резецированной легочной ткани забирали  от 5 до 10 участков легкого. 167 больных  -  курящие  (основная группа) и 46 больных не курили (группа сравнения).  35 пациентам из основной группы курящих и 13 из группы сравнения (всего 48) провели  иммуногистохимические исследования с целью выявления в легких макрофагов, Т- и В-лимфоцитов и других клеток. Срезы окрашивали гематоксилином-эозином, гематоксилином-пикрофуксином,  резорцин фуксином, азур 2-эозином, по Зербино и  Цилю-Нильсену.

Морфологические исследования выполняли совместно  с  д.м.н.  В.О. Никольским в лаборатории Областного  противотуберкулезного диспансера города Н.Новгорода  и д.м.н. Б. М. Ариэлем и к.м.н. О.М. Осташко  в лаборатории патоморфологии Санкт-Петербургского НИИ фтизиопульмонологии.

Результаты гистологического исследования подробно описывались в каждом конкретном случае с определением степени активности специфического воспаления  в соответствии с классификацией  Б.М. Ариэля (1998 г). По соотношению казеозно-некротических и фиброзных изменений, преобладанию клеток того или иного типа выделялось 5 степеней активности туберкулезного процесса:

I степень  -  затихшие воспалительные изменения (неактивный туберкулёз).

II степень - ограниченные активные воспалительные изменения.

III степень - распространенные активные изменения без  прогрессирования

IV степень - распространенные активные изменения с  прогрессированием.

V степень -  наиболее острые прогрессирующие изменения.

  Фармакокинетические исследования

Фармакокинетические исследования  проведены методами жидкостной хроматографии и спектрофотометрирования  с антибактериальными препаратами (левофлоксацином, рифампицином, цефотаксимом и кларитромицином), применяющимися для лечения туберкулеза  легких, пневмонии и обострений хронического бронхита. Всего выполнено 350 исследований у 70 больных: 49 курящих пациентов (основная группа)  и 21 некурящий (группа сравнения).

48 больным с впервые выявленным инфильтративным туберкулёзом лёгких  определены фармакокинетические параметры левофлоксацина (14 больным: 10 курящим и 4 некурящим  – 70 исследований) и рифампицина (34 больным: 25 курящим и 9 некурящим – 170 исследований). У 22 больных с внебольничной пневмонией  была определена в крови  концентрация цефалоспорина 3-го  поколения  цефотаксима  (11 больным: 7 курящим и 4 некурящим - 55 исследований) и макролида  кларитромицина  (11 больных: 7 курящим и 4 некурящим – 55 исследований). Сыворотку крови для исследований брали  первый раз в 8:00 - до введения лекарственных препаратов, а далее после введения  лекарства с интервалом в  2 часа – 10:00; 12:00; 14:00 и 16:00 часов.

В работе применяли жидкостные хроматографы «Agilent 1100» и  «Knauer K – 2501» со спектрофотометрическим  и  масс – спектрометрическим детекторами, а также спектрофотометр СФ - 46. Исследования выполняли в научно – производственном центре «Пробиотек» в г. Москве (генеральный директор к.х.н. В.В.Писарев).

Количественное определение левофлоксацина проводили методом абсолютной калибровки с использованием программного обеспечения фирмы «Agilent». Калибровочную кривую получали в результате анализа проб плазмы с добавками необходимых количеств стандарта определяемого соединения. 

       Сущность методики определения рифампицина в сыворотке крови состояла в  выделении рифампицина с помощью бензолгексана (смесь бензола и гексана 1:1), фосфатного буфера (рН 5,1)  с последующим спектрофотометрированием.

       Для расчёта результатов исследования использовали калибровочную кривую, при построении которой по общепринятым методам применялись чистый рафампицин – субстанция, бидистиллированная вода и сыворотка.

       Количественное определение цефотаксима в плазме крови  проводили методом абсолютной калибровки с использованием программного обеспечения фирмы «Knauer» (Eurochrom 2000). Калибровочную кривую получали в результате анализа проб плазмы с добавками определённых количеств стандарта цефотаксима в пересчете на основное вещество.

Количественное определение кларитромицина в плазме крови  проводили методом абсолютной калибровки с использованием программного обеспечения фирмы «Agilent» (ChemStation). Калибровочную кривую получали в результате анализа проб плазмы с добавками  стандарта кларитромицина.

Для обработки полученных результатов применяли методы вариационной статистики, преобразование динамических рядов,  оценку достоверности различий показателей. Достоверность различий между показателями совокупностей определяли с помощью параметрических методов (по критерию Стьюдента). Обработку материала проводили на  персональном компьютере с помощью прикладных статистических программ Excel 2000, пакета статистических программ Statz. Разность показателей считалась достоверной при t>2, Р<0,05.

Результаты клинических исследований

       Курительное поведение  больных с бактериальной патологией лёгких характеризуется ранним началом курения (более 20% больных  начали курить до 14 лет), длительным стажем употребления табачных изделий (половина больных курили более 20 лет), большой интенсивностью и индексом курения (57% больных выкуривали 20 и более сигарет в день). Мужчины предпочитали дешёвые сигареты с фильтром (~ 60%), остальные курили сигареты без фильтра и папиросы, единицы курили дорогие  сигареты. Женщины чаще курили так называемые «лёгкие сигареты» (табл. 1, рис. 1).

Таблица 1

Распределение больных основной группы по стажу курения табака

Стаж курения

Число больных

%

Мужчины

Женщины

Абс. ч.

%

Абс.ч.

%

До 10 лет

45

19,1

13

7,8

32

46,4

От10 до 19

74

31,5

55

33,1

19

27,6

От 20 до 29

63

26,8

52

31,4

11

15,9

От 30 до 39

40

17,0

33

19,9

7

10,1

40 лет и более

13

5,6

13

7,8

-

-

Всего

235

100

166

100

69

100

       

Табачная зависимость более выражена  у мужчин больных туберкулёзом, выкуривающих в среднем 26,5 сигареты в день против 20,4 -  больными  пневмонией.

       При изучении клинической характеристики больных установлено, что курящие  больные с инфильтративным туберкулезом легких чаще имели распространенные процессы с бактериовыделением и деструкцией. Так, патология, занимающая 3 и более сегментов легких, встречалась у табакокурильщиков в 53,8% случаев  против 44,3% у некурящих больных. Среди злостных курильщиков распространенные формы преобладали, составляя 65,8%, р<0,05.

Рис.1. Распределение больных с инфекционной патологией легких по индексу курящего человека и полу (в %).

       Микобактерии туберкулеза выделяли 70,5% некурящих больных из группы сравнения, 86,4% курящих (p<0,05)  и 94,7% злостных курильщиков (p<0,001). Деструктивные изменения чаще описывались у лиц, подверженных хронической табачной интоксикации: у 84,1% курильщиков, 89,5% злостных курильщиков, против 67,2% больных из группы сравнения (соответственно - p<0,05 и  p<0,01).

Выявлено, что  несмотря на более распространенный процесс у злостных курильщиков, по обращаемости у них выявлялось меньше больных, чем среди некурящих пациентов (57,9% против 70,5%). Одним из объяснений можно считать то, что многокурящие больные  в 1,5 -2  раза реже  жалуются на слабость и кашель, хотя они отмечаются у них при опросе значительно чаще. Причина этого в описанном в литературе стимулирующем и антидепрессантном воздействии  никотина и привычном «кашле курильщика» (В.Ф.Левшин , 2005).

Другие жалобы пациентов, изменения при аускультации, на ЭКГ, данные бронхоскопического обследования соответствовали большей тяжести процесса у курящих больных. Для них характерно снижение функции внешнего дыхания с преобладанием обструкции в области мелких периферических бронхов.

При изучении клинических особенностей внебольничной пневмонии у больных, употребляющих табачные изделия, отмечается большая тяжесть и распространенность пневмонии (табл. 2). Так, тяжелое течение заболевания  встречалось у 32,3% табакокурильщиков, 48,1% злостных курильщиков против 21,9% в группе сравнения (соответственно  p>0,05  и p<0,01).

Таблица 2

Степень тяжести  пневмонии у больных основной и сравниваемой групп, % (абс. число)

Степень тяжести пневмонии

Группы больных

Сравнения

(некурящие)

n =32

Основная

(курящие)

n=65

Злостные курильщики

n=27

Лёгкое течение

18,7 (6)

10,8 (7)

3,8 (1)*

Среднее течение

59,4 (19)

56,9 (37)

48,1 (13)

Тяжёлое течение

21,9 (7)

32,3 (21)

48,1 (13)**

*Разница с группой сравнения достоверна (p<0,01).

**Разница с группой сравнения достоверна (p<0,05).

Патологические изменения на рентгенограмме занимали долю и больше у 30,8% курильщиков, 37,0% злостных курильщиков и только у 18,8%  некурящих больных (p>0,05).

Однако одновременно у табакокурильщиков чаще выявлялось стертое, малозаметное начало заболевания: 61,5% в группе курящих больных, 66,7% злостных курильщиков против 40,6% у некурящих пациентов (p>0,05). Это можно объяснить стимулирующим действием никотина на организм и менее внимательным отношением курящих больных к своему здоровью. Подтверждает это большая частота жалоб больных основной группы на одышку, кашель (полученных чаще при активном опросе), боли в грудной клетке, и одновременно меньшая частота жалоб на слабость и недомогание: 70,4% у злостных курильщиков против 93,8% у больных из группы сравнения (p<0,05).

При изучении зависимости клинической характеристики хронического бронхита (в стадии обострения) от фактора курения установлено, что для курящих больных характерны частые, более тяжелые обострения, составляющие  в среднем 3,3 ±1,1 обострения в год для больных основной группы,  4,2±0,9 обострения для злостных курильщиков против 1,9±0,7 обострения для некурящих (соответственно - p>0,05  и  p<0,05).

Кроме этого, у курящих больных имел место более выраженный кашель с большим количеством гнойной мокроты,  значительное снижение дыхательных функций: объем форсированного выдоха за 1 секунду – ОФВ1 ,менее 70% от должного, отмечался у 45,3% больных основной группы, 63,8% злостных курильщиков (p<0,05) против 30,7% некурящих больных.

При рассмотрении показателей  эффективности лечения основной группы больных с инфекционными заболеваниями нижних дыхательных путей установлено, что хроническая табачная интоксикация приводит к замедленной инволюции патологического процесса.

Для курящих больных с инфильтративным туберкулезом легких выявлено снижение скорости ликвидации симптомов туберкулезной интоксикации: за первые 2 месяца интоксикация ликвидирована у 74,2% больных основной группы, 65,8% злостных курильщиков против 96,7% некурящих больных (p<0,001).

К моменту выписки из стационара негативация мокроты отмечена у 88,6% больных основной группы (p>0,05), 80,6% злостных курильщиков (p<0,05) и у 95,3% больных из группы сравнения. Деструкция перестала определяться у 76,6% табакокурильщиков, 67,6% злостных курильщиков против 90,2% у некурящих пациентов (соответственно - p<0,05 и p<0,05). Сроки прекращения бактериовыделения и ликвидации деструкции отстают у курящих больных на 1- 1,2 месяца, а у злостных табакокурильщиков до 1,5 месяцев по сравнению с некурящими пациентами.

Хроническая табачная интоксикация приводит к более выраженным остаточным изменениям после стационарного этапа лечения: большие изменения формируются у 56,8% больных основной группы, 71,1% злостных курильщиков (р<0,01) и только у 42,6% пациентов из группы контроля.

Сравнение показателей эффективности лечения внебольничной пневмонии у курящих и некурящих больных  показывает более низкую эффективность терапии у курильщиков. Так, ликвидация интоксикации и нормализация температуры происходит в среднем у курящих больных за 9,8±2,5 дня (p>0,05), у злостных курильщиков за 11,6±2,3 дня (p<0,05), а у некурящих больных за 5,7±1,7 дня. Значительное рассасывание инфильтративных изменений при неосложнённой пневмонии  отмечается в основной группе в среднем через 18,7±2,4 дня, в группе сравнения за 13,8±3,5 дня, а у многокурящих больных в 1,5 – 2  раза дольше – 24,3±3,8 дня (р<0,05).

Затяжное течение пневмонии имело место у 35,4% курящих больных, 38,5% злостных курильщиков против 25,0% в группе сравнения (p>0,05). Затяжное течение пневмонии часто было следствием, в числе многих факторов, наличия различных осложнений, которые у курящих встречались чаще. Например, плевриты диагностировали у 29,2% злостных курильщиков против 9,4% в группе сравнения (p<0,01). Абсцедирование выявляли у 15,4% больных основной группы, 18,5% многокурящих больных и у 12,5% некурящих пациентов. На момент выписки остаточные изменения имели место у 58,5% больных основной группы, 66,2% многокурящих больных и у 37,5% некурящих пациентов (соответственно - p>0,05  и  p<0,05).

Обострения хронического бронхита у курящих больных  отличались замедленной  положительной динамикой и более длительными сроками лечения (на 40-50% по сравнению с некурящими больными). Обострения протекали более торпидно, дольше сохранялась одышка и воспалительная картина крови.

Таким образом, наши данные выявляют четкое,  зависящее от дозы  неблагоприятное  влияние хронической табачной интоксикации на клинику и эффективность лечения больных с  инфильтративным  туберкулёзом  и  бактериальной патологией легких.

Определена жизнеспособность  клинических штаммов M.tuberculosis, выделенных от 140 больных с впервые выявленным инфильтративным туберкулёзом лёгких: 102 человека – курящие больные -  основная группа (в том числе 36 злостных курильщиков) и 38 человек – некурящие пациенты. Фактор курения достоверно увеличивает жизнеспособность возбудителей туберкулёза с чётким, зависящим от дозы  эффектом: высокая степень жизнеспособности M.tuberculosis отмечена у 39,2% табакокурильщиков, 52,8% злостных курильщиков против 17,5% некурящих больных из группы сравнения (соответственно р<0,01 и  р<0,001) (Табл.3).

Была проанализирована  лекарственная чувствительность  клинических штаммов M. tuberculosis, выделенных от 114 курящих, в том числе 36 злостных курильщиков и 43 некурящих больных с инфильтративным туберкулёзом лёгких. У больных, подверженных хронической табачной интоксикации, чаще встречались лекарственноустойчивые штаммы. Так, в основной группе их число было больше в 1,5 раза, чем среди некурящих (41,2% против 27,9%,  p>0,05), а среди злостных курильщиков –  в 2 раза больше (58,3%, p<0,05).

В структуре лекарственной устойчивости у курящих чаще встречалась полирезистентность,  причём, если среди всех больных основной группы различие с группой сравнения  было небольшое (20,2% и 16,3% от числа бактериовыделителей), то среди злостных курильщиков количество полирезистентных штаммов резко возрастает (до 38,9%,  p<0,05).

Особое внимание мы уделили так называемой  множественной лекарственной устойчивости M. tuberculosis.  У курящих больных основной группы этот вид  устойчивости встречается в 1,5 раза чаще, чем у некурящих, а среди злостных курильщиков - в 3 раза чаще (p<0,05),  т.е. наблюдается чёткая зависимость от дозы  (Рис.2).

Что касается устойчивости к отдельным  противотуберкулёзным  препаратам, то на первом месте  у всех групп больных стоит устойчивость  к стрептомицину и изониазиду, далее к рифампицину, этамбутолу, канамицину.  Причём, в группе злостных курильщиков число штаммов, резистентных  к рифампицину, было  более чем в 2 раза больше, чем в группе сравнения.

Проведёно изучение резистограмм микрофлоры, полученных от больных  с внебольничной пневмонией,  поступивших в 2008 - 2009 г. в клиническую инфекционную больницу №2 (г. Н.Новгорода). В исследование были включены культуры K. pneumoniaе,  так как  этот микроорганизм выделялся наиболее часто из мокроты в этиологически значимой концентрации: 105 колониеобразующих единиц на мл (КОЕ/мл) и более. Всего были изучены результаты обследования  38 больных с внебольничной пневмонией, среди которых выделена основная группа (26  курильщиков с индексом курения 20 п/л.) и группа сравнения (12 некурящих пациентов). У курящих больных чаще выделялись  штаммы с лекарственной устойчивостью: 84,6±7,08% против 50,0%±14,40% у некурящих, p<0,05.

Таблица 3

Жизнеспособность клинических штаммов M.tuberculosis  (%)  в

зависимости от факта табакокурения

Виды жизнеспо-собности

  Группы больных с МБТ

Группа сравнения

  (не курящие)

  Основная группа

(курящие)

  В т.ч. злостные

Абс.ч.

%

Абс.ч.

%

Абс.ч.

%

Высокая

7

17,5±4,8

40

39,2±4,8**

19

52,8±8,3***

Средняя

17

44,4±6,3

33

32,4±4,6

10

27,8±7,5

Низкая

14

38,1±6,1

29

28,4±4,5

7

19,4±6,6*

Всего больных

38

100

102

100

36

100

Примечание:  * р< 0,05  ** р< 0,01  *** р<0,001

Рис. 2. Удельный вес штаммов M.tuberculosis с лекарственной устойчивостью и множественной лекарственной устойчивостью  у курящих и некурящих больных с инфильтративным туберкулезом легких (в %).

В спектре  лекарственной устойчивости  у больных основной группы  преобладала устойчивость K.pneumoniae к цефалоспоринам  II, III и IV поколений и другим – лактамным антибиотикам.

Был изучен уровень цитокинов и другие показатели иммунитета у курящих больных с инфильтративным туберкулезом легких. Уровень цитокинов, значительно повышенный у больных обеих групп, под действием хронической табачной интоксикации претерпел изменения. Отмечено уменьшение интерлейкина-8 (р<0,05),  -интерферона, -фактора некроза опухоли и увеличение  -интерферона. Вместе с этими разнонаправленными изменениями у курящих больных с инфильтративным туберкулезом легких выявлен иммунодефицит по Т-клеточному типу, максимально выраженный у многокурящих больных, с уменьшением фагоцитарной активности и IgM и фагоцитарной активности и увеличением IgA и IgG (p<0,05) (Рис.3).

По морфологическим данным исследована активность туберкулезных изменений в зависимости от фактора курения. Как следует из полученных данных, у курящих больных отмечается более выраженная активность воспаления по сравнению с некурящими:  максимальная V степень воспаления встречается в основной группе в 2 раза (8,4%), а у злостных курильщиков - в 4 раза  чаще (17,6%) по сравнению с некурящими (4,3%), p<0,05. И наоборот, малоактивные II-III степень воспаления выявляется чаще у некурящих больных  (табл.4).

  Фармакокинетика  лекарственных  препаратов

Фармакокинетика рифампицина изучена у 34 больных с инфильтративным туберкулёзом лёгких (25курящие пациенты  - основная группа  и 9 некурящих пациентов - группа сравнения).  Курящие больные  были разделены на 2 подгруппы: 14 – злостные курильщики (ИК 25 п/л), 11 – умеренно  и мало курящие больные (ИК –10 п/л). Стаж курения составлял в среднем 17 лет.

Рис. 3. Динамика иммунного статуса у больных  инфильтративным туберкулезом легких в зависимости от фактора курения (по сравнению с некурящими больными).

  Таблица 4

Активность туберкулёзных изменений у курящих и некурящих больных

Группы

больных туберкулёзом

Всего

Степень активности туберкулёзных изменений (абс. число / %)

I

II

III

IV

V

Табакокурильщики

(основная группа)

167/100%

 

1/0,6

29/17,4

63/37,7

60/35,9 

14/ 8,4

В том числе многокурящие

(1,5 пачки сигарет в день)

17/100%

  -

-

6/35,3

8/47,1

3 /17,6

Некурящие

(группа сравнения)

46/100%

-

16 /34,8

20 /43,5

8/17,4

2/4.3

Достоверность показателя по сравнению с группой сравнения:

*  - p< 0,05        **  - p<0,01

Таблица  5

Концентрация левофлоксацина в сыворотке крови больных инфильтративным туберкулезом легких в зависимости от факта табакокурения (средние показатели в мкг/мл)

Категории пациентов

Время взятия анализа

8:00

10:00

12:00

14:00

16:00

Курящие больные

(основная группа) (n=10)

0,63±0,02

3,95±0,14

4,19±0,09

3,41±0,06

2,69±0,06*

Некурящие больные

(группа сравнения)

(n=4)

1,50±1,47

5,78±2,36

5,98±4,30

5,29±2,59

4,51±0,90

* Различия с группой сравнения достоверны:  р<0,05.

Как следует из наших данных, у много- и умеренно курящих больных отмечается чёткое снижение концентрации рифампицина по сравнению с некурящими при всех измерениях. Выраженность  уменьшения находится в прямой зависимости от интенсивности курения: у злостных курильщиков около 44 – 51% (p<0,05),  у  умеренно и мало  курящих – 13 - 17%.

Концентрация левофлоксацина определена у 14 больных с впервые выявленным инфильтративным туберкулёзом лёгких:  10 курящих пациентов (индекс курения 20 п/л и более) и 4 некурящих больных. Отмечено  снижение концентрации антибиотика у курящих больных при всех измерениях на 30-40%, кроме измерения в 8:00 утра, когда уменьшение составило 60%. Различие с группой сравнения было достоверно через 8 часов (р<0,05), (табл. 5).

Концентрация цефотаксима определена у 11 больных внебольничной пневмонией, в том числе у 7 курящих – основная группа и 4 некурящих больных – группа сравнения. Индекс курения составлял 20 п/л и более. Отмечены выраженные различия в фармакокинетике препарата у курящих и некурящих больных. В среднем концентрация цефотаксима у больных основной группы была более чем в 2 раза меньше, чем у некурящих. Во временном интервале максимальная разница с некурящими отмечается у больных  основной группы через 4 часа (в 3,5 раза) и через 24 часа (в 6 раз). Следовательно, для табакокурильщиков характерно быстрое, «пикообразное» снижение концентрации цефотаксима, тогда как для некурящих пациентов характерно более медленное, постепенное снижение концентрации антибиотика в сыворотке крови, когда минимальная подавляющая концентрация препарата поддерживается длительное время.

Фармакокинетические параметры кларитромицина были определены  у 11 больных с внебольничной пневмонией, из них 7 – основная группа (курильщики) и 4 – группа сравнения (некурящие больные). Индекс курения  составлял 20 и более п/л.

У лиц, подверженных хронической табачной интоксикации, выявлено уменьшение концентрации кларитромицина при всех измерениях на 17-55%. Уровень кларитромицина у курящих больных через 2 часа (р<0,05), после приёма препарата меньше, чем у некурящих через 6-8 часов, т.е. клиренс кларитромицина у табакокурильщиков  в 1,5 раза больше, чем у некурящих пациентов (Рис.4).

Таким образом, по полученным нами данным выявлено значимое  влияние табакокурения на фармакокинетику актуальных для фтизиопульмонологии антибактериальных препаратов (левофлоксацина, рифампицина, цефотаксима и кларитромицина), проявляющееся в меньшей концентрации лекарства в сыворотке крови и в более быстрой скорости выведения препарата из организма. Различия с некурящими больными составляет от 1,5 до 4-х и более раз (для цефотаксима). Механизм выявленных изменений, вероятно, в первую очередь связан с наблюдающейся у курящих активацией цитохромов печени (преимущественно для рифампицина, цефотаксима и кларитромицина) и усилением почечного клиренса (для левофлоксацина).

Рис. 4.  Динамика изменения концентрации кларитромицина в сыворотке крови больных пневмониями в зависимости от факта курения.

  Часть 2. Экспериментальные исследования.

Материалы и методы экспериментальных исследований

Для достижения поставленных целей исследования  выполнена комплексная  экспериментальная  работа. Проведено изучение возбудителей бактериальных заболеваний лёгких:  туберкулёза - M.tuberculosis  и  неспецифической патологии  -  S. pneumoniae, H. influenzae,  K. pneumoniae,  P. aeruginоsa ,S. аureus.

Исследования с конденсатом табачного  дыма проводили согласно  модифицированному  «Способу исследования воздействия табачного дыма  на возбудителя туберкулёза»  (патент РФ № 2083001 от 27.06.1997), авторы А.С. Шпрыков, А.Л. Лазовская, В.З. Жаднов. В работе использовали конденсат табачного дыма полученный в Онкологическом центре РАМН (д.б.н. Р.Д. Сафаев) в соответствии с российскими и международными стандартами.

Использовали 2 штамма M. tuberculosis: клинический штамм № 4688, выделенный от больного туберкулезом легких, и штамм H37Ra, референс-культура из  лаборатории туберкулеза НИИ ветеринарии Россельхозакадемии (коллекция ГИСК им. Л.А.Тарасевича). Для контроля качества проводимых исследований  с неспецифической микрофлорой использовали  референс–штаммы:  S. pneumoniae – АТСС 49619,  H. influenzae  - АТСС 49247 K. pneumoniae subspecium pneumoniaе  АТСС 35657, S.aureus  АТСС 38591; S.aureus  АТСС 25923, P. aeruginоsa        - АТСС 2785, полученные из НИИ антимикробной химиотерапии Смоленской государственной медицинской академии.

Было проведено 288 исследований по оценке  жизнеспособности M.tuberculosis. Жизнеспособность оценивали по 2 критериям: скорости и массивности роста.

С субкультурами  неспецифических возбудителей  проведено 1416 исследований по изучению ростовых, морфологических, биохимических свойств  микроорганизмов после воздействия  различных разведений конденсата табачного дыма.

Экспериментальное изучение чувствительности M.tuberculosis  к 6 основным (изониазид, рифампицин, этамбутол, стрептомицин)  и  резервным (этионамид, канамицин) антибактериальным препаратам проведено с  25 субкультурами  (21 экспериментальная и 4 контрольных),  давшими на средах с  конденсатом наиболее обильный рост. Всего было проведено  450  исследований (8 серий опытов)  методом абсолютных концентраций на плотных средах. Работа выполнялась согласно приказа МЗ РФ № 109 и другим методическим указаниям.

С субкультурами  неспецифических возбудителей заболеваний нижних отделов органов дыхания  проведено 1272 исследования по определению чувствительности к  антибактериальным препаратам основных групп.

Определение чувствительности штаммов к  антибактериальным препаратам  и интерпретацию результатов проводили согласно методическим указаниям  МУ 4.2.1890 - 04, международным стандартам микробиологического исследования CLSI / NCCLS и рекомендациям комитета антибиограмм  французского общества микробиологов СА-SFM. Исследование проводили диско-диффузионным методом на среде Мюллер-Хинтон (Hi-Media) для S.aureus, K.pneumoniae, P.aeruginоsa; на среде Мюллер-Хинтон с кровью для S.pneumoniaе, на среде HTM (Hi-Media) для  H.influenzae. Использовали  диски производства фирм  Biomerieux, Sanofi Diagnostics Pasteur, Bio – Rad.

Для S.pneumoniae, S.aureus  и  H.influenzae  использовали набор дисков из 7 наименований, для K.pneumoniae  - из 9 наименований, для P.aeruginоsa - из 8 наименований антибактериальных препаратов.

При изучении фенотипа  микроорганизмов  учитывали способность  бактерий при определённых концентрациях конденсата табачного дыма к слизеобразованию, что характеризует их как возможных потенциальных  возбудителей биоплёночных инфекций при воздействии неблагоприятных факторов.

Исследования  проводили в лаборатории  туберкулёза, инфекционных и инвазивных заболеваний животных научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной Зоны Российской Федерации Российской академии сельскохозяйственных наук (г. Н.Новгорода) - (зав. лабораторией, д.м.н., проф. А.Л. Лазовская), в бактериологической лаборатории Канавинского противотуберкулёзного диспансера г. Н.Новгорода (зав. лабораторией  Л.С. Финкельштейн, Е.И.Полуэктов) и в бактериологической лаборатории ГУЗ НО «Клиническая инфекционная больница №2 г.Н.Новгорода» (зав. лабораторией, к.м.н. – О.Н. Шпрыкова). В связи с важным биологическим  значением белковых систем бактерий были  исследованы электрофоретическим методом спектры белков  мембраны K.pneumoniae (10 штаммов) и экзобелков S.aureus (5 штаммов). Исследование  проводили в отделении микробиологии  и биохимии бактерий  Нижегородского НИИ  эпидемиологии и микробиологии  им. акад. И.Н. Блохиной (зав. лабораторией  д.б.н., проф. Г.К. Дёгтева) по методике  Devis и Ornstein, Weber и Osborn.

Результаты  экспериментальных микробиологических исследований

В виду большого  значения микробного фактора в патогенезе и клинике инфекционных заболеваний лёгких и для проведения экспериментально-клинических сопоставлений нами были изучены биологические свойства и лекарственная чувствительность, основных возбудителей бактериальных инфекций дыхательной системы:  M.tuberculosis, S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginоsa,  S. аureus в условиях воздействия конденсата табачного дыма.

       Для изучения жизнеспособности проведено комплексное экспериментальное исследование со штаммами 4688 и Н37Ra M.tuberculosis. Всего было выполнено 5 серий посевов субкультур в 3-х повторностях для каждого штамма на средах с 5-ю разведениями  конденсата табачного дыма: 1-е – 10 мг /мл, 2-е - 1 мг/мл, 3-е -  0,1 мг/мл, 4-е - 0,01 мг/мл, 5-е - 0,001 мг/мл.

Результаты опытов показывают, что на средах с 3-им (0,1 мг/мл) и 5-ым (0,001 мг/мл)  разведениями конденсата для штамма 4688, с 3-им (0,1 мг/мл)  и 4-ым (0,01 мг/мл) разведениями  для штамма Н37Ra отмечали чёткое увеличение роста субкультур, однако только культура МБТ, выросшая на среде с 3-м разведением КТД, соответствует критерию «высокая жизнеспособность», так как рост более 100 колоний был получен за 21 день, что в 1,5 раза быстрее, чем в контроле. Другие разведения конденсата табачного дыма  либо оказывали ингибирующее действие на рост  субкультур M.tuberculosis,  либо были индифферентны.

Таким образом, результаты экспериментов полностью подтверждают полученные нами ранее клинические  данные об увеличении жизнеспособности M.tuberculosis  под влиянием  продуктов табачного дыма.

Изучены биологические свойства бактериальных возбудителей внебольничных и госпитальных пневмоний: S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginоsa,  S. аureus. Всего было выполнено по 5-6 серий экспериментов с каждым из возбудителей  на средах с 5-ю разведениями конденсата табачного дыма и контролем.

Массивность роста субкультур S. pneumoniae была максимальной на средах  с 4-м (0,01 мг/мл) разведением конденсата  и  соответствовала 4,1 единиц мутности  по Мак Фарланду.  Увеличение по сравнению с контролем составило 28,1%  (р<0,05).

При изучении свойств  H. influenzae        установлено, что 5-ое (0,001 мг/мл)  разведение  конденсата  дало рост сходный с контролем, 1-ое (10 мг/мл), 2-ое (1 мг/мл)  и в меньшей степени 3-е (0,1 мг/мл)  разведения оказали угнетающее воздействие.  Наибольший интерес представляло 4-ое (0,01 мг/мл) разведение, на котором отмечали самый обильный рост культуры, составивший 1293 колониеобразующих единиц (КОЕ) (в среднем по 5 опытам). Увеличение по сравнению с контролем составило 25% (р<0,05) (Рис.5). Рост был в  виде более  влажных и сливающихся колоний;  микроскопически чаще, чем в контроле,  отмечался выраженный полиморфизм. Изменение биохимических свойств  носило разнонаправленный характер, наряду с подавлением некоторых ферментативных реакций (на 1-ом -10 мг/мл  и 2-ом - 1 мг/мл  разведениях  конденсата) отмечалось усиление (или ускорение) ряда биохимических реакций на 3 – ем  (0,1 мг/мл), 4-ом (0,01 мг/мл)  и 5-ом (0,001 мг/мл)  разведениях конденсата (окисление глюкозы, утилизация лактозы, мочевины, индолообразование) по сравнению с контролем.

Рис.5. Рост культуры H.influenzae на средах с разведениями конденсата табачного дыма (средние значения  5 серий опытов), в КОЕ/мл.

Опыты, проведённые с  K. рneumoniaе, показали угнетающее действие максимальных концентраций конденсата табачного дыма  на рост субкультур бактерий, что не отличало её от других микроорганизмов  и  проявилось в появлении меньшего количества колоний, более мелких и сухих, чем в контроле.  Самый обильный рост дали 5-е (0,001 мг/мл)  и, особенно, 4-е (0,01 мг/мл)  разведения конденсата. На 5-м (0,001 мг/мл) разведении рост культур примерно соответствовал контролю, а в 4-м (0,01 мг/мл)  разведении был обильнее, чем в контроле (на 12%). В этих же разведениях отмечалась более выраженная визуально (++) биохимическая реакция Фогес-Проскауэра по сравнению с контролем (+), остальные биохимические свойства  соответствовали контролю.

В экспериментах выявлено также выраженное угнетающее действие максимальных концентраций продуктов табачного дыма  на рост S. аureus. Колонии вырастали в меньшем количестве, были мелкие и сухие. Умеренное ингибирующее действие  проявило 3-е (0,1 мг/мл)  разведение, давшее уменьшение количества  колоний примерно на 10%. Рост колоний после воздействия  4-ого (0,01 мг/мл)  и 5-ого (0,001 мг/мл) разведений конденсата  соответствовал контролю. Микроскопическое обследование и  биохимические тесты различий не выявили.

При исследовании  P. aeruginоsa  выявлено супрессивное воздействие  1-го (10 мг/мл)  и 2-го (1 мг/мл)  разведений  конденсата, рост колоний с 3-его (0,1 мг/мл)  разведения примерно соответствовал контролю,  с 4-го (0,01 мг/мл)  и 5-го (0,001 мг/мл)  разведений  опережал контроль (на 12%). В этих разведениях отмечен факт появления 2-х видов колоний: выпуклых, слизистых, средних размеров и более мелких, плоских. Это явление можно рассматривать как пример диссоциации культуры при воздействии внешних факторов. По биохимическим свойствам культуры были идентичны, кроме теста на желатиназу. Субкультура, выросшая после  4 –ого (0,01 мг/мл)  разведения, с более крупными слизистыми колониями, в отличие от контроля, разжижала желатин. Для микроскопии в данном случае характерно наличие в мазках изменённых по морфологии палочек в отличие от контроля.

Проведённые нами эксперименты позволяют утверждать,  что продукты табачного дыма  не безразличны для возбудителей  неспецифических бактериальных респираторных инфекций. Рост на средах с 4-ым (0,01мг/мл) и реже с 5-ым (0,001 мг/мл) разведением конденсата табачного дыма достоверно изменял фенотип микроорганизмов (за исключением S. аureus): увеличивался размер колоний, появлялось повышенное  слизеобразование, возникала диссоциация культур. Изменялись биохимические реакции. Отмечается ускорение роста S. pneumoniaе  и H. influenzaе, в меньшей степени K. рneumoniaе  и  P. aeruginоsa , соответственно на 28,8% и  24,7% (р<0,05); 11,8% и  12,0% (р >0,05) после роста на средах с 4-ым (0,01мг/мл), в меньшей степени 5-ым, разведениями конденсата. Большой интерес вызывает получение максимального  изменения фенотипа с выраженным увеличением  массивности роста  (до 30%) у S. pneumoniae  и H.  influenzae, т.е. у тех возбудителей, которые по общепризнанному мнению  и литературным данным чаще вызывают пневмонии у табакокурильщиков.

Учитывая большое значение белковых систем в жизни микроорганизмов, проведено изучение спектра экзобелков для  S. аureus  и мембранных белков для  K. рneumoniaе. Исследованию подверглись 5 культур  S. аureus  (4 опытных культуры, давших хороший рост на средах с 4-ым и 5-ым разведениями конденсата и одна контрольная) и  10 культур K. рneumoniaе (7 опытных культур, давших обильный рост на 4-ом (0,01мг/мл) разведении  конденсата,  и 3 контрольные культуры), всего 15 культур.

Как следует из полученных результатов, у абсолютного большинства (63,6%) опытных культур: у 2-х из 4-х  S. аureus  и у 5-ти из 7 K. рneumoniaе, после воздействия продуктов табачного дыма отмечено появление изменений на протеинограмме по сравнению  с контрольными штаммами и ранее изученными культурами. Изменение белков имело место по всему спектру протеинограммы: как в низкомолекулярной части,  так и в области  более крупных белковых молекул.

Изученные белковые системы являются основой жизнедеятельности микробной клетки, что подтверждает и объясняет появление  описанных выше структурно-функциональных изменений  фенотипа бактериальных клеток.

Таким образом, комплексные экспериментальные микробиологические исследования выявили у некоторых разведений конденсата табачного дыма  сложное многостороннее воздействие  на основных возбудителей  инфекционных заболеваний лёгких, состоящее в увеличении жизнеспособности M. tuberculosis (что соответствует клиническим данным), в  изменении фенотипа и ускорении роста S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P.aeruginosa. Увеличение жизнеспособности, обильность роста возбудителей – одно из объяснений большей тяжести и торпидности течения бактериальной патологии лёгких у курящих больных. Причина этого, вероятно,  кроется в  сложном составе табачного дыма, состоящего из примерно  4700 химических соединений, часть из которых проникает внутрь микроорганизмов, что находит подтверждение  в обнаруженном факте изменения  спектра внеклеточных  и мембранных белков. Многие из этих веществ не безразличны для микробных клеток, а некоторые близки к различным факторам роста бактерий. 

В рутинных условиях табакокурения  ситуацию усугубляет большое количество двуокиси углерода, составляющее до 13% основного потока табачного дыма.  В микробиологии  описан стимулирующий эффект СО2 на рост  M. tuberculosis, S. pneumoniaе  и H.influenzaе, что используется, согласно действующим приказам,  для культивирования  двух последних  возбудителей.

Нами выполнено несколько серий экспериментов по изучению лекарственной чувствительности M. tuberculosis (штаммы 4688 и Н37Ra) после воздействия различных концентраций конденсата табачного дыма. В работу были включены 25 субкультур: 14 - штамма 4688 (12 опытных и 2 контрольных) и  11 - штамма Н37Ra (9 опытных и 2 контрольных). Выявлено формирование лекарственной устойчивости у большинства субкультур  опытных штаммов (12 субкультур – 57,1%).  Обращает на себя внимание, что культура, полученная от больных туберкулёзом (штамм 4688), оказалась в большей степени подвержена воздействию конденсата, чем лабораторный штамм Н37Ra: лекарственная устойчивость к различным противотуберкулёзным препаратам выявлена в 2/3 (штамм 4688) и 1/2 случаев (штамм Н37Ra). У штамма 4688  чётко отмечалась полирезистентность. В экспериментах преобладала устойчивость к изониазиду, несколько меньше к стрептомицину и рифампицину (соответственно 68, 58 и 42%).

Множественная лекарственная устойчивость M.tuberculosis у экспериментальных штаммов встречалась в 14,3%,  среди субкультур 4688 почти в 1,5 раза чаще, чем среди Н37Ra (соответственно в 16,7% случаев против  11,1%). Это даёт возможность предположить, что культуры, полученные от больных, более легко формируют множественную  лекарственную устойчивость, чем лабораторные штаммы. Вызывает интерес тот факт, что почти все случаи формирования множественной лекарственной устойчивости произошли при росте  на средах с 3-м (0,1мг/мл) разведением конденсата, то есть у культур с высокой степенью жизнеспособности. Наши данные совпадают с сообщениями  ряда авторов, которые подтверждают связь высокой жизнеспособности M. tuberculosis и множественной  лекарственной устойчивости (Н.М.Корецкая и соавт.,2007; S. Gagneux, 2009).

В экспериментах диско-диффузионным методом изучено влияние продуктов табачного дыма на лекарственную чувствительность актуальных возбудителей  неспецифических бактериальных инфекций  лёгких.

При анализе антибиотикочувствительности  S. pneumoniae выявлено уменьшение диаметра зоны задержки роста субкультур, выращенных на средах с конденсатом табачного дыма около дисков с эритромицином (на 25%), оксациллином (на 15%), левофлоксацином (на 14%). Наиболее выраженные изменения зафиксированы на  средах с 3-им (0,1мг/мл) и 4-ым (0,01мг/мл) разведениями  конденсата.

Исследования  антибиотикочувствительности  H.influenzaе выявили  тенденцию к значительному уменьшению диаметров зон задержки роста  к ряду антибиотиков: к цефотаксиму  (на 30%), (р<0,05), левомицетину  (на 15%), пефлоксацину (на 10%) и амоксиклаву (на 8%).  Уменьшение зон задержки роста, свидетельствующее о возможном снижении лекарственной чувствительности, наблюдалась у субкультур, выросших на 3-ем (0,1мг/мл) и 4-ом (0,01мг/мл) разведениях конденсата (Табл. 6).

Таблица 6

Лекарственная чувствительность субкультур экспериментальных штаммов H.influenzaе, выросших на средах с различными разведениями  конденсата табачного дыма  (средние значения зон задержки роста  в мм)

Разведения КТД (мг/мл)

1

10

2

1

3

0,1

4

0,01

5

0,001

К

-

Ампициллин

22

21

21

23

21

21

Амоксиклав

24

25

23

25

24

25

Гентамицин

21

20

20

20

19

20

Цефотаксим

23

23

19

21

26

27

Тетрациклин

19

18

18

20

20

18

Пефлоксацин

20

19

18

18

18

20

Левомицетин

25

23

25

23

24

27

После роста на средах с разведениями конденсата табачного дыма  - в основном это 3-е (0,1мг/мл) и 4-е (0,01мг/мл) разведения -  у культуры K. pneumoniaе выявлены выраженные изменения: уменьшение диаметров зон задержки роста  к цефепиму (на 33%), (р<0,05), амоксиклаву (на 20%) и меропенему (на 19%). Менее значительное уменьшение  зон задержки роста выявлено у цефотаксима (на 13%), пефлоксацина (на 7%). В опытах  с  K. pneumoniae, в отличие от других возбудителей, наиболее частые изменения  наблюдались у субкультур, выращенных на средах с 4 – м (0,01мг/мл) разведением  конденсата, преобладала как и у клинических  штаммов устойчивость к -лактамным антибиотикам. 

При постановке опытов со S. аureus  существенных отличий в диаметрах зон задержки роста  на средах  с конденсатом  и без конденсата выявлено не было, кроме небольшого  уменьшения  (на 10%) зоны задержки роста  к гентамицину у культур в  3-ем (0,1 мг/мл) разведении.

При изучении изменений лекарственной чувствительности P.aeruginosa отмечено некоторое уменьшение диаметра  зоны задержки роста  субкультур вблизи диска с меропенемом (на  6 %) и изменение морфологии колоний.

Итак,  в экспериментах выявлена тенденция к снижению лекарственной чувствительности у экспериментальных субкультур M.tuberculosis после роста на средах с конденсатом табачного дыма. Отмеченное неоднократное уменьшение  диаметра зон задержки роста  возбудителей неспецифических заболеваний, хотя и не выходит за пределы чувствительности  в ряде случаев,  свидетельствует о возможности развития лекарственной устойчивости к исследуемым  антибактериальным препаратам.

Таким образом, результаты наших исследований показывают, что продукты табачного дыма  в виде некоторых концентраций  конденсата в эксперименте и в виде табакокурения в клинике влияют на лекарственную чувствительность к ряду антибактериальных препаратов у  M. tuberculosis, S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniaе.

Механизм этого явления заключается, вероятно, в мутагенном действии продуктов табачного дыма, среди которых выделяют более  60 явных мутагенов, которые могут вызывать точечные мутации, в том числе в генах, с которыми связана лекарственная устойчивость.

Наиболее достоверные и значительные результаты  были получены при экспериментально-клинических сопоставлениях для  S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae. Важен факт, что первые 2 из вышеназванных возбудителей 

признаются в литературе наиболее частым этиологическим фактором  внебольничной пневмонии у курящих.

В обобщенном виде возможный механизм действия курения на организм больных туберкулезом и бактериальными заболеваниями легких представлен на схеме (рис. 6).

ВЫВОДЫ

  1. В процессе изучения влияния курения табака на течение и эффективность лечения туберкулеза и неспецифических бактериальных заболеваний легких выявлено существенное изменение  биологических свойств и лекарственной чувствительности  возбудителей.
  2. Курительное поведение больных инфекционными заболеваниями нижних дыхательных путей характеризуется большой длительностью и интенсивностью курения (у 50% больных стаж курения превышал 20 лет и 57% больных выкуривали 20 и более сигарет в день). Степень табачной зависимости более выражена у мужчин, больных туберкулезом, выкуривавших в день в среднем 26,5 сигарет против 20,4 сигарет у больных пневмонией.
  3. Хроническая табачная интоксикация отягощает течение бактериальной патологии лёгких. У курящих больных с инфильтративным туберкулёзом лёгких преобладают распространённые процессы с бактериовыделением и деструкциями, составляющими соответственно 53,8%, 86,4%, 84,1%  против 44,3%, 70,5%, 67,2% у некурящих (p>0,05, p<0,01, p<0,01). Внебольничная пневмония у курящих больных характеризуется стёртым началом заболевания, большей тяжестью, распространённостью процесса,  составляющих соответственно 61,5%, 32,3% и 30,8%  против 40,6%, 21,9% и  18,8%  у некурящих (p < 0,05, p>0,05 и  p<0,05).
  4. Хроническая табачная интоксикация определяет замедленную обратную динамику бактериальной патологии легких. Инфильтративный туберкулез легких у курящих больных характеризуется снижением показателей прекращения бактериовыделения, закрытия деструктивных изменений и более выраженными остаточными изменениями, соответственно 88,6%, 76,6%, 56,8% против 95,3%, 90,2%, 42,6%  у некурящих (p>0,05, p<0,05, p<0,05). Курение снижает эффективность лечения внебольничных пневмоний, замедляет  рассасывание инфильтративных изменений в 1,5 – 1,7 раза по сравнению с некурящими (p<0,05), учащает осложнения  в виде плеврита и абсцедирования (соответственно  24,6% и 15,4%  против  9,4% и 12,5% у некурящих, p<0,05  и p>0,05).
  5. Для курящих больных  хроническим бронхитом характерны более частые и тяжелые обострения (3,3 раза в год для основной группы и  4,2 раза в год для много курящих больных против 1,9 раза для некурящих, р>0,05 и р<0,05), значительное снижение дыхательных функций с формированием обструктивных изменений (ОФВ1 для курящих 52,7% от должных величин, для многокурящих 43,7%  против 68,9% у некурящих больных p<0,05) и замедленная регрессия клинических проявлений (в среднем на 40-50%).
  6. Курение усиливает  активность туберкулезного воспаления, определяемую по морфологическим  данным: у злостных курильщиков 4 степень  активности воспаления выявляется в 47,1%, у больных основной группы – в 35,9% против 17,4% некурящих больных из группы сравнения (соответственно p<0,01 и p<0,05).
  7. Хроническая табачная интоксикация оказывает значимое влияние на фармакокинетику и уменьшает концентрацию в крови левофлоксацина,  рифампицина, цефотаксима и кларитромицина  у многокурящих больных туберкулезом и внебольничной пневмонией, соответственно в среднем на  30-40%, 44-51%,  55-71%  и  17-55%, (p<0,05, p<0,05, p >0,05 и p<0,05).
  8. Влияние хронической табачной интоксикации на течение и эффективность лечения инфекционной патологии легких зависит от интенсивности курения: у многокурящих больных изменения выражены в наибольшей степени.
  9. Продукты табачного дыма в условиях эксперимента (р<0,001) и клиники вызывают увеличение жизнеспособности M.tuberculosis: высокая жизнеспособность наблюдается у штаммов, выделенных у 39,2%  больных основной группы и 52,8% злостных курильщиков против 17,5% из группы сравнения (p<0,01 и p<0,05).
  10. Конденсат табачного дыма в 4-ом разведении (0,01 мг/мл) изменяет фенотип и ускоряет рост S.pneumoniae, H.influenzae, K. рneumoniae и P.aeruginosa  соответственно на 28,1%, 24,7%, 11,8%, 12,0% по сравнению с контрольными штаммами. (p<0,05, p<0,05, p>0,05, p>0,05).
  11. Компоненты табачного дыма способствуют  формированию лекарственной устойчивости у 57,1% экспериментальных субкультур M.tuberculosis, в т.ч. у 14,3% - множественной лекарственной устойчивости.  В клинических условиях среди  курящих больных резистентные штаммы выделены  в 41,2% случаев, среди много курящих  -  в 58,3% против 27,9% у некурящих больных (p<0,05, р<0,01). Множественная лекарственная устойчивость в основной группе встречается в 1,5 раза, а среди злостных курильщиков – в 3 раза чаще, чем в группе сравнения (p<0,05).
  12. В эксперименте по исследованию лекарственной чувствительности конденсат табачного дыма приводит к уменьшению зон задержки роста у S.pneumoniae  и H.influenzae  (р<0,05), K. рneumoniae. Это свидетельствует о возможном его влиянии на  формирование лекарственной устойчивости к  антибактериальным  препаратам.
  13. Полученные результаты свидетельствуют о необходимости борьбы с курением табака среди больных туберкулезом и инфекционной патологией легких.

Практические  рекомендации

  1. Курящим больным туберкулезом легких до получения данных о лекарственной чувствительности возбудителя или при их отсутствии, следует использовать режим химиотерапии для больных с высоким риском лекарственной устойчивости M.tuberculosis  (IIб по приказу МЗ РФ № 109), включающий 4 основных препарата и 2-3 резервных. Злостное курение (индекс курения 25 пачек/лет и более) необходимо внести в число критериев применения этого режима.
  2. При назначении других режимов антибактериальной терапии  у многокурящих больных туберкулезом легких (индекс курения 25 пачек/лет и больше), не прекративших курить после начала лечения, следует применять максимально допустимые дозы рифампицина  и левофлоксацина.
  3. При лечении пневмоний у курящих больных, возбудителем которых является H.influenzae, при стартовой эмпирической терапии не следует назначать цефотаксим, целесообразно  применять другие рекомендованные Федеральным  руководством антибактериальные препараты.
  4. Для обучения студентов и врачей, при санитарно-просветительной работе предлагается  использовать  данные об уменьшении концентрации лекарственных препаратов в крови, снижении эффективности лечения курящих больных с инфекционной лёгочной патологией и  о  влиянии продуктов табачного дыма на рост и лекарственную резистентность возбудителей.

  Список работ, опубликованных по теме диссертации

  1. А.С.Шпрыков,В.З. Жаднов. Влияние табакокурения на течение инфильтративного туберкулеза легких и эффективность его лечения // Проблемы туберкулеза. – 1994. – № 5. – С. 26-27.
  2. А.С.Шпрыков,В.З. Жаднов, А.Л. Лазовская. Методика исследования действия табачного дыма на МБТ  // Туберкулез и экология. – 1995. – № 3. – С. 23-24.
  3. А.С. Шпрыков, В.З. Жаднов, А.Л. Лазовская, Т.Н.Левченко. Воздействие конденсата табачного дыма на некоторые микробиологические характеристики возбудителя туберкулеза  // III (XIII) съезд научно-медицинской ассоциации фтизиатров: тезисы докладов. – Екатеринбург, 1997. – С. 100.
  4. Патент 2083001 Российская Федерация, МПК G 09 B 23/28.Способ подготовки к исследованию воздействия табачного дыма на туберкулёзный возбудитель / Шпрыков А.С.,Лазовская А.Л., Жаднов В.З.; заявитель и патентообладатель Нижегородская государственная медицинская академия, ШпрыковАлександр Сергеевич. – № 93041493/14 ;опубл. 27.06.1997, Бюл. № 18, № 193. – 1 с.
  5. А.С. Шпрыков, В.З. Жаднов, А.Л. Лазовская. Курение как фактор риска развитая лекарственной устойчивости у возбудителя  туберкулеза  //  Нижегородский медицинский журнал. – 1998. – № 1. – С. 23-24.
  6. А.С. Шпрыков, В.З. Жаднов,  А.Л. Лазовская. Влияние конденсата табачного дыма на культуральные и биохимические свойства микобактерий туберкулеза  // Проблемы туберкулеза. – 1998. – № 4. – С. 55-57.
  7. А.С. Шпрыков, В.З. Жаднов. Клинико-экспериментальные параллели изучения влияния основных компонентов табачного дыма на лекарственную устойчивость возбудителя туберкулеза // 8-й Национальный конгресс по болезням органов дыхания: тезисы докладов. – М., 1998. – С. 398.
  8. А.С. Шпрыков, В.З. Жаднов, А.Л. Лазовская. Влияние курения на некоторые характеристики возбудителя туберкулеза  // IV (XIV) съезд научно-медицинской ассоциации фтизиатров: тезисы докладов. – Йошкар-Ола, 1999. – С. 220.
  9. В.З. Жаднов,  А.С. Шпрыков.Табакокурение как фактор риска утяжеления течения и снижения эффективности лечения больных с впервые выявленным туберкулезом легких // IV (XIV) съезд научно-медицинской ассоциации фтизиатров : тезисы докладов. – Йошкар-Ола, 1999. – С. 69.
  10. А.С. Шпрыков, В.З. Жаднов. Эффективность лечения впервые выявленного туберкулеза легких в зависимости от факта табакокурения  // 9-й Национальный конгресс по болезням органов дыхания : тезисы докладов. – М., 1999. – С. 345.
  11. А.С. Шпрыков, В.З. Жаднов, А.Л. Лазовская, Т.Н. Левченко. Изменение структуры микобактерий туберкулеза под действием
    конденсата табачного дыма  // Проблемы туберкулеза. – 2002. – № 2. – С. 39-41.
  12. А.С. Шпрыков, В.З. Жаднов. Некоторые особенности течения туберкулеза легких и пневмоний в зависимости от фактора табакокурения // 12-й Национальный конгресс по болезням органов дыхания: тезисы докладов. – М., 2002. – № 270.
  13. A.S. Shprykov, V.Z. Zhadnov, О.N. Shprykovа.Tobacco smoking as a factor of the decrease of chemotherapy effectiveness and of the development of the drug resistance in patients with pulmonary tuberculosis // Abstracts 4th European Congress of Chemotherapy and Infection (Paris, 2002)- Р. 225.
  14. А.С. Шпрыков, В.З. Жаднов, А.В. ШкаринТабакокурение и туберкулез легких: клинические и экспериментальные аспекты: учебно-методическое пособие /. – Н. Новгород: Изд-во НГМА; 2002. – 52 с.
  15. А.С. Шпрыков, В.З. Жаднов. Курение табака и эффективность лечения больных с инфекционной бактериальной патологией легких  // 13-й Национальный конгресс по болезням органов дыхания: тезисы докладов. – С.- Петербург, 2003. – С. 262.
  16. A.S. Shprykov, V.Z. Zhadnov, V.V. Shkarin The effect of tobacco smoking on drug sensitivity  and microbiological characteristics of Mycobacterium tuberculosis: clinical and experimental study  // Abstracts 13 th ERS Annual Congress (Vienna, 2003). – Р. 158.
  17. A.S. Shprykov, V.V. Shkarin. Clinical features of pulmonary tuberculosis and pneumonia in smoking patients  // Abstracts 3-rd Congress of European Region IUATLD and 14th National Congress of Russian Respiratory Society (Moscow, 2004). – Р. 870.
  18. A.S. Shprykov, V.V. Shkarin. Smoking and cultural properties of the main causative agents of infectious bacterial lung pathology  // Abstracts 14th ERS Annual Congress (Glasgow; 2004) // ERJ. – Vol. 25, Suppl. 48. – 215 s.
  19. Shprykov, A.S. Intensive tobacco smoking as a factor of the decrease of treatment effectiveness in patients with pulmonary tuberculosis // Abstracts 15th ERS Annual Congress (Copenhagen; 2005). – Р. 1036.
  20. A.S. Shprykov, V.V. Shkarin, О. N. Shprykovа. The effect of the tobacco smoke condensate on the structural changes in mycobacterium tuberculosis // Abstracts 15th ERS Annual Congress (Copenhagen; 2005). – Р. 156. 
  21. Shprykov, A.S. Cultural and clinical features of bacterial pneumonia in smoking patients: clinical and experimental study // Abstracts 16th ERS Annual Congress (Munich; 2006). – Р. 1441.
  22. A.S. Shprykov, V.V. Shkarin, О. N. Shprykovа.Fumo di tobacco e crescita del Mycobacterium Tuberculosis (Tobacco smoking and the Mycobacterium Tuberculosis’s growth)  // Tabaccologia. – 2007. – № 4. – Р. 22-26.
  23. Шпрыков, А.С. Хроническая табачная интоксикация как значимая причина утяжеления туберкулезного процесса  VIII Российский съезд фтизиатров «Туберкулез в России»: материалы съезда. – М., 2007. – С. 191.
  24. A.S. Shprykov, О. N. Shprykovа. Multidrug resistant tuberculosis and tobacco smoking: clinical and experimental investigation  // Abstracts 18th ERS Annual Congress (Berlin, 2008). – Р. 1029.
  25. Shprykov, A.S. The effect of tobacco smoke condensate on drug sensitivity of pneumonia causative agents // Abstracts 18th ERS Annual Congress, (Berlin, 2008). – Р. 1377.
  26. А.С.Шпрыков, Лекарственная устойчивость микобактерий туберкулеза в условиях хронической табачной интоксикации: клиника и эксперимент // Туберкулез и болезни легких. – 2009. – № 8. – С. 34-37.
  27. А.С.Шпрыков,  Инфильтративный туберкулез легких у больных с хронической табачной интоксикацией  // Современные тенденции в эпидемиологии, диагностике и лечении туберкулеза и других заболеваний легких: сб. статей / под ред. А.С. Шпрыкова. – Н. Новгород: Изд-во НГМА, 2009. – С. 216-220.
  28. А.С. Шпрыков, А.А. Елипашев, В.О. Никольский Влияние табакокурения на активность туберкулезного воспаления (по морфологическим данным)  // Медицинский альманах. – 2010. – № 2(11). – С. 291-293.
  29. А.С.Шпрыков, Влияние интенсивноготабакокурения на течение внебольничных пневмоний // Врач. – 2010. – № 4. – С. 70-72.
  30. А.С.Шпрыков, Жизнеспособность – новое биологическое свойство возбудителя туберкулеза, в условиях воздействия продуктов табачного дыма // СТМ. Современные  технологии в медицине. – 2010. – № 4. – С. 33-36.
  31. А.С.Шпрыков, Злостноетабакокурение как фактор, снижающий социальный статус больных инфекционной бактериальной патологией легких  // Медицинский альманах. – 2010. –№ 4. –С.298-300.
  32. А.А. Елипашев, В.О. Никольский, А.С. Шпрыков.Прогностическое значение морфологических признаков активности туберкулезного воспаления у больных с ограниченными формами лекарственно-устойчивого туберкулеза легких/ // Архив патологии. –2010. –№ 4. –С.40-43.
  33. А.С.Шпрыков, Фармакокинетикарифампицина и переносимость химиотерапии туберкулеза легких  у курильщиков табака  // Туберкулез и болезни легких. – 2010. – № 9. – С. 22-24.
  34. А.С.Шпрыков, В.В.Писарев, Левофлоксацин  в терапии бактериальных заболеваний  лёгких: новое в фармакокинетике препарата у многокурящих больных / // СТМ. Современные  технологии в медицине. – 2011. - №1. - с. 105 – 107.
  35. А.С.Шпрыков, А.С. Лекарственная чувствительность  возбудителей неспецифической  лёгочной патологии  в экспериментальных условиях воздействия  конденсата табачного дыма  // СТМ. Современные технологии  в  медицине.– 2011. - №2. – с.14 – 17.
  36. А.С.Шпрыков, Действие конденсата табачного дыма на биологические свойства возбудителей неспецифической лёгочной патологии  //  СТМ. Современные технологии  в медицине .– 2011. -  №2. – с.152 – 154.
  37. Д.А.Сутягина, А.С.Шпрыков,Особенности динамики цитокинового статуса больных инфильтративным туберкулёзом лёгких,  в комплексном лечении которых использовалась низкоинтенсивная лазерная терапия / // Туберкулёз и болезни лёгких. – 2011. - №5. -  с. 180 – 181.
  38. А.С.Шпрыков, В.В.Писарев, Р.Ф.Мишанов Особенности  фармакокинетикицефотаксима и кларитромицина у многокурящих больных пневмонией  // СТМ. Современные технологии в медицине.  –  2011.  -  №3. – с.157 – 159.
  39. А.С.Шпрыков, Клинические особенности туберкулёза лёгких у курящих больных  // Туберкулёз и болезни лёгких. – 2011. -№9. – с.24 – 28.








© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.